粘附分子E-钙粘素/β-连环素在LNCaP和ARCaP亚细胞系中的差异性表达及意义

目的:检测粘附分子E-钙粘素/β-连环素(E-cadherin/β-catenin)复合体在LNCaP和ARCaP亚细胞系IF11、IA8中的差异性表达,以探讨E-cadherin/β-catenin复合体与前列腺癌转移侵袭的关系。方法:用Western印迹及免疫荧光鉴定LNCaP和ARCaP亚细胞系IF11、IA8中E-cadherin、β-catenin的表达以及分布情况。结果:Western印迹显示E-cadherin在LNCaP细胞系中表达较高,在IF11、IA8中表达缺失,β-catenin在IF11、IA8中表达显著高于LNCaP(P<0.01)。免疫荧光显示β-catenin在LNCaP细胞系中主要分布在细胞膜上,而在ARCaP亚细胞系IF11、IA8中,主要分布于细胞核中;E-cadherin在LNCaP细胞中主要分布在细胞膜上。结论:不同上皮细胞间质转化态(EMT)特性的前列腺癌细胞系中E-cadherin/β-catenin表达以及分布存在差异,β-catenin的核转位可能是诱发前列腺癌细胞系发生EMT改变的机制之一。     

Wnt/β-catenin信号通路在多种人前列腺癌细胞系中的表达研究及意义

目的:检测多种不同上皮细胞间质转化(EMT)特性的人前列腺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达,对细胞中Wnt/β-catenin信号通路的功能状态进行鉴定,分析其在前列腺癌EMT现象中可能的作用。方法:用Western印迹法鉴定LNCaP及其亚细胞系C4、C4-2、C4-2B和ARCaP亚细胞系IF11、IA8,以及PC-3、DU145细胞中β-连环素(β-catenin),糖原合成酶3β(t-GSK3β),磷酸化糖原合成酶3β(p-GSK3β)的表达差异情况。结果:β-catenin和p-GSK3β在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、IF11、IA8中表达较高,在PC-3中表达较低,在DU145中表达缺失,t-GSK3β在上述所有细胞中表达无明显差异。p-GSK3β/t-GSK3β比值在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、IF11、IA8中较高,在PC-3和DU145中较低。结论:8种不同EMT特性的前列腺癌细胞系中,Wnt/β-catenin信号通路的功能状态存在差异。     

前列腺癌细胞株LNCaP和IA8中转移相关蛋白的差异表达及意义

目的:从粘附因素及细胞骨架蛋白角度初步探讨前列腺癌细胞骨转移潜能的分子机制。方法:用Western印迹法鉴定转移潜能不同的两个前列腺癌细胞株(LNCaP和IA8)中E钙粘素和波形蛋白的表达差异情况,并初步分析其在前列腺癌转移过程中所发挥的作用。结果:E钙粘素在低转移细胞株LNCaP中高表达、在高转移细胞株IA8中缺失;而波形蛋白在这两种细胞中的表达情况恰与E钙粘素相反。结论:人前列腺癌高、低转移株之间确实存在转移表型(E钙粘素和波形蛋白)的表达差异,而这两种表达差异蛋白可能在促进或抑制前列腺癌转移的过程中发挥重要作用。     

环氧化酶2在不同前列腺癌细胞系中的表达

目的:研究环氧化酶2(COX-2)在不同前列腺癌细胞系中的表达,探讨COX-2在前列腺癌侵袭进展及转移潜能获得机制中的可能作用。方法:应用Western印迹及RT-PCR鉴定LNCaP及其亚细胞系C4-2和AR-CaP亚细胞系IF11、IA8,以及PC-3细胞中COX-2的表达情况,并初步分析其在不同特性前列腺癌细胞系转移侵袭过程中的作用。结果:Western印迹结果显示:COX-2蛋白在PC-3细胞中表达相对较高,在IF11、IA8、LNCaP和C4-2细胞中表达缺失,差异具有统计学意义(P<0.05)。COX-2mRNA表达结果同蛋白一致。结论:不同来源、不同转移潜能的前列腺癌细胞株中COX-2表达存在差异。高表达COX-2可能在PC-3细胞高侵袭转移潜能获得方面起着一定作用,而与其他细胞系转移作用无关。     

TGF-β/Smads通路关键蛋白在5种前列腺癌细胞株中表达的鉴定及意义

目的:对多种不同人前列腺癌细胞株TGF-β/Smads信号通路的"开放"或"关闭"状态进行鉴定,初步探讨此通路在前列腺癌侵袭、转移中的作用及可能的机制。方法:用Western印迹法检测LNCaP、PC-3、DU145及AR-CaP亚细胞系IF11、IA8细胞中TGF-β/Smads通路的关键蛋白TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)、Smad2/3、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad4的差异表达。结果:TβRⅡ在PC-3、DU145、IF11、IA8中表达较高,在LNCaP中表达极低;Smad2/3在所有细胞中表达均较高,但活性成分p-Smad2仅在PC-3、DU145中表达;Smad4在LNCaP、PC-3、DU145中表达较高,IF11、IA8中表达缺失。结论:不同转移潜能的前列腺癌细胞株TGF-β/Smads通路的"开闭"状态存在差异,仅PC-3、DU145细胞处于开放状态;前列腺癌细胞可能通过不同的方式改变TGF-β/Smads通路状态参与晚期肿瘤的侵袭、转移过程。     

缺氧诱导因子1α诱导人前列腺癌细胞上皮间质化改变的研究

目的:研究人前列腺癌细胞在缺氧诱导因子1α(HIF-1α)诱导下能否发生上皮细胞间质转化态(EMT)改变,进而致侵袭能力增强,并初步分析其分子机制。方法:应用RT-PCR技术检测LNCaP细胞及其亚细胞系C4、C4-2、C4-2B这4种EMT阴性的人前列腺癌细胞中波形蛋白(vimentin)mRNA表达情况,并凭此筛选出适合于进一步作转染诱导试验的细胞。用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF-1α和pCD-NA3.1(-)空质粒后,分别转染上步试验所挑选出的人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/mLG418筛选抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α表达,Western印迹法检测EMT标志蛋白——上皮型钙粘素(E-cadherin)和vimentin的表达,Transwell验证转染后LNCaP细胞侵袭能力的改变。结果:RT-PCR证实4种EMT阴性的细胞中,仅LNCaP表达有vimentin编码基因,适合作转染诱导试验。免疫荧光也观察到HIF-1α转染细胞胞质中荧光亮度较空质粒转染细胞和未转染细胞明显增强。Western印迹法证实HIF-1α转染细胞发生了EMT转化,其E-cad-herin表达缺失,而vimentin表达增加。同时,Transwell体外侵袭试验也发现,LNCaP/HIF1α细胞的体外侵袭能力显著高于LNCaP细胞和LNCaP/pCDNA3.1(-)细胞。结论:HIF-1α过表达可以通过调节两种EMT相关蛋白诱导人前列腺癌细胞LNCaP发生EMT改变并致其侵袭能力增强。     

miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移

目的探讨miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。方法人工合成miR-21 mimic/inhibitor及其对照组序列,分别转入前列腺癌细胞株C4-2、DU145中,收集细胞行RT-qPCR检测miR-21、FOXO1 mRNA表达,行Western blot检测FOXO1、E-cadherin和N-cadherin表达,行Transwell试验检测转染后前列腺癌细胞侵袭透膜能力变化。结果前列腺癌细胞株C4-2、DU145转染miR-21 mimic/inhibitor及对照序列后,RT-qPCR检测miR-21表达升高/降低明显(P0.05),RT-qPCR检测FOXO1 mRNA表达与miR-21一致。在Western blot结果中,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达高于对照组,E-cadherin表达相反;转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达低于对照组,E-cadherin表达相反。Transwell试验显示,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞侵袭透膜能力较对照组增强(P0.01),转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞侵袭能力较对照组减弱(P0.01)。结论 miR-21通过诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。     

两种不同前列腺癌上皮细胞间质转化模型转录调控因子的比较及意义

目的:初步筛选、对比决定两种不同前列腺癌上皮细胞间质转化(EMT)模型(LNCaP/HIF1α细胞模型、ARCaP细胞模型)表型的转录因子,为利用这两个模型深入研究前列腺癌转移机制奠定基础。方法:分别体外培养LNCaP/HIF1α细胞模型中的LNCaP细胞、稳定高表达缺氧诱导因子HIF1α的LNCaP细胞和ARCaP细胞模型中的IF11细胞、IA8细胞,提取总RNA行RT-PCR,检测目前发现的决定EMT表型的5种转录因子(Snail、Slug、ZEB1、SIP1、Twist1),对比两种模型的差异。结果:LNCaP/HIF1α细胞模型中的两种细胞均不同程度地表达5种转录因子,其中Slug、Twist1有差异,表型转化后Slug表达升高,而Twist1表达降低(P<0.05);ARCaP细胞模型中的两种细胞均不同程度地表达Snail、Slug、ZEB1、SIP1,不表达Twist1,其中ZEB1、Slug有差异,表型转化后ZEB1、Slug表达升高(P<0.05)。结论:决定不同来源的前列腺癌EMT模型表型转化的转录调控机制各不相同,Slug可能是决定HIF1α诱导LNCaP细胞EMT表型转化的关键转录因子,而ZEB1、Slug则可能在ARCaP细胞EMT表型转化中起决定作用。     

Smad4在人前列腺癌细胞系LNCaP和ARCaP中的差异表达及意义

目的:探讨TGF-β/Smads信号转导的核心Smad4在前列腺癌转移潜能获得中的作用及可能的机制。方法:用Millicell体外侵袭试验观察LNCaP和ARCaP系IF-11、IA-8细胞株转移潜能的差异情况,分别应用Western印迹法和逆转录PCR鉴定这3种细胞株中Smad4蛋白及mRNA的差异表达。结果:ARCaP系IF-11、IA-8细胞株的体外侵袭潜能明显高于LNCaP细胞(P<0.01);但Smad4蛋白在低转移潜能的LNCaP细胞中高表达,而在高转移潜能的IF-11、IA-8中表达缺失(P<0.01),Smad4 mRNA表达结果与蛋白一致。结论:Smad4在转移潜能不同的前列腺癌细胞系间存在差异表达,Smad4表达缺失可能是晚期前列腺癌发生侵袭转移的机制之一。     

细胞株源人前列腺肿瘤干细胞的分选与鉴定

目的:论证人前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞株中是否存在干细胞亚群。方法:分别用免疫表型法和侧群(side population,SP)细胞法从5种人PCa细胞株(Du145、IA8、LNCaP、TSU-PrL和PC-3)中富集类干细胞,再应用软琼脂克隆形成试验初步验证类干细胞亚群的体外生长方式及成瘤能力。选择LNCaP源SP细胞(LNCaP/SP),依次采用免疫细胞化学技术、Transwell、MTT以及裸鼠致瘤试验,分别检测其干细胞标记物的表达情况、鉴定其体外增殖和侵袭能力以及动物体内的致瘤和转移潜能。结果:5种细胞株中均难以分选出免疫表型为CD133+CD44+的细胞亚群。除PC-3外,其余4株细胞可分选出呈现典型克隆性生长特点的SP细胞。体外克隆形成率在IA8、LNCaP和TSU-PrL源SP细胞与非侧群(non-side population,NSP)细胞间有显著性差异(P<0.05)。与LNCaP/NSP相比,LNCaP/SP的体外增殖和侵袭能力显著增强,同时阳性表达整合素α2、Nanog、CD44、OCT4以及ABCG2等5种干细胞标记物。而且,LNCaP/SP的皮下成瘤率、骨转移率及瘤体体积亦显著高于LNCaP/NSP(P<0.01)。结论:SP分选法更适合富集人PCa细胞株中类干细胞,LNCaP/SP细胞是PCa细胞株LNCaP中的肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)。     

柯萨奇腺病毒受体在人PCa细胞Du145和LNCaP中的差异表达及意义

目的:探讨柯萨奇腺病毒受体(CAR)在PCa转移潜能获得机制中的可能作用。方法:用TransweⅡ技术鉴定两种PCa细胞株(Du145和LNCaP)的不同转移潜能,进而应用Western印迹法鉴定这两种细胞株中的CAR表达差异情况,并初步分析其在PCa转移过程中所发挥的作用。结果:Du145的体外侵袭潜能显著高于LNCaP细胞(P<0.05);同时,CAR在低转移细胞株LNCaP中高表达,而在高转移细胞株Du145中表达缺失(P<0.01)。结论:CAR在转移潜能不同的PCa细胞株之间确实存在着有意义的差异表达,而这种表达差异可能在影响PCa转移过程中发挥重要作用。