红花黄色素对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨红花黄色素对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用Aβ_(1-42)损伤SH-SY5Y细胞模拟体外AD,不同浓度(0. 01、0. 1、1g/l)红花黄色素进行干预。倒置显微镜下观察细胞形态; MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞内Aβ_(1-42)水平; Western Blot检测SH-SY5Y细胞内APP、BACE-1、SAPPα、NEP、IDE、ERK和P-ERK蛋白表达水平。结果:红花黄色素各剂量均能够减少Aβ_(1-42)引起的SH-SY5Y细胞的损伤,使细胞的存活率显著提高,且具有剂量依赖性;ELISA结果显示,红花黄色素0. 1、1g/L可降低SH-SY5Y细胞内的Aβ_(1-42)水平; Western Blot结果显示红花黄色素各剂量均可以上调SAPPα、NEP、IDE和P-ERK蛋白的表达,下调APP和BACE-1蛋白的表达。结论:红花黄色素可以通过调节Aβ_(1-42)相关代谢酶而减少Aβ_(1-42)的含量,发挥抗AD作用,该作用可能与MAPK/ERK通路的激活有关。     

女贞苷对Aβ42诱导的神经细胞凋亡及相关蛋白NF-κB、Bcl-2变化的影响

目的探讨女贞苷对Aβ42诱导的神经细胞凋亡及相关蛋白NF-κB、Bcl-2变化的影响及其相关机制。方法人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)用女贞苷(50,100μmol·L~(-1))预保护12 h后,加入浓度为15μmol·L~(-1)的Aβ42诱导损伤12 h,用MTT法测定终点细胞存活率,Western blot法检测NF-κB和Bcl-2的蛋白表达变化。结果 50,100μmol·L-1的女贞苷可减少Aβ42引起的SH-SY5Y细胞凋亡。女贞苷组NF-κB的蛋白表达较模型组减少(P0.01),抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达相对于模型组明显增加(P0.01)。结论表明女贞苷可提高Aβ42诱导损伤的SH-SY5Y细胞存活率,其机制可能与女贞苷抑制NF-κB的激活和增加抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达有关。     

五味子乙素对Aβ_(1-42)诱导的阿尔茨海默病细胞DNA甲基化的影响

目的:探讨DNA甲基化在五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)抗Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病中的作用及机制。方法:MTT法检测细胞存活率;Real-time PCR检测细胞中DNMT1和DNMT3A的mRNA表达;Western blot检测细胞中DNMT1和DNMT3A的蛋白含量。结果:Sch B对Aβ_(1-42)损伤的SH-SY5Y细胞具有明显改善作用,无论在细胞形态还是活力上均发生显著变化;Real-time PCR及蛋白印迹的结果显示,AD细胞模型组DNMT3A及DNMT1的mRNA和蛋白表达量均明显降低,经Sch B治疗后,各剂量给药组DNMT3A和DNMT1的mRNA和蛋白表达量显著增加。结论:Sch B能够有效抑制Aβ_(1-42)对SH-SY5Y细胞的损伤,且这可能与DNA甲基化有关。     

鸢尾苷元通过GSK-3β/Nrf2信号通路减轻Aβ1-42诱导的 SH-SY5Y细胞损伤

目的：探讨鸢尾苷元对β淀粉样蛋白(Aβ)_1-42诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其潜在机制。方法：以Aβ_1-42诱导人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y建立阿尔茨海默病(AD)神经元损伤模型,MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;相关试剂盒检测LDH、Caspase-3、氧化应激和GSK-3β水平;免疫荧光法检测4-HNE表达;PDB数据库和分子对接预测鸢尾苷元和GSK-3β的结合;Western Blot分析凋亡和GSK-3β/Nrf2通路相关蛋白表达。结果：鸢尾苷元可呈浓度依赖性缓解Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞活力损伤、凋亡及氧化应激,并可通过靶向GSK-3β从而调控GSK-3β/Nrf2信号。结论：鸢尾苷元可通过调控GSK-3β/Nrf2通路进而抑制Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤。     

芍药苷对PINK1-Parkin介导的线粒体自噬在H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的影响

目的观察芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞损伤中线粒体自噬的影响,探讨其相关作用机制。方法采用250μmol/L H2O2诱导SH-SY5Y细胞24 h构建细胞损伤模型。实验细胞分为空白组、模型组和芍药苷低、中、高剂量组。采用MTT法检测细胞存活率,JC-1线粒体膜电位荧光探针检测线粒体膜电位,TUNEL染色检测细胞凋亡率,Western blot检测PINK1、Parkin、LC3Ⅱ和p62蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组细胞存活率下降,线粒体膜电位下降,细胞凋亡率上升,PINK1、LC3Ⅱ和p62蛋白表达升高,Parkin蛋白表达无明显变化;与模型组比较,芍药苷低、中、高剂量组细胞线粒体膜电位上调,细胞凋亡率下降,PINK1、LC3Ⅱ和p62蛋白表达降低,Parkin蛋白表达升高。结论芍药苷可显著降低H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其机制可能与调控PINK1-Parkin介导的线粒体自噬途径相关。     

基于蛋白质组学研究葛根素逆转Aβ_(1-42)损伤SH-SY5Y细胞的机制

葛根素具有逆转β-淀粉样蛋白(amyloidβpeptide,Aβ)诱导的神经损伤、抑制神经元凋亡的抗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)活性,然而,其潜在药效机制依然有待进一步的研究。AD的发生发展是由于体内多个代谢环节发生变化而导致平衡的破坏,而葛根素可能作用于多靶点、多代谢过程来达到治疗目的,如何尽可能全面了解其作用机制,定量蛋白质组学分析提供了新的选择。该研究采用Aβ_(1-42)诱导SH-SY5Y细胞建立AD细胞模型,并通过Aβ免疫荧光检测发现葛根素干预后Aβ显著减少。利用Label-free非标记定量技术,并基于生物信息学分析结果采用Western blot检测,来进一步探究葛根素逆转Aβ_(1-42)损伤SH-SY5Y细胞的机制。结果表明,大部分差异蛋白与cellular component organization or biogenesis、cellular component organization、cellular component biogenesis等生物过程相关,并主要参与pathogenic Escherichia coli infection、m TOR signaling pathway、regulation of autophagy、regulation of actin cytoskeleton、spliceosome、hepatocellular carcinoma、tight junction、non-small cell lung cancer、apoptosis、gap junction等P排在前10的通路中。Annexin V/PI流式细胞仪以及TUNEL检测结果显示,葛根素干预后Aβ显著减少,凋亡率显著下降;Western blot检测发现自噬相关蛋白LC3Ⅱ蛋白表达水平在Aβ诱导后上调,其上调程度在葛根素干预组出现了进一步的增强;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值在各组间趋势与LC3Ⅱ蛋白表达水平相同;p62蛋白的表达水平在对照组、AD模型组及葛根素干预组依次降低。蛋白互作网络分析表明,CAP1与TUBA1B、HSP90AB2P、DNM1L、TUBA1A、ERK1/2之间的功能存在相关性,其中CAP1与ERK1/2的相关性最高。Western blot检测发现,葛根素干预后p-ERK1/2、Bax、CAP1的表达显著下调,而Bcl-2蛋白的表达水平显著上调。因此,葛根素可能在细胞内多个位置,通过多个生物学过程及通路的共同作用来改善Aβ_(1-42)对SH-SY5Y细胞的损伤,其中CAP1或许扮演着重要角色。     

参知健脑方组分对淀粉样β蛋白β25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探讨SZJ对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用机制。方法:以Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率,应用Western blot检测Aβ25-35以及SZJ/APP17肽对SH-SY5Y细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:25μmol/L的Aβ25-35减低SH-SY5Y细胞存活率,SZJ/APP17肽预处理24h可提高SH-SY5Y细胞存活率,相同浓度Aβ25-35 SZJ预处理组与非处理组比较差异显著(P<0.05);25μmol/L Aβ25-35处理的SH-SY5Y细胞Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Caspase-3的表达增高,SZJ/APP17肽预处理能抑制其表达升高,与非预处理组比较差异显著(P<0.05)。结论:SZJ可对抗Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的毒性作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达,促进Bcl-2的表达有关。     

女贞苷对Aβ42诱导神经细胞凋亡及相关蛋白NFκB、Bcl2变化的影响

目的：探讨女贞苷对Aβ42诱导神经细胞凋亡及相关蛋白NF-κB、Bcl-2变化的影响及其相关机制。方法：在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞上,女贞苷梯度（50 μM、100 μM）预保护12小时后,加入浓度为15 μM的Aβ42诱导损伤12小时。MTT法测定终点细胞存活率, Western blot法检测NF-ΚB,Bcl-2的表达变化。结果： 50 μM、100 μM女贞苷可减少Aβ42引起SH-SY5Y细胞的凋亡。Western blot法检测女贞苷组NF-ΚB的蛋白表达较模型组来说减少（P﹤0.01）,抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达相对于模型组明显增加（P﹤0.01）。 结论：表明女贞苷可提高Aβ42诱导损伤的SH-SY5Y的细胞存活率,其可能机制为女贞苷抑制NF-ΚB的激活和增加抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,从而达到对细胞的保护作用。     

补脑软胶囊对Aβ_(1-42)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的:研究补脑软胶囊对Aβ1-42诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用。方法:建立β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导SH-SY5Y细胞损伤模型,采用PBS溶解的补脑软胶囊内容物干预24h,采用CCK-8法测定细胞存活率,在Hochest33258染色荧光显微镜下观察SH-SY5Y细胞凋亡情况。结果:SHSY5Y细胞经Aβ1-42诱导损伤后采用补脑软胶囊干预24h,与模型组相比,用药组细胞突触结构消失减少,贴壁状态明显改善,提高了细胞存活率;Hoechst33258染色结果显示,对照组细胞呈现弥散均匀的弱荧光,而Aβ1-42模型组细胞核出现固缩形态和颗粒状荧光,补脑软胶囊干预后可明显减少细胞颗粒状荧光及固缩形态,提示补脑软胶囊可有效抑制Aβ1-42引起的细胞凋亡。结论:补脑软胶囊对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有一定的保护作用。     

地黄饮子对β淀粉样蛋白_(1-42)致SH-SY5Y细胞线粒体损伤及细胞凋亡的影响

目的探讨地黄饮子药物血清对β淀粉样蛋白(Aβ)1-42致SH-SY5Y细胞线粒体损伤及细胞凋亡的保护作用机制。方法雄性SD大鼠以成人临床用药量20倍剂量地黄饮子灌胃给药,连续7 d,提取大鼠血清灭活后,制备药物血清。SH-SY5Y细胞采用5μmol/L Aβ1-42及0、1.25%、2.5%、5%、10%(V/V)等浓度药物血清共孵育。MTT法检测细胞存活率,PI/Annexin V双染流式细胞术分析细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax表达,ELISA检测caspase-3、caspase-9酶活性,JC-1法测定线粒体膜电位。结果地黄饮子药物血清可显著提高Aβ1-42损伤SH-SY5Y细胞的存活率,减少细胞凋亡,上调抗凋亡蛋白Bcl-2和下调促凋亡蛋白Bax表达,抑制Aβ1-42诱导caspase-3和caspase-9的激活,提高线粒体膜电位。结论地黄饮子药物血清通过保护Aβ1-42导致的线粒体损伤,抑制依赖线粒体的细胞凋亡通路激活,减少细胞凋亡,提高细胞存活率。     

五味子醇甲对Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞的RAGE-ROS-凋亡通路的影响

目的探讨五味子醇甲(Schisandrin,SCH)对Aβ1-42诱导SH-SY5Y的RAGE/ROS/凋亡通路的影响。方法MTT法检测control组、SCH高中低剂量组的细胞活力,探讨SCH高中低剂量组对SH-SY5Y细胞的保护作用。MTT法检测control组、Aβ组、Vitamin E组及SCH高中低剂量组细胞活力、双染法观察细胞凋亡和DHE染色法检测ROS含量,探讨SCH对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y的细胞损伤的保护作用。Western-blot法检测control组、Aβ组、SCH组RAGE蛋白,探讨SCH对Aβ1-42诱导SH-SY5Y的RAGE影响。结果与control组比较,SCH各剂量组细胞活力均显著增强(P<0.01)。与Aβ组比较,各给药组细胞活力均明显增强(P<0.01)和细胞凋亡率均明显下降(P<0.01);各给药组检测ROS的荧光强度均减弱(P<0.01),SCH(5.0μg/mL)组RAGE蛋白表达降低,有显著性差异(P<0.05)。结论SCH防治阿尔茨海默病的抗氧化作用机制可能与降低ROS含量、细胞凋亡率和下调RAGE蛋白表达有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的三七总皂苷调控自噬抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制研究

目的探讨三七总皂苷(PNS)能否通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬从而减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制。方法将H9c2细胞分为正常组、缺氧/复氧(A/R)组、A/R+PNS组、A/R+PNS+雷帕霉素(Rapa)组、A/R+Rapa组、A/R+羟氯喹(HCQ)组、A/R+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。通过缺氧6 h、复氧2 h建立H9c2细胞A/R模型。CCK-8法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞损伤,Western blot检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白PI3K、Akt、m TOR的表达,荧光法观察细胞自噬流。结果与正常组比较,A/R组H9c2细胞存活率明显下降,细胞损伤率明显升高(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P0.05),自噬体和自噬溶酶体数量显著增加,自噬流显著增强(P0.05);与A/R组比较,用PNS预处理后,H9c2细胞存活率明显上升,细胞损伤率明显降低(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低(P0.05),p62蛋白表达明显升高,与自噬抑制剂HCQ、3-MA作用相似,荧光结果显示,PNS对自噬流有明显抑制作用(P0.05);PNS预处理后p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显升高(P0.05)。结论 PNS能有效减轻H9c2细胞A/R损伤,其机制与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而抑制自噬流相关。     

艾灸对类风湿性关节炎大鼠滑膜组织自噬相关分子表达的影响

目的:观察艾灸对类风湿性关节炎(RA)大鼠滑膜组织中自噬相关基因(Atg)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1(ULK1)、Beclin-1和微管相关蛋白轻链3(LC3)表达及滑膜细胞超微结构的影响,探讨艾灸通过细胞自噬途径发挥抗炎和调节细胞增殖作用的机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、香烟灸组和药物组,每组8只。采用风、寒、湿环境因素结合左后足跖皮下注射完全弗氏佐剂建立RA模型。艾灸组使用直径0.9 cm的艾条对"足三里"(左侧)施灸,施灸距离皮肤2 cm,每日1次,每穴每次灸20 min,共灸15 d;香烟灸组处理方法同艾灸组,用直径0.8 cm普通卷烟代替艾条;药物组予以雷公藤多苷片混悬液灌胃(0.8 mg/100 g),每日1次,连续给药15 d。用足跖容积测量仪测量各组大鼠左后肢足跖容积,透射电镜观察滑膜细胞超微结构,荧光定量PCR法检测滑膜组织Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA的表达,Western blot法检测滑膜组织LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠左后肢足跖容积增加(P0.01),滑膜组织Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均显著降低(P0.01)。与模型组比较,艾灸组和药物组大鼠足跖关节容积均显著降低(P0.01),Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均显著升高(P0.01);香烟灸组Atg3、Atg12、ULK1 mRNA表达显著增加(P0.05,P0.01)。与艾灸组比较,药物组、香烟灸组大鼠左后肢足跖关节容积均增加(P0.05,P0.01),香烟灸组Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均降低(P0.01,P0.05),药物组Atg3、ULK1 mRNA表达显著升高(P0.01)。与香烟灸组比较,药物组左后肢足跖关节容积显著降低(P0.01),Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均显著升高(P0.01)。与正常组比较,模型组滑膜细胞损伤明显,出现病理性改变;与模型组比较,艾灸组、药物组和香烟灸组均有不同程度缓解。结论:RA模型大鼠关节滑膜细胞的自噬水平低于正常大鼠,艾灸和雷公藤多苷灌胃干预能改善关节肿胀和滑膜细胞损伤,增强其自噬水平,且艾灸的消肿作用强于雷公藤多苷。艾灸可能通过提高自噬水平发挥修复RA滑膜细胞损伤的作用。     

梓醇对纤维状Aβ1-42诱导的bEnd.3细胞凋亡及过度自噬的影响

目的:观察梓醇对纤维状β-淀粉样蛋白(amyliod-beta protein,Aβ_(1-42))诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(b End.3)损伤的保护作用,并探讨其保护作用机制。方法:将b End.3细胞分为溶剂组,模型组(Aβ_(1-42)20μmol·L~(-1)),梓醇低、中、高浓度组(Aβ_(1-42)20μmol·L~(-1)+梓醇50,200,500μmol·L~(-1));噻唑蓝(MTT)比色法检测梓醇及其对Aβ_(1-42)诱导的b End.3细胞活性的影响;Hoechst33258染色法检测梓醇对Aβ_(1-42)诱导的b End.3细胞凋亡情况的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬及凋亡相关蛋白(Beclin~(-1),LC3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞色素-C(cytochrome-C),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及切割活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)的表达水平。结果:MTT显示,梓醇对b End.3细胞无毒副作用;MTT与Hoechst33258染色结果显示,与模型组比较,梓醇低、中、高剂量组能明显提高b End.3细胞活性,抑制Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞凋亡(P0.05);Western blot显示,与模型组比较,梓醇预处理后,可明显降低Bax/Bcl-2,cytochrome-C/β-actin,cleaved Caspase-3/Caspase-3,Beclin~(-1)/β-actin,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(P0.05)。结论:梓醇可能通过抑制Aβ_(1-42)诱导的b End.3细胞凋亡及过度自噬发挥其神经保护作用。     

人参皂苷Rg1对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞自噬性死亡的保护作用

目的:观察人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白(beta-Amyliod,Aβ1-42)诱导PC12细胞自噬性死亡的作用,试探究其神经保护机制。方法:将PC12细胞分为对照组、Aβ组和Aβ+Rg1组。Aβ组细胞用Aβ1-42(10μmol/L)处理24 h;Aβ+Rg1组细胞分别用12.5、25、50μmol/L Rg1预处理24 h后,加入Aβ1-42(10μmol/L)继续培养24 h。采用MTT法测定各组细胞活力,免疫荧光染色法检测细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达变化,Western blot法检测LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达变化。结果:对照组比较,Aβ组细胞活力显著下降(P0.01);与模型组比较,Rg1各剂量组细胞活力显著高于Aβ组(P0.01)。与对照组比较,Aβ组LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达显著上升(P0.01);与模型组比较,Rg1各剂量组LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达显著低于Aβ组(P0.01)。结论:人参皂苷Rg1可能通过抑制Aβ诱导的细胞自噬性死亡发挥神经保护作用。     

六味地黄丸含药血清对Aβ诱导SH-SY5Y细胞的自噬影响及机制研究＊

目的 研究六味地黄丸含药血清对Aβ诱导SH-SY5Y细胞的自噬影响及其机制，探讨阿尔茨海默病的病理机制及补肾填精法的作用机制。方法 30只大鼠随机分成对照组和六味地黄丸组两组，分别予以等量的双蒸水和含六味地黄丸粉末水溶液进行灌胃，末次灌胃结束后取血并分离血清备用。将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组和药物组，对照组和模型组给予含空白血清的完全培养液，药物组给予含含药血清的完全培养液，模型组和药物组加入Aβ1-42寡聚体，培养48 h。应用CCK-8法对各组进行细胞增殖率分析；免疫荧光法分析各组细胞内Aβ沉积情况；Western Blot法检测各组细胞BACE1、p62、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达情况。结果 CCK-8结果显示，与对照组相比，模型组细胞增殖率显著降低（P<0.01）；与模型组相比，药物组细胞增殖率显著增高（P<0.01）。与对照组相比，模型组细胞内Aβ的沉积显著增加（P<0.01）；与模型组相比，药物组细胞内的Aβ沉积显著减少（P<0.01）。Western Blot结果显示，与对照组相比，模型组细胞的BACE1、Beclin1的蛋白表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值显著升高（P<0.01），p62的蛋白表达量显著降低（P<0.01）；与模型组相比，药物组细胞的Beclin1的蛋白表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值显著升高（P<0.01），BACE1和p62的蛋白表达量显著降低（P<0.01）。结论 六味地黄丸含药血清可以增加Aβ诱导的SH-SY5Y细胞自噬相关基因的表达，上调自噬水平，减轻细胞损伤，对细胞具有明显的保护作用。     

氧化苦参碱对Aβ_(1-42)诱导原代星形胶质细胞的影响

目的:探讨氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对Aβ_(1-42)诱导的原代星形胶质细胞的影响。方法:采用原代星形胶质细胞模型,随机将细胞分为正常对照组、模型组(Aβ_(1-42)30μmol/L)及OMT低(10μg/m L)、中(100μg/m L)、高(1 000μg/m L)浓度组。应用MTT比色法检测OMT对Aβ_(1-42)诱导原代细胞存活率的影响;应用ELISA试剂盒,检测细胞培养液中脑源性神经营养因子(BDNF)、神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量;应用Western blot法测定营养因子的特异性受体Trk B、Trk A、RET及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果:OMT可呈剂量依赖的提高原代星形胶质细胞的存活率(P0.05)。各浓度OMT均能提高营养因子分泌水平,抑制促炎因子的分泌,并呈剂量依赖性的上调Aβ_(1-42)诱导后原代星形胶质细胞Trk B、Trk A、RET、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达。结论:OMT能缓解Aβ_(1-42)诱导原代星形胶质细胞的损伤,促进营养因子分泌,其机制可能与促进营养因子受体Trk B、Trk A、RET蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达并抑制凋亡蛋白Bax和促炎因子水平有关。     

黄芪甲苷对Aβ_(1-42)诱导的体外血脑屏障模型损伤的影响及机制探究

目的探究黄芪甲苷对纤维状Aβ_(1-42)诱导的体外血脑屏障(BBB)模型损伤的影响及可能机制。方法制备Aβ_(1-42)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞b End.3和原代大鼠星形胶质细胞As非接触式共培养BBB模型,分为对照组、模型组(Aβ_(1-42)30μmol/L)及黄芪甲苷低、高剂量(50、200μmol/L)组;利用噻唑蓝(MTT)法检测黄芪甲苷对Aβ_(1-42)诱导的b End.3细胞活力的影响;通过检测荧光素钠透过体外BBB模型的量鉴定BBB的通透性;Western blotting法检测细胞凋亡执行蛋白半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)、活化的半胱天冬蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的表达水平以及BBB内皮细胞间相关连接蛋白细胞质透明带蛋白-1(ZO-1)、Claudin-5、Occludin的表达水平。结果 MTT结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷低、高剂量组均能显著提高b End.3细胞活性(P0.001),且保护作用与黄芪甲苷浓度呈正相关;荧光素钠通透性实验结果显示,与模型组相比较,黄芪甲苷预处理可显著降低BBB的通透性(P0.001)。Western blotting结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷预处理后,cleaved Caspase-3/Caspase-3显著降低,ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达水平显著增加(P0.001)。结论黄芪甲苷可能是通过抑制Aβ_(1-42)诱导的脑微血管内皮细胞b End.3的凋亡及增加其连接蛋白表达而发挥BBB保护作用。     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠Beclin1/PI3K-AKT-mTor的影响

目的观察佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜中自噬相关基因5、7、12(Atg5,7,12)mRNA、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬标志物Beclin1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶向蛋白(m Tor)及血清细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的表达水平变化及新风胶囊对其的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、西药组(来氟米特,5.0 mg/kg)和中药组(新风胶囊,3.0 g/kg),每组12只。干预30天后,观察各组大鼠体质量、足趾肿胀度(E%)、关节炎指数(AI)及踝关节病理及超微结构变化;检测大鼠滑膜中Atg5、7、12 mRNA表达;检测滑膜LC3-Ⅱ、Beclin1、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达;检测大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量。结果与正常组比较,模型组E%、AI、IL-1β、TNF-α升高,体重、IL-4、IL-10、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达降低(P0.01,P0.05),PI3K、AKT、m Tor蛋白表达升高(P0.01)。与模型组比较,两个给药组E%、AI、IL-1β、TNF-α、Atg12 mRNA、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达降低(P0.01,P0.05),IL-4、IL-10、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达升高(P0.01,P0.05);西药组Atg5降低(P0.01),Atg7 mRNA升高(P0.05)。与西药组比较,中药组体重、IL-4、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、PI3K、m Tor蛋白表达升高(P0.01,P0.05)。结论AA大鼠滑膜细胞自噬水平下降,导致滑膜细胞的过度增生,引起关节肿胀,致炎因子上升,抑炎因子下降,引起关节的炎症反应。中药新风胶囊可以改善关节炎指数、足趾肿胀度,改善滑膜自噬相关基因及蛋白表达。     

基于ROS/GSK-3β信号通路研究淫羊藿次苷Ⅱ对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨淫羊藿次苷Ⅱ对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法:以过氧化氢损伤SH-SY5Y细胞建立氧化损伤模型,以不同浓度淫羊藿次苷Ⅱ(12.5、25和50μmol/L)进行干预。采用MTT法检测细胞活力,采用DCFH-DA检测ROS的水平,TUNEL法和PI染色检测细胞凋亡,免疫印迹实验检测细胞中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白表达。结果:不同浓度淫羊藿次苷Ⅱ(12.5、25和50μmol/L)能够抑制过氧化氢诱导的细胞死亡并呈浓度依赖性。模型组细胞氧化应激作用和凋亡率较对照组明显增强,给予淫羊藿次苷Ⅱ作用24 h后,能够显著降低活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量,升高超氧化物歧化酶(SOD)活力,抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡并上调p-ser9-GSK-3β的蛋白表达,下调p-tyr216-GSK-3β蛋白表达。结论:淫羊藿次苷Ⅱ能够抑制过氧化氢对SH-SY5Y细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞凋亡并调控ROS/GSK-3β信号通路有关。