乙型肝炎病毒核心启动子部分缺失真核表达载体的构建及对病毒抗原表达的影响

乙型肝炎病毒核心启动子 (ＣＰ)部分缺失变异已证实在几种ＨＢＶ感染的临床现象中存在[1 3 ] 。我们在一组 14例血清抗 ＨＢｅ阳性的无症状携带者中 ,发现有 9例在ｎｔ174 8(或ｎｔ174 7)至ｎｔ176 7间 2 0 (或 2 1)个核苷酸的缺失 ,此 9例中有 5例合并有ｎｔ1896Ｇ→Ａ点变异[4] 。本研究在此基础上 ,拟构建这种ＣＰ 2 0 / 2 1ｂｐ缺失及合并存在Ａ1896点变异的ＨＢＶ全基因重组真核表达载体 ,并转染ＨｅｐＧ2细胞 ,以研究此类变异株对病毒抗原表达的影响。一、材料与方法1 材料 :ＥＢＯ ｐｐｌｐ质粒由美国Ｓｃｒｉｐｐｓ研究所Ｆｒａｎ…     

乙型肝炎病毒的父儿传播与肝外定位

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）父儿传播与肝外ＨＢＶＤＮＡ的检出。方法以８名ＨＢｓＡｇ阳性而其配偶无任何ＨＢＶ标志的男性携带者与其子宫内受感染的８例胎儿为对象,以巢式ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ,以ＰＣＲ产物直接测序的方法测定父亲血清、精子与胎儿血清ＨＢＶＤＮＡ。６对父儿测定Ｓ区ｎｔ４５１～６６０段,２对测定Ｃ区ｎｔ２０２２－２３２１段序列。结果父几间核苷酸同源性９８％～１００％。Ｓ区测定结果表明６对父儿均感染ａｄｗ亚型病毒。２对父儿此段序列核苷酸有差异。父亲与原型株一致而胎儿在４９１,４９４,５４６,５８１位核苦酸变异致使１１３,１１４,１３１,１４３位氨基酸替代。另外４对父儿此段序列完全一致,其中１对父儿在１２６位均发生氨基酸替代。２对父儿Ｃ区ｎｔ２０２２～２３２１位核苷酸完全一致,父儿共同变异的１１个位点均为无表型变异。在胎儿血清、白细胞、肝脏、心脏、脾脏、肾脏、肺、脐带、肌肉、皮肤、胸腺、睾丸等组织脏器检出ＨＢＶＤＮＡ。结论出生前期存在ＨＢＶ父儿传播,大部分父亲将携带的优势毒株,小部分将少数株传给子代。在胎儿多个脏器与组织检出ＨＢＶＤＮＡ。     

慢性重型乙型肝炎患者T细胞免疫状态与HBV前C区基因变异的关系

ＨＢＶ前Ｃ区最常见的基因变异是第 1896位核苷酸Ｇ→Ａ突变 ,使第 2 8位密码子形成终止密码 ,导致ＨＢｅＡｇ合成终止。前Ｃ区变异被认为是免疫选择的结果 ,并与暴发性乙型肝炎有密切的关系 ,但尚没有直接证据表明前Ｃ区变异株病毒毒力增强 ,而且也不是所有感染前Ｃ区变异株的患者都会出现病情加重。我们对慢性重型乙型肝炎患者杀伤性Ｔ细胞 (Ｔｃ)和抑制性Ｔ细胞 (Ｔｓ)与ＨＢＶ前Ｃ区基因变异的关系进行了研究 ,现报道如下。材料与方法一、研究对象42例慢性重型乙型肝炎患者为武汉协和医院 1998年10月至 1999年 5月间的住院患者 ,男 39例…     

乙型肝炎病毒C基因启动子区准种与变异特点的研究

以乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)Ｃ基因启动子 (ＣＰ)变异来探讨ＨＢＶ准种在慢性感染者中的存在意义。以中国株ＨＢＶ基因序列为依据 ,设计特异性聚合酶链反应 (ＰＣＲ)引物 ,自 3例慢性ＨＢＶ感染患者外周血血清中扩增ＨＢＶＣＰ序列 ,克隆入 ｐＧＥＭＴｅａｓｙ质粒 ,随机挑选克隆进行ＤＮＡ测序以确定病毒的变异程度。测序结果发现ＨＢＶＣＰ序列高度保守 ,但在ＴＡＴＡ样盒 ( 1 3)可发生多种点突变 ,其中 184ｎｔ(Ｔ→Ｃ)位替换突变最为常见。在直接重复序列 (ＤＲ)Ｉ上游存有一缺失突变高发区。ＣＰ区内有一缺失高变区 ,ＴＡＴＡ样盒 3的变异…     

等位基因差异特异性PCR检测HBVDNA的前C区1896突变位点及其临床意义

为了探讨ＨＢＶ前Ｃ区 １８９６突变位点检测的临床意义，采用３－末瑞等位基因差异特异性ＰＣＲ方法对９５例乙型肝炎病毒感染者的ＨＢＶＤＮＡ１ ８９６位点进行基因型（野生株／突变株）的检测，结果显示：总突变率为６４．２％，总野生率为５５．８％，纯野生型和纯突变型的检出率分别为２８．４％和２７．４％；不同临床类型的乙肝病毒感染者均可出现突变，其野生型、突变型和混合感染型的检出率之间的比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），急性乙肝与慢性乙肝、携带者、肝硬化和肝癌的总突变率存在差异（Ｐ＜０．０５）；血清不同ＨＢｅ系统均可发生突变．抗－ ＨＢｅ阳性组的突变率显著高于ＨＢｅＡｇ阳性和ＨＢｅ系统阴性组（Ｐ＜０．０５），提示：机体感染了ＨＢＶ后．变异主要是发生在慢性持续性感染过程中．突变株逐渐替代了野生株并成为优势株．使宿主得以持续感染ＨＢＶ。     

快速简便筛检乙型肝炎病毒C基因启动子变异的方法及应用

目的明确中国乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）区段变异特点及其可能的临床意义。方法应用错配聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法，结合核苷酸序列分析，检测１４３例ＨＢｓＡｇ阳性的ＨＢＶ慢性感染者中Ｘ基因／ＢＣＰ区的核苷酸（ｎｔ）１７６２碱基由Ａ→Ｔ和１７６４碱基由Ｇ→Ａ变异。结果在１１４份ＨＢＶＤＮＡ阳性血清中，３７例感染ＢＣＰ变异株，其中３１例为慢性肝炎病例，６例为慢性ＨＢＶ无症状感染者（ＡｓＩ）；其中４１例ＨＢｅＡｇ阳性ＡｓＩ中仅２例检出，１８例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＩ中也有４例检出。ＨＢｅＡｇ阳性的６５例中，１３例有ＢＣＰ区变异，而ＨＢｅＡｇ阴性的４９例中，２４例有ＢＣＰ区变异（Ｐ＜０．０１）。结论错配ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检测这一对点突变，具有快速、简便、适用的优点；ＨＢＶ毒株ＢＣＰ变异可能与肝病变活动有一定关系。     

拉米夫定长期治疗复发病例中HBV YMDD基序的变化

拉米夫定为核苷类似物 ,对乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)的复制有抑制作用 ,近年应用于慢性乙型肝炎和肝移植术后防治ＨＢＶ再感染。有报道在长期接受拉米夫定治疗的部分患者中出现耐药 ,耐药的产生与病毒多聚酶编码区的变异有关。我们检测了 4例拉米夫定治疗复发患者的ＨＢＶＤＮＡ ,了解变异的发生情况 ,报道如下。材料与方法一、研究对象4例患者为 1997年始在我院接受拉米夫定治疗的慢性ＨＢＶ感染者 ,均为男性 ,平均年龄 2 4岁 (中位数 )。治疗前ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ和血清ＨＢＶＤＮＡ均为阳性 ,其他肝炎病毒标志为阴性 ,血清…     

不同类型乙型肝炎病毒感染者体内毒株存在状况与临床转归

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染时 ,病变的发生和进展主要取决于宿主的免疫应答 ,但免疫应答不仅由宿主的遗传素质决定 ,也由病毒的异质性所决定[1] 。目前认为慢性ＨＢＶ感染时病毒呈“相似株”分布[2 ] 。为探讨ＨＢＶ毒株在不同转归的ＨＢＶ感染者体内的存在状况与转归的关系 ,我们用ＨＢＶ前Ｓ1/Ｓ2区为研究区段 ,选择了 3组不同转归的ＨＢＶ感染者 :(1)急性自限性乙型肝炎 ;(2 )慢性ＨＢＶ携带者 ;(3)慢性重型乙型肝炎。每组各 3例 ,每个患者随机挑选10个阳性克隆 ,对共 90个克隆、5万碱基进行了位点变异、插入和缺失突变现象的分析 ,并对…     

乙型肝炎病毒S基因变异研究进展

我们从乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｓ基因变异的产生及流行病学、与ＨＢＶ血清学诊断的关系以及ＨＢＶ Ｓ基因变异所引起的生物学改变等方面对ＨＢＶ Ｓ基因变异株的最新研究进展予以综述。对ＨＢＶ Ｓ基因变异株所带来的问题、感染结局及今后的研究方向进行了讨论。 １．ＨＢＶ Ｓ基因变异的定义及分类：ＨＢＶ Ｓ基因变异可分为Ｍ类,第一类指自然发生的变异,是病毒自身在长期进化过程中随机变化的结果。这包括在急性或慢性ＨＢＶ感染过程中没有受到外界治疗压力下所产生的变异。ＨＢＶ亚型和ＨＢＶ不同的基因型也属于自然变异。第二类是指某…     

HBV前C区变异与HBe转换和慢性肝炎的预后

ＨＢＶ前Ｃ区变异与ＨＢｅ转换和慢性肝炎的预后田琦琦，骆抗先，陈伟华，杨洁，王志明为进一步了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区变异与血清ＨＢｅ转换及临床预后的关系，探讨其可能的发生机制，我们对４８例经肝活检及血清学确诊的慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者随访血清进...     

血清HBeAg阴性与HBeAg/IC及A1896变异的关系

目的探讨血清ＨＢｅＡｇ阴性（双抗体夹心法）与ＨＢｅＡｇ／ＩＣ形成及ＨＢＶ变异株Ａ１８９６的关系，评价ＨＢｅＡｇ／ＩＣ检测的临床意义．方法单克隆抗ＨＢｅ固相ＥＬＩＳＡ检测血清中ＨＢｅＡｇ／ＩＣ；套式多聚酶链反应检测ＨＢＶＤＮＡ；３＇碱基特异多聚酶链反应判断Ａ１８９６变异；ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ，研究对象为１１７例慢性ＨＢＶ感染者，２０例健康对照统计处理采用卡方检验．结果ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ检出率明显高于ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阴性血清，Ｐ＜０００１（９１３％ｖｓ３６２％）；２９份ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶＤＮＡ阳性血清中仅５例（１７２％）检出Ａ１８９６，而且其中２例与野毒株（Ｇ１８９６）混合感染并伴ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性．２９份中１７份（５８７％）为ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性的Ｇ１８９６感染；血清抗ＨＢｅ阳性组Ａ１８９６检出率高于抗ＨＢｅ阴性组，Ｐ＜００５（２５％ｖｓ３２％）．结论ＨＢｅＡｇ／ＩＣ为ＨＢＶ活跃复制指标；临床ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶＤＮＡ阳性患者仍多数为Ｇ１８９６感染，ＨＢｅＡｇ／ＩＣ形致双抗体夹心法不能检出ＨＢｅＡｇ；抗ＨＢｅ应答可能为促使前Ｃ变异的重要因素     

乙型肝炎病毒前C区A83变异株在肝硬化中的感染状况及性别差异

已有的研究证明乙型肝炎病毒(ＨＢＶ)前Ｃ区Ａ83变异株感染与肝炎病变慢性化有关[1],但变异株感染是否引起有别于野生株感染的临床表现和预后,尚缺乏系统的量化分析。我们选择典型的慢性肝炎晚期病型———ＨＢＶ相关的肝硬化153例为研究对象,在测定血清Ａ83变异株感染状态的基础上,对同一病型中变异株感染和野生株感染病例的主要临床资料进行了比较,结果报告如下。材料与方法一、研究对象按照1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的临床诊断标准,从1986～1998年我科住院病例及血清资料中选出符合诊断标准的153例肝硬化,其中男119例,女34…     

慢性乙型肝炎患者干扰素治疗与HBV PreC基因nt1896突变

慢性乙型肝炎患者干扰素治疗与ＨＢＶＰｒｅＣ基因ｎｔ１８９６突变严新民华映坤董虹高建梅张平张丽平云南省自然科学基金资助课题作者单位：６５００３２昆明，云南省人民医院大剂量干扰素治疗慢性乙型肝炎是有效的，一些报道认为，ＨＢＶＰｒｅＣ基因ｎｔ１８９６的突变...     

乙型肝炎病毒感染慢性化与外周血IL-10、IL-12水平关系的研究

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染慢性化机制复杂。文献报道 ,合并ＨＣＶ、ＨＤＶ的混合感染、宿主内在的免疫功能紊乱、ＨＢＶ所致机体免疫状态以及ＨＢＶ基因组和抗原变异等均有可能导致ＨＢＶ感染的持续存在与发展。为此 ,我们通过检查外周血ＩＬ 10、ＩＬ 12水平的变化来探讨两者在ＨＢＶ感染慢性化过程中的意义。材料与方法一、病例选择依照 1995年北京第五次全国传染病和寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案为诊断标准 ,选择门诊或住院患者44例 ,其中男 2 4例、女 2 0例 ,年龄 17～ 76岁 ,平均年龄 45岁。根据临床类型分类 :无症状Ｈ…     

慢性乙肝患者病毒前C区突变株感染的检测与意义

本文采用３‘端特异性ＰＣＲ技术对３６例慢性乙型肝炎患者进行了ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变检测。结果发现４例ＨＢＶ突变性感染，３例为混合感染，１例为单纯突变株感染。作者对使用３’端特异性ＰＣＲ对ＨＢＶ突变株检测的作用及ＨＢＶ突变株在乙肝病情发生，发展中的作用进行了探讨。     

重型肝炎血清HBV前C区A83变异株比率的动态观察

目的 了解ＨＢＶ前区Ｃ区Ａ８３变异与重型肝炎的关系。方法 用套式错配ＰＣＲ限制片段长度多态性分析和凝胶光密度图象分析仪及定量ＰＣＲ,对９例重型肝炎患者血清ＨＢＶ变异株的比率和ＨＢＶ ＤＮＡ含量进行测定和动态观察。结果 Ａ８３变异株在６例阳性率中均与野生株呈混合感染,其比率〉５０．０％的仅２例,存活死亡各１例,〈３１．０％的４例均死亡,变异株的出现及其比率变化与ＨＢＣＶ ＤＮＡ含量的消长一致,但无统     

慢性乙型肝炎干扰素疗法的适应证选择

目前用于慢性乙型肝炎抗病毒治疗的干扰素主要是ＩＦＮ α，其适应证基本只有一个，即ＨＢＶ复制活跃的活动性慢性乙型肝炎。 慢性乙型肝炎有经典型（ｃｌａｓｓｉｃａｌ）和异型（ａｔｙｐｉｃａｌ）之分。经典型的血清病毒学标志特征是血清Ｈ ＢｓＡ ｇ ＋、ＨＢｅＡｇ＋和抗－ＨＢｃ＋、血清ＨＢＶＤＮＡ十，由野生株ＨＢＶ感染所致，也称ＨＢｅＡｇ阳性慢性乙型肝炎；异型的血清病毒学标志特征是血清ＨＢＳＡｇ＋、抗ＨＢｅ＋和抗ＨＢｃ＋，血清ＨＢＶ ＤＮＡ＋，主要由前Ｃ基因变异株或Ｘ区Ｃ基因启动子变异株ＨＢＶ感染所致，也称抗－…     

抗－HBe阳性慢性乙型肝炎病毒感染：病毒前C变异与病变活动

抗－ＨＢｅ（＋）的慢性活动性肝炎５１例，以聚合酶链反应检出ＨＢＶＤＮＡ４８例（９４．１％）。对６例以反应产物直接序列分析，发现前Ｃｎｔ８３发生Ｇ→Ａ（Ａ８３）点突变，使密码２８由ＴＧＧ变异为终止密码ＴＡＧ而不能编码ＨＢｅＡｇ。以抗－ＨＢｅ（＋）的慢性无症状ＨＢＶ携带者３０例为对照，仅１２例（４０％）检出弱ＨＢＶＤＮＡ带。５例序列分析未发现Ａ８３变异。结果提示：变异病毒逃避免疫清除而继续活跃复制，与病变持续活动有关。     

丙型病毒性肝炎患者外周血单核细胞中HCV—RNA的存在及其意义

作者用套式ＰＣＲ检测２５例丙型病毒性肝炎（丙肝）患者血清和外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ，结果显示血清阳性２１例，ＰＢＭＣ阳性１８例，表现在大部分丙肝患者ＰＢＭＣ中有ＨＣＶ－ＲＮＡ的存在。且急性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率明显低于慢性丙肝患者，提示ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ的存在可能与感染ＨＣＶ后的慢性化有关。     

抗—HBe阳性慢性乙型肝炎病毒感染：病毒前C变异与病变活动

抗－ＨＢｅ（＋）的慢性活动性肝炎５１例，以聚合酶链反应检出ＨＢＶ ＤＮＡ４８例（９４．１％）。对６例以反应产物直接序列分析，发现前Ｃｎｔ８３发生Ｇ→Ａ（Ａ８３）点突变，使密码２８由于ＴＧＧ变异为终止密码ＴＡＧ而不能编码ＨＢｅＡｇ。以抗－ＨＢｅ（＋）的慢性无症状ＨＢＶ携带者３０例为对照，仅１２例（４０％）检出弱ＨＢＶ，ＤＮＡ带。５例序列分析未发现Ａ８３变异。结果提示：变异病毒逃避免疫清除而继续活跃复