川芎嗪抑制血管平滑肌细胞增殖及胶原合成的作用机制研究

目的 研究川芎嗪抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖的作用机制,为中药有效预防血管再狭窄提供实验依据。方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为：阴性对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组（AngⅡ10 －6 mol/L）、低剂量组（川芎嗪20 μmol/L加AngⅡ］、中剂量组（川芎嗪40 μmol/L加AngⅡ）及高剂量组（川芎嗪80 μmol/L加AngⅡ）。MTT法检测细胞增殖率;Western blot和实时荧光定量PCR法分别检测Wnt通路相关蛋白Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1及胶原Ⅰ（ColⅠ）、胶原Ⅲ（ColⅢ）蛋白、基因表达。结果 与阴性对照组比较,AngⅡ组细胞增殖率明显升高（P<0.05）。与AngⅡ组比较,中、高剂量组细胞增殖率明显降低（P<0.05）。与阴性对照组比较,AngⅡ组Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1、ColⅠ、ColⅢ蛋白和mRNA表达均明显上调（P<0.05）。与AngⅡ组比较,中、高剂量组Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1、ColⅠ、ColⅢ蛋白和mRNA表达均明显下调（P<0.05）。上述指标在低、中、高剂量组均具有浓度依赖性。结论 川芎嗪通过下调Wnt信号通路在一定程度上抑制了AngⅡ诱导的VSMCs的增殖及胶原分泌。     

黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的调控作用

目的观察黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的调控作用,初步阐释黄芪甲苷治疗骨关节炎的分子作用机制。方法通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路。Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养。倒置显微镜观察Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对人软骨细胞形态学变化的影响。黄芪甲苷混悬液干预共培养体系,采用Western bolt方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;采用ELISA方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达的影响。结果β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞后成功激活Wnt信号通路并与软骨细胞共培养。随培养时间的延长,软骨细胞生长逐渐受到抑制,软骨细胞胞体边缘与板壁接触处发白,折光度增加,细胞贴壁强度降低。黄芪甲苷干预后,Western blot检测发现滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达明显下调(P0.01);ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达与正常对照相比明显升高(P0.01)。结论滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活可以使软骨细胞生长受到抑制。黄芪甲苷可以降低滑膜细胞β-catenin表达,且与干预时间长短相关。黄芪甲苷可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达。黄芪甲苷可能通过抑制OA滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎。     

黄芪多糖对肌源性干细胞Wnt信号相关基因表达的影响

目的 探讨黄芪多糖干预的肌源性干细胞Wnt/β-catenin信号通路的相关基因表达的变化。方法 将经混合酶消化法、多次差速贴壁法分离纯化的MDSCs随机分为6组,进行实验干预,即空白对照组、APS组、Wnt激动剂组、APS+Wnt激动剂组、Wnt抑制剂组及APS+Wnt抑制剂组。Realtime PCR检测MDSCs Wnt信号通路上下游节点基因Wnt3、β-catenin及MDSCs增殖分化相关基因CyclinD1、c-myc、CD34mRNA的表达变化。结果 流式细胞仪检测结果表明MDSCs CD34、Sca-1阳性。倒置显微镜下观察,APS组、Wnt激动剂组、APS+Wnt激动剂组MDSCs较空白对照组生长密集,APS+Wnt激动剂组聚团明显,Wnt抑制剂组MDSCs增殖明显受到抑制。PCR检测结果显示:APS+激动剂干预组的Wnt信号通路各节点基因表达水平最高,Wnt激动剂组与APS组其次,空白对照组最低。结论 在黄芪多糖的干预作用下,持续激活Wnt信号通路能够促进MDSCs的增殖分化。     

淫羊藿素通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成软骨分化

该文研究GDF-5联合淫羊藿素(ICT)诱导BMSCs成软骨分化,并探讨Wnt信号通路在其中的作用。采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,取P3代细胞分成6组:BMSCs组,ICT组,GDF-5组,GDF-5+ICT组,GDF-5+ICT+SB216763组,GDF-5+ICT+XAV-939组,连续诱导培养14 d。倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;Alcian Blue染色检测蛋白聚糖变化;RT-PCR检测aggrecan,Col2,Sox9,Dvl1,Gsk3β,β-catenin mRNA表达水平;Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白和β-catenin蛋白表达水平。结果提示,与BMSCs组相比,GDF-5组,GDF-5+ICT组,GDF-5+ICT+SB216763组蛋白聚糖Alcian blue染色均明显较深;成软骨分化标记基因aggrecan,Col2,Sox9 mRNA表达水平及Ⅱ型胶原蛋白表达水平,Wnt信号通路相关基因β-catenin mRNA及蛋白表达均逐渐增加,Gsk3βmRNA表达量逐渐减少。相反,相对于GDF-5+ICT组,添加XAV-939组则表现为成软骨分化及Wnt信号通路相关基因Dvl1,β-catenin表达下调,Gsk3βmRNA表达增加,Ⅱ型胶原蛋白及β-catenin蛋白表达水平均下降,上述差异均有统计学意义。GDF-5联合淫羊藿素能够诱导大鼠BMSCs成软骨分化,其中ICT起促进作用。ICT可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进大鼠BMSCs体外成软骨分化。     

臭牡丹总黄酮对A549细胞增殖迁移侵袭力及Wnt通路相关蛋白的影响

目的:观察臭牡丹总黄酮对β-catenin过表达A549细胞增殖、迁移、侵袭力以及Wnt通路相关蛋白的影响。方法:选取构建β-catenin真核过表达载体并转染A549细胞,将其分为6组,分别为未转染细胞、未转染细胞+臭牡丹总黄酮、空载组、空载+臭牡丹总黄酮、β-catenin过表达组、β-catenin过表达+臭牡丹总黄酮。MTT法检测各组细胞的相对存活率,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的侵袭力。Western Blot检测各组Wnt通路相关蛋白β-catenin、GSK-3β、P-GSK-3β、c-myc、CyclinD1的表达。结果:转染β-catenin过表达的A549细胞增殖能力、迁移能力、侵袭力均明显增强(P0.05),并显著上调wnt通路相关因子β-catenin、C-Myc,CyclinD的蛋白表达,下调P-GSK-3β的蛋白表达(P0.05)。采用臭牡丹总黄酮干预后,能明显降低各组细胞的存活率,降低细胞向划痕区域迁移的能力,减少侵袭小室穿过基膜的细胞数(P0.05)。并下调β-catenin、C-Myc、CyclinD1表达(P0.05),上调P-GSK-3β表达(P0.05)。臭牡丹总黄酮的干预作用对转染β-catenin过表达细胞尤为明显。结论:转染β-catenin过表达的A549细胞其增殖、迁移、侵袭力均明显增强,能激活Wnt/β-catenin通路。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭力,其机制可能是通过抑制细胞中β-catenin的高表达从而调控下游的一系列因子而起到抑制Wnt/β-catenin通路的作用。     

不同浓度的Chir99021对软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原表达的影响

目的:探讨不同浓度的Wnt/β-catenin信号通路激活剂Chir99021对体外培养的大鼠软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原表达的影响。方法:新生24hSD大鼠8只(雌雄不限),取出关节软骨进行软骨细胞培养,细胞培养48h后进行软骨细胞免疫荧光鉴定。以不同药物浓度将软骨细胞分为四组,分别加入浓度为0.00μmol/L(对照组),0.75μmol/L,1.50μmol/L,3.00μmol/L的Wnt/β-catenin信号通路激活剂Chir99021进行干预。24h后分别观察不同浓度组细胞形态的变化,蛋白印迹分析法(Western blot)检测Ⅱ型胶原、β-catenin和PCNA蛋白的表达情况。结果:在0.00μmol/L(对照组),0.75μmol/L,1.50μmol/L,3.00μmol/L的Wnt/β-catenin信号通路激活剂Chir99021干预下,各组细胞数量明显逐渐增加,与对照组相比较,各加药组β-catenin和PCNA蛋白的表达逐渐上调(P0.05),而Ⅱ型胶原蛋白的表达逐渐下降(P0.05)。结论:不同浓度的Chir99021激活Wnt/β-catenin信号通路后明显促进了软骨细胞的增殖,却抑制了软骨细胞分泌的Ⅱ型胶原。     

补肾活血方对Wnt/β-catenin信号通路介导的人滑膜细胞与正常软骨细胞共培养体系的调控作用

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制。方法:构建β-catenin过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,Transwell小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞模拟滑膜软骨关节体系内环境;各时间点不同浓度药物干预共培养体系,Western bolt方法检测补肾活血方对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;ELISA方法检测补肾活血方对共培养体系中滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7),人Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅱ),软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响。结果:Western blot检测发现β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞后滑膜细胞胞浆及胞核中β-catenin表达明显上调(P0.01),补肾活血方能够明显下调共培养滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达(P0.01);同时,ELISA法检测发现补肾活血方能够明显下调滑膜细胞与软骨细胞培养上清液中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达(P0.01)。结论:β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Wnt/β-catenin信号通路激活后共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的水平明显上升;补肾活血方可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达,减轻异常滑膜细胞对软骨细胞的损害,减缓软骨基质的降解,有利于骨关节炎的缓解和恢复。     

基于Wnt/β-catenin通路探讨西黄丸对三阴乳腺癌细胞4T1增殖及干性成球能力的影响

目的 基于Wnt/β-catenin信号通路评价西黄丸对三阴乳腺癌细胞4T1的增殖及干性成球能力的影响.方法 制备西黄丸浸提液,采用CCK8的方法,筛选最佳给药浓度,检测其对4T1细胞增殖能力的影响,采用无血清干细胞成球实验检测其对4T1细胞干性成球能力的影响,通过Transwell实验检测其对4T1细胞的迁移和侵袭能力的影响,RT-PCR实验检测Wnt/β-catenin信号通路介导的上皮细胞间充质转化(EMT)的相关mRNA的表达.结果 西黄丸可以抑制细胞的增殖、干细胞成球能力和肿瘤细胞的迁移侵袭,RT-PCR结果显示E-cadherin相对上调,Vimentin、β-catenin表达下调,且西黄丸可协同Wnt/β-catenin通路活性抑制剂XAV939抑制细胞的增殖、干细胞成球能力和肿瘤细胞的迁移侵袭.结论 西黄丸可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路介导的EMT,干预肿瘤细胞的"干性",从而防治肿瘤转移.     

雷公藤甲素通过PTEN表达调控Wnt/β-catenin通路抑制黑色素瘤的机制研究

目的:探讨雷公藤甲素的抗黑色素瘤作用是否与PTEN表达及Wnt/β-catenin通路相关。方法:实验分为5组:空白对照组、雷公藤甲素(20 nmol/L)组、β-catenin抑制剂(5μmol/L IWR-1-endo)组、雷公藤甲素+β-catenin抑制剂组、ATRA(100μmol/L)组。分别采用CCK8法、Annexin V-FITC/PI双染色法、实时定量PCR法和Western blot法检测各组A375细胞活力、凋亡率及PTEN、β-catenin、Bcl-2、Caspase-3、PCNA mRNA及蛋白的表达。结果:雷公藤甲素、β-catenin抑制剂和ARTA处理能抑制A375细胞的增殖并诱导其凋亡,在增强Caspase-3和PTEN表达的同时抑制β-catenin、Bcl-2、PCNA的表达。结论:雷公藤甲素能抑制黑色素瘤细胞A375的增殖并诱导其凋亡,该作用可能是通过增加PTEN的表达进而抑制Wnt/β-catenin通路的激活来实现。     

消岩汤经Wnt通路抑制肺腺癌A549细胞增殖的机制研究

目的 探讨消岩汤经Wnt通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖的可能机制。方法 体外培养A549细胞,加入梯度浓度消岩汤(10、50、100、200、300 g/L)后,采用CCK8法检测A549细胞存活率。通过PCR测定Wnt通路相关基因β-catenin、c-myc、凋亡相关基因bcl-2、caspase-3表达情况;通过荧光素酶报告基因检测反应Wnt通路活性。流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 消岩汤可以剂量和时间依赖性地抑制A549细胞的增殖,同时消岩汤可以剂量依赖性地显著降低A549细胞中β-catenin、c-myc的表达水平,抑制Wnt通路活性,并通过降低bcl-2表达、增强caspase-3表达来促进了肿瘤细胞凋亡。结论 消岩汤可能通过抑制Wnt信号通路来抑制A549细胞的增殖、促进凋亡。     

消炎散中活血化瘀药含药血清对成软骨诱导下兔骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路及SOX9影响的研究

目的探讨消炎散中活血化瘀药含药血清对成软骨诱导下兔间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)Wnt/β-catenin信号通路及SOX9的影响。方法提取并培养MSCs,先分为成软骨细胞诱导剂组和未成软骨细胞诱导剂组,每组又分为不加血清组、含药血清组、空白血清组、sFRP-3组。采用流式细胞仪检测细胞周期情况,运用RT-PCR、Western Blotting检测Wnt信号通路相关Wnt5a、β-catenin,SOX9基因及蛋白水平表达的变化。结果RT-PCR及Western Blotting显示,活血化瘀含药血清抑制诱导前MSCs表达Wnt5a、β-catenin mRNA和蛋白,促进SOX9 mRNA和蛋白表达,而对诱导后的MSCs促进Wnt5a、β-catenin mRNA和蛋白表达,抑制SOX9 mRNA和蛋白表达。结论消炎散中活血化瘀药含药血清可通过作用Wnt/β-catenin信号通路,改变SOX9的表达水平,进而影响MSCs的软骨分化。     

竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:C57BL小鼠雌雄各半随机分成4组,每组10只,即正常对照组、模型组及竹节参皂苷Ⅳa低、高剂量组。HE染色观察小肠形态学变化,免疫组化检测各组小肠干细胞数量、PCNA表达及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的变化。结果:与正常对照组比较,模型组小肠绒毛长度、V/C值、PCNA表达量及杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著升高,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著上调(P0.05或P0.01)。与模型组比较,竹节参皂苷Ⅳa组绒毛长度、V/C值、PCNA表达量、杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著降低,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著下调(P0.05或P0.01)。结论:竹节参皂苷Ⅳa可通过Wnt/β-catenin信号通路调控小肠干细胞微环境,改善其过度增殖分化状态和抑制小肠干细胞增多,调节小肠干细胞功能。     

马钱子碱对人结肠癌细胞SW480增殖和周期的影响及机制研究

目的探讨马钱子碱对人结肠癌细胞株SW480的增殖和周期的影响及可能的分子机制。方法将试验分为空白对照组和马钱子碱高(8μmol/L)、中(4μmol/L)、低剂量组(2μmol/L),细胞生长曲线检测马钱子碱干预前后各组SW480细胞的增殖情况;流式细胞术检测马钱子碱对各组SW480细胞周期的影响;RT-PCR检测马钱子碱对SW480细胞中Wnt3a、β-catenin、C-myc、CyclinD1的mRNA表达的调节作用;Western Blot试验检测马钱子碱对SW480细胞中Wnt3a、β-catenin、C-myc、CyclinD1蛋白表达的调节作用。结果细胞生长曲线表明,在一定范围内,马钱子碱给药浓度越高,对SW480细胞增殖的抑制作用越显著,以高剂量组为最优。流式细胞术试验表明,马钱子碱可显著升高G2/M期的SW480细胞数量,从而将SW480周期阻滞在G2/M期。RT-PCR和Western Blot试验结果显示,马钱子碱干预后Wnt3a、β-catenin、C-myc、CyclinD1的mRNA和蛋白表达相较于正常对照组其表达明显降低。结论马钱子碱可通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞SW480增殖并将SW480细胞周期阻滞在G2/M期。     

运用基因芯片技术分析老龄肾阳虚证与Wnt/β-catenin信号通路的相关性

目的：采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与Wnt/β-catenin信号通路上基因表达异常间的联系。方法：筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u33Plus2.0基因表达谱芯片,比较两组间在Wnt/β-catenin信号通路上的差异表达基因。结果：芯片数据组间比较后在Wnt/β-catenin信号通路上获得5条差异表达基因。讨论：老龄肾阳虚证的发生与Wnt/β-catenin信号通路的调控紊乱之间有必然联系,衰老机制可能是这一联系的关键。     

山柰酚对人口腔癌KB细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨山柰酚对人口腔癌KB细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:将对数生长期的人口腔癌KB细胞分为对照组及25、50、100、200μmol/L山柰酚处理组;采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,real-time q PCR法检测Bcl-2及Bax基因表达,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达。结果:山柰酚对人口腔癌KB细胞的增殖有明显的抑制作用;与对照组比较,山柰酚各浓度组细胞凋亡率、Bax mRNA表达、Caspase-3活性均显著升高,Bcl-2 mRNA及β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达均显著降低(P0.05或P0.01)。结论:山柰酚具有抑制人口腔癌KB细胞增殖及诱导凋亡作用,该作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

补肾活血方含药血清对小鼠肢芽细胞增殖和分化的影响

目的探讨补肾活血方对小鼠肢芽细胞向软骨细胞分化增殖的影响。方法分离12.5天小鼠胚胎肢芽细胞进行微团培养,同时用补肾活血方含药血清进行干预。采用MTT法检测肢芽细胞的增殖活性,阿尔新蓝染色检测肢芽细胞分化为软骨细胞能力,RT-PCR法检测肢芽细胞中Col2a1、Col10a1、Mmp9、β-catenin、Runx2 mRNA的表达水平。结果与空白对照组比较,补肾活血方含药血清组在24 h、48 h和72 h 3个时间点均能显著促进小鼠肢芽细胞增殖。微团培养6 d后,阿尔新蓝染色结果显示补肾活血方含药血清组软骨细胞集落形成增加。RT-PCR结果显示补肾活血方含药血清组肢芽细胞Col2a1 mRNA表达水平增加,而Col10a1、Mmp9、β-catenin、Runx2 mRNA表达下调。结论补肾活血方含药血清可能通过β-catenin信号通路促进小鼠胚胎肢芽细胞的增殖与分化。     

毒痰瘀脾虚方含药血清对HepG2肝癌细胞影响的实验研究

目的:研究毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中相关基因及细胞侵袭、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR实验观察毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响;Transwell细胞侵袭和迁移实验,观察其对Hep G2肝癌细胞侵袭和迁移的影响;AnnexinV-FITC双染流式细胞法检测其对Hep G2肝癌细胞凋亡的影响。结果:RT-qPCR结果显示,与阴性组比较,毒痰瘀脾虚方含药血清能下调HepG2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA的表达,差异有统计学意义(P0.01或P0.05);Transwell细胞侵袭实验和迁移实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.01),对细胞的迁移无明显影响(P0.05);细胞凋亡实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能促进Hep G2细胞的凋亡,与阴性组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞侵袭,促进细胞凋亡,并能抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达。     

健脾复方通过Exo-Wnt3a/5a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制大肠癌侵袭转移机制研究

目的:探究大肠癌侵袭转移中健脾复方对Wnt3a/5a调控Wnt/β-catenin信号通路的作用机制。方法:建立裸鼠人肠癌转移瘤模型,使用低、中、高剂量的健脾复方进行治疗干预,同时设阳性对照组及空白对照组,收集裸鼠血清,并保留瘤体,使用WB检测Exo-Wnt3a/5a、β-catenin、MMP-7、C-MYC、CyclinD1等信号分子。结果:β-catenin、MMP-7、C-MYC、CyclinD1在健脾复方高剂量组中表达水平最低,β-catenin异常表达与MMP-7、C-MYC、CyclinD1在大肠癌肿瘤细胞中出现高表达有明显正相关性(P<0.05)。结论:健脾复方可下调Wnt3a/5a,从而降低大肠癌细胞的增殖、侵袭,并增加对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用,从而控制大肠癌的发展及转移。     

槲皮素抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及与Wnt/β-catenin信号通路的机制

目的:观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用,探讨其抗前列腺癌的可能机制。方法:体外培养PC-3细胞,以不同终浓度槲皮素进行处理,设空白组。采用噻唑蓝比色法(MTT)观察槲皮素对PC-3细胞增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测槲皮素对PC-3细胞凋亡的影响;采用免疫印迹法(Western blot)和逆转录-PCR(RT-PCR)分析检测槲皮素对β-catenin和下游靶基因细胞周期素D1(Cyclin D1),原癌基因(c-Myc)蛋白表达和转录水平;采用免疫荧光分析检测槲皮素对β-catenin表达的影响;利用荧光酶报告基因分析检测槲皮素对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果:与空白组比较,槲皮素对PC-3细胞增殖具有明显抑制作用(P0.05),并诱导PC-3细胞凋亡(P0.05)。与空白组比较,槲皮素可显著抑制PC-3细胞β-catenin的蛋白表达和转录活性,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路的传导,抑制下游靶基因的表达水平(P0.05,P0.01)。结论:槲皮素可显著抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制晶状体上皮细胞增殖的实验研究

[目的]探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床治疗提供新的靶点。[方法]人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组:Wnt3a组,姜黄素组和对照组。Wnt3a组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a c DNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞中,构建PCO的细胞模型。姜黄素组在转染Wnt3a c DNA表达载体48 h后加入20μmol/L姜黄素,对照组转染pc DNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达,CKK-8实验检测姜黄素对SRA 01/04细胞增殖能力的影响,采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的变化;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子cyclin D1和c-Myc蛋白表达的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化。[结果]Western blot检测证实,转染pc DNA3-HA表达载体后,SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CKK-8检测表明,姜黄素组SRA 01/04细胞的增殖率明显低于Wnt3a组(t=2.782,P=0.049)。姜黄组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为23.6%±4.0%,明显低于Wnt3a组的43.4%±5.4%,差异有统计学意义(t=2.951,P=0.018)。转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a组细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞之中,姜黄素组β-catenin蛋白主要分布于细胞核中,少量分布于细胞质中。Western blot检测姜黄素组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc蛋白表达明显低于Wnt3a组。[结论]在SRA01/04细胞中,姜黄素抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达下调,抑制人LECs的增生。