姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌抑制效应及其机制

目的 检测姜黄素在体外对雄激素非依赖性前列腺癌细胞(PC-3)生物学行为的影响,并探讨其机制.方法 分别采用CFSE染色、Annexin V-PI染色和PI染色法,使用流式细胞仪分析姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.然后采用荧光素酶报告基因系统检测姜黄素在体外对核因子-κB(NF-κB)、激活蛋白-1(AP-1)和p53三个信号通路的影响.结果 50μmol/L的姜黄素作用后,PC-3细胞的增殖指数从7.08±0.20降到4.38±0.19(P＜0.05);凋亡率从(5.34±0.96)%提高到(21.53±2.87)%(P＜0.05);G2/M期细胞比例由(34.27±1.87)%上升到(57.29±1.91)%(P＜0.05).荧光素酶活性检测结果显示,姜黄素能在体外抑制NF-κB和AP-1信号通路活性(P＜0.05).结论 姜黄素能在体外显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡并导致细胞周期的阻滞.姜黄素可能通过抑制NF-κB和AP-1信号通路发挥抑癌效应.     

17 β雌二醇通过丝裂原活化蛋白激酶抑制前列腺癌细胞系PC3增殖

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶在17β雌二醇(E2)抑制前列腺癌PC3细胞生长中的作用。方法检测不同浓度E2作用不同时间后PC3细胞生长抑制率。流式细胞仪分析细胞周期分布,TUNEL染色检测凋亡。Western blot检测ERK1/2,JNK和p38活性。RT-PCR法检测雌激素受体(ER)α、ERβ、P21WAF1和cyclinD1的表达。结果E2抑制PC3细胞增殖,并且可以激活ERK1/2、JNK和p38。处理因素作用48h后,对照组、E2、E2 PD98059、E2 SP600125、E2 SB203580组细胞的凋亡率分别为(0.9±0.1)%;(23.0±1.4)%;(30.0±1.2)%;(10.6±0.8)%和(14.6±0.7)%,(P<0.05)。E2使细胞阻滞在G1期,PD98059、SP600125、SB203580分别预处理1h后细胞分别进一步阻滞在G1期;轻度阻滞在G1期和进入S期。RT-PCR发现PC3细胞表达ERα和ERβ,E2、E2 PD98059、E2 SP600125、E2 SB203580组中cyclinD1、P21WAF1基因表达分别为对照组的(0.42±0.03)、(3.13±0.02)倍;(0.21±0.03)、(3.08±0.05)倍;(0.43±0.01)、(1.31±0.04)倍;(2.81±0.02)、(3.14±0.02)倍(P<0.05)。结论E2激活JNK增加P21WAF1基因表达,并激活p38抑制cyclinD1表达,使细胞阻滞在G1期,JNK和p38通路还介导E2引起PC3细胞凋亡。同时E2又可激活ERK1/2,轻度拮抗上述作用。     

去甲二氢愈创木酸对前列腺癌PC-3细胞作用机制的实验研究

目的 观察脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响并探讨其相关机制. 方法以不同浓度(0、20、40,80和160 μmol/L)的NDGA干预体外培养的前列腺癌PC-3细胞.通过细胞形态学观察、四甲基偶氮唑盐比色法及TUNEL法检测NDGA对PC-3细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,流式细胞术检测其活化Caspase-3的表达情况.结果 40、80、160μmol/L NDGA对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,作用强度具有时间和剂量依赖性.0、20、40、80和160μmol/L NIX;A作用48 h后,PC-3细胞凋亡指数分别为(2.9±0.2)%、(3.2±0.3)%、(68.5±0.8)%、(86.2±0.3)%和(86.9±0.6)%,后3组与第1组比较差异有统计学意义(P<0.05).0、20,40、80和160/μmol/L NDGA作用PC-3细胞48 h后活化Caspase-3的阳性率分别为(3.9±0.0)%、(4.1±0.1)%、(55.5±0.8)%、(75.1±0.3)%和(76.3±0.7)%,后3组与第1组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 NDGA能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖、诱导其凋亡,作用呈剂量和时问依赖性,其机制可能与PC-3细胞Caspase-3活化有关.     

汉黄芩素通过激活活性氧簇介导的p38MAPK信号通路诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡

目的探讨汉黄芩素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)凋亡的影响以及作用机制。方法类风湿关节炎患者关节滑液经原代培养,应用3~5代传代的成纤维样滑膜细胞。按照不同方法处理分为6组:空白对照组、低剂量汉黄芩素组(终浓度为20μg/mL)、中剂量汉黄芩素组(终浓度为50μg/mL)、高剂量汉黄芩素组(终浓度为100μg/mL)、100μg/mL汉黄芩素+NAC组、100μg/mL汉黄芩素+SB203580组。MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),DCFH-DA染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot法检测p38MAPK通路相关蛋白的表达。结果与正常对照组相比,各剂量汉黄芩素均能够抑制RA-FLS细胞的增殖,增加其凋亡,降低MMP以及增加ROS水平,激活p38MAPK信号通路,并且呈现剂量依赖性关系。ROS清除剂NAC和p38抑制剂SB203580可以明显降低汉黄芩素诱导的RA-FLS细胞的凋亡,并且5 mmol/L NAC下调汉黄芩素引起的p38MAPK磷酸化。结论汉黄芩素能够诱导RA-FLS细胞凋亡,ROS/p38MAPK信号通路参与了其凋亡的过程。     

P38信号通路在脂多糖诱导的大鼠系膜细胞产生白细胞介素1β中的作用

目的探讨p38信号通路在肾小球系膜细胞促炎介质白细胞介素l(IL-1)β表达中的作用.方法采用免疫沉淀法、免疫复合物蛋白激酶测定,Western blotting检测p38信号通路在脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA观察p38信号通路抑制剂SB203580对肾小球系膜细胞促炎介质IL-lβ mRNA和蛋白质表达的影响.结果脂多糖刺激肾小球系膜细胞引起p38信号通路活化,p38信号通路抑制剂SB203580对肾小球系膜细胞促炎介质表达有显著抑制作用.结论 p38信号通路在大鼠系膜细胞炎症反应产生炎症介质IL-1β中可能起主要的作用.     

生育酚结合蛋白对氧化应激所致前列腺癌细胞凋亡的调控作用

目的 观察生育酚结合蛋白(TAP)对氧化应激所致前列腺癌细胞凋亡的调控作用.方法 脂质体法分别转染pEGFP-N3-TAP质粒及空载体质粒进入前列腺癌细胞PC-3.以过氧化氢(H2O2)刺激PC-3细胞构建氧化应激模型,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测TAP的表达,流式细胞技术检测各组细胞的凋亡.结果转染TAP后的PC-3细胞中TAP表达量明显升高.RT-PCR结果显示,H2O2单独或联合促氧化剂丁胱亚磺酰亚胺(BSO)刺激细胞后TAP的mRNA表达量分别为(2.457±0.113)、(3.643±0.162)较对照组(0.721±0.048)显著上升,差异有统计学意义(P<0.01);在无H2O2刺激的对照组PC-3、PC-3-vector、PC-3-TAP细胞的凋亡率分别为2.42%、3.69%、15.37%;在H2O2刺激下,各组凋亡率分别为7.56%、16.71%、43.93%;联合应用BSO与H2O2,各组凋亡分别为13.73%、26.36%、49.19%.结论 TAP基因可参与前列腺癌细胞对氧化应激的应答反应,并促进氧化应激所致的前列腺癌细胞凋亡.     

三氧化二砷对前列腺癌DU-145细胞周期阻滞及凋亡的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对前列腺癌非雄激素依赖细胞系DU-145细胞的增殖抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响.方法应用体外细胞生长抑制试验(MTT比色法)研究As2O3对DU-145细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期分布情况及凋亡情况,琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA的变化.结果As2O3对DU-145细胞的增殖有明显的抑制作用,随着药物浓度增加和作用时间延长,凋亡细胞明显增加,出现G2/M期阻滞和DNA的断裂.结论As2O3可明显抑制前列腺癌DU-145细胞的增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞周期.     

丝裂霉素诱导胆管癌细胞凋亡过程中p38MAPK表达的研究

目的研究丝裂霉素诱导胆管癌细胞凋亡过程中p38MAPK表达的变化 ,探讨p38MAPK在其中的作用。方法用AnnexinV PI染色及流式细胞技术分析丝裂霉素及p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80对胆管癌细胞凋亡的影响 ,同时利用Westernblot法测定经丝裂霉素及SB2 0 35 80处理人胆管癌RBE细胞后 ,p38MAPK及其下游ATF 2 (反映p38MAPK激酶活性 )的表达水平。结果丝裂霉素诱导RBE细胞凋亡率为 (8 91± 0 83) % (P <0 0 1) ,同时p38MAPK和ATF 2 (p38MAPK下游基因 ,反映其激酶活性 )表达显著升高 (P <0 0 1)。用SB2 0 35 80阻断p38MAPK通路后 ,丝裂霉素诱导凋亡的作用进一步加强 ,凋亡率达 (2 2 2± 2 6 ) % (P <0 0 1)。结论丝裂霉素可以活化p38MAPK通路 ,p38MAPK可能起到保护胆管癌RBE细胞逃避丝裂霉素诱导的凋亡 ,阻断该通路可增强丝裂霉素诱导胆管癌细胞凋亡的作用。     

米非司酮诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡过程中PKB/Akt激酶的调控作用

目的 观察米非司酮在体外诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的作用机制以及Akt激酶在前列腺癌生长过程中的作用.方法 采用Western blot方法检测不同前列腺癌细胞株癌细胞以及米非司酮作用后PC-3细胞中Akt蛋白磷酸化后蛋白含量,以及相关蛋白的表达量.结果 前列腺癌PC-3细胞中Akt磷酸化后蛋白即[p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)]的含量明显高于激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞中的蛋白表达量,其表达量分别为0.27±0.05和0.22±0.07;0.46±0.09和0.37±0.10(P＜0.05).10 μmol/L米非司酮作用于PC-3细胞后p-Akt(Th308邶)和p-Akt(Ser473)磷酸化蛋白的含量均明显下降,但其中p-Akt(Thr308)蛋白表达量变化尤为显著,4～24h4个时间组蛋白含量分别为0.24±0.08、0.11±0.03、0.05±0.01和0.01±0.00;其蛋白表达量下降速度较p-Akt(Ser473)快且显著,p-Akt(Ser473)磷酸化蛋白4～24 h 4个时间组蛋白含量分别为0.56±0.17、0.42±0.11、0.28±0.09和0.12 ±0.05.米非司酮作用于PC-3细胞后使Caspase-9、Caspase-3被激活裂解出有活性的激活片段.结论 Akt激酶在前列腺癌生长、发展以及激素依赖性向激素非依赖性的转变过程中起着重要作用.p-Akt(Thr308)蛋白磷酸化水平在Akt磷酸化激活过程中占主导地位,是Akt激活的必要过程.米非司酮抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其可能是通过抑制Akt信号转导通路,从而激活Caspase.     

三氧化二砷诱导乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的实验研究

目的观察不同浓度的三氧化二砷(As2O3)作用不同时间后对乳腺癌细胞系MCF-7的影响及其作用机理。方法应用不同浓度的As2O3作用于乳腺癌细胞后,观察As2O3对乳腺癌细胞生长状态的影响;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察其对MCF-7细胞增殖的影响;应用琼脂糖凝胶电泳和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测As2O3对MCF-7细胞凋亡的诱导作用。结果不同浓度的As2O3作用于乳腺癌细胞有明显的时间和剂量依赖性,As2O3作用后细胞生长明显受抑制,并出现明显的凋亡特征性改变(细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成);经1、2、4及8μmol/L4个剂量的As2O3处理48h后,琼脂糖凝胶电泳检测到细胞发生凋亡时DNA降解形成梯形分子条带;4μmol/LAs2O3作用24、48及72h后TUNEL法可检测到细胞凋亡水平显著性升高。结论As2O3可明显抑制乳腺癌细胞的生长,其机理主要是诱导乳腺癌细胞凋亡。     

胸腰椎骨折椎弓根内固定断裂与植骨融合方式的相关性分析

[目的]探讨胸腰椎骨折椎弓根螺钉内固定系统内固定术后,椎弓根螺钉断裂与植骨融合方式之间的关系,以探讨胸腰椎骨折植骨融合的最佳方式。[方法]回顾性研究1995年5月~2005年12月本院脊柱外科收治的胸腰椎骨折病人197例,其中A组单纯内固定(不植骨)患者14例,B组“H”形椎板植骨21例,C组横突间植骨67例,D组椎间、椎内联合横突间植骨95例。[结果]术后随访6~32个月,内固定断裂12例,其中A组4例,B组3例,C组5例,D组0例,4组中D组内固定断裂率显著低于其他3组(P<0.05)。[结论]椎间、椎体内联合横突间植骨重建脊柱三柱的稳定性,符合人体生物力学原理,能有效降低内固定断裂的发生。     

Study of the correlations between the volumes of the hypophysis, the epiphysis and the subfornical organ to the somatic weight and the volume of the hypothalamus in rodents]

The correlations between volume of the hypophysis, of the epiphysis and of the subfornical organ to body weight and volume of the hypothalamus were studied on 193 rodents belonging to 41 species. Concerning the volume of the hypophyseal lobes the regression slopes of Rodentia occupy an intermediate position between those of Isectivora and Prosimians studied by BAUCHOT. The volume of the epiphysis increases more rapidly with the weight of the body than that of the hypophyseal lobes, the volume of the subfornical organ increases on the contrary more slowly.     

Characteristics of the receptors in the isolated capsule of the hip in the cat

Summary The properties of the afferent fibres from the capsule of the hip joint have been studied in the cat in situ, in relation to joint rotation, and in an isolated capsule preparation which was opened and stretched directly with an actuator.In situ two types of afferent fibres were found, those having a full range of sensitivity and others having only a limited range in response to the joint rotation. When studied in isolated tissue the afferent fibres of the capsule were uniform in threshold and sensitivities, and no full range receptors were found. We conclude that the full range receptors which enter the articular nerve of the hip are spindle afferents and not capsule receptors. On the basis of these and previous results in animals and man the role of joint receptors in kinaesthesia and position sense is discussed.

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Résumé Les auteurs ont étudié les propriétés des nerfs afférents à la capsule de la hanche, chez le chat en imprimant à l'articulation des mouvements de rotation et sur des préparations de capsule isolée et ouverte en l'étirant directement grâce à un dispositif mécanique.In situ, on a trouvé deux types de nerfs afférents, les uns ayant en réponse à la rotation articulaire une étendue complète de sensibilité et les autres seulement une sensibilité limitée. Sur la capsule isolée les nerfs afférents sont indentiques en ce qui concerne le seuil et la sensibilité et on ne trouve aucun récepteur complet. On en conclut que les récepteurs de toute l'étendue de la sensibilité qui pénètrent les nerfs articulaires de la hanche sont des fibres en fuseau d'origine musculaire et non des récepteurs capsulaires. Sur ces bases et sur les résultats précédemment obtenus chez l'animal et chez l'homme, les auteurs discutent le rôle des récepteurs articulaires dans la cénesthésie et le sens des positions.