马铃薯外敷对长春瑞滨输液性静脉炎ICAM-1和VEGF表达的影响

目的:探讨马铃薯片外敷防治兔静脉炎的作用机制。方法:将36只健康日本大耳兔随机分成模型组、硫酸镁组和马铃薯组。采用1.0 mg/kg(20 mL 0.9%氯化钠溶液稀释)长春瑞滨溶液静脉输注制备实验性静脉炎模型。硫酸镁组和马铃薯组于输液结束后5 min之内分别给予33%硫酸镁湿敷和马铃薯片外敷。分别于输液后1、3、7 d取兔耳缘静脉组织标本,观察细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:输入长春瑞滨后1、3和7 d,ICAM-1和VEGF三组均有一定程度的升高。马铃薯组的ICAM-1的表达量为44.9%、37.1%和27.1%,分别低于模型组的54.8%、48.9%和41.0%(均P<0.05)。马铃薯组VEGF表达量在1 d时低于模型组(P<0.05)。结论:采用马铃薯贴敷可防治长春瑞滨引起的静脉炎,其防治静脉炎的作用机制可能与其抑制ICAM-1和VEGF的升高有关。     

Vascular endothelial growth factor up-regulates the expression of intracellular adhesion molecule-1 in retinal endothelial cells via reactive oxygen species, but not nitric oxide

Background The vascular endothelial growth factor （VEGF） is involved in the initiation of retinal vascular leakage and nonperfusion in diabetes. The intracellular adhesion molecule-1 （ICAM-1） is the key mediator of the effect of VEGFs on retinal leukostasis. Although the VEGF is expressed in an early-stage diabetic retina, whether it directly up-regulates ICAM-1 in retinal endothelial cells （ECs） is unknown. In this study, we provided a new mechanism to explain that VEGF does up-regulate the expression of ICAM-1 in retinal ECs. Methods Bovine retinal ECs （BRECs） were isolated and cultured. Immunohistochemical staining was performed to identify BRECs. The cultured cells were divided into corresponding groups. Then, VEGF （100 ng/ml） and other inhibitors were used to treat the cells. Cell lysate and the cultured supernatant were collected, and then, the protein level of ICAM-1 and phosphorylation of the endothelial nitric oxide synthase （eNOS） were detected using Western blotting. Griess reaction was used to detect nitric oxide （NO）. Results Western blotting showed that the VEGF up-regulated the expression of ICAM-1 protein and increased phosphorylation of the eNOS in retinal ECs. Neither the block of NO nor protein kinase C （PKC） altered the expression of ICAM-1 or the phosphorylation of eNOS. The result of the Western blotting also showed that inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K） or reactive oxygen species （ROS） significantly reduced the expression of ICAM-1. Inhibition of PI3K also reduced phosphorylation of eNOS. Griess reaction showed that VEGF significantly increased during NO production. When eNOS was blocked by L-NAME or PI3K was blocked by LY294002, the basal level of NO production and the increment of NO caused by VEGF could be significantly decreased. Conclusion ROS-NO coupling in the retinal endothelium may be a new mechanism that could help to explain why VEGF induces ICAM-1 expression and the resulting leukostasis in diabetic retinopathy.     

核因子kappaB的反义核酸对人内皮细胞间粘附分子-1表达的影响

目的　采用反义核酸技术观察核因子kappaB(NF κB)的合成及其对所调控的粘附分子表达的影响 ,阐明其作用机制并证明其有效性。方法　设立正义、反义核酸组和对照组 (单用肿瘤坏死因子 α刺激 )。观察FITC标记的寡核苷酸在内皮细胞内的摄取情况及采用流式细胞仪检测反义核酸对NF κB表达的影响 ;采用RT PCR、免疫组织化学法和流式细胞仪检测转染后细胞间粘附分子 (ICAM ) 1的表达情况。结果　反义核酸组NF κB的表达较对照组下降 35 .94%,较正义核酸组下降 47.14%(P <0 .0 5 ) ;反义核酸组人血管内皮细胞I CAM 1的mRNA表达及其在细胞表面的表达水平较对照组分别降低 12 .2 3%和 71.37%,较正义核酸组分别降低 18.16 %和 71.82 %(P <0 .0 5 )。结论　NF κB的反义核酸能有效降低NF κB的复制及合成 ,从而显著下调人血管内皮细胞ICAM 1的表达 ,其正义核酸无此效应。     

细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1在血管瘤组织中表达的意义

目的：探讨细胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）在小儿血管瘤增殖退化病理生理演变过程中的表达及作用机制.方法：应用SABC免疫组化法检测28例增殖期血管瘤及22例退化期血管瘤的ICAM-1、VCAM-1在血管内皮细胞上的表达情况,同时以血管畸形及正常皮肤为对照.结果：ICAM-1在增殖期血管瘤强阳性表达,退化期阳性表达,两时期差异十分显著（P＜0.01）;VCAM-1在增殖期和退化期血管瘤均为阳性表达,两时期无明显差异;ICAM-1和VCAM-1在血管畸形和正常皮肤几乎均为阴性表达,与不同时期血管瘤相比差异均十分显著（P＜0.01）.结论：ICAM-1可能在血管形成早期发挥作用,介导内皮细胞间黏附,参与血管瘤发病和消退的病理过程.     

登革病毒感染对人血管内皮细胞血管细胞黏附分子-1表达的影响

目的:研究登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的影响.方法:原代分离、纯化、培养人HUVEC细胞,用生长良好的2～3代细胞进行实验.分别用病毒感染复数(MOI)为1、2、4、8、16的DV2病毒液感染HUVEC,阴性对照组直接以RPMI 1640培养,应用细胞计数试剂-8(CCK-8)法测定DV2感染前和感染后6、12、24、48、72和96 h的细胞活性.另以MOI=2的DV2病毒液感染细胞,阴性对照组直接以RPMI 1640培养,于感染后6、12、24、48、72、96 h分别收集病毒感染的HUVEC,采用流式细胞术测定细胞表面VCAM-1表达水平;采用RT-PCR法检测细胞中VCAM-1 mRNA转录水平.结果:当病毒MOI=2时对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义.DV2感染可以促进HUVECs中VCAM-1 mRNA的转录,96 h内均有增加,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).其中,正常状态下HUVEC基本无VCAM-1 mRNA转录,感染12 h达到最高峰,12～48 h表达量显著高于其他时间(P<0.05).DV2 感染HUVEC后, VCAM-1蛋白表达在12～72 h显著升高(P<0.05),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:DV2感染上调HUVEC的VCAM-1 mRNA转录和蛋白表达.这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一.     

糖尿病周围神经病变患者血管内皮生长因子与可溶性血管内皮生长因子受体-2的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)与可溶性血管内皮生长因子受体-2(sVEGFR-2)对糖尿病周围神经病变发生的影响。方法检测30例糖尿病周围神经病变患者(病变组)及31例未并发周围神经病变的糖尿病患者(无病变组)的血清VEGF及sVEGFR-2浓度。结果周围神经病变组患者血清VEGF水平高于无周围神经病变组,差异有统计学意义(P<0.01)。周围神经病变组患者血清sVEGFR-2水平稍低于无周围神经病变组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论糖尿病患者血清中VEGF水平升高未能阻止周围神经病变的发生,sVEGFR-2可能未参与周围神经病变的形成。     

雷公藤内酯醇抑制血管内皮细胞生长因子的表达与合成

目的 探讨雷公藤内酯醇对血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,进一步探讨雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制。方法 以人内皮细胞系ECV－304为研究对象,利用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）、流式细胞仪、酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同剂量雷公藤内酯醇对佛波脂（PMA）诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,并采用RT－PCR检测雷公藤内酯醇对内皮细胞c-jun/c-fos mRNA表达的影响。结果 雷公藤内酯醇可以抑制PMA诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌,并呈剂量依赖性。同样,雷公藤内酯醇剂量依赖性抑制PMA诱导的内皮细胞c-jun/c-fos mRNA的表达。结论 雷公藤内酯醇抑制内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌可能是其雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制之一。雷公藤内酯醇可能通过影响转录因子AP－1的形成而影响内皮细胞VEGF的表达与合成。     

Cardiotrophin-1 induces intercellular adhesion molecule-1 expression by nuclear factor κB activation in human umbilical vein endothelial cells

Background In addition to elevated concentrations of cytokines, patients with congestive endothelial dysfunction and increased plasma concentrations of adhesion molecules heart failure （CHF） show ke intercellular adhesion molecule-1 （ICAM-1）. Furthermore, the concentration of cardiotrophin-1 （CT-1） - a cytokine of the interleukin-6 superfamily - is increased in CHF. We tested the hypothesis whether CT-1 is able to induce ICAM-1 in human umbilical vein endothelial cells （HUVEC）. Furthermore we examined the signalling mechanisms of CT-1 mediated ICAM-1 expression. Methods Confluent layers of HUVEC were incubated with increasing concentrations of CT-1 （5 to 100 ng/ml） for different periods. ICAM-1 mRNA was determined by real-time polymerase chain reaction （PCR） and ICAM-1 surface expression by fluorescence-activated cell sorter （FACS） analysis and soluble ICAM-1 （slCAM-1） in the culture supernatant by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. To clarify the signalling pathway of CT-1 induced ICAM-1 expression we used various inhibitors of possible signal transducing molecules, electromobility shift assay （EMSA） and Western blot analysis. Results CT-1 induced ICAM-1 mRNA （1.8±0.8 fold increase compared to unstimulated cells after 6 hours） and protein （1.4±0.2 fold increase compared to unstimulated cells after 48 hours） in HUVEC in a time- and concentration-dependent manner. EMSA experiments show that CT-1 causes nuclear factor （NF） κB activation. Because parthenolide could inhibit CT-1 induced ICAM-1 expression NFκB activation is required in this pathway. CT-1 did not activate extracellular signal regulated kinases （ERK）, c-Jun N-terminal kinase （JNK） and p38. Conclusion CT-1 is able to induce ICAM-1 in endothelial cells by NFκB activation. These results may explain in part elevated ICAM-1 concentrations in patients with CHF and endothelial dysfunction.     

培哚普利对U937泡沫细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究培哚普利对氧化修饰的低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的U937泡沫细胞血管内皮生长因子（VEGF）mRNA、蛋白表达的影响。方法：U937细胞与80μg/mLox-LDL孵育48h,建立U937泡沫细胞模型,以不同浓度的培哚普利（0.01、0.10、1.00μmol/L）预处理U937细胞24h再加入80μg/mL的ox-LDL孵育48h,通过逆转录-聚合酶链式扩增反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测U937细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况。结果：U937泡沫细胞组VEGF mRNA的表达较U937细胞对照组明显增加[（2.371±0.253）vs（0.954±0.245）（P〈0.01）],培哚普利干预后,随着浓度（0.01、0.10、1.00μmol/L）的增加,U937泡沫细胞的VEGF mRNA表达水平呈浓度依赖性下降[（2.168±0.270）vs（1.533±0.248）vs（1.022±0.189）（P〈0.01）];U937泡沫细胞组VEGF蛋白表达较U937细胞对照组明显增加[（1804.18±177.59）pg/mL vs（716.19±60.82）pg/mL（P〈0.01）],培哚普利干预后,随着浓度（0.01、0.10、1.00μmol/L）的增加,U937泡沫细胞VEGF蛋白表达呈浓度依赖性降低（1601.46±154.68）pg/mL vs（1377.09±110.36）pg/mL vs（1017.89±147.18）pg/mL（P〈0.01）。结论：培哚普利能够浓度依赖性地下调ox-LDL诱导的U937泡沫细胞VEGF mRNA、蛋白的表达。     

阳和汤干预兔骨关节炎软骨细胞中血管内皮生长因子变化

目的：观察阳和汤对兔骨关节炎软骨细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响。 方法：新西兰大白兔15只随机分为正常组、模型组和阳和汤组。按照Hulth法建立膝骨关节炎模型，术后第5周起至第7周末，阳和汤组予混有阳和汤的颗粒饲料，正常组及模型组均给予普通饲料；术后第8周分别取各组胫骨平台关节软骨，采用番红O染色，进行Mankin评分；免疫组织化学染色测定关节软骨中VEGF表达的阳性指数。 结果：正常对照组番红O染色的Mankin评分与模型组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。阳和汤组番红O染色减少或缺失程度较模型组轻，差异有统计学意义（P〈0．01）。各组关节软骨切片VEGF免疫组化染色分析，模型组VEGF的阳性指数明显高于正常组，差异有统计学意义（P〈0．01），阳和汤组VEGF阳性指数明显低于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）。 结论：VEGF在骨关节炎形成早期起重要作用；阳和汤可延缓关节软骨退行性改变，其作用可能是通过调控VEGF而达到抑制血管增生的作用。     

烟草烟雾对大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达的影响

[目的]探讨不同剂量与时程的烟草烟雾对大鼠脑血管内皮细胞细胞间粘附分子1(ICAM-1)mRNA表达的影响。[方法]雄性Wistar大鼠50只随机分为5组,每组10只：长期大量吸烟组、长期少量吸烟组、短期大量吸烟组、戒烟组、正常对照组、建立大鼠被动吸烟模型,原位杂交结合显微图像分析系统检测大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA的表达情况。[结果]与对照组比较①吸烟大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达增加。②戒烟大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达下调。[结论]烟草烟雾使大鼠脑血管内皮细胞ICAM—1mRNA表达增加,二者存在时效与量效关系。     

香烟烟雾对大鼠脑血管细胞粘附分子-1表达的影响

目的为研究香烟烟雾对大鼠脑血管细胞粘附分子(VCAM-1)表达的影响,探讨吸烟致脑梗死的一种分子机制.方法建立大鼠吸烟模型,免疫组化方法检测大鼠脑血管VCAM-1表达.结果吸烟大鼠脑血管VCAM-1表达增加(大量吸烟组平均灰度116.08±2.38,小量吸烟组123.06±1.68,对照组130.33±1.88,即大量吸烟组血管内皮染色最深,VCAM-1表达最强,小量吸烟组次之,对照组最弱.经统计学分析,三组数值之间两两比较,差异均有显著性意义,P＜0.05).结论香烟烟雾使大鼠脑血管VCAM-1表达增加,脑血管内皮细胞VCAM-1表达增强可能是吸烟引起脑梗死的分子机制之一.     

肝细胞生长因子及受体促进人大肠癌细胞血管内皮生长因子表达

目的:观察不同浓度肝细胞生长因子对体外培养的大肠癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:体外培养人大肠癌细胞,分别加入不同浓度的人重组肝细胞生长因子和或其受体抑制剂Herbimycin A(HA),用Western blot、RT-PCR、ELISA等方法检测肝细胞生长因子对其受体磷酸化表达及大肠癌细胞VEGF表达的影响.结果:肝细胞生长因子在10～100 ng/ml浓度范围内较对照组相比显著促进大肠癌细胞VEGF mRNA(增加了4～5倍)、蛋白质表达(增加了3～10倍);Western blot检测肝细胞生长因子引起其受体磷酸化,并与其诱导的VEGF表达相关.结论:体外培养条件下,肝细胞生长因子呈剂量依赖性促进大肠癌细胞VEGF表达,其表达与其受体磷酸化水平相关;其受体磷酸化抑制剂可以抑制大肠癌细胞VEGF表达.     

核因子kappaB的诱骗性寡核苷酸对肿瘤坏死因子-α诱导的细胞间粘附分子-1表达的影响

目的 探讨人脐静脉内皮细胞中，核因子kappaB(NF-kB)的诱骗性寡核苷酸对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的细胞间粘附分子(ICAM)-1表达的影响。方法 采用培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304，脂质体介导法转染寡核苷酸，以流式细胞仪检测转染效率，电泳迁移率转换试验检测诱骗性寡核苷酸与NF-kB转录因子的亲和力及特异性，并以RT-PCR和流式细胞仪测定其对TNF-α诱导的粘附分子ICAM-1表达的影响。结果 诱骗性寡核苷酸能与NF-kB特异结合，并可显著下调TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达。结论 NF-kB的诱骗性寡核苷酸可显著下调NF-kB调控的与动脉粥样硬化相关的粘附分子的表达，为核酸药物防治动脉粥样硬化的临床应用提供一些前期资料。     

血管内皮生长因子与微血管密度在良性前列腺增生中的表达

目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）与微血管密度（microvascular density，MVD）在良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）中的表达情况及其在BPH血管生成中的作用。方法：应用VEGF、MVD的免疫组化S—P染色法分析23例BPH中VEGF及MVD的表达情况。结果：中央区VEGF表达阳性率为54．35％，周边区VEGF表达阳性率为13．48％，二者差别有高度统计学意义（P〈0．01）；BPH中央区平均MVD值为（20．39±6．45），周边区平均MVD值为（7．45±4.34），二者差别有高度统计学意义（P〈0．01）；BPH中VEGF表达强度与MVD值之间呈正相关（r=0．8634，P〈0．05）。结论：VEGF是促进BPH内血管生成的重要因素。     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

延迟脂肪瓣内血管内皮生长因子的表达

目的观察脂肪瓣延迟术后瓣内血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平,为以后使用瓣内脂肪组织进行移植提供理论依据。方法选用新西兰兔6只,随机在左或右侧腹股沟处形成掀起长4 cm、宽2 cm的脂肪瓣,12h后收集瓣内脂肪组织,用ELISA法检测VEGF,并与对侧比较。结果脂肪瓣形成后12h,瓣内VEGF水平(0.93±0.23pg/mg)与对侧(0.53±0.11pg/mg)比较增高,差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论脂肪瓣延迟术可促进瓣内VEGF的表达,提示与皮瓣一样,可增加瓣内的血管增生,用瓣内脂肪组织移植可能增加存活率和存活时间。     

小窝蛋白-1对血管内皮生长因子孵育的骨肉瘤细胞血管内皮生长因子受体-2表达水平的影响

目的：研究小窝蛋白-1（caveolin-1）对血管内皮生长因子（VEGF）孵育的骨肉瘤细胞株（SOSP-9607）血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）表达的影响,探讨其在骨肉瘤发展中作用的可能机制。方法：实验分为三组,即对照组、VEGF组、VEGF＋caveolin-1小片段干扰核糖核酸（siRNA）组。反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测VEGF孵育的SOSP-9607细胞中caveolin-1、VEGFR-2信使核糖核酸（mRNA）的表达;蛋白质印迹（Western Blot）检测caveolin-1、VEGFR-2蛋白的表达。结果：与对照组相比,VEGF组细胞caveolin-1、VEGFR-2 mRNA和蛋白表达明显增加（均P〈0.01）,VEGF＋caveolin-1 siRNA组细胞caveolin-1 mRNA和蛋白表达减少,而VEGFR-2 mRNA表达增加,蛋白水平却表达减少,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：caveolin-1能明显减少VEGF刺激下的骨肉瘤细胞中的VEGFR-2蛋白水平的表达,提示caveolin-1在VEGF依赖性信号级联反应中起正调控作用,为临床选择合适的靶点治疗骨肉瘤的血管生成提供实验依据。     

冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆可溶性细胞间黏附分子-1和可溶性血管细胞黏附分子-1水平检测

目的:探讨不同临床表现的冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)和可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)水平与冠状动脉粥样硬化病变严重程度的关系.方法:74例CHD患者分为急性冠脉综合征(ACS)患者58例(包括急性心肌梗死20例(AMI组)和不稳定性心绞痛38例(UAP组))、稳定性心绞痛16例(SAP组).另选取非冠心病患者15例(对照组).采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定上述各组外周血中sICAM-1和sVCAM-1的水平.采用Gensini积分系统评价病变血管的狭窄程度.结果:62例行冠状动脉造影的CHD患者随Gensini积分的升高,sICAM-1与sVCAM-1水平有升高趋势(F分别为7.772与9.622,P均为0.000).CHD患者sICAM-1和sVCAM-1水平均与冠状动脉粥样硬化病变Gensini积分呈正相关(r分别为0.415和0.487,P均＜0.01).AMI组和UAP组的sICAM-1水平((318.0±86.4)μg/L和(334.9±122.6)μg/L)高于SAP组((264.8±86.6)μg/L)和对照组((279.8±145.8)μg/L),P均＜0.05.AMI组、UAP组和SAP组sVCAM-1水平((407.8±182.1)μg/L、(446.3±160.4)μg/L、(386.5±104.2)μg/L)均明显高于对照组((307.7±23.2)μg/L),P均＜0.05.结论:sICAM-1和sVCAM-1水平可以反映冠状动脉粥样硬化病变的严重程度,前者升高能反映冠状动脉粥样斑块的不稳定状态.