99Tcm标记反义肽核酸探针的制备及其荷瘤裸鼠体内分布

目的 探讨99Tcm标记反义肽核酸(PNA)探针的新方法及其在生物体内的分布.方法 合成12mer且5'端含有四肽G-(D)-A-G-G的c-myc mRNA反义、无义PNA片段,利用G-(D)-A-G-G形成的N4结构为螯合基团进行99Tcm标记,用聚酰胺薄膜层析法和高效液相色谱仪法(HPLC)测定其标记率和标记物的稳定性,并行人结肠癌荷瘤裸鼠体内分布[每克组织百分注射剂量率(%ID/g)]及显像研究.采用SAS 6.22软件对数据进行分析.结果 反义、无义PNA片段合成物的纯度>95%.99Tcm标记c-myc mRNA反义、无义PNA的标记率>95%,标记物室温放置18 h测定其标记率仍可达95%以上.c-myc mRNA反义、无义PNA片段4～8℃下放置3个月标记率仍>95%.HPLC测定标记物呈单峰.99Tcm标记c-myc mRNA反义PNA主要分布在荷瘤鼠肾、脾、肿瘤、肠道、肝组织中,99Tcm标记c-myc mRNA无义PNA在荷瘤鼠血液、脾、肾、肝及肺组织中分布较多;注射后4 h两者在荷瘤鼠肿瘤组织中的分布差异有统计学意义[(1.11±0.12)%ID/g和(0.14±0.02)%ID/g;t=14.75,P<0.01].99Tcm标记c-mycmRNA反义PNA在小鼠体内肿瘤/肌肉、肿瘤/肺的摄取比值较高,肿瘤显像明显.结论 用99Tcm标记c-myc mRNA反义、无义PNA的方法简单,标记率高,标记物稳定,前者有望成为一种新型肿瘤显像剂.     

^99Tc^m—hTERT mRNA反义分子探针荷MCF-7乳腺癌裸鼠显像

目的制备^99Tc^m-人端粒酶催化亚单位（hTERT）mRNA反义寡核苷酸（ASON）显像分子探针并验证其在荷MCF-7乳腺癌裸鼠早期诊断中的价值。方法采用双功能螯合剂法制备^99Tc^m-hTERT mRNA无义寡核苷酸（SON）、ASON探针。建立荷MCF-7乳腺癌裸鼠模型,运用阳离子脂质体介导法进行活体显像。采用SPSS12．0软件进行单因素方差分析。结果^99Tc^m-hTERT mRNA ASON标记率达到（76±5）％,放化纯〉96％,比活度达到1850kBq／μg。室温放置和健康人血清孵育24h后的放化纯均〉93％。SON与ASON的标记率基本一致。注射后4h反义组荷瘤裸鼠右上肢接种肿瘤部位可见放射性摄取,6～8h后显影清晰;无义组始终未见肿瘤部位放射性浓聚。反义组有和无脂质体介导的肿瘤／非肿瘤组织放射性（T／NT）比值分别为8．02±0．03和7．55±0．12,差异无统计学意义（t=-1．99,P〉0．05）;无义组有和无脂质体介导的T／NT比值分别为1．23±0．06和1．33±0．15,差异无统计学意义（t=0．42,P〉0．05）。但是分别比较反义组与无义组、脂质体介导组与无介导组间差异均有统计学意义（t=26．30和28．71,P均〈0．001）。结论^99Tc^m-hTERT mRNA ASON在荷瘤裸鼠活体内可与高表达hTERT基因的人乳腺癌MCF－7肿瘤组织特异靶向结合,在肿瘤分子功能显像中具有潜在应用价值。     

脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的研究脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内的分布及反义显像诊断结肠癌的可能性,为反义显像和反义治疗的临床应用提供实验依据.方法制作荷瘤裸鼠模型,每只小鼠尾静脉注射约0.30MBq脂质体包裹的99Tcm-反义寡聚核苷酸,于不同时间眼眶静脉采血后处死小鼠,测定不同组织中及标准源的放射性计数.荷瘤裸鼠尾静脉注入脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸(30～90mg),于注射后不同时间显像,观察其在肿瘤组织的浓聚情况,并以脂质体介导的99Tcm标记的正义和无义寡聚核苷酸为对照.结果胃、网状内皮系统和肿瘤组织放射性浓聚较高,其次为心和血,余组织中放射性分布较少.肿瘤组织中放射性在2h时达到高峰,以后迅速降低.在2h时,脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸能清晰显示肿瘤部位,而对照组则不能.结论脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸可用于结肠癌的诊断,但临床应用前还需进行大量的研究.     

99Tcm—survivinmRNA反义肽核酸制备及荷瘤裸鼠基因显像研究

目的制备99Tcm标记的survivinmRNA反义肽核酸（PNA）探针,并进行荷瘤裸鼠体内基因显像,研究其对肿瘤早期诊断的价值。方法化学合成survivinmRNA的反义、无义PNA,在5’端连上4个氨基酸[Gly一（D）Ala—Gly—Gly],形成1个类似N。结构的强螯合基团;为消除空间阻碍,引入1个1一氨基丁酸（Aba）作为隔离物,利用配体交换法进行99Tcm标记。用HPLC及ITLC对标记物的标记率、放化纯进行鉴定。并对反义、无义组各5只人肺癌A549荷瘤裸鼠行99Tcm一survivinmRNA反义、无义PNA体内显像。注药后1,2和4h分别显像,利用ROI测得肿瘤与对侧组织的rr／NT比值。结果分析采用SPSS13．0软件进行成组t检验。结果99Tcm一survivinmRNA反义PNA即刻标记率为（95．48±1．92）％,放化纯〉95％,且标记物体外稳定性好,与血清保温24h后标记率仍〉85％。无义PNA标记率与之基本一致。99Tcm一survivinmRNA反义PNA在肿瘤组织内特异性浓聚,随时间延长,浓聚程度逐渐增加,1,2和4hT／NT值分别为2．70±0．28,3．44±0．35和4．21±0．63。无义PNA在肿瘤组织中稍有浓聚,但在4h内变化不大,4h时T／NT值（3．12±0．50）与反义组差异有统计学意义（t=2．918,P：0．019）。结论99TcmsurvivinmRNA反义PNA即刻标记率高,稳定性好,无需纯化即可用于显像,在肿瘤组织中特异性浓聚,对肿瘤的早期诊断有潜在价值。     

^99Tc^m—survivin mRNA反义肽核酸基因显像在肿瘤与炎性反应模型中的对比研究

目的研究^99Tc^m-survivin mRNA反义肽核酸（PNA）显像在肿瘤特异性诊断中的价值。方法用^99Tc^m标记人工合成的12碱基单链survivin mRNA反义PNA。20只荷瘤（A549）裸鼠按随机数字表法分为4组,每组5只。每只裸鼠经尾静脉注入^99Tc^m-survivin mRNA反义PNA,3组进行体内分布研究,其余进行显像研究。用同样方法对20只炎性反应（金黄色葡萄球菌）小鼠进行分组、体内分布和显像研究。采用SPSS13．0软件进行统计学分析,组间计量资料比较采用t检验。结果^99Tc^m-survivin mRNA反义PNA在肝内分布最高,其次是肾,注射后4h肿瘤组靶／非靶（T／NT）比值明显高于炎性反应组,分别为3．69±1．13,2．03±0．47,差异有统计学意义（t=3．01,P=0．02）。肿瘤组在注射药物后0．5h即可见肿瘤清晰显影,至4h时显影仍较清晰,而炎性反应部位始终未见明显显影。结论^99Tc^m-survivin mRNA反义PNA基因显像可通过其在肿瘤组织中的特异性浓聚区分肿瘤与炎性反应,为肿瘤的特异性诊断提供了一种可能的新方法。     

脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义肽核酸在荷SKOV3卵巢癌裸鼠体内的分布及显像

目的 评价脂质体介导对^99Tc^m-表皮生长因子受体（EGFR） mRNA反义PNA体外靶细胞摄取、荷瘤裸鼠体内特异显像及生物学分布的影响.方法 利用碱基互补配对原则将带有短肽螯合功能的EGFRmRNA反义PNA与部分互补寡核苷酸杂交,再以配体交换法对反义探针进行^99Tc^m标记,然后以脂质体包裹反义探针,用HPLC法鉴定标记物的标记率.分析脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA在体外人卵巢癌SKOV3细胞中的摄取率及滞留率的差别,同时分析两者在荷SKOV3卵巢癌裸鼠模型体内生物学分布及显像情况的差异.数据分析采用两样本t检验（或t＇检验）及Wilcoxon秩和检验.结果 脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA6h内标记率均在95％以上.两者在注射后1、2、4、6、12及24 h后的细胞摄取率分别为（28.90±1.12）％、（32.76±1.20）％、（38.20±3.11）％、（41.23±1.60）％、（46.63±1.55）％和（46.78±2.14）％,（3.51±0.39）％、（3.90±0.40）％、（4.69±0.18）％、（5.91±0.26）％、（5.30±0.22）％和（5.39±0.17）％,差异有统计学意义（t＇=47.11～58.67,Z=2.80,均P＜0.05）,两者滞留率差异亦有统计学意义（t＇=7.25～11.55,Z=2.80,均P＜0.05）.注射两探针后1h荷瘤裸鼠肿瘤部位均可显像,但脂质体介导使肿瘤显像更为清楚,肿瘤摄取高峰T/NT由3.95上升至5.02,并明显增加注药后各时间点T/NT（t=3.96,t＇=12.65～ 14.69,Z=2.83～5.29,均P＜0.05）.分子探针主要分布在肿瘤、肾脏及肝脏组织中.肿瘤摄取量随时间逐渐增加,1h时非介导组为（1.49±0.09） ％ID/g,介导后为（2.15±0.21） ％ID/g;6 h时分别为（3.90±0.65） ％ID/g和（5.00±0.10） ％ID/g;脂质体介导后可增加注药后各个时间点的肿瘤/肌肉（t=11.24,t＇=3.96～ 11.94,均P＜0.05）.结论 脂质体介导可以明显促进^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA进入细胞,并提高对EGFR高表达肿瘤的显像效?     

脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的：研究脂质体介导的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内的分布及反义显像诊断结肠癌的可能性,为反义显像和反义治疗的临床应用提供实验依据。方法：制作荷瘤裸鼠模型,每只小鼠尾静脉注射约0.30MBq脂质体包裹的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸,于不同时间眼眶静脉采血后处死小, 测定不同组织中及标准源的放射性计数。荷瘤裸鼠尾静脉注入脂质体介导的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸（30－90mg),于注射后不同时间显像,观察其在肿瘤组织的浓聚情况,并以脂质体介导的^99Tc^m标记的正义和无义寡聚核苷酸为对照。结果：胃、网状内皮系统和肿瘤组织放射性浓聚较高,其次为心和血,余组织中放射性分布较少。肿瘤组织中放射性在2h时达到高峰,以后迅速降低。在2h时,脂质体介导的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸能清晰显示肿瘤部位,而对照组则不能。结论：脂质体介导的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸可用于结肠癌的诊断,但临床应用前还需进行大量的研究。     

99Tcm-J591的制备及荷人前列腺癌裸鼠显像

目的 研究99Tcm-抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)抗体J591与前列腺癌细胞体外结合性能、在荷人前列腺癌裸鼠显像及体内分布情况.方法 用改进的Schwarz方法进行99Tcm标记J591,经Sephadex G-50柱分离纯化;用纸层析法和三氯醋酸法测定标记率与放化纯;用流式细胞术测定99Tcm-J591与肿瘤细胞在体外的结合性能.以PSMA阳性的C4-2前列腺癌荷瘤裸鼠为实验组,PSMA阴性的PC3前列腺癌荷瘤裸鼠为对照组,2组均经静脉注射99Tcm-J591 6.2～ 8.5 MBq(25 μg/只)后,分别于2、6、12及24h后行γ显像,利用ROI技术获得各时间点T/NT(NT为对侧肌肉组织).12 h显像后分批处死裸鼠(实验组4只,对照组5只),取肿瘤、心、肝、肾、胃、骨骼、肌肉和血液等组织,测湿质量和放射性计数,计算％ID/g,采用两样本t检验比较2组间差异.结果 99Tcm直接标记J591的标记率为(78.9±6.2)％,放化纯为(92.3±5.1)％,放射性比活度为68.7 MBq/mg.流式细胞术分析结果显示,J591与99Tcm-J591在体外均能结合PSMA阳性的C4-2细胞,与PSMA阴性的PC3细胞不结合.实验组静脉注射99Tcm-J591后6h,肿瘤部位出现明显放射性浓聚,至12 h放射性浓聚范围增大,边缘更清晰,2、6、12和24 h T/NT分别为1.9±1.1、4.3±1.8、5.6±2.7和1.4±0.6;对照组肿瘤部位未见明显放射性浓聚,各时间点T/NT均小于2.体内分布结果显示:注药后12 h,实验组肿瘤放射性为(20.1±5.2) ％ID/g,对照组为(5.8±2.6)％ID/g,两者差异有统计学意义(t=5.37,P＜0.001);其余部位2组间放射性摄取差异无统计学意义(均t＜1.98,均P＞0.05).结论 99Tcm-J591具有良好的免疫活性和生物分布特性,对接种于裸鼠体内的人前列腺癌具有靶向定位性能,可望用于前列腺癌的导向诊断及导向治疗.     

99Tcm标记亲肿瘤三肽的实验研究

目的 进行99Tcm-精氨酸-谷氨酸-丝氨酸(RES)的亲肿瘤实验研究.方法 采用标准Fmoc固相合成法合成RES,在不同的试剂和温度(100 ℃或室温)条件下,以氯化亚锡为还原剂进行RES的99Tcm标记,优化标记条件.进行荷A549肺癌裸鼠99Tcm-RES显像并测定%ID/g,研究99TcmRES在荷瘤裸鼠体内的分布.比较兔炎性反应和肿瘤模型显像结果.结果 (1)酒石酸钠及氢氧化钠为缓冲剂,氯化亚锡为还原剂,100 ℃水浴10 min,RES放化纯最高达到85%;99Tcm-RES性能稳定,室温下放置6 h,放化纯仍达75%.(2)注射后0.5 h,99Tcm-RES多分布于心、肝、肾等血供丰富脏器,2 h血液的放射性(0.36%ID/g)降幅明显,仅相当于0.5 h(2.35%ID/g)的1/7;心、肝、肺的放射性降幅稍慢,但明显快于肿瘤;注射后0.5 h肿瘤放射性摄取为2.32%ID/g,6 h为1.54%ID/g,6 h后仍有超过60%的放射性滞留.99Tcm-RES注射后6 h肿瘤/血、肿瘤/心、肿瘤/肝、肿瘤/肺、肿瘤/脾和肿瘤/骨骼肌放射性比值分别为5.31,1.88,1.57,3.58,4.16和5.92.(3)荷瘤鼠显像发现肿瘤部位明显浓聚99Tcm-RES,而201Tl、99Tcm-MIBI在肿瘤部位未见明显浓聚.(4)兔炎性反应和肿瘤模型显像示肿瘤部位放射性明显浓聚,而炎性反应部位放射性无明显浓聚,注药后6 h肿瘤/炎性反应部位放射性比值为3.12.结论 用放射性组合化学文库筛选出的小分子RES是一种与肿瘤高亲和力的多肽,有望成为一种肿瘤显像剂.     

99Tcm-AE105的制备及荷胰腺癌裸鼠显像研究

目的 以99Tcm标记尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂受体(uPAR)靶向多肽分子D-Cha-F-s-r-Y-L-W-S (AE105),探讨标记产物作为显像剂无创性评价肿瘤组织内uPAR表达的可行性.方法 采用三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)作为协同配体,SnCl2为还原剂,应用99Tcm标记AE105及阴性对照多肽D-Cha-F-s-r-Y-L-E-S(AE105mut).采用完全随机法将荷胰腺癌(bxpc-3细胞株)裸鼠模型分为2组,每组30只,分别注射18.5 MBq (0.2 ml)99Tcm-AE105与99Tcm-AE105mt,比较两者体内分布及γ显像结果.采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织内uPAR表达,并探讨其与标记物摄取的相关性.数据分析采用两样本t检验和Pearson直线相关分析.结果 99Tcm-AE105标记率达(94.64±0.72)％,放化纯达(97.72±1.73)％,且体外稳定性良好.注射99Tcm-AE105后2h,荷瘤鼠肿瘤显影,4、6h显影清晰;注射99Tcm-AE105mut组始终未见清晰显影.肿瘤组织中99Tcm-AE105的分布均明显高于99Tcm-AE105mut,注射后4h放射性摄取分别为(3.12±0.27) ％ID/g和(1.65±0.53) ％ID/g(t=4.496,P＜0.01);注射后6h放射性摄取分别为(2.98±0.15) ％ID/g和(1.41±0.38)％ID/g(t=6.787,P＜0.01).4～6h肿瘤组织内uPAR表达与99Tcm-AE105摄取呈正相关(r=0.791,P＜0.01),而99Tcm-AE105mut组两者之间无相关性(r=-0.415,P＞0.05).结论 99Tcm-AE105的标记过程简单易行,标记率高,稳定性好,具有良好的uPAR靶向性与特异性,有望应用于临床.     

99Tcm—NGR—IFN-α2a在荷瘤小鼠体内分布及SPECT／CT显像

目的制备99Tcm标记天冬酰胺-甘氨酸-精氨酸（NGR）-干扰素-α2α（NGR—IFN—α2a）,并研究其在荷瘤小鼠体内的动态分布及显像。方法（1）双半胱氨酸（EC）作为双功能螯合剂合成EC—NGR—IFN-α2a,用MDP作为转移螯合剂,采用二步法对EC—NGR—IFN-α2a进行99Tcm标记,制备99Tcm-NGR-IFN-α2a,同时进行生物学活性测定,采用最小显著差异法t检验比较99Tcm-NGR-IFN-α2a与EC—NGR—IFN—α2a,NGR—IFN—α2a的生物活性;（2）建立肝癌MHCC97-H细胞严重联合免疫缺陷病（SCID）小鼠皮下移植瘤模型,采用随机数字表法分组,尾静脉注射99Tcm-NGR-IFN-α2a7．4MBq,分别于注射后0．5,1,2,4,6,8,12和24h处死小鼠。取血、肝、肾、心、脾、肺、胃、肠、骨骼、肌肉及肿瘤组织,测质量及测放射性计数,经物理衰变校正后计算％ID／g,以肿瘤组织为靶组织,以肌肉组织为非靶组织,计算不同时间点T／NT放射性比值;（3）荷瘤小鼠经尾静脉注射7．4MBq99Tcm-NGR-IFN-α2a,分别于注射后0．5,1,2,4,6,8,12和24h行静态平面及SPECT／CT显像,采用ROI技术,同上计算不同时间点的T／NT比值。结果99Tcm-NGR-IFN-α2a的标记率及放化纯均〉90％99Tcm-NGR-IFN-α2a在生理盐水中放置24h后放化纯为71％;标记后生物学活性未发生改变（t=0．416,0．120和1．300,P均〉0．05）;99Tcm-NGR-IFN-α2a经小鼠尾静脉注射后24h内,由泌尿和消化系统排泄,肾、肝、脾、肠道肿瘤的％ID／g值达到高峰的时间分别为8h,6h,6h,4h,高峰值分别为41．5±8．0,31．3±5．0,36．0±7．8,43．0±4．8;其在血液内清除迅速,其他组织器官的放射性随时间延长逐渐降低,rr／NT比值最高可达16．5,最佳显像时间为注射后4～8h。结论99Tcm-NGR-IFN-α2a易于制备,具有良好的靶向性和显像效果。放射性核素标记的NGR—IFN—α2a有望成为-种新的肿瘤血管靶向性诊断与治疗药物。     

99Tcm-DTPA-环九肽用于前列腺癌骨转移白细胞介素11受体显像的实验研究

目的 建立99Tcm标记白细胞介素11（IL11）类似物环九肽,即环状肽半胱氨酰-甘氨酰-精氨酰-精氨酰-丙氨酰-甘氨酰-甘氨酰-丝氨酰-半胱氨酸[c（CGRRAGGSC）]的方法,探讨标记物用于前列腺癌骨转移IL11受体（IL11R）显像的可行性.方法 采用间接法,用99Tcm标记c（CGRRAGGSC）制备99Tcm-DTPA-环九肽[99Tcm-DTPA-Bz-NH-SA-c（CGRRAGGSC）,简称99Tcm-DTPA-IL11RR].利用纸层析法及高效液相色谱（HPLC）测定标记率和稳定性.将99Tcm-DTPA-IL11RR（0.74 MBq/只）经正常ICR小鼠尾静脉注射后,观察其在小鼠体内生物学分布,计算血、脑、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、肌肉、甲状腺、骨骼、胰腺每克组织百分注射剂量率（%ID/g）.γ显像动态（5只小鼠）观察99Tcm-DTPA-IL11RR在荷人PC-3前列腺癌骨转移瘤BALB/c裸鼠模型体内0.5,1,2,4,6,8和24 h表现,与99Tcm-亚甲基二膦酸盐（MDP）骨显像比较,采用感兴趣区（ROI）法计算99Tcm-DTPA-IL11RR显像肿瘤/对侧正常骨骼放射性（T/NT）比值,并用此2种显像剂进行裸鼠骨折模型显像比较.进行体内竞争抑制显像（3只荷瘤裸鼠）,观察标记物生物学活性.对计量资料数据行单因素方差分析.结果 99Tcm-DTPA-IL11RR标记率90.7%,HPLC即时测放化纯为（99.57±0.09）%,室温放置1,2,3,4,6,8和24 h,放化纯依序为（99.29±0.18）%,（98.95±0.78）%,（98.67±0.11）%,（96.53±0.91）%,（95.20±0.70）%,（88.38±0.22）%和（36.17±1.29）%.标记物经正常ICR小鼠尾静脉注射后主要经肾排泄,各时相重要组织脏器普遍摄取较低,肌肉和脑最低,4 h骨骼、肝摄取达峰值,分别为（1.910±0.109）和（0.366±0.030）%ID/g.注射后24 h体内放射性消失.模型鼠γ动态显像示脊柱骨髓、四肢关节髓腔轻度显影,体内放射性清除迅速;瘤灶放射性持续摄取,4 h最明显,延续至6～8 h;24 h全身影像极淡.以ROI法测量的模型鼠0.5,1,2,4,6,8和24 h T/NT比值分别为1.17±0.17,2.20±0.29,3.20±0.15,3.67±0.23,13.61±0.85,9.45±0.37和3.33±0.30（F=621.54,P＜0.05）.骨折模型99Tcm-MDP显像示骨折处放射性摄取,99Tcm-DTPA-IL11RR显像未见摄取.体内竞争抑制实验示环九肽对瘤体显像具有抑制作用.结论 99Tcm-DTPA-IL11RR标记率高,稳定性好,有望成为前列腺癌等富含IL11R的骨转移特异分子靶向显像剂.     

99mTc-labeled vasoactive intestinal peptide receptor agonist: functional studies.

Vasoactive intestinal peptide (VIP) is a naturally occurring 28-amino acid peptide with a wide range of biological activities. Recent reports suggest that VIP receptors are expressed on a variety of malignant tumor cells and that the receptor density is higher than for somatostatin. Our aims were to label VIP with 99mTc--a generator-produced, inexpensive radionuclide that possesses ideal characteristics for scintigraphic imaging--and to evaluate 99mTc-VIP for bioactivity and its ability to detect experimental tumors. METHODS: VIP28 was modified at the carboxy terminus by the addition of four amino acids that provided an N4 configuration for a strong chelation of 99mTc. To eliminate steric hindrance, 4-aminobutyric acid (Aba) was used as a spacer. VIP28 was labeled with 1251, which served as a control. Biological activity of the modified VIP28 agonist (TP3654) was examined in vitro using a cell-binding assay and an opossum internal anal sphincter (IAS) smooth muscle relaxivity assay. Tissue distribution studies were performed at 4 and 24 h after injection, and receptor-blocking assays were also performed in nude mice bearing human colorectal cancer LS174T. Blood clearance was examined in normal Sprague-Dawley rats. RESULTS: The yield of 99mTc-TP3654 was quantitative, and the yields of 125I-VIP and 1251-TP3654 were >90%. All in vitro data strongly suggested that the biological activity of 99mTc-TP3654 agonist was equivalent to that of VIP28. As the time after injection increased, radioactivity in all tissues decreased, except in the receptor-enriched tumor (P = 0.84) and in the lungs (P = 0.78). The tumor uptake (0.23 percentage injected dose per gram of tissue [%ID/g]) was several-fold higher than 125I-VIP (0.06 %ID/g) at 24 h after injection in the similar system. In mice treated with unlabeled VIP or TP3654, the uptake of 99mTc-TP3654 decreased in all VIP receptor-rich tissues except the kidneys. The blood clearance was biphasic; the alpha half-time was 5 min and the beta half-time was approximately 120 min. CONCLUSION: VIP28 was modified and successfully labeled with 99mTc. The results of all in vitro examinations indicated that the biological activity of TP3654 was equivalent to that of native VIP28 and tumor binding was receptor specific.     

^99Tc^m标记RGD环肽在荷肺腺癌裸鼠中的显像研究

目的制备^99Tc^m标记的含RGD序列的^99Tc^m-联肼尼克酰胺（HYNIC）-c（RGDfK）环肽单体,评价其在整合素表达阳性的肺腺癌严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠肿瘤模型中的生物学分布,并进行显像研究。方法（1）以HYNIC为双功能螯合剂,以三羟甲基甘氨酸（tricine）和乙二胺二乙酸为协同配体,采用二步法制备^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）,进行细胞结合实验,测定标记物生物学活性;（2）将荷A549肺腺癌模型小鼠分为7组[第7组作为竞争性抑制组,注射显像剂前0．5h先注射HYNIC-c（CRDGfk）100μg],每组5只,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC-c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h处死,计算荷A549肺腺癌小鼠模型各脏器％ID／g,同时采用ROI技术研究^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在小鼠体内的生物学分布,计算不同时间点的T／NT比值（NT选取肌肉）;（3）取6只荷瘤裸鼠,其中3只为竞争性抑制组,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h进行静态1显像。结果^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）的标记率〉90％,放化纯〉95％。^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）与A549肺腺癌细胞特异性结合率最高为36．14％,体内分布实验显示^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在肾的摄取率始终高于20％ID／g,注射后0．5h肿瘤％ID／g为10．52±1．48,8h为17．26±2．81,12h为8．93±0．90,竞争性抑制组注射后0．5h为2．29±0．85。通过ROI技术测得T／NT在8h达6．87。注射后1h肿瘤可显影,4～8h显影更清晰。结论^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）易于制备,具有良好的靶向性。