神经干细胞与嗅鞘细胞联合移植的研究进展

神经干细胞（NSCs）能分化成神经元替代坏死,凋亡神经元,嗅鞘细胞（OECs）是一种特殊类型的胶质细胞,两种细胞联合移植能在中枢神经系统修复过程中起到互补作用,更好地修复损伤组织,改善宿主运动及认知功能。     

神经干细胞和嗅鞘细胞联合移植与神经干细胞移植治疗实验性脑出血的比较

目的对比神经干细胞(NSCs)和嗅鞘细胞(OECs)联合移植与NSCs移植治疗大鼠脑出血的疗效。方法制作大鼠脑出血模型,记录细胞移植后对照组和移植组(NSCs组、NSCsOECs组)大鼠运动功能,采用免疫组化观察移植细胞在体内存活、分化和迁徙的情况。结果NSCsOECs组和NSCs组移植NSCs分别有14.19%和2.96%分化为神经元,差异有统计学意义(χ2=154.79,P<0.01),30d时神经功能缺损评分NSCs组为1.60±0.13,NSCsOECs组为1.01±0.11,差异有统计学意义(P<0.05),OECs移植后能存活、迁徙,NSCs移植后能存活、分化为神经元、星形和少突胶质细胞,并向损伤区迁徙。结论OECsNSCs移植改善脑出血大鼠运动功能的疗效优于单纯NSCs移植。     

嗅鞘细胞对原代培养神经干细胞增殖、分化的影响

目的 观察嗅鞘细胞(OECs)对神经干细胞(NSCs)增殖、分化的影响.方法 新生大鼠脑OECs和NSCs原代培养,采用免疫荧光及免疫细胞化学方法鉴定相关细胞.取原代OECs分为2组,实验组去除培养孔的间隔,使OECs和NSCs共用一培养液体系;对照组不破坏培养孔的间隔,单独培养NSCs,其余同实验组.观察2组细胞增殖、分化情况.结果 原代培养的OECs表达神经生长因子受体(P75NGFR);原代培养的神经球表达巢蛋白(nestin),神经球分化的细胞表达神经丝200(NF200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP).增殖实验中,实验组NSCs数量较对照组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05).诱导分化实验中,实验组4d、7d时NF200阳性细胞率较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),说明2种细胞共液培养时,OECs提高了NSCs向NF200阳性细胞分化率.结论 OECs可促进NSCs增殖,并提高了NSCs向神经元分化的效率.     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤的研究一直是神经科学界探讨的热点,而脊髓损伤后的神经修复和功能重建也一直困扰着临床医学界。既往认为中枢神经细胞的轴突损伤在自然条件下几乎不能再生,其原因是中枢神经环境不利于轴突再生、中枢神经细胞本身的再生能力低下、以及神经轴突不能穿越损伤瘢痕区到达靶细胞。脊髓损伤包括原发性损伤和继发性损伤,二者均可引起部分神经元的丢失和神经纤维的断裂;而继发性损伤可导致原发性损伤范围的扩大,使更多的神经元凋亡和神经纤维的变性、脱髓鞘改变等,从而导致相应部位的感觉、运动和神经反射功能的丧失。近年来,随着神经科学…     

嗅鞘细胞对神经干细胞向胆碱能神经元分化的影响

目的：研究不同浓度嗅鞘细胞（OECs）对神经干细胞（NSCs）向胆碱能神经元分化的影响,为细胞联合移植治疗阿尔茨海默病提供理论依据。方法：分别体外培养NSCs和OECs。将5×10^4/mL的NSCs分别与1×10^4/mL、1×10^6/ mL、1×10^8/mL OECs共培养7 d,同时设立对照组（不加OECs）。用免疫细胞化学法检测胆碱乙酰化酶阳性细胞表达。结果：共培养7 d后,OECs能促进NSCs向胆碱能神经元分化,以1×10^6/mLOECs与NSCs共培养作用最明显,与对照组比较差异有显著统计学意义（P〈0.01）。结论：OECs可促进NSCs向胆碱能神经元分化。     

嗅鞘细胞移植治疗晚期脊髓损伤临床试验初步报告

目的　开展嗅鞘细胞移植治疗晚期脊髓损伤的临床试验研究 ,探讨其移植是否安全可行 ,对晚期脊髓损伤患者是否有帮助脊髓神经功能恢复的作用。方法　取胚胎嗅球 ,消化成单个嗅鞘细胞后 ,培养 2～ 3周 ,然后将其移植到脊髓损伤部位的上下处。共治疗 171例伤后时间为 6个月至 18年 ,脊髓损伤部位没有压迫性病变的脊髓损伤患者 ,其中男 139例 ,女 32例 ,年龄为 2 .5～ 6 4岁。结果　嗅鞘细胞移植后两周～两个月时随访 ,按ASIA脊髓损伤神经功能分类国际标准评价 ,171例患者的脊髓功能均有部分恢复 ,其中运动功能由术前 34.5± 2 0 .3提高到 4 2 .0± 2 0 .0 ,轻触觉由术前 4 7.2± 2 4 .0提高到 6 1.8± 2 2 .9,痛觉由术前 4 8.6± 2 3.5提高到 6 4 .0± 2 2 .8。自身术前术后对照t检验 ,P <0 .0 0 1。患者无术后长期发热、脊髓感染和功能恶化等并发症 ,无与手术有关的死亡。结论　嗅鞘细胞移植安全可行 ,能帮助晚期脊髓损伤患者恢复部分脊髓神经功能。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床研究现状

目的：对嗅鞘细胞生物学特性、培养纯化、嗅鞘细胞移植的可能机制及嗅鞘细胞移植在临床的应用等方面进行分析,介绍嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状。 资料来源：以olfactory ensheathing cells,spinal cord injury,嗅鞘细胞,脊髓损伤为检索词检索PubMed数据库(2000/2009),中国期刊全文数据库(2000/2009)。 资料选择：纳入标准：①文章所述内容应与嗅鞘细胞及脊髓损伤密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准：①重复性研究。②Meta分析。 结局评价指标：嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展。 结果：嗅鞘细胞具有与许旺细胞和星形胶质细胞相似的特征。目前嗅鞘细胞移植的动物实验主要致力于提高轴突再生能力、替代细胞成分、阻止脱髓鞘病变和促进髓鞘再生等方面,移植的嗅鞘细胞具有促进感觉及运动功能恢复的客观结果,有些移植研究甚至已经进入了临床试验阶段。不过嗅鞘细胞移植由动物实验转化到临床应用还受到很多因素的影响,诸如移植剂量、细胞生长因子的活力,细胞移植的风险等,尤其是嗅鞘细胞移植后的近期及远期效果还需要进一步深入研究、评价,并且需要长时间的随访。有研究已经把用基因转染的嗅鞘细胞用于移植,在动物试验身上已经取得了满意的效果。 结论：随着基因工程技术发展以及嗅鞘细胞移植修复神经机制的深入研究,嗅鞘细胞移植必将为临床治疗脊髓损伤的患者带来康复的希望。     

不同来源嗅鞘细胞移植治疗脑出血的比较

背景：嗅鞘细胞是目前已知用于移植细胞中惟一可以跨越周围神经系统与中枢神经系统边界的细胞。在众多的国内外文献中,大多以嗅球来源嗅鞘细胞作为观察对象;但采用嗅黏膜嗅鞘细胞移植具有来源方便、损伤小、可自体取材等优势。 目的：比较嗅球来源嗅鞘细胞和嗅黏膜嗅鞘细胞移植对脑出血后神经功能损伤恢复作用的差异。 设计、时间及地点：免疫组织化学水平的随机对照动物实验,于2005-10/2007-10在无锡市第三人民医院细胞实验室完成。 材料：选用健康雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为3组,对照组、嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各10只。 方法：分别获取人鼻中隔黏膜、人胚嗅球,进行嗅鞘细胞的分离培养纯化,取培养10 d的细胞用作细胞移植。取SD大鼠制备尾状核出血模型,嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各取10μL细胞悬液在立体定向下引导微量注射器向大鼠脑组织内匀速注射(1 μL/min),对照组注入等量培养基,注射点为右侧尾状核。 主要观察指标：观察两种来源嗅鞘细胞的体外培养情况。嗅鞘细胞移植后对动物行定期行为学评定,功能损伤越重,得分越高;并观察组织切片靶区域免疫细胞化学分析结果。 结果：从体外培养结果看,无论在形态上还是表型上,两者无明显区别。嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组大鼠的Longa 5分制法及前肢放置试验评分在移植后第14,28,56天显著低于对照组（P < 0.05）,两移植组差异无显著性意义（P > 0.05）,移植组各时间段差异无显著性意义（P > 0.05）。 结论：用于移植修复神经功能的两种嗅鞘细胞在细胞特性、移植效果方面均无明显差异。     

嗅鞘细胞移植治疗多发性硬化1例

作者在治疗晚期脊髓损伤的基础上[1],采用嗅鞘细胞移植治疗脊髓多发性硬化1例,取得较好效果.     

嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤

背景：嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤在众多疗法中效果较佳,成为最有前景的治疗方法之一。目前移植方法为局部移植,存在操作复杂、创伤大、重复移植治疗困难等缺点。寻找一种简单易行且疗效好的移植方法成为各国学者研究的热点。 目的：分析嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤的可行性和疗效。 方法：制备Wistar大鼠脊髓半切模型,随机分4组：嗅鞘细胞髓内局部移植组、嗅鞘细胞静脉移植组、D/F12静脉移植组和空白对照组。定期行CBS功能评分及组织学检查,评价脊髓修复情况。 结果与结论：嗅鞘细胞髓内局部移植组、嗅鞘细胞静脉移植组的功能恢复和组织学改变优于D/F12静脉移植组和空白对照组,嗅鞘细胞髓内局部移植组、嗅鞘细胞静脉移植组间无显著差别。说明嗅鞘细胞静脉移植可向脊髓损伤部位迁移并修复脊髓损伤,其疗效与嗅鞘细胞髓内局部移植相当。     

Effects of olfactory ensheathing cells on the proliferation and differentiation of neural stem cells

BACKGROUND:Olfactory ensheathing cells can promote oriented differentiation and proliferation of neural stem cells by cell-secreted neural factors. OBJECTIVE:To observe the effect of olfactory ensheathing cells on the differentiation and proliferation of neural stem cells. DESIGN,TIME AND SETTING:Cytology was performed at the Department of Neurology,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,China,from September 2007 to October 2008. MATERIALS:Mouse anti-nestin polyclonal antibo...     

人胚神经干细胞移植治疗大鼠脑缺血的实验研究

目的　研究人胚神经干细胞(hNSCs)移植治疗脑缺血大鼠的效果及其在缺血大鼠脑内的状况。方法　从自然流产的孕10~13周的人胚脑组织中分离、培养神经干细胞。采用线栓法制作大鼠脑缺血模型,1d后经尾静脉移植未分化的hNSCs入脑缺血大鼠体内,对移植后大鼠进行神经损害严重程度评分(NSS),用免疫组化方法观察移植后hNSCs的存活、迁徙、分化状况。结果　从人胎脑中成功培养出hNSCs,培养条件下呈悬浮状态生长,形成神经球,绝大多数的细胞表达神经干细胞的标记物神经巢蛋白(nestin)。hNSCs移植组大鼠自移植后3周末起其NSS显著低于对照组(P<0 .05);移植后2、3、4、5周脑组织切片中均可见5 溴脱氧嘧啶尿苷(Brdu)染色阳性细胞,缺血侧明显多于对侧(P<0 .05),移植后3、4、5周末明显多于移植后2周(均P<0 .05);移植组各时间点脑组织切片中均可见nestin染色阳性细胞;在Brdu阳性细胞群中, 73 8%为胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色阳性的星形胶质细胞, 16 7%为2, 3 环核苷酸磷酸二脂酶(CNPase)染色阳性的少突胶质细胞, 9 5%为神经元特异性烯醇化酶(NSE)染色阳性的神经元。结论　经静脉移植hNSCs能有效改善脑梗死动物的神经功能,hNSCs体内体外均具有多向分化潜能,受缺血部位微环境信号的影响分化成3种主要类型的神经细胞。     

嗅鞘细胞诱导神经干细胞分化后神经元电生理特性的研究

目的探索大鼠嗅鞘细胞对神经干细胞(NSC)分化的影响,以及分化后神经元电生理特性。方法取新生鼠大脑皮质,原代培养大鼠NSC。NSC分为实验组和对照组,实验组将无血清培养的NSC中加入嗅鞘细胞条件培养液,对照组单纯无血清培养NSC。光镜下观察细胞分化情况,免疫组化法分别检测巢蛋白(nestin)、神经生长因子受体(NGFRp75)、神经丝蛋白(NF200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,膜片钳检测神经元电生理特性。结果实验组嗅鞘细胞主要诱导NSC分化为神经元,少量分化为胶质细胞。对照组NSC逐渐萎缩,最终死亡。分化后的神经元记录到快速激活、快速失活能被河豚毒素特异阻断的钠电流,以及慢激活、慢失活能被四乙铵特异阻断的延迟整流性钾电流。结论嗅鞘细胞能诱导NSC分化成神经元,分化后的神经元具有活跃的电生理特性。     

Stem cell transplantation for treatment of cerebral ischemia in rats Effects of human umbilical cord blood stem cells and human neural stem cells

BACKGROUND:Exogenous neural stem cell transplantation promotes neural regeneration. However, various types of stem cells transplantation outcomes remain controversial. OBJECTIVE:To explore distribution, proliferation and differentiation of human neural stem cells (hNSCs) and human umbilical cord blood stem cells (hUCBSCs) following transplantation in ischemic brain tissue of rats, and to compare therapeutic outcomes between hNSCs and hUCBSCs. DESIGN, TIME AND SETTING:Randomized controlled animal studies were performed at the Experimental Animal Center of Nanjing Medical University and Central Laboratory of Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University of China from September 2008 to April 2009. MATERIALS:hNSCs were harvested from brain tissue of 10-13 week old fetuses following spontaneous abortion, and hUCBSCs were collected from umbilical cord blood of full-term newborns at the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University of China. hNSCs and hUCBSCs were labeled by 5-bromodeoxyuridine (BrdU) prior to transplantation. METHODS:Rat models of cerebral ischemia were established by the suture method. A total of 60 healthy male Sprague Dawley rats aged 7-9 weeks were randomly assigned to hNSC transplantation, hUCBSC transplantation and control groups. The rat models in the hNSC transplantation, hUCBSC transplantation and control groups were infused with hNSC suspension, hUCBSC suspension and saline via the caudal vein, respectively. MAIN OUTCOME MEASURES:The distribution, proliferation and differentiation of hNSCs and hUCBSCs in ischemic brain tissue were observed using immunohistochemical methods. Neurological function in rats was assessed using the neurological severity score. RESULTS:The number of BrdU-positive cells was significantly greater in the hNSC transplantation group compared with hUCBSC transplantation group at 14 days following transplantation (P < 0.05). The number of BrdU-positive cells reached a peak at 28 days following transplantation. Nestin-positive, glial fibrillary acidic protein-positive, cyclic nucleotide 3' phosphohydrolase-positive and neuron specific enolase-positive cells were visible following transplantation. No significant difference was determined in the constituent ratio of various cells between hNSC and hUCBSC transplantation groups (P > 0.05). The neurological severity score was significantly decreased in rats at 21 days following transplantation (P < 0.05). No significant difference was detected in neurological severity score between hNSC and hUCBSC transplantation groups at various time points (P > 0.05). CONCLUSION:The transplanted hNSCs and hUCBSCs can migrate into ischemic brain tissue, proliferate and differentiate into neuron-like, astrocyte-like and oligodendrocyte-like cells, and improve neurological function in rats with cerebral ischemia.     

NSCs在OECs诱导下定向分化及神经元电生理特性研究

目的探索大鼠嗅鞘细胞（OECs）对神经干细胞（NSCs）分化的影响,并记录分化后神经元电生理特性。方法在无血清改良Eagle培养基（DMEM／F12）培养的NSCs中,加入OECs条件培养基,观察分化情况,巢蛋白（nestin）鉴定NSCs、神经丝蛋白200（NF200）鉴定神经元、膜片钳检测神经元电生理特性。结果OECs能促进NSCs分化为神经元,分化后的神经元记录到快速激活快速失活、能被河豚毒素（TTX）特异阻断的钠电流及慢激活慢失活、能被四乙基氯化铵（TEA）特异阻断的延迟整流性钾电流。结论OECs能诱导NSCs分化,分化后的神经元具有活跃的电生理特性,具有替代凋亡、坏死神经元的潜能。     

嗅鞘细胞与神经干细胞共培养后增殖及向神经元的分化

背景：影响神经干细胞增殖分化的外在因素包括细胞因子和微环境,嗅鞘细胞能分泌多种细胞因子,与神经干细胞共培养时改变其微环境。 目的：观察不同浓度嗅鞘细胞对神经干细胞增殖及分化的影响。 方法：体外分别培养Wistar大鼠神经干细胞和嗅鞘细胞,5×107 L-1神经干细胞分别和1×107 L-1,1×109 L-1,1×1011 L-1嗅鞘细胞共培养,同时设立正常对照组,不加嗅鞘细胞。倒置荧光显微镜下观察神经干细胞增殖情况,诱导7 d后行NSE免疫细胞化学染色,计算阳性细胞/细胞总数得出阳性细胞百分比。 结果与结论：①3种浓度嗅鞘细胞与神经干细胞共培养3 d后,均促进了神经干细胞增殖,以1×109 L-1嗅鞘细胞共培养组作用最显著,明显优于1×107 L-1嗅鞘细胞组、1×1011 L-1嗅鞘细胞组。②神经干细胞与1×109 L-1嗅鞘细胞共培养7 d后,神经干细胞分化为神经元样细胞的百分比最高,与正常对照组相比差异有显著性意义(P < 0.01)。     

嗅鞘细胞对神经干细胞增殖与分化的影响

BACKGROUND： Olfactory ensheathing cells can promote oriented differentiation and proliferation of neural stem cells by cell-secreted neural factors. OBJECTIVE： To observe the effect of olfactory ensheathing cells on the differentiation and proliferation of neural stem cells. DESIGN, TIME AND SETTING： Cytology was performed at the Department of Neurology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, China, from September 2007 to October 2008. MATERIALS： Mouse anti-nestin polyclonal antibody （Chemicon, USA）, mouse anti-glial fibrillary acidic protein （GFAP） IgG1, mouse anti-2＇, 3＇-cyclic nucleotide 3＇-phosphodiesterase （CNPase） IgG1, mouse anti-Tubulin Class-Ill IgG1 （Neo Markers, USA）, Avidin-labeled Cy3 （KPL, USA）, and goat anti-mouse IgGl： fluorescein isothiocyanate （FITC） （Serotec, UK） were used in this study. METHODS：Tissues were isolated from the embryonic olfactory bulb and subependymal region of Wistar rats. Serum-free DMEM/F12 culture media was used for co-culture experiments. Neural stem cells were incubated in serum-free or 5% fetal bovine serum-containing DMEM/F12 as controls. MAIN OUTCOME MEASURES： After 7 days of co-culture, neural stem cells and olfactory ensheathing cells underwent immunofluorescent staining for nestin, tubulin, glial fibrillary acidic protein, and CNPase. RESULTS： Olfactory ensheathing cells promoted proliferation and differentiation of neural stem cells into neuron-like cells, astrocytes and oligodendrocytes. The proportion of neuron-like cells was 78.2%, but the proportion of neurons in 5% fetal bovine serum DMEM/F12 was 48.3%. In the serum-free DMEM/F12, neural stem cells contracted, unevenly adhered to the glassware wall, or underwent apoptosis at 7 days. CONCLUSION： Olfactory ensheathing cells promote differentiation of neural stem cells mainly into neuron-like cells, and accelerate proliferation of neural stem cells. The outcome is better compared with serum-free medium or medium containing 5% fetal bovine serum.     

嗅鞘细胞及其表达的NGF和BDNF对神经干细胞增殖的影响

目的 研究嗅鞘细胞及其表达的神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)对神经干细胞增殖的影响.方法 采用共培养液培养以及NGF或BDNF抗体封闭的方法,观察嗅鞘细胞对神经干细胞增殖的影响.免疫组化和RT.PCR半定量分析嗅鞘细胞表达的细胞因子及其受体的情况.结果 共培养液培养4d后,神经干细胞数量明显增多(P<0.05).免疫组化和RT-PCR半定量分析结果显示,嗅鞘细胞表达多种细胞因子及受体,共培养液培养2d后嗅鞘细胞表达NGF和BDNF mRNA的相对值明显高于对照组(P<0.05).抗体封闭培养液中的NGF或BDNF后,没有影响神经干细胞的增殖.结论 嗅鞘细胞表达大量细胞因子作用于神经干细胞,促进其增殖.在本研究条件下,神经干细胞的增殖可能与嗅鞘细胞表达的碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)有关,而与NGF和BDNF无关.