昆明山海棠碱诱导Jurkat淋巴瘤细胞核DNA链断裂和DNA片段化

目的 探讨昆明山海棠碱对淋巴瘤细胞核DNA的影响，以了解THH碱诱导细胞凋亡的机制。方法 THH碱诱导Jurkat细胞后，TUNEL荧光标记DNA链断裂，细胞DNA含量分析方法分析DNA片段化，均以流式细胞术检测。结果 THH碱能诱导Jurkat淋巴瘤细胞DNA链断裂，之后DNA发生片段化。结论 提示在THH碱诱导Jurkat凋亡过程中，核DNA发生重要变化。     

昆明山海棠碱通过Fas受体介导途径诱导Jurkat淋巴瘤细胞株凋亡

目的 探讨Fas、caspase-8在昆明山海棠碱(THH碱)对Jurkat淋巴瘤细胞的凋亡诱导中的变化，以进一步研究THH碱诱导凋亡的分子机制。方法 采用Annexin—Ⅴ标记和流式细胞术检测细胞的凋亡发生率，采用western blotting分析FasL、caspase-7、caspase-8、Bid等蛋白表达的变化。结果 THH碱能有效诱导Jurkat细胞凋亡；在其凋亡过程中，FasL逐渐表达增强、caspase-7、caspase-8、Bid剪切激活，并呈时间依赖性。结论 THH碱通过Fas受体—配体介导激活caspase-8，caspase-8再激活caspase-7和Bid等网络途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

昆明山海棠碱诱导白血病细胞株凋亡的分子机制

目前在世界范围内 ,新药的寻找已逐渐转向天然动植物 ,在这一过程中 ,我国传统的中医中药已越来越受到人们的青睐。昆明山海棠 [TripterygiumHypoglaucum (Levl)Hutch ,简称THH]是我国的传统中药 ,属卫矛科雷公藤属 ,但毒性远比雷公藤小。临床上主要用来治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮、肿瘤 ,并具有镇痛、抗炎、抗雄性生育和致突变作用[1 ] 。 1999年我室首次报道THH水提取液具有诱导肿瘤细胞凋亡的效应后[2 ] ,又分离了其主要活性成分———昆明山海棠生物碱 (THH碱 ) ,近期又对其诱导Jurkat淋巴瘤细胞株和HL 60急性骨髓白血病细胞…     

昆明山海棠碱通过线粒体途径诱导Jurkat淋巴瘤细胞株细胞凋亡

目的 研究昆明山海棠碱通过线粒体途径诱导细胞凋亡的作用。方法 THH碱多剂量多时间点诱导Jurkat细胞后，采用Western blotting检测细胞内Bcl-2表达的含量、采用JC—1原位染色方法、细胞免疫化学和流式细胞术等手段在单细胞水平分析细胞线粒体膜Apo2．7分子以及线粒体膜电位(△Ψm)的变化。结果 THH碱诱导后Bcl-2蛋白表达下调，线粒体膜电位明显下降，线粒体膜Apo2．7蛋白分子表达显著增加。结论 THH碱可通过线粒体途径诱导Jurkat T淋巴瘤细胞株发生凋亡，并且Bcl—2蛋白参与了线粒体凋亡功能的启动。     

昆明山海棠碱诱导Jurkat淋巴瘤细胞株的PARP酶剪切和caspase-3激活

目的　探讨昆明山海棠碱诱导淋巴瘤细胞凋亡过程中caspase 3和PARP酶的作用 ,以了解THH碱诱导细胞凋亡的机制。方法　THH碱诱导JurkatT淋巴瘤细胞后 ,FAM DEVD FMK荧光标记活化的caspase 3 ,免疫细胞化学方法荧光标记PARP酶剪切后的 89× 10 3片段 ,均以流式细胞术检测。结果　THH碱能有效诱导caspase 3激活和PARP酶剪切。结论　提示在THH碱能诱导JurkatT淋巴瘤细胞凋亡过程中caspase 3和PARP酶参与调控 ,它们可能抑制了受损伤DNA的修复 ,从而导致DNA片段化     

THH碱不通过钙离子信号通道诱导Jurkat淋巴瘤细胞株凋亡

目的 探讨昆明山海棠碱在凋亡中对细胞内游离钙离子浓度的影响。方法 THH碱诱导Jurkat细胞后，采用Indo-1 AM及PI进行细胞染色、流式细胞术等手段在单细胞水平上检测细胞内钙离子浓度的变化。结果 THH碱诱导后细胞内钙离子浓度未见明显变化。结论 THH碱不通过钙离子信号通道诱导Jurkat细胞凋亡。     

昆明山海棠碱诱导Jurkat淋巴瘤细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻及瘤细胞超微结构改变的研究

目的 检测昆明山海棠碱(THH碱)诱导Jurkat T淋巴瘤细胞的凋亡效应。方法 THH碱多剂量多时间点诱导Jurkat T淋巴瘤细胞细胞后，采用Annexin-V-Fluorescence标记膜外翻磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine，PS)的凋亡细胞，同时荧光素PI标记坏死细胞，流式细胞术检测分别检测其阳性细胞率。同时采用判断凋亡发生的“金标准”——形态学观察方法观察其超微结构的改变。结果 THH碱诱导后磷脂酰丝氨酸外翻的细胞显著增加，有明显的时间和剂量相关性，超微结构观察可见大量细胞明显发生细胞体积缩小、核固缩、胞浆浓缩、凋亡小体形成等凋亡典型的形态特征。结论 THH碱能非常显著地诱导Jurkat T淋巴瘤细胞发生凋亡。     

昆明山海棠诱导Jurkat等3个细胞株微核形成的研究

目的：为研究昆明山海棠（THH）的毒理作用。方法：使用流式细胞仪检测发现THH均可诱导Jurkat、CHE和NIH3T3细胞株微核形成和细胞凋亡。结果：3个细胞株表现出完全相似的变化规律,但Jurkat淋巴瘤细胞更为敏感,仅25μl/皿即在各时相点出现微核形成高峰,50μl/皿即出现细胞凋亡高峰。结论：THH对Jurkat肿瘤细胞比对CHE和NIH3T3细胞具有更大的细胞毒性。     

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的 为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfrom Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变.结果 THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多).结论 THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计.     

昆明山海棠总生物碱对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究昆明山海棠总生物碱(total alkaloids of tripterygium hypoglaucum hutch,THHta)对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测THHta对HCT116细胞增殖的抑制作用;用倒置及荧光显微镜观察THHta作用后HCT116细胞形态的变化;流式细胞术检测THHta对HCT116细胞周期及凋亡的影响,Western bolt检测凋亡相关caspase-3及PARP蛋白表达.结果 THHLa能显著抑制HCT116细胞增殖,抑制率与剂量和时间呈依赖关系.THHta作用HCT116细胞48、72 h的IC_(50)值小于20 μg/ml.THHta(10μg/ml)能诱导HCT116细胞G_0/G_1期比例增加及细胞凋亡,caspase-3活化及PARP蛋白剪切显著增强.结论 THHta能显著抑制HCT116细胞增殖,并可诱导HCT116细胞G_0/G_1期阻滞及细胞凋亡.     

昆明山海棠水提液的急性毒性研究

目的 探明昆明山海棠的急性毒性及半数致死剂量(LD50)，为临床的安全使用提供依据和资料。方法 THH水提液多剂量小鼠口服，观察小鼠的死亡率和脏器的感官病理改变。结果 雄性的LD50(95％可信限)为79g/kg(69～89g／kg)，雌性的LD50(95％可信限)为100g／kg(90～112g／kg)；肉眼未见脏器明显的病理改变。结论 按化学物质的急性毒性分级标准，THH水提液属中等毒级别，临床使用比较安全，具有广阔的应用发展前景。     

HPLC法测定昆明山海棠中雷公藤酯甲含量

目的建立高效液相色谱法测定昆明山海棠药材中雷公藤酯甲含量的方法.方法采用反相C18柱,以乙腈-水（80：20）为流动相,205nm为检测波长,测定雷公藤酯甲的含量.结果雷公藤酯甲在0.42～10.5μg/mL范围内线性良好,r=0.9995,平均回收率94.3%,RSD为2.87%.结论本方法灵敏、准确、重现性好.     

分光光度法测定黑曼和昆明山海棠碱A片中生物碱的含量

本文报道黑曼和昆明山海棠碱A片中生物碱的分光光度法测定。当黑曼的部位相同时,秋季采集的样品中生物碱含量较春季采的高;当采集季节相同时,黑曼根较茎中的生物碱含量为高。对昆明山海棠碱A片中雷公滕次碱的质量和百分含量均进行了测定。标准曲线的相关系数接近于1。测定的变异系数为0.55％。本法较灵敏而且方便。