兔正常膀胱移行上皮细胞的体外培养和鉴定

目的：摸索膀胱移行上皮细胞的合适培养条件，为建立满足组织工程需要的尿路上皮细胞体培养体系提供实验基础。方法：采用无血清培养系统，以组织块法原代培养兔正常膀胱移行上皮细胞并传代。动态观察细胞形态变化和生长增殖状况，进行免疫细胞化学染色鉴定细胞来源。结果：原代第4开始有上皮样细胞自组织块边缘长出，第10-14天汇合，呈典型铺路石样外观。2代超细胞生长4-7d后汇合，未发现成纤维样细胞混杂生长。细胞可传至6代以上。细胞角蛋白AE1/AE3单抗染色各代细胞均呈阳性反应。结论：分离培养的是单一的膀胱移行上皮细胞，细胞具有一定的增殖传代能力。     

牛眼视网膜和虹膜色素上皮细胞体外培养的生物学特性比较

目的分离、培养和纯化牛原代视网膜色素上皮细胞(RPE)和虹膜色素上皮细胞(IPE),比较体外培养的RPE与IPE的生物学特性。方法采用酶辅助显微分离牛眼RPE和IPE,进行体外培养,密度梯度离心法纯化并采用免疫组化法进行鉴定。透射电镜观察体外培养RPE、IPE的超微结构,比较两种细胞体外培养下的生长状况。结果纯化后体外培养牛RPE和IPE的角蛋白表达强阳性,细胞阳性率分别达到94%和88.7%。原代培养的牛RPE和IPE外形类似,为多角形,具有相似的生长曲线。电镜显示两种细胞都具有细胞极性,顶端有大量微绒毛,原代细胞内含有大量色素颗粒和内质网,RPE含有较多与其吞噬功能相适应的溶酶体。结论通过酶辅助显微分离色素上皮细胞,结合密度梯度离心的方法可以获得较纯的牛RPE和IPE,该方法同样适用于周切虹膜材料。两种色素上皮细胞具有相似的形态和生物学性状,但仍然存在与功能相适应的超微结构差异。     

牛眼视网膜和虹膜色素上皮细胞体外培养的生物学特性比较

目的 分离、培养和纯化牛原代视网膜色素上皮细胞(RPE)和虹膜色素上皮细胞(IPE),比较体外培养的RPE与IPE的生物学特性.方法 采用酶辅助显微分离牛眼RPE和IPE,进行体外培养,密度梯度离心法纯化并采用免疫组化法进行鉴定.透射电镜观察体外培养RPE、IPE的超微结构,比较两种细胞体外培养下的生长状况.结果 纯化后体外培养牛RPE和IPE的角蛋白表达强阳性,细胞阳性率分别达到94%和88.7%.原代培养的牛RPE和IPE外形类似,为多角形,具有相似的生长曲线.电镜显示两种细胞都具有细胞极性,顶端有大量微绒毛,原代细胞内含有大量色素颗粒和内质网,RPE含有较多与其吞噬功能相适应的溶酶体.结论 通过酶辅助显微分离色素上皮细胞,结合密度梯度离心的方法可以获得较纯的牛RPE和IPE,该方法同样适用于周切虹膜材料.两种色素上皮细胞具有相似的形态和生物学性状,但仍然存在与功能相适应的超微结构差异.     

不同理化因素条件下体外培养晶体上皮细胞的生物学特性

不同理化因素条件下体外培养晶体上皮细胞的生物学特性李朝辉综述何守志审校关键词晶体；细胞培养；体外；生物学；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ７７６自从１９６９年Ｍａｙｅｒ首次报道晶体上皮细胞体外培养技术以来，牛、鼠、兔、鸡以及人的晶体上皮细胞体外培养相继...     

人肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定

目的 :建立人肾小管上皮细胞原代培养、传代、冻存及鉴定方法。方法 :采用肾小管节段贴块培养法 (A法 )与消化培养法 (B法 )对比原代培养 ,并以 0 .2 5 %胰蛋白酶消化、传代 ,以免疫细胞化学方法鉴定细胞种类 ,常规冻存和复苏。结果 :A法成功培养、传代、冻存、复苏并鉴定了人肾小管上皮细胞 ,B法失败。结论 :肾小管节段贴块培养法用于人肾小管上皮细胞原代培养是可行的     

人视网膜色素上皮细胞原代培养及HGF/c-Met的表达

目的：探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)及其受体c-Met在原代培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞中的表达情况。方法：体外培养人RPE细胞，3—5代细胞用于实验；采用免疫细胞化学和RT-PCR方法检测细胞内HGF及其受体c-Met的表达。结果：人RPE细胞HGF及其受体c-Met免疫细胞化学染色的阳性信号分别位于细胞浆内和细胞膜上；RT-PCR方法可检测到HGF及其受体c-Met mRNA的表达。结论：人RPE细胞自身产生HGF并表达其受体c-Met，提示HGF可能通过自分泌和(或)旁分泌途径作用于RPE细胞，涉及眼内多种疾病过程。     

视网膜色素上皮细胞培养及移植进展

视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞的代谢障碍与许多眼底疾病的发病有着密切的关系。将体外分离、培养的视网膜色素上皮细胞移植入患眼治疗眼底疾病是当今眼科研究的热点之一。现将目前有关于RPE细胞体外分离、培养及移植的研究进展进行综述。     

正常人结膜上皮细胞的体外培养及扫描电镜观察

人结膜上皮细胞不仅在体内具有较高的再生能力，而且在体外培养同样表现出较高的繁殖活性。细胞接种后４￣５ｄ即长成单层，紧密连接，细胞形态多为多边形，部分细胞显示类啤酒株外观。细胞表面超微结构可见丰富的微绒毛，显示出旺盛的代谢及分泌功能，为体外药物毒理及药物筛选提供了一个良好模型的组织结构基础。     

兔晶体上皮细胞培养技术的改进

研究兔晶体上皮细胞的培养并对组织块培养法作了改良。在原代培养中，用吸管转移晶体囊膜较为简便易行。可为各种实验提供原代或传代的兔晶体上皮细胞。     

改良的兔晶体上皮细胞体外培养

目的:建立一种改良的兔晶状体上皮细胞体外培养的方法,提高晶体上皮细胞原代培养的成功率。方法:利用改良消化法对兔晶体上皮细胞进原代培养,对培养的细胞进行形态学观察。结果:接种48小时~72小时后即可见上皮细胞贴壁生长,具备上皮细胞的形态特点;约7天后融合。传至5代后,细胞明显成纤维细胞化。结论:此种方法经济简便,可为各种实验提供兔晶体上皮细胞。     

人甲状腺细胞体外培养的研究进展

甲状腺细胞原代培养是一种较新的实验手段,在甲状腺功能和甲状腺疾病的研究工作中具有重要意义。从原代取材到单细胞悬液制备的过程是甲状腺上皮细胞体外培养成功的第一步;采用不同培养介质可以使甲状腺细胞的生存时间延长、生理功能更强;甲状腺细胞的成功冷冻保存和复苏对体外研究甲状腺生理功能和病理变化也是有重要意义的。本文对国内外甲状腺上皮细胞的体外培养予以综述。     

人近端肾小管上皮细胞的原代培养

目的应用组织块培养法建立人近端肾小管上皮细胞的原代培养方法。方法取肾皮质组织块,应用无血清培养液进行原代培养,融合后用胰蛋白酶-EDTA消化传代。取第三代细胞检测细胞角蛋白、波形蛋白、碱性磷酸酶、结蛋白、Ⅷ因子、α-肌动蛋白的表达,应用扫描电镜和透射电镜观察细胞的超微结构。结果融合的上皮单层细胞呈铺路石样表现,伴圆顶(dome)形成。细胞角蛋白、波形蛋白和碱性磷酸酶染色阳性,α-肌动蛋白、Ⅷ因子相关抗原、纤维连接蛋白和结蛋白染色阴性。细胞存在极性,细胞尖端存在短的微绒毛,细胞之间连接紧密。结论应用组织块培养法结合无血清培养液可以成功建立原代人近端肾小管上皮细胞系。     

简易犬皮肤表皮细胞的体外培养

目的　探索犬皮肤表皮细胞简易培养方法 ,以此了解复合组织经体外保存后组织细胞的存活状况。方法　组织块培养法。结果　培养至第 5 d,倒置相差显微镜下可见表皮细胞从组织块周围长出 ,并向四周扩展。第 7d,组织块间长出的表皮细胞已相互汇合 ,交为一体 ,形成单层表皮细胞片。至第 1 1 d,扩增的表皮细胞片直径达 1 mm以上 ,在组织块周边可见乳白色、半透明的表皮细胞生长物。结论　犬表皮细胞在 RPMI1 64 0培养基中生长良好 ,增殖旺盛。组织块培养法简便、易行 ,适合犬表皮细胞培养。     

关于统计学符号的书写方法

为探讨输卵管上皮细胞对小鼠雌雄原核受精卵（2PN受精卵）体外发育的影响,首选建立了羊输卵管上皮细胞共培养体制,再将小鼠2PN受精卵分别放在M16培养液（对照组）中和羊输卵管上皮细胞＋M16培养液（实验组）中培养,结果表明：在对照组中,只有50％的2－细胞胚胎能克服体外发育的阻断而达到4－细胞阶段,发育到囊胚遥比率仅为28．2％。实验组中,有86．75％的2－细胞胚胎可以克服体外发育的阻断而达到4－细胞阶段,发育到囊胚期的比率为45．7％。对照组与实验组相比,统计学上有显著差异（P＜0．01）。这提示：输卵管上皮细胞有助于小鼠胚胎克服体外发育阻断,并增加发育囊胚期的胚胎数。     

兔角膜缘干细胞的体外原代培养和生物学鉴定

目的 建立兔角膜缘干细胞体外培养方法,观察其生物学特性。方法 用含20％胎牛血清1640培养液对兔角膜缘干细胞进行体外培养,倒置显微镜观察培养细胞体外生长的形态,电镜观察培养细胞的超微结构并进行免疫细胞化学和间接免疫荧光鉴定。结果 植块48～72h细胞开始贴壁生长,7～10d形成良好的单层,细胞呈圆形、卵圆形或多边形,类似角膜上皮细胞;电镜下,可见细胞表面有许多微绒毛,细胞间有桥粒连接,胞质丰富,胞质细胞器较多,含有线粒体等结构;免疫细胞化学和间接免疫荧光染色显示,培养第8天少量细胞角蛋白K3(AE5)免疫反应呈阳性,细胞质被染色,培养第14天和第21天,较多细胞．AE5免疫反应阳性。结论 含20％胎牛血清1640培养液能作为角膜缘干细胞培养的基础液。应用组织培养方法获得的原代培养细胞具有与正常角膜缘干细胞相一致的生物学特性。     

蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细胞毒性的实验研究

目的研究不同蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细袍的毒性及其影响细胞增殖的因素。方法采用组织块培养法体外原代培养鼠胚表皮细胞，用直接接触法和浸提液法体外培养鼠胚表皮细胞，MTT比色法检测其在不同蚕丝蛋白材料上的增殖活力和细胞相对增殖率，进行毒性分析；并用活细胞计数法观察不同蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细胞生长的影响。结果鼠胚表皮细胞在1、2、4、5、7、8、10号各型蚕丝蛋白材料上生长，其增殖活力与细胞对照组相当（P〉0.05）；在3、6、9号化学交联或HY-823交联型蚕丝蛋白材料上生长，其增殖活力均低于细胞对照组（P〈0．05）；而在11号蚕丝蛋白材料其增殖活力显著低于细胞对照组（P〈0．01）。1、7号丝胶材料细胞毒性分级为0级（无毒），2、3、4、5、6、8、9、10号各型蚕丝蛋白材料细胞毒性分级为1级（轻微毒），而11号蚕丝蛋白材料细胞毒性分级为2级（中度毒）。活细胞计数结果与MTT检测结果基本相一致。结论除11号蚕丝蛋白材料外，1～10号各型蚕丝蛋白材料无明显细胞毒性，能支持鼠胚表皮细胞正常生长，具有良好的细胞相容性。     

应用Percoll非连续密度梯度离心法富集人前列腺上皮细胞

【目的】探讨应用Pereoll非连续密度梯度离心法从人前列腺增生组织中纯化上皮细胞的可行性。【方法】无菌条件下用胶原酶消化前列腺增生组织碎块，获得细胞悬液经两种不同质量密度溶液（ρA=1．070g／mL Pereoll和ρS=1．035g／mL Pereoll）的梯度柱离心后，以注射器于两种Pereoll溶液界面之间抽出前列腺上皮细胞，以HBSS液洗涤细胞后置于37℃、体积分数5％CO2孵箱中连续培养。观察细胞形态及生长，台盼蓝染色计算活细胞率，细胞角质蛋白免疫组织化学染色鉴定上皮细胞。【结果】经Pereoll非连续比重梯度离心法，能将上皮细胞与成纤维细胞和其他基质细胞分离，纯度达95％以上。台盼蓝染色计算活细胞率达95％。纯化得到的细胞呈上皮细胞特有的铺路石样外观，可连续传3—5代。细胞角质蛋白CK7／8染色阳性证实细胞为上皮源性。【结论】Pereoll非连续密度梯度离心法简便可行，能获得纯度较高、活力良好的前列腺上皮细胞。     

应用Percoll非连续密度梯度离心法富集人前列腺上皮细胞

 【目的】探讨应用Pereoll非连续密度梯度离心法从人前列腺增生组织中纯化上皮细胞的可行性。【方法】无菌条件下用胶原酶消化前列腺增生组织碎块，获得细胞悬液经两种不同质量密度溶液（ρA=1．070g／mL Pereoll和ρS=1．035g／mL Pereoll）的梯度柱离心后，以注射器于两种Pereoll溶液界面之间抽出前列腺上皮细胞，以HBSS液洗涤细胞后置于37℃、体积分数5％CO2孵箱中连续培养。观察细胞形态及生长，台盼蓝染色计算活细胞率，细胞角质蛋白免疫组织化学染色鉴定上皮细胞。【结果】经Pereoll非连续比重梯度离心法，能将上皮细胞与成纤维细胞和其他基质细胞分离，纯度达95％以上。台盼蓝染色计算活细胞率达95％。纯化得到的细胞呈上皮细胞特有的铺路石样外观，可连续传3—5代。细胞角质蛋白CK7／8染色阳性证实细胞为上皮源性。【结论】Pereoll非连续密度梯度离心法简便可行，能获得纯度较高、活力良好的前列腺上皮细胞。