乙肝标志物模式与病毒载量的相关性研究

目的研究慢性乙肝患者血清标志物和病毒载量之间相关性。方法血清HBV DNA测定用荧光定量分析PCR法和乙肝标志物采用化学发光酶免疫定量法,分别对222例慢性乙肝患者血清HBV DNA和乙肝标志物检测并比对分析。结果血清学检测乙肝表面抗原（HBsAg）＋乙肝病毒e抗原（HBeAg）＋乙肝病毒核心抗体（HBcAb）组与乙肝表面抗原（HBsAg）＋乙肝病毒e抗原（HBeAg）组其病毒载量显著高于其它组（病毒载量高于105拷贝/m l分别达91.9%和77.8%）。结论 HbeAg与HBV DNA定量水平具有良好的相关性,同时检测乙肝标志物和HBV DNA才能准确反映不同个体HBV感染状态及病毒复制情况     

乙肝产妇血清及乳汁中HBVDNA含量相关性研究

目的 了解乙型病毒性肝炎病毒携带产妇血清HBVDNA含量与乳汁中HBVDNA含量相关性的探讨，以指导母乳喂养。方法 选择经血清学检测诊断为乙肝携带者的产妇219例（HBVDNA定量分析呈阳性），采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对已确认的乙肝孕产妇血清HBVDNA与乳汁HBVDNA的检测，并对所有检测指标进行相关性分析。结果 219例血清HBVDNA阳性产妇的乳汁中检出HBVDNA136例，总阳性率为62．1％，且乳汁HBVDNA的阳性率随血清HBVDNA含量的升高而增高。结论 慢性HBV感染孕产妇尤其是血清．HBVDNA阳性者的乳汁含有HBVDNA，具有一定传染性。检测HBV感染孕产妇乳汁中HBVDNA含量，对阻断母婴传播和预防家庭内水平传播，及对HBV感染孕产妇的诊治和疗效评估有着重要意义，特别是为HBV感染产妇选择是否母乳喂养提供了指导依据。     

隐匿性HBV感染者血清中HBVS基因变异分析

目的分析隐匿性HBV感染者的HBV DNA基因序列,查找基因变异位点,探讨隐匿性HBV感染的分子生物学机制。方法选择不明原因肝病患者76例,分离患者血清,采用巢式PCR检测患者血清HBV DNA,阳性者随机抽取8例扩增nt56-nt767 HBV S区DNA片段并采用直接测序法检测S区基因的变异情况。结果本组76例不明原因肝病患者中16例血清HBV DNA阳性,随机选择8例测序比对发现,a决定簇内nt587出现G→A的突变,推导氨基酸由甘氨酸变异为精氨酸,即较为常见的G145R突变。a决定簇外nt355、nt484碱基均由A→C,推导氨基酸无变化,nt512碱基由C→A,推导氨基酸由脯氨酸变异为苏氨酸。结论 HBV S区的变异影响了体内HBV清除,导致病毒的低水平复制,其中G145R突变是隐匿性HBV感染发生的原因之一。     

免疫失败儿童乙肝病毒S基因“a”抗原决定簇序列分析

目的: 探讨乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白母婴阻断免疫失败儿童病毒S基因"a"决定簇的变异情况.方法: 对30例经乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白母婴阻断免疫失败后血清表面抗原(HBsAg)阳性的儿童,采用聚合酶链反应方法(PCR)扩增其血清中HBV DNA S基因区,并对PCR产物直接标记测序.结果: 30例HBsAg阳性儿童有28例血清HBV DNA阳性,其中有8例出现了S基因"a"决定簇的变异,变异率为28.6%,第126位的异亮氨酸(Ile)被苏氨酸(Thr)替代2例,第134位苯丙氨酸(Phe)被异亮氨酸替代2例,第145位甘氨酸(Gly)被丙氨酸(Ala)替代4例.结论: 乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白母婴阻断免疫失败儿童中存在S基因"a"抗原决定簇变异.     

隐匿性乙型肝炎患者HBV—DNA的检出与分析

目的探讨隐匿性乙型肝炎患者血清HBV标志物与DNA水平的关系。方法采用荧光定量PCR方法及ELISA方法对20例隐匿性乙型肝炎患者血清乙肝标志物及DNA水平进行检测分析。结果20例患者HBsAg和HBeAg阴性的不同组合模式均可检测到低拷贝的HBV-DNA,其中抗-Hbe＋、抗-HBc＋共11例（5SoA）,而抗-HBs4-、抗-Hbe＋和抗一HBe＋共5例（25％）;16例血清HBV-DNA含量〈1000copies／ml,仅3例肝功能轻度异常。结论HB—sAg阴性的不同血清学模式存在低拷贝HBV感染,荧光定量PCR在隐匿型HBV感染中具有很好的监测作用。     

替诺福韦与产后联合免疫阻断HBV母婴传播的有效性及安全性

目的 ：观察HBV高病毒载量孕妇服用替诺福韦（TDF）与产后新生儿乙肝免疫球蛋白（hepatitis B immune globulin,HBIG）、乙肝疫苗联合免疫阻断慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）母婴传播的有效性和安全性。方法：慢性HBV感染（HBsAg阳性）孕妇100例,根据血清HBV DNA水平分为高病毒载量组（≥5.30 lg IU/mL）21例,低病毒载量组（<5.30 lg IU/mL,但高于检测下限）28例和低于检测下限组（<1.70 lg IU/mL）51例。高病毒载量组孕妇在妊娠28周至分娩结束前予以TDF抗HBV治疗;所有婴儿在出生12小时内完成乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗联合免疫,其后按计划接种乙肝疫苗。比较3组HBV母婴传播阻断效果,观察TDF用药的安全性。结果：高病毒载量组分娩前HBV DNA 4.61(3.96,5.86)lg IU/mL明显低于用药前7.98(7.75,8.12)lg IU/mL,差异有统计学意义（P<0.05）。高病毒载量组有1例婴儿在7月龄发生HBV感染,HBV母婴传播阻断失败率4.7%,...     

乙型肝炎病毒宫内感染的探讨

目的：重视对妊娠期间孕妇HBV的筛查，积极预防，控制宫内感染，方法：采用集孕静脉血，用ELISA法做血清乙肝标志物HBsAg,HbsAg,HbeAg,HbcAb检测，用PCR法做HBV－DNA检测，对乙肝大三阳，HBV－DNA阳性孕妇所生新生儿采集脐静脉血，做乙肝标志物及HBV－DNA检查，结果：乙肝大三阳。，HBV－DNA阳性孕妇68例，所生新生儿脐静脉检测，54例（79．41％）为病毒携带者，其中HBV－DNA阳性42例（77．78％）。结论：乙型肝炎病毒宫内感染发病率较高，母婴传播具有高度危险性，应注意孕期筛查，加强预防，早期诊断，尽早治疗。     

乙型肝炎孕妇HBV-M和HBV-DNA关系分析

目的分析孕妇乙型肝炎血清学标志物（HBV-M）与乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）的关系,以便指导免疫干预,为阻断乙型肝炎病毒母婴传播提供科学依据。方法分离240名乙肝携带孕妇的血清样本,用酶联免疫吸附方法（ELISA）测定HBV-M,用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）测定HBV-DNA含量。结果不同HBV-M模式的HBV-DNA阳性率和含量有差异。大三阳[HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、抗-HBc（＋）]模式的HBV-DNA阳性率和含量最高,显著高于其他3种模式（P〈0.05）;小三阳[HBsAg（＋）、抗-HBe（＋）、抗-HBc（＋）]、[HBsAg（＋）、抗-HBc（＋）]及[HBsAg（＋）]3种模式的HBV-DNA阳性率分别为49.1%、29.5%和16.7%。HBeAg阳性的乙肝孕妇血清HBV-DNA含量明显高于HBeAg阴性的乙肝孕妇（P〈0.05）,HBeAg阳性与HBV-DNA含量呈正相关关系。结论乙型肝炎孕妇HBV-M和HBV-DNA含量之间存在联系,联合检测HBV-M及HBV-DNA对阻断HBV母婴传播及指导临床诊治具有重要意义。     

联合免疫阻断乙肝病毒母婴传播的效果观察和失败原因分析

目的：了解阻断乙肝病毒母婴传播综合措施的效果,期望提高阻断成功率。方法对2006年6月至2013年8月本院收治的乙肝病毒感染孕妇所分娩并随访的3010例婴儿进行回顾性分析。结果母亲HBsAg（＋）、HBeAg（＋）组婴儿HBV 感染率均明显高于母亲HBsAg（＋）、HBeAg（-）组（P=0.000）;母亲HBV DNA载量与婴儿HBV感染率呈正相关;阴道分娩组婴儿HBV感染率明显高于剖宫产组（ P=0.036）;婴儿感染率与婴儿性别及是否为足月分娩的差异无显著性。结论联合免疫阻断乙肝病毒母婴传播的成功率较高,母亲HBeAg（＋）和高病毒载量是造成婴儿阻断失败的主要原因,剖宫产可能提高阻断成功率。     

1832例孕产妇病毒血清学的检测分析

目的对孕产妇进行乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、艾滋病毒筛查和干预治疗,有效阻断母婴传播。方法对本院2009年4月～2011年4月孕产妇血清乙肝病毒（HBV）、丙肝病毒（HCV）、梅毒螺旋体抗体（TRUST）、艾滋病病毒（HIV）进行检测统计和分析。结果 1832例孕产妇中感染HBV 145例（7.9%）,HCV感染10例（0.55%）,TP感染10例（0.55%）,HIV感染1例（0.055%）。结论通过对孕产妇进行血性感染性疾病知识的宣传和筛查,降低孕产妇HBV、HCV、TP、HIV感染,降低围产儿感染率。     

乙肝病毒DNA和前S1抗原及其标记物三者相关性分析

目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)、乙肝病毒标志物(HBVM)之间的相关性,为拉米夫定(Lamivudine)治疗提供新的监测指标。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例,其中HBV DNA阳性400例(拷贝数>500/ml),按HBV-DNA含量由低到高分8组;其余为HBVDNA阴性对照100例。同步以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PreS1;以电化学免疫发光法检测乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg);以荧光定量PCR法检测HBV DNA(以HBV DNA拷贝数>500/ml为阳性)。结果(1)在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,PreS1的阳性率比HBeAg高(P<0.05);在HBV DNA拷贝数1×106/ml以上,二者阳性率无显著性差异(P>0.05);(2)PreS1的灵敏度为90%(360/400),高于HBeAg的68.5%(274/400)(P<0.05);PreS1的阴性预示值为55.6%(50/90),高于HBeAg的43.2%(96/222)(P<0.05);PreS1的检测有效率为82.0%(410/500),高于HBeAg的64.8%(324/500)(P<0.05)。(3)在HBVDNA拷贝数500~1×104/ml之间,HBsAg的阳性率比PreS1高(P<0.05),在HBVDNA拷贝数1×104/ml以上,HBsAg的阳性率与PreS1的阳性率无显著性差异(P>0.05)。在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,HBeAb有较高的阳性率。结论PreS1与HBVDNA具有较好的相关性,其检测灵敏度和阴性预示值、检测有效率都优于HBeAg检测。PreS1可作为拉米夫定等抗病毒药物疗效观察指标之一。HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标。     

HBV M和HBV DNA的关系探讨

目的:研究乙肝病毒血清学标志物(HBV M)与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)之间的关系。方法:对497例患者同时检测HBV M和HBV DNA,HBV M检测用ELISA法,HBV DAN检测用PCR法。结果:HBV M的检测结果分为6组,每组HBV M组合都有一定的HBV DNA检出率。结论:说明HBV M只能作为乙肝病毒有无感染的一般性检测,而HBV DNA能检出复制病毒,但难以表达非复制状态的感染,所以两者关系值得进一步探讨。     

氧化苦参碱对乙型肝炎病毒转基因小鼠乙肝抗原表达的影响

目的：研究氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的作用,并初步探讨其作用机制。方法：以乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠ＩＣＲ－ＴｇＮ（ＨＢＶａｄｒ１．２）ＳＭＭＵ 为动物模型,运用ＥＬＩＳＡ和免疫组化的方法检测小鼠肝脏内乙肝抗原含量。结果：分别予氧化苦参碱１００, ２００, ３００ ｍ ｇ／ｋｇ 腹腔注射,１次／ｄ,３０ ｄ 后,乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较空白对照组（予等体积生理盐水腹腔注射）均有明显的下降,且对两者作用一致;进一步的研究表明氧化苦参碱２００ ｍ ｇ／ｋｇ 作用１０ ｄ,２０ ｄ 时小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较治疗前有明显的下降。结论：氧化苦参碱能降低乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量,有抗乙型肝炎病毒作用。     

乙肝病毒不同血清标志物ALT中与HBVDNA载量临床意义

目的分析乙肝病毒（HBV）不同血清标志物（HBVM）中丙酸氨基转移酶（ALT）异常率与乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）载量的关系,探讨乙肝病毒感染时肝损伤的主要原因及检测HBVM与HBVDNA载量及ALT的临床意义。方法对345份乙肝患者的血清标本分别用ELISA、荧光定量PCR、速率法检测HBVM、HBVDNA载量及ALT。结果①HBeAg（＋）与HBeAg（-）两组HBVDNA阳性率、HBVDNA载量〉10^5的百分率比较均有显著差异（P〈0．01）。②ALT异常率在HBeAg（＋）组的不同HBVDNA载量级中无差异（P〉0．05）,在HBeAg（-）组中随HB—VDNA载量级增大而增大（P〈0．01）。结论在HBeAg（＋）时,肝损伤与HBVDNA载量无关;HBeAg（-）时,大多病毒复制减弱,但有少数HBVDNA载量为高拷贝,其肝损伤程度与HBVDNA载量呈正相关。     

Relationship between Maternal PBMC HBV cccDNA and HBV Serological Markers and its Effect on HBV Intrauterine Transmission

Objective To investigate the relationship between maternal peripheral blood mononuclear cells (PBMC) hepatitis B virus(HBV) covalenty closed circular deoxyribonucleic acid(cccDNA) and other HBV serological markers and its effects on HBV intrauterine transmission. Methods We enrolled 290 newborns and their hepatitis B surface antigen(HBsAg) positive mothers. HBV cccDNA in PBMC and HBV DNA in serum were detected by a real‐time PCR‐TaqM an probe while HBV serological markers were detected with an electrochemiluminescence immunoassay. Results There was a positive correlation between the levels of PBMC HBV cccD NA and serum HBV DNA and HBeA g(r = 0.436 and 0.403, P 0.001). The detection rate of pattern A [‘HBsA g(+), HBeA g(+), and anti‐HBc(+)'] was significantly higher in the PBMC HBV cccD NA positive group than in the control group(χ2 = 48.48, P 0.001). There was a significant association between HBV intrauterine transmission and PBMC HBV cccD NA(χ2 = 9.28, P = 0.002). In the presence of serum HBV DNA, HBeA g, and PBMC HBV cccD NA, the risk of HBV intrauterine transmission was three times higher(OR = 3.69, 95% CI: 1.30‐10.42) than that observed in their absence. The risk of HBV intrauterine transmission was the greatest(OR = 5.89, 95% CI: 2.35‐14.72) when both PBMC HBV cccD NA and pattern A were present. A Bayesian network model showed that maternal PBMC HBV cccD NA was directly related to HBV intrauterine transmission. Conclusion PBMC HBV cccDNA may be a direct risk factor for HBV intrauterine transmission. Our study suggests that serological markers could be combined with PBMC‐related markers in prenatal testing.     

乙型肝炎病毒载量与血清免疫标志物及ALT的关系

目的探讨不同乙肝病毒（HBV）载量与其血清标志物模式及ALT的关系。方法采用荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和速率法分别检测患者血清HBV-DNA载量、血清学标志及谷氨酸丙氨酸转移酶（ALT）活性。结果在605例患者样本中共检测出9种血清模式,HBeAg阳性模式,即HBsAg（＋）,HBeAg（＋）,抗HBc（＋）模式与HBsAg（＋）,HBeAg（＋）模式,其HBV-DNA阳性率分别为96.2%和100.0%,病毒平均含量106.53copies/mL,明显高于HBeAg阴性模式（P〈0.01）。HBV-DNA水平与ALT异常存在相关。结论 HBeAg阳性模式HBV载量显著高于HBeAg阴性模式,HBV载量越高,ALT异常的比例越大。     

乙型肝炎病毒滴度与血清标志物的关系

目的探讨乙型肝炎病毒的滴度与血清标志物及肝功能的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和ELISA法同时检测420份血清的HBV-DNA和血清标志物(HBV-M),并用全自动生化分析仪测定其肝功能ALT,对结果进行分析。结果105例HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组的血清HBV-DNA平均拷贝数为3.16×1010/m l,检出率为95.23%,显著高于其他组(P<0.01);HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组ALT异常率为64.76%(68/105),显著高于HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+组ALT异常率36.96%(34/92)(P<0.01)。45例HBsAb+组血清HBV-DNA检出率为0,38例HBV-M全阴性组血清HBV-DNA检出率为7.89%。HBV-DNA阳性组ALT异常率为57.84%(107/185),显著高于HBV-DNA阴性组ALT异常率31.06%(73/235)(P<0.01)。结论定量PCR方法可以作为确认乙肝病毒感染不同状态的一种有效手段,血清标志物HBV-M阴性患者仍可有HBV-DNA阳性,HBV-DNA与HBV-M、肝功能同时检测,对乙肝的临床诊断、治疗方案的选择以及疗效判断有一定的指导意义。     

HBV病毒滴度与血清标志物关系的研究

目的探讨乙肝患者血清中乙型肝炎病毒的滴度与血清标志物及肝功能的关系。方法1584份患者血清分别用荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)、ELISA法测定HBVDNA和血清标志物(HBV-M),肝功能三项(TB、AST、ALT)用全自动生化分析仪测定。结果感染期模式组共有1525例,HBVDNA检出有1215例,阳性率为79.67%,最高拷贝数为9.61×109/ml,最低拷贝数为9.16×103/ml,HBV-M主要模式大三阳、小三阳的HBVDNA阳性率分别为97.49%和51.17%,平均拷贝数分别为2.56×108/ml和1.61×107/ml;恢复期模式组有42例,但仍可检出HBVDNA4例,阳性率为9.52%;HBV-M全阴的有17例,1例为HBVDNA阳性,阳性率为5.88%。相关分析显示血清HBVDNA含量与肝功能状态无明显的相关性(相关系数γDNA-ALT=0.3204,γDNA-AST=0.2751,γDNA-TB=0.2007)。结论FQ-PCR方法检测HBVDNA具有高检出率,能准确反映乙肝病毒感染和复制情况;血清标志物阴性患者仍可有HBVDNA阳性;HBVDNA水平不能反映肝功能状态。HBVDNA与HBV-M、肝功能同时检测,对乙肝的临床诊断、治疗方案的选择以及疗效的判断有一定的指导意义。     

PCR检测HBV DNA对乙肝疫苗应答反应的研究

儿童全程接种乙肝疫苗后的应答反应率高（为９６％）［１］；而成人接种乙肝疫苗后免疫应答比较低（为６５．１２％）。本文对成人组接种乙肝疫苗无应答反应１５例（３４．８８％），进一步探索了乙肝疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例正常成人经乙肝疫苗接种后无应答反应者和３例乙型肝炎患者的血清，结果发现１５例不产生抗－ＨＢｓ者，经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ均为阴性；仅３例为阳性。本文作者在ＰＣＲ检测指导下，对１５例成人采用乙型肝炎免疫球蛋白（ＨＢＩＧ）和３０微克乙肝疫苗联合应用１０５天后，有１２例产生抗－ＨＢｓ。提示对于接种乙肝疫苗的正常人群，凡经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ阴性者，经过重复大剂量注射乙肝疫苗后可使绝大多数得到可靠的保护。     

应用竞争性PCR方法探讨血清HBV DNA浓度与HBV免疫标志的关系

目的：探讨血清ＨＢＶＤＮＡ浓度与ＨＢＶ免疫学标志的关系。方法：应用竞争性ＰＣＲ方法，检测ＨＢＶ免疫标志不同背景的原发性肝癌（ｎ＝３８），肝硬化（ｎ＝３６），慢性肝炎（ｎ＝５１）共１２５例的血清ＨＢＶＤＮＡ浓度，结果：ＨＢＶＤＮＡ浓度与血清ＨＢＶ免疫标志有关，而与慢性肝病类型无关，五项免疫标志均阴性或抗－ＨＢｓ阳性的慢性肝病患者中，约有三分之一病例存在低水平ＨＢＶ感染，ＨＢｅＡｇ阳性病例的ＨＢＶＤＮ