多房棘球蚴原头节的体外培养:吡喹酮和阿苯达唑亚砜的抗原节作用

作者等观察了吡喹酮和阿苯达唑亚砜对体外培养的多房棘球蚴原头节的作用。用无菌法自感染的棉鼠采集原头节,经无菌生理盐水洗涤和尽可能除去     

吡喹酮体外抗细粒棘球蚴原头节的作用

观察了吡喹酮在体外抗细粒棘球蚴原头节的阼用。细粒棘球蚴原头节用无菌法采自羊的包虫囊。用Hanks’盐平衡溶液(HBSS)洗涤4次,每批原头节平均存活率达80％。原头节培养在30ml无菌的组织培养瓶中,内装有CMRL 1066培养液10ml,在37℃中培养。吡喹酮溶解在HBSS中。每组培养     

达克罗宁对细粒棘球蚴原头节体外作用及其ROS水平的影响

目的初步探究达克罗宁对细粒棘球蚴原头节体外生长的影响以及原头节内ROS的表达情况。方法用达克罗宁与细粒棘球蚴原头节体外共培养,采用0.1%曙红排斥试验观察原头节的形态,统计存活率并绘制原头节的生存曲线;将DCFH-DA探针加入孵育原头节的培养基以检测其ROS活性;用SOD和Caspase-3试剂盒测定SOD和Caspase-3的活性。结果 40μg/ml达克罗宁可使体外培养的原头节在第4d全部死亡;达克罗宁以剂量依赖的方式使原头节的ROS和Caspase-3表达量增加,同时降低SOD的活性。结论达克罗宁具有体外抗细粒棘球蚴原头节作用,通过激活ROS诱导氧化应激导致Caspase-3被激活从而引起细粒棘球蚴原头节的凋亡。     

抗包虫药物的实验研究——Ⅰ.吡喹酮体外抗细粒棘球蚴原头节的作用

在20％小牛血清-RPMI1640中,吡喹酮对体外培养的细粒棘球蚴原头节有较强的杀灭作用,主要表现为外翻、皮层肿胀、泡状物形成、破裂,以及头钩排列紊乱和脱落等,24h后即出现死亡,3天内的死亡率达90％以上。吡喹酮对培养在囊液中的原头节亦有杀灭作用,但对培养在RPMI1640和HBSS中的则无。进一步观察的结果表明,吡喹酮在体外抗原头节的作用需赖于有蛋白质的存在。此外,小鼠口服吡喹酮后,其血清有抗原头节作用,主要成份为吡喹酮原药。     

伽马射线体外照射对细粒棘球蚴原头节的杀灭作用

目的 探讨细粒棘球蚴原头节体外照射γ-射线后导致的死亡、细胞内caspase-3的表达和显微结构的变化。方法 在体外培养的基础上,用不同剂量的γ-射线对细粒棘球蚴原头节进行照射。对照射后各组原头节细胞内的caspase-3蛋白酶活性进行测定,观察期原头节死亡率,并在倒置显微镜下动态观察原头节形态结构的变化。结果 原头节经过γ-射线体外照射后会出现死亡率升高,caspase-3表达增强现象,同时原头节形态结构出现肿胀、塌陷、碎裂的阶段性变化。结论 γ-射线体外照射可以直接杀灭原头节,且诱导原头节细胞发生凋亡。     

化学剂与药物抗细粒棘球绦虫原头节的作用

本文报告3种化学剂与2种药物在体内与体外杀灭原头节的效果。终浓度为0.3％的北美黄连碱与原头节作用15min后,头节死亡率分别为68.9％和70.2％;终浓度为10％的乙醚-醋酸-乙醇混合液(乙醚:醋酸:乙醇为5:3:2)分别为56.2％和56.8％,较终浓度为0.3％的H_2O_2的杀头节效果(6.0％)为佳,0.004％吡喹酮与0.004％阿苯达唑在体外试验中与原头节作用15min未见有杀灭原头节效果。初步结果表明北美黄连碱和乙醚-醋酸-乙醇混合液具有较迅速和较强杀原头节作用。扫描电镜观察结果,经北美黄连碱作用后,原头节顶突质膜皱襞断裂,头钩排列紊乱、脱落,吸盘变形,头钩与吸盘表面膜内颗粒减少。     

吡喹酮对体外细粒棘球绦虫原头节作用机理的初步探讨

细粒棘球绦虫原虫节受浓度为0.05～1μg/ml的吡喹酮作用后,其皮层即出现肿胀、空泡,严重者还发生破裂,脱落并暴露肌层或实质组织;部分细胞显示核浓缩,溶解及崩裂。该药还能迅速引起原头节体内糖原含量的减少以及AKP和ATP酶活力的减弱,但对虫体核酸及蛋白质的作用则发生较慢或影响较小。初步认为吡喹酮的体外杀虫作用主要是通过药物破坏原头节的皮层并抑制虫体的糖代谢而实现的。     

抗包虫药物的实验研究——Ⅲ.甲苯达唑和阿苯达唑体外抗细粒棘球蚴原头节的作用

在20％小牛血清-RPMI 1640中培养的细粒棘球蚴原头节经甲苯达唑或阿苯达唑20μg/ml作用3～5d后,其死亡率分别为42.4～64.2％和40.6％。用囊液培养原头节时,两种药物的效果更差。甲苯达唑或阿苯达唑与低浓度的吡喹酮合并应用时,原头节的死亡率较两药单用的明显增加。小鼠1次口服甲苯达唑或阿苯达唑1g/Kg后4h,其血清具有较强的抗原头节作用。     

雄黄对细粒棘球蚴原头节体外生长及抗氧化酶活性的影响

目的初步探讨雄黄对体外细粒棘球蚴原头节生长及抗氧化酶的影响。方法在体外培养的基础上,将不同浓度雄黄分别作用细粒棘球蚴原头节2 d,光镜下观察原头节活力及形态变化;扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察原头节表面及内部超微结构改变;采用ELISA法测定SOD、ROS、HO-1和NQO-1表达情况;采用Caspase-3试剂盒检测原头节Caspase-3酶活性。结果250、500、1000、2000μmol/L雄黄体外作用于细粒棘球蚴原头节均能抑制其生长,雄黄作用2 d后光镜下观察原头节形态结构均发生改变,虫体萎缩,伊红染色呈红色(正常虫体为透明无色);SEM下观察原头节虫体皱缩,原头节正常形态被破坏;TEM下观察原头节内部微绒毛减少,合胞体带变薄、结构松散并有少量脂滴。EUSA检测SOD、HO-1和NQO-1活性均呈下降趋势,ROS和caspase-3酶活性均呈升高趋势(均P<0.05)。结论雄黄体外可抑制细粒棘球蚴原头节生长,破坏原头节形态结构,降低抗氧化酶活性,该抑制作用与机体抗氧化防御系统平衡失调有关。     

体外阿苯达唑和阿苯达唑合并亚砜对细粒棘球绦虫的作用

本文报告单用阿苯达唑(ABZ)和阿苯达唑合并亚砜(ABZ·SO)对体外培养的细粒棘球绦虫原头节的杀灭作用。用美蓝排斥试验和感染小鼠的方法评定原头节的存活力,用透射电镜和扫描电镜观察药物对原头节超微结构的影响。 细粒棘球蚴原头节系无菌取自屠宰绵羊的肝包囊,试验前用美蓝排斥试验测定其活力,并将原头节在37℃下含青霉素和链霉素的199培养液内培养。单用ABZ或ABZ·SO和二者按1:1混合溶于1:100O二甲亚砜(DMSO)内,加培养液使终浓度为     

甘氨鹅脱氧胆酸对体外细粒棘球蚴原头节活力及ROS影响

目的 研究甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid, GCDCA)对体外细粒棘球蚴原头节活力及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法 将细粒棘球蚴原头节分为对照组及GCDCA处理组(500、1 500、2 500 μ mol/ L),应用体外培养技术,通过伊红染色法每天定时在光学显微镜下观察原头节的活力并记录存活和死亡数目。使用试剂盒检测不同浓度GCDCA处理 24 h后各组原头节体内caspase-3酶活性变化;DCFH- DA染色法荧光显微镜观察 GCDCA作用24 h后原头节内 ROS水平变化。结果 500、1 500、2 500 μ mol/ L GCDCA处理后均可导致原头节活力减弱,且最高浓度组在第7 d时原头节全部死亡。500、1 500、2 500 μ mol/ L GCDCA组作用原头节24 h后 caspase-3酶活性与对照组相比明显升高(F=555.162, P<0.05)。500、1 500、2 500 μ mol/ L GCDCA作用原头节24 h后原头节内 ROS水平与对照组相比明显升高(F=216.901, P<0.05)。结论 GCDCA 能抑制体外原头节生长,促使原头节死亡,可能与活化caspase-3及提高原头节内ROS 水平相关,具体机制有待进一步研究。     

过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞Caspase-3表达及超微结构改变的影响

目的探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡、Caspase-3表达和细胞超微结构的影响。方法RPMI1640添加谷氨酰胺组即体外培养细粒棘球蚴原头节,用5mmol/L H2O2诱导8h,使其发生细胞凋亡。用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL法)检测原头节细胞凋亡情况,用过氧化物酶标记链霉卵白素(SP)染色半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)。在透射电镜下观察原头节细胞超微结构的变化。结果过氧化氢诱导原头节细胞凋亡细胞增加,caspase-3表达增加,电镜观察原头节细胞异染色质增加,部分细胞染色质异常浓缩呈现凋亡细胞征象。结论H2O2可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡,且caspase-3参与原头节细胞的凋亡。     

高强度聚焦超声波对细粒棘球绦虫原头节酶活性的影响

目的探索高强度聚焦超声波(HIFU)对体外分离的细粒棘球绦虫原头节的酶活性的影响作用。方法用不致原头节即刻杀伤的高强度聚焦超声剂量照射原头节,行酶组织化学染色观察酸性磷酸酶(ACP)、葡萄糖6-磷酸酶(G-6-P)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性,了解高强度聚焦超声对体外培养的原头节3种代谢酶活性的影响作用。结果细粒棘球绦虫原头节具有酸性磷酸酶、葡萄糖6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶活性。不致原头节即刻杀伤的高强度聚焦超声波作用后,辐照组原头节葡萄糖6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶活性较对照组明显减弱,而酸性磷酸酶反应产物与对照组相比无明显变化。阴性对照组无酶反应产物产生。结论高强度聚焦超声波辐照对原头节酸性磷酸酶活性无影响,而对葡萄糖6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性有明显的抑制,这可能是影响原头节的代谢功能,最终抑制其增殖的原因之一。     

高强度聚焦超声波对细粒棘球绦虫原头节的杀伤效应

目的 探索高强度聚焦超声波(HIFU)对体外分离的细粒棘球绦虫原头节的急、慢性杀灭作用.方法 实验对象为感染细粒棘球蚴病的羊肝原头节.选择声功率为0(对照组)、25、50、100、200、250 W的超声波辐照离体原头节,每种功率辐照时间分别为5、10、20、30、40、50、60 s,观察HIFU对离体原头节的即刻杀灭作用.以不致即刻杀伤的超声剂量作用原头节后,观察HIFU对原头节的迟发性生长抑制作用.光镜下,根据台盼蓝排斥法染色结果及观察原头节形态变化计算原头节死亡率.结果 HIFU对原头节有明显的急性杀伤作用,在一定的功率和时间范围内有剂量-效应关系,不同功率和辐照时间对原头节死亡率的影响,组间比较差异均有统计学意义(F值分别为5201.59、1865.65,P＜0.05),且功率与辐照时间之间存在交互效应(F=214.50,P＜0.05).随着超声照射剂量增大,其生物学效应越明显,声功率≥200 W的短时照射即可致原头节全部即刻死亡,部分原头节被打碎.以不致原头节即刻杀伤的超声照射后,体外培养2～7 d的原头节死亡率均较对照组明显增高(P＜0.05),随超声剂量的增大抑制原头节生长作用增强,培养第2天开始,50 W×10 s组强于25 W×20 s组(P＜0.05).结论 HIFU能够即刻杀灭原头节并能抑制原头节在体外的生长.     

X线照射泡球蚴原头节的体外实验研究

目的探讨X线对体外培养的泡球蚴原头节的杀伤作用。方法无菌采集子午沙鼠体内的泡球蚴中含原头节的囊液,将其加入RPMI 1640培养液中培养。原头节体外培养3 d后分装至培养瓶中,每组10瓶,每瓶约含10 000个原头节,设空白对照组、低剂量组(15 Gy和30 Gy)、中剂量组(45 Gy和60 Gy)、高剂量组(75 Gy和90 Gy)、阿苯达唑组(2 500 ng/ml)、45 Gy X线+2 500 ng/ml阿苯达唑组和75 Gy X线+2 500 ng/ml阿苯达唑组。X线照射剂量率为200 cGy/min,源皮距为100 cm。体外培养第4天开始照射,每组共照射3次,每次间隔1 d。首次照射后第1天开始每天取原头节培养液,0.1%伊红染色,光镜下计数每100个原头节中着色原头节数目,每组计算300个原头节的平均死亡率,直至实验组原头节全部死亡为止。同时光镜下观察经X线照射后原头节的变化。结果不同放射剂量组的原头节死亡率与空白对照组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。阿苯达唑组原头节死亡率与放射线联合阿苯达唑组间的差异均有统计学意义(P<0.05),且显著高于空白对照组(P<0.05)。其中,X线...     

左旋咪唑和伊维菌素体外抗细粒棘球蚴原头节的作用

作者等用体外培养方法观察了左旋咪唑和伊维菌素的抗细粒棘球蚴原头节的效果,并进一步用光学显微镜和电镜观察左旋咪唑和伊维菌素对原头节成活率和超微结构的影响。原头节系从自然感染的绵羊肝包囊中采集。培养液为199,含青霉素100IU/ml和链霉素100μg/ml。在盛有199培养液10ml的培养管中培养1500只原头节,培养温度为37℃。伊维菌素和左旋咪唑均用1％二甲亚     

阿苯达唑和吡喹酮伍用与阿苯达唑单用对腹腔内细粒棘球蚴病的术前治疗效果比较

外科手术可治疗细粒棘球蚴病,但在手术过程中包囊内活性原头节有扩散,可导致复发。使用一些用于术前治疗的药物如甲苯咪唑、阿苯达唑、吡喹酮等,发现它们灭活原头节的效果均不理想。本文作者就阿苯达唑和吡喹酮伍用与阿苯达唑单用对腹腔内细粒棘球蚴病的术前治疗效果进行了比较研究。 所有受试者均为该病患者且均至少有一个肝包囊,并排除了那些包囊内无原头节结构以及对药物不耐受的病人。按研究时间将受试者分为三组,第一组(1990年6月—     

TNF-α诱导骆驼源细粒棘球绦虫原头节凋亡的初步实验

目的 初步探讨TNF-α有无诱导包虫凋亡作用.方法 将 TNF-α加入无菌生理盐水中体外培养骆驼源细粒棘球绦虫原头节.用TUNEL染色、HE染色及电镜观察其有无诱导凋亡作用.结果 各用药组原头节TUNEL染色阳性率与对照组相比,差异有统计学意义(P＞0.05),且具有剂量和时间依赖性.电镜下观察到原头节内部有细胞凋亡现象.结论 初步观察到TNF-α在体外对骆驼源细粒棘球绦虫原头节有凋亡诱导作用,且存在剂量和时间依赖性.     

不同培养基及不同温度对体外培养泡球蚴原头节的影响

目的观察不同温度下不同培养基对体外培养泡球蚴原头节的影响,探讨泡球蚴原头节体外培养合适条件。方法按照培养基的不同,随机分为3组:Ⅰ组为含10%胎牛血清的RPMI-1640(4℃、25℃、37℃);Ⅱ组为含10%胎牛血清的D-MEM(4℃、25℃、37℃);Ⅲ组为含10%胎牛血清的M199(4℃、25℃、37℃)。观察各组泡球蚴原头节存活、生长情况,并记录原头节存活率及最长生存时间。结果 RPMI-1640培养基、D-MEM培养基与M199培养基中泡球蚴原头节的存活率有统计学差异(P0.05),RPMI-1640培养基与D-MEM培养基中泡球蚴原头节的存活率无统计学差异(P0.05);4℃、25℃与37℃泡球蚴原头节的存活率无统计学差异(P0.05),但RPMI-1640培养基在4℃及37℃,D-MEM培养基在25℃泡球蚴原头节存活率较高;各组在第3d和第9d泡球蚴原头节存活率有统计学差异(P0.05)。4℃各组原头节存活时间明显高于25℃组和37℃组。结论不同温度及不同培养基对体外培养泡球蚴原头节的存活的影响不同,RPMI-1640在4℃下培养,D-MEM在25℃培养,原头节成活率较高,存活时间较长,M199培养基不适合泡球蚴原头节的体外培养。     

胆汁对体外细粒棘球蚴原头节的作用观察

目的探讨不同浓度的胆汁对细粒棘球蚴原头节的生长作用及形态学影响。方法将体外培养的细粒棘球蚴原头节分别加入40％、60％、80％、100％的胆汁中体外孵育。0．1％伊红染色在倒置显微镜下检测原头节的活力及形态改变,实验重复三次;透射电子显微镜下（TEM）下观察胆汁作用后原头节表面超微结构改变。结果不同浓度的胆汁对原头节均有杀伤作用,其中浓度为100％和80％的胆汁对细粒棘球蚴原头节杀伤作用最明显。倒置显微镜下观察发现,不同浓度的胆汁作用细粒棘球蚴原头节后,原头节多呈外翻型,原头节顶突上的小钩排列紊乱,部分脱落,吸盘突起,变形,活动性减弱。随着浓度的增加,变化越明显。超微结构显示40％的胆汁作用3d后,原头节纤毛出现少量缺损,合胞体带排列较紊乱,合胞体带内出现散在少量的空泡和脂滴。60％胆汁作用3d后,合胞体带内微毛出现融合,腔内出现空泡和脂滴,数量多且大。结论胆汁作用后,可导致体外细粒棘球蚴原头节的形态发生不同程度的改变并有有抑制作用,然而关于胆汁在体内的疗效有待于进一步研究。