咳喘方对支气管哮喘模型大鼠气道重塑的干预作用

目的:探讨咳喘方对支气管哮喘模型大鼠气道重塑的干预作用。方法:将30只SD雄性大鼠分为对照组、模型组、中药组,每组10只。除对照组外均行支气管哮喘造模;中药组予咳喘方灌胃,其余两组予0.9%Na Cl注射液灌胃,疗程3周。采用免疫组化法检测各组大鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;并取肺组织经HE染色进行病理观察,图像分析测定其气道壁总面积(Wat)、管壁平滑肌面积(Wam)、支气管底膜周径(Pbm)、支气管周围胶原纤维组织面积(Wac)的数值。结果:模型组TGF-β1表达较对照组明显升高(P0.01);中药组TGF-β1计数较模型组明显降低(P0.01)。模型组Wat、Wam、Wac水平较对照组明显升高(P0.01);中药组Wat、Wam、Wac水平较模型组明显降低(P0.01)。结论:咳喘方可抑制支气管哮喘大鼠肺组织TGF-β1表达和气管壁增厚。     

芪黄补肺汤(原防哮汤)抑制哮喘大鼠气道重塑及对细胞色素C影响

目的 :观察芪黄补肺汤抑制SD哮喘大鼠气道重塑的疗效,初步揭示其通过激活细胞色素C(Cyt-C)的释放,促进气道平滑肌细胞(ASMC)凋亡的机制。方法 :采用随机原则将40只SD大鼠分为空白对照组、阳性对照组、顺尔宁组、芪黄补肺汤组。采用鸡卵蛋白(OVA)致敏后,雾化激发12周制备哮喘模型。于第15天起,灌胃治疗12周。HE染色法观察气道病理切片;图像分析软件测量支气管壁总面积(Wat)、支气管平滑肌面积(Wam)等;细胞计数器检测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)数及嗜酸性粒细胞(EOS)百分比,ELISA法检测ASMC胞内中Cyt-C含量,Tunel法检测ASMC凋亡指数。结果 :与阳性对照组相比,芪黄补肺汤组、顺尔宁组大鼠在气道炎性细胞浸润、气道平滑肌(ASM)层增厚、支气管平滑肌厚度(Wam/Pbm)、支气管壁厚度(Wat/Pbm)、BALF中的WBC数及EOS百分比方面显著降低(P0.01),芪黄补肺汤组与顺尔宁组无明显差异(P0.05);芪黄补肺汤组、顺尔宁组ASMC凋亡指数和Cyt-C含量较阳性对照组均有上调(P0.01),芪黄补肺汤组优于顺尔宁组(P0.01)。结论:芪黄补肺汤能够抑制哮喘模型大鼠气道重塑,其机制可能通过激活凋亡蛋白Cyt-C促进ASMC凋亡而实现。     

PI3K／Akt／p70^S6K途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的 观察哮喘大鼠肺组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)活性变化,以探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号转导途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用.方法 采用卵蛋白致敏和激发方法将24只SPF级健康雄性SD大鼠制成慢性哮喘模型,随机分为哮喘组(A组)和渥曼青霉素(wortmannin)干预组(W组),同时设正常对照组(C组,共12只),分别观察各组大鼠气道炎症和细胞浸润情况,并测定气道壁厚度(Wat)、气道平滑肌层厚度(Wam)、支气管基底膜周径(Pbm)和肺组织中P-Akt、p-p70S6K、cyclinD1表达水平.结果 A组和W组大鼠Wat/Pbm、Wam/Pbm、肺组织P-Akt、p-p70S6K蛋白、cyclinD1 mRNA的含量均大于C组(均P＜0.01);W组大鼠上述各指标的含量均小于A组(均P＜0.01).肺组织P-Akt蛋白的含量与Wam/Pbm、p-p70S6K蛋白含量和cyclinD1 mRNA含量均呈显著正相关性(均P＜0.01).结论 哮喘大鼠肺组织中P13K/AktJp709S6K途径激活,抑制该途径可减少哮喘大鼠ASMCs增殖,从而减轻哮喘气道重塑;同时CyclinD1在哮喘大鼠肺组织中表达增高,且与p-Akt及p-p70S6K表达趋势一致,提示P13K信号转导途径可能通过激活cyclinD1促进ASMCs增殖.     

布地奈德对哮喘气道重塑大鼠骨桥蛋白和mRNA表达的影响

目的探讨布地奈德对气道重塑模型大鼠肺组织骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其在哮喘气道重塑中的作用。方法大鼠于第1天和第8天腹腔注射卵清蛋白(OVA)/AI(OH)3,第15天起雾化吸入OVA激发,隔天1次,制备哮喘气道重塑幼年大鼠模型。布地奈德组在雾化吸入OVA前30 min,给予雾化布地奈德混悬液(2ml:1mg)。正常对照组以生理盐水代替OVA。运用彩色医学图像分析系统测量大鼠支气管壁总面积和平滑肌面积,计算平滑肌厚度(Wam)和支气管壁厚度(Wat),通过反转录-聚合酶链(RT-PCR)测定各组大鼠肺组织中OPN的mRNA,运用免疫组化法测定各组大鼠OPN蛋白的表达,并对Wat、Wam与OPN的蛋白和mRNA表达进行相关性分析。结果哮喘组Wat及Wam显著高于对照组,布地奈德组较哮喘组显著降低(P均<0.01)。免疫组化检测结果提示,布地奈德组OPN蛋白的表达高于正常对照组,但显著低于哮喘组,差异具有统计学意义(P均<0.01)。RT-PCR检测结果显示,哮喘组OPN mRNA表达均高于正常对照组,布地奈德组组较哮喘组显著减弱,差异具有统计学意义(P均<0.01)。肺组织中Wat、Wam与OPN的蛋白、mRNA表达均呈正相关。结论布地奈德能显著抑制哮喘大鼠OPN的表达,缓解气道重塑。     

姜黄素对慢性哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液中ICAM-1水平的影响

目的 探讨姜黄素对慢性哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平的影响.方法 选取30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组,分别为正常对照组(N组)、模型对照组(A组)、姜黄素组(C组),每组各10只,制作慢性哮喘大鼠模型,取肺组织行苏木精-伊红染色(HE染色)观察其病理变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA法)测定血清与肺泡灌洗液(BALF液)中的ICAM-1的表达量.结果 (1)A组支气管壁厚度(Wat)、平滑肌厚度(Wam)显著高于同时期N组、C组(P均＜0.01).(2)A组血清及BALF液中ICAM-1含量显著高于同时期N组、C组(P均＜0.01).结论 姜黄素可以降低血清和肺泡灌洗液中ICAM-1含量,其可能是降低哮喘大鼠气道重塑的重要原因之一.     

哮喘气道重塑大鼠尾加压素Ⅱ促转化生长因子-β1表达的研究

目的 研究哮喘气道重塑大鼠尾加压素Ⅱ(UⅡ)和转化生长因子(TGF)-β1的表达变化,探讨UⅡ对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中TGF-β1表达的调控作用.方法 以卵清白蛋白(OVA)致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型,16只雄性SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,每组8只.分别采用免疫组织化学法(IHC)和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定UⅡ和TGF-β1的蛋白和mRNA的表达.体外培养哮喘大鼠ASMC,分为对照组和UⅡ刺激组,其中UⅡ刺激组根据UⅡ干预时间的不同分为:4、8、12、24和48h组;按加入UⅡ浓度的不同分为:0.4、4、10、40和400nmol/L组.酶联吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中TGF-β1蛋白含量,实时定量PCR(real-time PCR)检测ASMC中TGF-β1mRNA表达变化.结果 哮喘组肺组织UⅡ蛋白、TGF-β1蛋白表达较对照组均明显升高,具有显著性统计学意义(P＜0.01);哮喘组肺组织中UⅡmRNA和TGF-β1 mRNA含量与对照组比较均明显增加,具有显著性统计学意义(P＜0.01).体外实验显示:UⅡ不同时间点促哮喘大鼠ASMC中,TGF-β1 mRNA的表达4h开始上升,24h达到高峰;TGF-β1蛋白表达于12h开始增加,24h达到高峰.UⅡ不同浓度促哮喘大鼠ASMC中,TGF-β1mRNA和蛋白表达均于4nmol/L开始上升,40nmol/L达到高峰.结论 哮喘大鼠肺组织中UⅡ和TGF-βl呈高表达;UⅡ对哮喘大鼠ASMC中TGF-β1的表达可能存在调控作用,且呈一定时间-浓度依赖性.     

哮喘大鼠气道平滑肌细胞caveolae的变化及罗红霉素的调控作用

目的观察支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气道平滑肌细胞微囊（caveolae）及微囊蛋白一1（caveolin一1）的表达变化,并探讨罗红霉素对其表达的影响。方法SPF级雄性SD大鼠24只,采用数学表法随机分为对照组（c组）、哮喘组（A组）、罗红霉素组（R组）,每组8只。以卵白蛋白致敏和激发的方法复制大鼠哮喘气道重塑模型,图像分析软件测定气道壁厚度（Wat／Pbm）及气道平滑肌层厚度（Wam／Pbm）;透射电镜观察eaveolae超微结构;Westernblot法测定caveolin—l的表达变化。结果（1）A组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm大于C组（P〈0．01）;R组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm小于A组（P〈0．01）,大于C组（P〈0．01）;（2）透射电镜显示c组ASMC胞膜及胞质eaveolae含量丰富、形态多样,A组caveolae含量少、结构单一,R组eaveolae含量明屁减少,但较A组多;（3）Westernblot法显示c组caveolin一1高表达,A组表达明显低于c组（P〈0．01）;R组caveolin-1表达显著高于A组（P〈0．01）,但较c组表达减少;（4）caveolin-1表达与Wam／Pbm呈负相关（r=-0．928,P〈0．01）。结论哮喘大鼠气道平滑肌细胞eaveolae结构明显减少,caveolin-1表达减少,提示caveolae缺乏与哮喘气道重塑有密切关系,罗红霉素可能通过caveolae的影响而抑制哮喘气道重塑。     

磷脂酰肌醇3激酶途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：观察哮喘大鼠肺组织中p-Akt、p-p70^s6k含量变化,探讨磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）信号转导途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖中的作用。方法：SPF级健康雄性SD大鼠36只,随机分为对照组（C组）、哮喘组（A组）和wortmannin干预组（W组）,每组12只。以卵蛋白（OVA）致敏和激发的方法制备大鼠慢性哮喘模型。观察各组大鼠气道炎症和细胞浸润情况;以图像分析软件测定气道壁厚度（Wat）及气道平滑肌层厚度（Wam）;以Westernblot法检测肺组织p-Akt及p-p70^s6k表达情况。结果：①A组大鼠War、Wam大于C组（P〈0．01）;W组大鼠War、Wam小于A组（P〈0．01）,大干C组（P〈0．01）。②A组p-Akt及p-p70^s6k。含量均高于C组（P〈0．01）;W组低于A组（P〈0．01）,但高于C组（P〈0．01）。③p-Akt蛋白含量与Wam／Pbm呈显著正相关（r=0．779,P〈0．01）;p=Akt蛋白含量与P—p70^s6k蛋白含量呈显著正相关（r=0．803,P〈0．01）。结论：哮喘大鼠肺组织中P13K／Akt／p70^s6k途径激活,抑制该途径可减轻哮喘大鼠ASMC增殖。     

地塞米松对哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖及转化生长因子β1表达的影响

目的探讨地塞米松干预对哮喘小鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖及转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法建立哮喘小鼠气道重塑模型,实验分为对照组、哮喘组和地塞米松组。测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞（EOS）计数及活性TGF-β1表达的变化,行HE染色及PCNA、TGF-β1免疫组化染色,图像分析测定管腔基底膜周长（Pbm）、气管壁总面积（WAt）、气道平滑肌面积（WAm）、ASMC核数（N）及TGF-β1在ASMC的灰度值。结果哮喘组EOS计数明显升高,出现管壁、平滑肌层明显增厚及ASMC增殖等气道重塑的特征,与TGF-β1的表达呈正相关。地塞米松组与哮喘组比较炎症反应减轻,管壁、平滑肌层增厚及ASMC增殖减少（P均小于0.05）,TGF-β1表达减弱（P〈0.05）。与对照组间比较差异无显著性（P均大于0.05）。结论反复的变应原吸入可导致气道重塑尤其是ASMC增殖,TGF-β1在ASMC增殖中可能具有重要作用,地塞米松干预可减缓气道重塑尤其是ASMC增殖的发生。     

TGF-β1和Smad6在哮喘大鼠气道重塑中的表达及福莫特罗的影响

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-B1)和Smad6在支气管哮喘(简称哮喘)大鼠肺组织中表达变化及福莫特罗对其表达的影响.方法 无特定病原体级(SPF)健康雄性SD大鼠60只,根据干预方法和时间分为对照组(A2和A4),哮喘组(B2和B4),福莫特罗组(C2和C4),每组10只.用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏与激发,建立哮喘大鼠气道重塑模型,福莫特罗组模型制作同哮喘组,在激发阶段,激发前30 min给予福莫特罗灌胃处理,各组均在末次激发后1～2h处死大鼠.采用图像分析技术测定肺内支气管壁厚度(Wat)及支气管平滑肌厚度(Wam);免疫组化法测定肺组织中TGF-β1,及Smad6蛋白表达.结果 (1)Wat:C2组和B2组比较差异无统计学意义(P＞0.05),两者均显著厚于A2组(均P＜0.01),C4组显著薄于B4组(P＜0.01),两者均显著厚于A4组(均P＜0.01);(2)Wam:C2组显著薄于B2组(P＜0.01),两者均显著厚于A2组(均P＜0.01),C4组显著薄于B4组,两者均显著厚于A4组(均P＜0.01);(3)肺组织TGF-β1蛋白平均吸光度值:C2组低于B2组(P＜0.05),两者均显著高于A2组(均P＜0.01),C4组低于B4组(均P＜0.05),两者均显著高于A4组(均P＜0.01);(4)肺组织Smad6蛋白平均吸光度值:C2组与B2组比较差异无统计学意义(P＞0.05),两者均显著低于A2组(均P＜0.01),C4组显著低于B4组(P＜0.01),两者均显著高于A4组(均P＜0.01).结论 TGF-β1在哮喘气道重塑大鼠肺组织中表达增高,Smad6表达减低;TGF-β1和Smad6表达失衡可能促进了哮喘气道重塑的发生和发展;福莫特罗可抑制哮喘大鼠TGF-β1表达,促进Smad6表达,作用随激发时间延长而增强.     

古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠表达P62、TGF-β1的影响

目的探讨古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠P62、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分成正常组、哮喘组、肾阳虚哮喘组、古汉养生精低、中、高剂量组,每组5只。以氢化可的松制备肾阳虚模型,卵蛋白与氢氧化铝致敏激发制备哮喘模型,造模成功后 通过灌胃方式,各剂量组予以相应剂量古汉养生精,在最后一次激发24 h后,于大鼠左肺切取部分组织,用于行苏木精-伊红(HE)染色,应用图像分析技术测定支气管基底膜周径(Pbm)、支气管管壁面积(Wat)、支气管内壁面积(Wai)、支气管管壁平滑肌面积(Wam),所得数据采用Pbm进行标化,得到Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm等重塑指标;取右肺组织使用qRT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达,采用Western blot检测肺组织P62蛋白的表达。结果肾阳虚哮喘组大鼠病理改变较哮喘组大鼠明显,各剂量组较肾阳虚哮喘组大鼠病理改变明显减轻(P＜0.05)。肾阳虚哮喘组Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm较哮喘组升高,各剂量组较肾阳虚哮喘组降低(P＜0.05)。肾阳虚哮喘组肺组织中TGF-β1 mRNA表达量较正常组明显上升(P＜0.05),各剂量组TGF-β1 mRNA表达量较肾阳虚哮喘组降低(P＜0.05)。肾阳虚哮喘组P62表达较哮喘组降低,而各剂量组P62表达较肾阳虚哮喘组升高(P＜0.05)。结论古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠的气道重塑有抑制作用,可能机制与调控P62、TGF-β1的表达相关。     

姜黄素对支气管哮喘大鼠气道重塑和核因子-κB的影响

目的:探讨姜黄素对支气管哮喘大鼠气道重塑及核因子-κB(NF-κB)的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组、姜黄素组,各10只;采用卵蛋白(OVA)致敏复制大鼠哮喘模型。观察3组大鼠气道炎症、气道壁厚度、胶原沉积及NF-κB和转化生长因子(TGF-β1)表达情况。结果:哮喘组大鼠炎性细胞浸润、胶原沉积、气道壁厚度、NF-κB、TGF-β1表达与对照组比较有显著性差异(P<0.01),而姜黄素组较哮喘组明显减轻(P<0.01);NF-κB与TGF-β1表达、气道炎症、气道壁厚度、胶原沉积变化成正相关(P<0.01)。结论:姜黄素可抑制哮喘大鼠NF-κB活性以干预其气道重塑。     

川芎嗪对哮喘大鼠气道壁平滑肌增殖及TGF-β1表达的影响

目的观察川芎嗪对哮喘大鼠气道壁平滑肌增殖及转化生长因子(TGF-β1)表达的影响.方法32只SD大鼠均分为正常对照组、以卵蛋白致敏制备的哮喘模型组以及给予不同剂量川芎嗪进行干预的小剂量、大剂量川芎嗪干预组共4组,采用免疫组织化学和计算机图像分析方法测定各组大鼠气道壁TGF-β1含量、平滑肌层厚度及内外径.结果模型组气道壁TGF-β1含量和平滑肌层厚度较正常组均显著增加(均为P<0.001),气道内外径比值较正常组减小(P<0.001).两种剂量川芎嗪干预组平滑肌层厚度均较模型组变薄(均为P<0.001),TGF-β1含量均较模型组减低(均为P<0.001),气道内外径比值均高于模型组(均为P<0.001),两种剂量川芎嗪干预组间平滑肌厚度无差别(P>0.05),大剂量组对TGF-β1表达抑制较小剂量组强(P<0.01).气道壁平滑肌层厚度与TGF-β1表达呈正相关(rs=0.5878,P<0.01).结论川芎嗪能减轻哮喘大鼠气道壁平滑肌层的增厚并抑制TGF-β1表达.     

p27kip-1在支气管哮喘气道上皮组织中的表达及意义

【目的】探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p27kip-1在支气管哮喘气道上皮组织中的表达及意义。【方法】60只雄性SD大鼠随机分为对照组与哮喘组,每组30只。用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型。应用免疫组化SP法,检测对照组和哮喘组气道上皮组织中气道黏膜上皮细胞、p27kip-1的表达情况;测定两组气道上皮组织中气道平滑肌增生细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的阳性计数。分离各组气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC),以α-Actin抗体标记其核数。【结果】半定量评分显示,哮喘组气道黏膜上皮细胞及p27kip-1显著低于对照组(P<0.05),哮喘组PCNA阳性计数、ASMC核数显著大于对照组(P<0.01)。【结论】支气管哮喘时,p27kip-1在气道上皮组织中表达减少。通过上调p27kip-1在气道上皮组织表达可以抑制气道上皮组织中ASMC的增殖,为哮喘的防治研究提供了新思路。     

P27KiP-1蛋白对支气管哮喘大鼠气道平滑肌增生的影响

目的 探讨P27Kip-1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增生及气道重塑的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠30只,随机分成对照组(C)、哮喘4周组(A1)、哮喘6周组(A2)每组10只.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型,末次激发后24h内测气道反应性和观察气道壁炎性细胞的浸润情况,图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度;免疫组化法检测增生细胞核抗原(PCNA)及P27Kip-1表达.结果 哮喘4周和6周组P27Kip-1蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05),且6周组低于4周组(P＜0.05);哮喘4周和6周组PCNA表达、支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度和气道反应性均显著高于对照组(P＜0.01),且6周组高于4周组(P＜0.01).结论 P27Kip-1可抑制气道平滑肌细胞增生进而影响气道重构与气道高反应性.     

平喘Ⅰ号对支气管哮喘小鼠气道重塑中SDF-1及CXCR4表达的影响

目的研究平喘Ⅰ号调节基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体CXCR4在支气管哮喘小鼠肺内表达变化及影响。方法 72只雌性BALB/C小鼠按数字随机分为正常对照组、模型对照组、布地奈德组、平喘Ⅰ号低剂量组、中剂量组、高剂量组,共6组,每组12只。通过卵清蛋白(OVA)致敏和激发复制支气管小鼠哮喘模型,然后分别予生理盐水、布地奈德药物及中药平喘Ⅰ号低、中、高剂量干预。取小鼠肺组织,通过病理切片观察,图像分析软件测定支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam),采用实时定量PCR测定小鼠肺组织中SDF-1 mRNA及CXCR4 m RNA的含量,通过免疫印迹法检测肺组织中SDF-1及CXCR4的蛋白表达水平,采用线性相关分析技术测量了SDF-1与CXCR4的相关性。结果 SDF-1及CXCR4的表达水平在正常对照组中较低,在模型对照组中表达水平明显增高(P均0.01)。与模型对照组比较,平喘Ⅰ号各剂量组和布地奈德组中SDF-1及CXCR4的表达水平均明显降低(P0.01或P0.05);其中布地奈德组表达水平低于平喘Ⅰ号低剂量和中剂量组(P0.05或P0.01),而中药高剂量组的表达水平低于布地奈德组(P0.05)。结论在支气管哮喘气道炎症及其气道重塑过程中,SDF-1及其受体CXCR4两者相互作用,干预其重塑过程。平喘Ⅰ号通过影响SDF-1及CXCR4在肺内的表达而干预哮喘气道重塑,达到缓解哮喘症状的作用。     

Rho／Rho激酶在哮喘小鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的研究Rho／Rho激酶（ROCK）信号通路在哮喘小鼠气道中的表达及其对气道重塑的作用。方法清洁级BALB／c雄性小鼠39只,随机分为对照组、哮喘组、Y-27632干预组、地塞米松干预组,每组10只（其中对照组9只）。建立哮喘小鼠模型,并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预,光镜观察肺组织结构,Image—proplus图像分析软件测量支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白含量,RT—PCR法测定RhoA、ROCKⅡ mRNA含量。结果（1）哮喘组小鼠RhoA、ROCKⅡ表达明显增高,应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。（2）Y-27632干预组小鼠Wat和Wam均明显低于哮喘组小鼠。结论哮喘小鼠肺组织RhoA及ROCKⅡ表达增多,ROCKll受体拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达,明显抑制哮喘小鼠Wat和Wam。     

TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响研究

目的：探究TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响,进一步揭示哮喘的发病机制。方法建立大鼠慢性哮喘模型,原代分离培养大鼠ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、TGF-β1组和TGF-β1＋PD-98059组,以CCK-8法检测细胞增殖,Western blot法检测caveolin-1和p- ERK1/2蛋白表达。结果 TGF-β1组细胞增殖较正常组和哮喘组明显（均P＜0.01）;TGF-β1＋PD-98059组细胞增殖较TGF-β1组减低,但较哮喘组仍明显（均P＜0.05）。TGF-β1组p- ERK1/2表达量较正常组和哮喘组增加;TGF-β1＋PD-98059组p- ERK1/2表达量较TGF-β1组减少,但较哮喘组表达量仍有所增加（均P＜0.05）。TGF-β1组caveolin-1表达量较正常组和哮喘组减少（均P＜0.05）;TGF-β1＋PD-98059组caveolin-1表达量较TGF-β1组增加（P＜0.05）。结论 TGF-β1可以下调caveolin-1蛋白的表达量,激活ERK通路,从而促进哮喘大鼠ASMC的增殖,引起气道重塑。     

哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖及细胞周期蛋白D1表达的差异

目的:研究哮喘小鼠气道重建模型中气道平滑肌细胞(ASMC)的细胞增殖、细胞周期及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的变化,探讨cyclin D1对支气管哮喘气道重建中平滑肌细胞增殖过程及细胞周期的影响,进而为哮喘的诊断和治疗提供新的依据.方法:用Balb/c小鼠建立哮喘气道重建模型后进行ASMC原代培养,并以原代培养的正常小鼠ASMC为对照组,以四唑盐比色试验(MTF)检测细胞增殖能力,流式细胞术(FCM)测定细胞周期,FCM检测cyclin D1表达.结果:与对照组比较,哮喘组细胞的细胞增殖显著增快(P＜0.05);细胞周期中S期比例明显增高;cyclin D1在胞质中表达明显增加.结论:在哮喘气道重建过程中ASMC经历了一定程度的过增殖过程,cyclin D1的表达增加参与了细胞增殖,气道重建环境可刺激气道平滑肌细胞增殖能力.     

TGF-β_1对不同阶段哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用

目的探讨TGF-β1对不同阶段哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用。方法建立2周、6周哮喘大鼠模型,分别以1μg/L、10μg/L和100μg/LTGF-β1干预ASMCs生长。采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度TGF-β1对ASMCs增殖的影响。结果 2周和6周哮喘组ASMCs的S期比例、A值分别为(34.31±1.41)%、(35.96±3.46)%;(0.546±0.005)、(0.559±0.009)与对照组(12.24±2.64)%、(0.289±0.009)比较均显著增高(均P0.01)。2周、6周哮喘模型组的各TGF-β1干预组ASMCs的S期比例、A值与各自哮喘组比较均显著升高(均P0.01),10μg/L和100μg/LTGF-β1组比1μg/LTGF-β1组对ASMCs增殖作用明显增加(P0.01),10μg/LTGF-β1组和100μg/LTGF-β1组相比,ASMCs增殖细胞占细胞总数的百分比无明显变化,两种浓度增殖作用无有明显差别(P0.05)。而2周和6周哮喘组相比,加入不同浓度TGF-β1干预后的差别不大(P0.05)。结论与正常鼠相比,2周和6周哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高,6周哮喘大鼠气道平滑肌较2周哮喘大鼠增殖更明显。经TGF-β1干预后,2周和6周哮喘哮喘大鼠气道平滑肌细胞处于S期的细胞比例增加,增殖增强,提示TGF-β1可能在哮喘早期阶段即可促进大鼠气道平滑肌细胞增殖,并促进各阶段哮喘大鼠气道平滑肌细胞持续增殖。