PDTC对肝纤维化大鼠核转录因子-κB、α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原表达影响研究

目的探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对二甲基亚硝胺(DMN)所致肝纤维化大鼠肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col-1)表达的影响及其意义。方法雄性SD大鼠38只,随机分为A、B、C组。A组为正常对照组,B、C组再各自随机分为2周及4周组并腹腔注射DMN诱导大鼠肝纤维化模型,C组造模同时给予PDTC灌胃。应用化学发光凝胶电泳迁移率(EMSA)检测肝组织NF-κBp65活性;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肝组织NF-κBp65和Col-1的mRNA表达;应用免疫组化检测NF-κBp65、α-SMA和Col-1的表达。结果 B组及C组NF-κBp65活性及其mRNA表达、Col-1 mRNA表达、NF-κBp65免疫组化阳性细胞数、α-SMA及Col-1阳性面积均明显高于A组(P<0.01或P<0.05),且随着时间的延长,4周组高于2周组(P<0.01或P<0.05);同期比较发现C组NF-κBp65活性及其mRNA表达、Col-1 mRNA表达、NF-κBp65免疫组化阳性细胞数、α-SMA及Col-1阳性面积均明显低于B组(P<0.01或P<0.05)。NF-κBp65活性与NF-κBp65 mRNA表达、Col-1 mRNA表达、NF-κBp65免疫组化阳性细胞数、α-SMA及Col-1阳性面积呈正相关(r=0.747,0.780,0.779,0.658,0.780,P均<0.01)。结论 NF-κB与大鼠肝纤维化密切相关;PDTC可能通过抑制NF-κB的活性及α-SMA、Col-1表达从而产生抗肝纤维化作用。     

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠心室重塑的作用及机制

目的：研究阿托伐他汀对自发性高血压大鼠（SHR）心室重塑的作用及机制。方法：雄性SHR 12只，随机分为2组（每组6只）：阿托伐他汀组（阿托伐他汀50 mg·kg^-1·d^-1）和SHR（0.5%阿拉伯胶浆10 mL·kg^-1·d^-1）组；另选WKY大鼠6只（0.5%阿拉伯胶浆10 mL·kg^-1·d^-1）作为正常对照组。实验6周后，称取大鼠全心重量及左心室重量，计算左心室重量指数；同时检测心肌羟脯氨酸、胶原蛋白含量；大鼠血清C反应蛋白含量；免疫组化检测心肌血管细胞黏附分子(VCAM)的表达；原位杂交测定心肌细胞NF-κB的表达；透射电镜观察心肌的超微结构。结果：SHR组心肌NF-κB的表达和心肌VCAM的表达强于WKY组；阿托伐他汀组大鼠的心脏重量、心肌羟脯氨酸、胶原蛋白和大鼠血清C反应蛋白的含量低于SHR组；同时心肌NF-κB的表达和心肌VCAM的表达低于SHR组。透射电镜显示：阿托伐他汀组细胞核膜不完整，肌原纤维排列紊乱，横纹不清，间质胶原纤维增生等病理改变轻于SHR组。结论：阿托伐他汀具有改善SHR心室重塑的作用，其分子机制可能下调SHR心肌NF-κB的表达和心肌VCAM的表达，抑制心肌的慢性炎症有关。     

不同剂量乙醇对小鼠早期肝纤维化的影响及机制研究

目的: 探讨2种不同剂量乙醇诱导的小鼠早期肝纤维化过程中的病理改变以及相关机制的异同。方法: 24只雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组及高、低剂量乙醇诱导组。诱导组小鼠分别给予8 g·kg^-1·d^-1,3 g·kg^-1·d^-1乙醇经口灌胃30 d,留取肝组织。苏木素伊红(HE)染色、Masson染色进行形态学观察,炎症活动度分级、纤维化程度分期并计算每高倍视野胶原纤维面积;免疫组织化学染色、免疫印迹(Western blotting)分别检测肝组织内Toll样受体4(TLR-4)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,转化生长因子β(TGF-β)、核因子-κB (NF-кB)蛋白浓度;实时荧光定量PCR检测骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂 (Bambi) mRNA含量;原位末端标记(TUNEL)法标记肝组织凋亡细胞并计数。结果: 乙醇诱导组均出现不同程度纤维组织增生(P<0.01),肝星形细胞(HSCs)活化,凋亡细胞数增多(P<0.01);高剂量组较低剂量组小鼠肝纤维化趋势更为明显,该组凋亡细胞数也较低剂量组明显增高,但Bambi mRNA含量较低剂量组显著降低(P<0.05);TLR-4蛋白在低剂量组表达明显上调但在高剂量组表达受到抑制(P<0.01)。结论: 2种剂量乙醇诱导的小鼠肝早期纤维化的机制存在差异。高剂量乙醇所致肝纤维化过程中,凋亡机制可能较TLR-4通路具有更重要的作用,同时Bambi的下调存在不依赖于TLR-4的信号途径,这可能也是该组纤维化程度更高的原因之一。     

TNF -α活化人瘢痕疙瘩成纤维细胞NF - κB的实验研究

目的:观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)以及正常皮肤成纤维细胞(NSF)核因子-kappa B(NF-κB)的影响,以探讨瘢痕疙瘩的发生机制.方法:原代培养成纤维细胞;免疫荧光技术观察NF-κB p65和IκB-α在静息状态和TNF-α刺激后的成纤维细胞中分布;应用TransAMTMNF-κB p65 kit试剂盒检测NF-κB p65 DNA结合活性;应用Western blotting检测IκB-α蛋白水平.结果:TNF-α刺激后,NF-κB p65从细胞浆转移至细胞核;NF-κB p65 DNA结合活性水平在刺激后1 h达到高峰,4 h接近正常;细胞浆IκB-α蛋白水平在刺激后15 min降至最低值,4 h基本接近正常;KFB较NSF对TNF-α的刺激更为敏感.结论:KFB较NSF对TNF-α活化NF-κB更为敏感,可能是瘢痕疙瘩形成的潜在发病机制.     

核转录因子-κB在实验性肝纤维化中的表达、分布及意义

目的:研究核转录因子-κB(NF-κB)在实验性肝纤维化过程中的表达、分布及意义。方法:雌性Wistar大鼠随机分为正常组、肝纤维化模型组和NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组,PDTC组大鼠在给CCl4的同时给予PDTC灌胃。肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量测定,鲎试剂法测定血浆内毒素水平,赖氏法测定丙氨酸氨基转移酶(ALT),TBA法检测丙二醛(MDA)的水平,免疫组化法测定NF-κB的表达,Western blot-ting检测结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果:免疫组化显示NF-κBp65在正常肝组织中少量表达于中央静脉周围的肝细胞胞浆内,肝纤维化模型组肝组织可见程度不等的细胞浆和(或)细胞核表达,主要分布于纤维化区、肝窦区、血管壁及部分胆管细胞、变性肝细胞也可见阳性染色,阳性细胞数从第1周末就显著高于正常对照组,PDTC组阳性细胞数明显低于同期肝纤维化模型组(P0.05);肝纤维化模型组内毒素含量、NF-κB以及CTGF表达明显升高,且两两均呈正相关;PDTC组内毒素含量呈先升高后降低趋势,NF-κBp65和CTGF表达显著低于同期肝纤维化模型组,且二者呈正相关(r=0.815,P0.01),内毒素与NF-κBp65和CTGF表达无相关性。结论:内毒素可能通过激活NF-κB通路上调CTGF的表达。     

八肽胆囊收缩素对TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6的作用及其可能的分子机制(英文)

目的: 观察硫酸化八肽胆囊收缩素（sCCK-8）对TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6 mRNA 表达及核因子NF-κB的影响及其可能的受体机制。方法: 大鼠滑膜细胞株RSC-364经TNF-α(10　μg/L)、sCCK-8(10^-8-10^-6 mol/L)、CCK受体拮抗剂丙谷胺（2 mg/L）及溶剂单独或联合孵育3 h，用RT-PCR检测细胞IL-6、CCK-AR及CCK-BR mRNA的表达，孵育1 h，用电泳迁移率检测NF-κB活性，孵育30 min，用Western blotting检测胞浆IκB蛋白表达。结果: RSC-364细胞固有表达CCK-A/B受体，sCCK-8（10^-8-10^-6 mol/L）使IL-6、CCK-AR和CCK-BR mRNA表达进一步增高，明显增加TNF-α诱导的NF-κB活性，降低胞浆中IκB蛋白水平，并可被丙谷胺所拮抗。结论: sCCK-8通过NF-κB途径上调TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞IL-6 mRNA表达，此作用可能通过滑膜细胞上的CCK受体实现，提示CCK-8在类风湿性关节炎（RA）发病过程中可能具有调控作用。     

核因子κB p65反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞增殖和I型胶原表达的影响

目的 探讨核因子κB(NF-κB)p65反义寡核苷酸(ASOND)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和I型胶原表达的影响.方法 Ⅳ型胶原酶消化密度梯度离心法分离培养大鼠HSC;脂质体介导的不同浓度的NF-κB p65 ASOND(0.001、0.01、0.1和1μmol/L)进入HSC;台盼蓝染色排斥法检测NF-κBp65 ASOND对HSC的毒性实验并检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性;MTT法测定NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC增殖影响;RT-PCR法和ELISA法检测不同浓度NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC I型胶原表达的影响.结果 转染NF-κB p65 ASODN后,HSC细胞NF-κB蛋白的表达下降,不同浓度(0.001、0.01、0.1和1 μmol/L)的NF-κB p65 ASOND对于体外培养HSC的存活率和LDH无明显影响(P>0.05),0.01～μmol/L的NF-κB p65 ASOND抑制HSC的增殖,lmg/L TNF-α刺激HSC的I型胶原蛋白和mRNA的表达,且随浓度的增加作用增强(P<0.05).结论 NF-κB p65 ASOND可通过抑制NF-κB活性减少HSC活化增殖及Ⅰ型胶原生成,从而减少细胞外基质的产生.     

通心络超微粉对高脂饮食兔主动脉内皮保护机制的实验研究

目的： 探讨通心络超微粉对高脂饮食兔主动脉内皮损伤的干预作用及其可能机制。方法： 健康雄性新西兰白兔32只随机分为空白对照组、模型组、阿托伐他汀组、通心络组4组。空白对照组饲以普通饲料；模型组饲以高脂饲料；阿托伐他汀组饲以高脂饲料同时阿托伐他汀3 mg·kg^-1·d^-1灌胃；通心络组饲以高脂饲料同时通心络超微粉0.31 g·kg^-1·d^-1灌胃，连续给药，于6周末酶法检测各组血脂水平，比色法检测各组血清NO、MDA水平及SOD活性，免疫组织化学染色法检测主动脉内皮细胞NF-κB核转位情况及ICAM-1 蛋白表达，RT-PCR法检测ICAM-1 mRNA表达。结果：模型组血清TC、TG、LDL-C、HDL-C及MDA水平均显著高于空白对照组(P<0.01)，NO水平及SOD活性低于空白组(P<0.01)；主动脉内皮细胞NF-κB核转位、ICAM-1基因及蛋白表达明显多于空白组（P<0.01）。两药物干预组TC、TG、LDL-C及MDA水平均显著低于模型组(P<0.01)，NO水平和SOD活性则高于模型组（P<0.05, P<0.01），主动脉内皮细胞NF-κB核转位、ICAM-1基因及蛋白表达亦明显少于模型组（P<0.05，P<0.01），通心络组HDL-C显著高于模型组（P<0.05），且通心络组对上述指标的作用均优于阿托伐他汀组（P<0.05，P<0.01）。结论： ① 高脂血症可使血管内皮细胞受损，其机制可能与氧化应激、NF-κB的激活及ICAM-1基因与蛋白的表达异常有关。② 通心络超微粉可在一定程度上减轻上述病理损伤，可能与其抗氧化、抑制NF-κB核转位进而降低ICAM-1基因及蛋白表达有关。     

人参二醇组皂苷对脂多糖攻击大鼠脑皮质NF-κB的影响

目的： 观察人参二醇组皂苷对脂多糖(LPS)攻击大鼠脑皮质NF-κB的影响。方法: 大鼠随机分为实验对照（control）组、脂多糖（LPS）组、脂多糖加地塞米松（LPS+Dex）组和脂多糖加人参二醇组皂苷（LPS+PDS）组。大鼠静脉注射LPS（4 mg·kg^-1）1 h、4 h后检测脑皮质NF-κB的变化。结果:EMSA实验显示人参二醇组皂苷可抑制LPS攻击后1 h、4 h NF-κB的DNA结合活性；抑制细胞核p65和p50蛋白的表达。结论:LPS休克早期脑组织细胞NF-κB激活入核，人参二醇组皂苷通过抑制其活性而减轻脑组织损伤。     

β-胡萝卜素对脂多糖刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制

目的:探讨β-胡萝卜素对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制。方法:采用5μg/ml的LPS刺激巨噬细胞24 h后用不同浓度的β-胡萝卜素(20、40、80、160μmol/L)处理细胞3 h,MTT法测细胞活性,荧光定量PCR测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量,ELISA测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌量,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量。5μg/ml的LPS和不同浓度的NF-κB抑制剂PDTC(1、5、10μg/ml)共同处理巨噬细胞24 h,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量,荧光定量PCR、ELISA测炎症因子的表达和分泌。比较LPS+PDTC组和LPS+PDTC+β-胡萝卜素组炎症因子和NF-κB p65蛋白相对表达的变化。结果:与LPS组相比,不同浓度的β-胡萝卜素对LPS刺激的巨噬细胞的细胞活性有提升作用,对炎症因子和NF-κB p65蛋白的表达有抑制作用;抑制NF-κB蛋白的表达可以抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子的分泌;LPS+PDTC+β-胡萝卜素组对炎症因子的抑制作用比LPS+PDTC组明显,且差异显著(P0.05),但两组对NF-κB p65蛋白的表达不明显。结论:β-胡萝卜素可以通过抑制NF-κB通路中NF-κB p65蛋白的表达抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,且此通路不是唯一相关的通路。     

NBD多肽预处理对局灶脑缺血再灌注大鼠脑内核因子-κB核转位活化的影响

目的探讨NBD多肽预处理对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑缺血皮质细胞内核因子-κB活化的影响。方法将SD健康雄性大鼠（280～300g）共36只随机分为假手术组（n=6）、模型组（n=15）、药物组（n=15）。缺血模型制备前2h经右侧侧脑室注射NBD多肽25μl进行预处理。运用改良线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞再灌注大鼠模型。运用免疫组化检测再灌注后72hNF-κBp65在胞浆／胞核的蛋白表达变化;运用免疫荧光定位及Western印迹（半定量）检测NF-κB p65及IκBα的蛋白表达情况。结果免疫组化结果显示与假手术组比较,再灌注72h模型组胞浆／胞核内NF-κB p65大量表达（P〈0．05）;NBD多肽预处理后NF-κB p65主要在胞浆表达,胞核内表达明显减少（P〈0．05）;免疫荧光双标定位及Western印迹半定量检测显示模型组胞浆／胞核内NF-κB p65蛋白均大量表达（P〈0．05）,IκBα蛋白呈现低表达（P〈0．05）;NBD多肽预处理后胞核内NF-κB p65蛋白表达明显减少,主要以胞浆表达为主（P〈0．05）,IκBα胞浆／胞核内表达显著增加（P〈0．05）。结论局灶脑缺血再灌注72hNF-κB p65蛋白胞核表达明显增加．NF-κB核转位／活化过程被激活：NBD多肽预处理后通过增加胞核／胞浆内IκBα表达有效阻止NF-κB的核转位／活化过程,从而有效地减轻再灌注后72h局灶脑缺血再灌注对脑组织的损害。     

温胃舒胶囊通过抑制核因子κB(NF-κB)通路减轻慢性胃炎大鼠胃黏膜损伤

目的探讨温胃舒胶囊对慢性胃炎模型大鼠核因子κB(NF-κB)相关蛋白表达的影响。方法采用脱氧胆酸钠、氨水、乙醇和饥饱失常法建立慢性胃炎Wistar大鼠模型。分为空白组、模型组、维酶素片组、温胃舒胶囊高、中、低剂量组,空白组、模型组以生理盐水2 mL/d、其余各组分别以0.3 g/kg维酶素及(0.76、 0.38、 0.19) g/kg温胃舒胶囊灌胃,处理4周。肉眼观察及HE染色评价胃组织病变情况, ELISA检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平,免疫荧光染色观察胃组织核因子κBp65(NF-κBp65)、 NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的表达, Simple Western法检测胃组织NF-κBp65、IκBα、环加氧酶2(COX2)蛋白水平。结果与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜变薄、皱襞消失或变浅,胃黏膜炎性细胞浸润明显、腺体紊乱,血清炎性因子及胃组织NF-κBp65、 IκBα、 COX2蛋白水平显著升高;与模型组比较,维酶素组、温胃舒胶囊高、中剂量组大鼠胃腔体征减轻,组织病变改善,血清中TNF-α和IL-6水平降低,胃组织中NF-κBp65、 IκBα、 COX2蛋白表达降低。结论温胃舒胶囊通过抑制胃组织NF-κB通路,降低血清炎症因子水平,减轻慢性胃炎大鼠胃黏膜损伤。     

TNF-α活化人瘢痕疙瘩成纤维细胞NF-κB的实验研究

目的：观察肿瘤坏死因子－α（TNF-α）对瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）以及正常皮肤成纤维细胞（NSF）核因子-kappa B（NF-κB）的影响，以探讨瘢痕疙瘩的发生机制。 方法:原代培养成纤维细胞；免疫荧光技术观察NF-κB p65和IκB-α在静息状态和TNF-α刺激后的成纤维细胞中分布；应用TransAMTM NF-κB p65 kit试剂盒检测NF-κB p65 DNA结合活性；应用Western blotting检测IκB-α蛋白水平。 结果: TNF-α刺激后，NF-κB p65从细胞浆转移至细胞核；NF-κB p65 DNA结合活性水平在刺激后1 h达到高峰，4 h接近正常；细胞浆IκB-α蛋白水平在刺激后15 min降至最低值，4 h基本接近正常；KFB较NSF对TNF-α的刺激更为敏感。结论: KFB较NSF对TNF-α活化 NF-κB更为敏感, 可能是瘢痕疙瘩形成的潜在发病机制。     

酒精性肝纤维化核因子κB信号通路与性别的差异

目的 探讨酒精性肝纤维化的核因子(NF)-κB信号通路与性别差异的关系。方法 将7～8周龄的C57BL/6 N小鼠随机分为：雄性正常组、雄性模型组,雌性正常组和雌性模型组各20只。正常组采用对照液体饲料喂养8周,模型组采用酒精液体饲料喂养8周,联合31.5%乙醇灌胃(每周两次,5 g/kg)建立酒精性肝纤维化模型。8周末处死小鼠,检测各组小鼠血清学谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)的活性,雌二醇(E₂)和睾酮(T)的水平,天狼星红染色检测各组小鼠纤维化情况,HE染色观察肝组织病理学变化,免疫组织化学法检测NF-κB-P65和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性面积率,免疫印迹法检测Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、磷酸化核因子κB-P65(p-NF-κB-P65)、核因子κB抑制因子α(IκBα)、磷酸化核因子κB抑制因子α(p-IκBα)的表达水平。结果 雄性模型组ALT,AST酶活性和T的水平升高,E₂的水平降低,胶原纤维增加,HE染色坏死积分升高,NF-κB-P65和α-SMA的阳性面积率增加,co...     

IL-33调控NF-κB/Twist信号通路促进肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的机制研究北大核心CSCD

目的:探究IL-33是否通过激活NF-κB/Twist信号通路,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生上皮-间质转分化(EMT)而促进肺纤维化(PF)的进程。方法:C57BL/6小鼠48只,随机分成对照(CON)组、博莱霉素(BLM)组、BLM+IL-33(30μg/kg)组和BLM+抗IL-33抗体(Anti-IL-33 Ab)(100μg/kg)组,每组12只。气管注射BLM(5000 U/kg)诱导PF小鼠模型。造模后每隔1 d腹腔注射1次重组IL-33和抗IL-33抗体,连续注射3周。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组化检测肺组织IL-33跨膜受体ST2L的表达。体外培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,实验设Control组、IL-33(100 ng/ml)组、IL-33^(+)二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33^(+)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,100μmol/L)组,每组设复孔6个。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。RT-PCR检测肺组织或肺泡上皮细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。Western blot检测肺组织和(或)肺泡上皮细胞IL-33、CollagenⅠ、CollagenⅢ、E-cadherin、Vimentin、α-SMA、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达及细胞核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平。结果:体内实验,与CON组相比,BLM组IL-33、ST2L的表达明显升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平显著升高,肺组织E-cadherin的表达明显下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达明显上调(P<0.05)。与BLM组相比,IL-33组IL-33、ST2L的表达进一步升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平进一步增加,肺组织E-cadherin的表达进一步下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达进一步上调(P<0.05),肺纤维化程度进一步加重;而Anti-IL-33 Ab的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验,IL-33能够明显增加细胞内IκBα、NF-κB p65磷酸化水平,显著增加细胞核内NF-κB p65和Twist蛋白水平,明显下调E-cadherin的表达而显著上调Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达(P<0.05)。而IL-33的这些作用能够被NF-κB抑制剂PDTC所逆转。结论:IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而促使转录因子Twist的表达,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT而导致PF发生。     

水杨酸钠对豚鼠螺旋神经节NGB mRNA和蛋白表达的影响

目的： 观察水杨酸钠对豚鼠螺旋神经节NGB mRNA和蛋白表达的影响。方法: 48只成年健康豚鼠分4组进行，每组12只。A组：对照组；B组：水杨酸钠组Ⅰ（200 mg·kg^-1·d^-1）；C组：水杨酸钠组Ⅱ（300 mg·kg^-1·d^-1）；D组：水杨酸钠组Ⅲ（450 mg·kg^-1·d^-1）。各组均经腹腔注射给药，给药15d后处死检测；采用RT-PCR检测实验豚鼠螺旋神经节区NGB mRNA的表达；采用免疫组织化学染色分析NGB蛋白表达。结果: ①对照组豚鼠螺旋神经节区NGB mRNA表达明显高于3个水杨酸钠组（P<0.01）；3个水杨酸钠组NGB mRNA表达比较以D组表达最低，B组表达最高，C组与D组比较差异显著（P<0.05）。②免疫组织化学染色检测结果显示实验各组均表达NGB蛋白。A组NGB蛋白表达明显高于其它各组；3个水杨酸钠组以B组表达最高、D组表达最低。结论: 水杨酸钠可显著降低螺旋神经节神经元NGB mRNA和蛋白表达；水杨酸钠对螺旋神经节神经元NGB mRNA和蛋白表达是剂量依赖性的。     

核因子-κB对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响

目的: 探讨核因子-κB(NF-κB)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖、凋亡和转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达的影响。方法: 体外培养ASMCs，以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,将ASMCs分为对照组、TNF-α组和TNF-α+PDTC组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β₁ mRNA表达，Western blotting检测NF-κB、TGF-β₁的表达，免疫细胞化学染色法检测PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位，四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMCs增殖，Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡。结果: （1）TNF-α组ASMCs的NF-κB活性显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组NF-κB活性显著低于TNF-α组 (P<0.01)。（2）TNF-α组ASMCs增殖显著高于对照组(P<0.01),TNF-α＋PDTC组的增殖反应显著低于TNF-α组(P<0.01)；TNF-α+PDTC组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01)。（3）TNF-α组ASMCs的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01)，TNF-α+PDTC组的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著低于TNF-α组(P<0.01)。（4）TNF-α组ASMCs的TGF-β₁的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α＋PDTC组（P<0.01）。结论: NF-κB活化可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β₁的表达和分泌。     

病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB的表达

目的:初步探讨基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65在柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的小鼠病毒性心肌炎心肌中的表达。方法:6周龄近交系雄性BALB/c小鼠随机分为对照组和病毒性心肌炎组,分别给予0.1 m L PBS和10-5.69TCID50/m L CVB3注射,第4天和第10天各随机取8只小鼠处死并取血和心脏标本。Reed-Muench法测定接种病毒滴度;苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色后光镜观察心肌组织病理学改变;应用免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测MMP-2和NF-κB p65在心肌组织表达的分布和含量;用Western blot法检测MMP-2、NF-κB p65和IκBα在心肌组织的表达,用ELISA检测血清TNF-α含量的变化。结果:与对照组相比,免疫组化和Western blot实验结果提示病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB p65的表达显著升高(P0.05);感染组IκBα的表达呈下降趋势(P0.05);ELISA结果提示血清TNF-α含量在感染组显著升高,差异有统计学显著性(P0.05)。结论:病毒性心肌炎小鼠心肌组织中TNF-α、NF-κB p65和MMP-2表达显著上调,可能通过相关机制参与疾病的发生。     

siRNA对小鼠血管内皮细胞NF-κB p65表达的抑制作用

探索RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术在抑制血管内皮细胞激活中的应用前景.利用阳离子脂质体LipofectamineTM000作为转染试剂将化学合成的小鼠NF-κB p65的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染人小鼠EOMA细胞,RT-PCR测定细胞内NF-κB p65 mRNA表达,Westem blot检测细胞内NF-κB p65蛋白水平.同时观察siRNA对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的NF-κB激活的抑制作用.结果显示在转染siRNA后的第24小时,细胞内NF-κB p65mRNA水平降低,蛋白表达量明显减少,而在第48小时、72小时细胞内NF-κB p65蛋白已经无法测出;在TNF-α刺激后,转染siRNA的细胞组内NF-κB p65的表达也明显受到抑制.说明RNAi技术可以抑制NF-κB p65的表达,为进一步研究血管内皮细胞的保护提供了有效的方法.     

右美托咪定改善感染性休克大鼠急性肺损伤及对TLR9/NF-κB通路表达的影响

目的用,并探讨其可能的机制。方法将SD大鼠分为假手术组(Sham),模型组(LPS)和DMED治疗组(LPS+DMED);称重并计算各组大鼠肺系数、肺组织湿/干重比(W/D)和含水量;HE染色检测各组大鼠肺组织病理变化;ELISA检测各组大鼠肺组织IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白的表达;免疫荧光化学法染色各组大鼠肺组织NF-κB(p65)的表达;Western blot法检测TLR9和NF-κB(p65)的蛋白表达。结果与LPS组比较,DMED明显降低感染性休克大鼠的肺系数、肺组织湿/干重比(W/D)和含水量,改善感染性休克大鼠肺组织病理变化,显著降低IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达水平,减弱肺组织中NF-κB(p65)的活化,抑制TLR9和NF-κB(p65)的蛋白表达。结论 DMED对感染性休克大鼠急性肺损伤的保护作用,与减轻炎症因子和抑制TLR-9/NF-κB信号通路相关。