MK-801对围生期缺氧缺血性损伤后脑细胞线粒体膜电势的影响

目的了解围生期缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑细胞线粒体膜电势(△Ψm)的变化及NMDA型谷氨酸受体拮抗剂MK-801对这一变化的影响。方法应用7日龄新生SD大鼠HIBD动物模型,将实验动物分为正常对照组(n=6),HIBD组(n=10)和HIBD+MK-801组(n=10)(MK-801于低氧处理前按0.3mg/kg剂量腹腔注射)。于缺氧缺血后立即断头处死动物,制成脑细胞悬液后,以罗丹明123(Rho123)标记、以流式细胞仪测定△Ψm的变化。结果围产期HIBD时双侧脑细胞△Ψm值均显著降低,差异具有显著性(P<0.05),以损伤侧(右侧)为甚,右侧脑细胞△Ψm由正常状态下的(18.93±0.74)MFL降至损伤后的(7.59±0.32)MFL,右:左△Ψm比值由正常状态下的1.06±0.05降至损伤后的0.80±0.06(降低了24.5%),差异具有显著性(P<0.05)。结论HIBD后脑细胞△Ψm明显降低,提示线粒体功能明显受损;MK-801可减轻这一变化,提示NMDA型谷氨酸受体拮抗剂可通过减轻线粒体功能受损程度治疗围产期缺氧缺血性脑损伤。     

缺氧缺血对新生大鼠及小鼠脑细胞线粒体膜电势的影响

目的 了解缺氧缺血(HI)对新生大鼠及新生小鼠脑细胞线粒体膜电势(△ψm)的影响.方法 7日龄SD大鼠和C57小鼠各160只,分为正常对照组和HIBD后0、l、3、4、8、12 h和24h组(各组n=20,其中10只测定海马、大脑皮质、丘脑部位的△ψm值),HIBD动物予以右颈总动脉分离结扎再置8%02低氧舱处理,以流式细胞仪测定△ψm,比较同一动物HI损伤侧(右侧,即A侧)与损伤对侧(B侧)之间△ψm的比值(即A、B△ψm比值)变化.结果 HI损伤后新生SD大鼠及C57小鼠脑细胞△ψm均呈现"降低-恢复-再降低-再恢复-再降低"的改变,新生SD大鼠A、B侧△ψm比值在HI后0、4、24h出现3次降低,分别为(0.80±0.17)、(0.70±0.22)、(0.71±0.13),新生C57小鼠的该比值在HI后0、24h出现2次降低,分别为(0.84±0.26)、(0.86±0.13);新生SD大鼠改变最明显的部位是大脑皮质区,其HI后0、4、24h的比值为(0.69±0.07)、(0.73±0.11)、(0.65±0.20),新生C57小鼠改变最明显的部位是海马回,其HI后0、4、24 h的比值为(0.71±0.16)、(0.71±0.21)、(0.76±0.20);新生SD大鼠和C57小鼠丘脑区的△ψm比值变化相对最轻.结论 HI导致的脑细胞线粒体功能降低有短时间恢复的可能,两种动物的△ψm改变有不同的时间规律和易损部位,提示针对不同部位的HIBD实验研究采用不同方法制备动物模型的可行性.     

NMDA受体拮抗剂MK-801对缺氧缺血性脑损伤保护作用的机制探讨(英文)

目的　NMDA型谷氨酸受体的激活在缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的病理生理过程中具有重要的作用。该研究探讨NMDA型谷氨酸受体拮抗剂MK 80 1对HIBD的保护机制。方法　 30只 7日龄SD大鼠随机分为正常对照组、HIBD组和HIBD +MK 80 1组 ,每组 1 0只 ,后两组大鼠结扎右颈总动脉后暴露于低氧环境制备HIBD模型 ,HIBD +MK 80 1组大鼠于低氧处理前腹腔注射MK 80 1 0 .3mg/kg。所有大鼠于HI后立即断头处死 ,制备脑单细胞悬液 ,以流式细胞仪测定脑细胞线粒体跨膜电势 (△Ψm)、以荧光扫描仪测定脑细胞内游离钙([Ca2 + ]i)水平。结果　与正常对照组相比 ,HIBD组大鼠双侧脑细胞△Ψm值及右 :左△Ψm比值均显著降低 ,[Ca2 + ]i显著升高 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ;MK 80 1 +HIBD组大鼠脑细胞右 :左侧△Ψm比值较HIBD组升高 ,其差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,但两组间脑细胞右 :左 [Ca2 + ]i的比值无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　MK 80 1对缺氧缺血性脑损伤的保护作用与其改善脑细胞线粒体功能有关 ,而与其对 [Ca2 + ]i水平的影响关系不大 ,其保护机制可能不是经过“NMDA受体 [Ca2 + ]i △Ψm”途径、而是通过“NMDA受体 其它 △Ψm”途经发挥作用。     

MK-801对新生大鼠脑缺氧缺血后Caspase-3激活及其对凋亡的影响

目的：探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801对新生大鼠缺氧缺血(HI)后半胱天冬酶-3(Caspase-3)激活及凋亡的影响。方法：7日龄新生大鼠在HI后即刻给予腹腔注射MK-801 0.5 mg/kg,在HI后24 h取脑制作脑组织连续切片进行微管相关蛋白 2(MAP-2),Caspase-3免疫组化染色及发夹寡核苷酸探针(Hairpin Probe, HPP)原位杂交,计算脑损伤面积及Caspase-3,HPP阳性细胞数。结果：①MK-801干预组脑损伤面积为(23±5)%,较生理盐水对照组(52±12)%明显降低,P<0.01;②MK-801干预组Caspase-3及HPP阳性细胞数(65±8)/高倍视野,(61.6±11.5)/高倍视野,与对照组(40±6.7)/高倍视野,(12.6±5.2)/高倍视野相比均明显减少,其中HPP阳性细胞数减少比Caspase-3阳性细胞数减少更明显。结论：MK-801能明显抑制Caspase-3的激活,减少神经元的凋亡,减轻缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的程度。     

高压氧对缺氧缺血1周内新生大鼠脑皮质细胞线粒体膜电势的影响

目的研究高压氧（HBO）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）1周内脑皮质细胞线粒体功能的影响,探讨HBO对HIBD可能的保护作用及其机制。方法新生SD大鼠360只分为正常对照组、HIBD组和HIBD+HBO组,每组120只。HIBD组和HIBD＋HBO组结扎左侧颈总动脉后暴露于8% O2＋92% N2低氧环境中2 h制备HIBD模型。HIBD+HBO组在缺氧缺血后立即予HBO干预（压力为2 ATA, 每次持续60 min,每日1次,连续7 d）,HIBD组不予HBO干预,正常对照组不予结扎左侧颈总动脉和HBO干预。以HIBD模型建立后设为缺氧缺血后0 h时点,3组于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d和7 d时点断头处死（各组各时点n=10）,取损伤侧脑皮质制备单细胞悬液,予细胞线粒体膜电势（ΔΨm）标记物罗丹明123（Rho123）孵育,用流式细胞仪检测Rho123的平均荧光强度（MFL）,并以该MFL值作为ΔΨm值。 结果①正常对照组脑皮质细胞ΔΨm值为（4.66±0.80）MFL,HIBD组各时点脑皮质细胞ΔΨm值均低于正常对照组相应时点,且最低为0 h时点［（2.85±0.56）MFL］,各时点差异均有统计学意义（P<0.05）;②HIBD组及HIBD+HBO组脑皮质细胞ΔΨm均呈现降低-恢复-再降低的变化规律,两组ΔΨm初次降低时间均为缺氧缺血后0 h时点,初次恢复时间均为缺氧缺血后2~12 h,再次降低的时间均为缺氧缺血后1~4 d,HIBD+HBO组ΔΨm的再次降低程度更明显且最低为缺氧缺血后3 d时点［（2.62±1.03）MFL］;③HIBD组脑皮质细胞ΔΨm在再次降低后未再回复,而HIBD+HBO组ΔΨm在再次降低后,于缺氧缺血后5 d时点后开始恢复,6和7 d时点ΔΨm值逐渐趋近但低于正常对照组水平,差异无统计学意义（P<0.05）。 结论HBO在HIBD后0 h至3 d内不能改善缺氧缺血损伤侧脑皮质细胞的线粒体功能,HIBO后过早开始HBO治疗可能导致受损脑皮质细胞的进一步损伤,但HBO可能在HIBD后5~7 d内可通过改善脑皮质线粒体功能促进HIBD受损细胞功能恢复。     

MK-801对新生大鼠高氧性肺损伤的保护作用

目的观察谷氨酸(Glu)的NMDA受体拮抗剂MK-801对新生大鼠高氧性肺损伤的影响,探讨Glu在高氧性肺损伤中的可能作用。方法出生12h内的SD新生大鼠随机分为:空气对照组、空气 MK-801组、高氧对照组及高氧 MK-801组。观察持续高氧暴露7d后各组肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞及中性粒细胞数、肺组织及BALF中一氧化氮(NO)含量的变化。结果MK-801可有效地抑制高氧所致新生大鼠肺W/D、BALF中白细胞和中性粒细胞、肺组织和BALF中NO含量的增高。结论MK-801可有效地减轻新生大鼠高氧性肺损伤,提示内源性Glu通过NMDA受体介导,促进NO的产生而加重肺损伤。     

氯氨酮对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的研究

氯氨酮是一种非竞争性N甲基D天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂,它能通过血脑屏障与NMDA型受体离子通道结合,阻断钙离子通道,在临床上是一种常用的诱导麻醉剂。竞争性或非竞争性NMDA型受体阻断剂能减轻缺氧缺血(hypoxia-ischemia,HI)所诱导的脑损伤。离体实验显示,氯氨酮对新生动物缺氧缺血性神经元损伤具有保护作用。2002年7月～2003年5月,我们对7日龄新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(1iypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的动物模型腹腔注射氯氨酮,观察其在HIBD后的神经保护作用,报告如下。     

延迟高压氧治疗对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的远期影响

目的　探讨延迟高压氧 (hyperbaricoxygen,HBO)治疗对缺氧缺血性脑损伤 (hypoxic-ischemicbraininjury,HIBD)新生大鼠的远期影响。方法　7日龄大鼠随机分为对照组(n=18,假手术处理)、HIBD组(n=17)和HBO组(n=17,制备HIBD模型后 48~72h开始 2个绝对大气压HBO治疗,稳压 30min/次,间隔 24h,连续 5次),以大鼠 37~41日龄的学习记忆功能 (Morris水迷宫实验 )和 42日龄的脑形态组织学(脑损伤程度、脑重量、海马CA1区存活神经元数、AchE纤维面积百分比和NOS神经元数)来判断干预效果。结果　HBO组、HIBD组的空间学习记忆功能严重不良,脑形态组织学也明显缺损。水迷宫平均逃逸潜伏期HBO组 [ (56±23)s]、HIBD组 [ (56±22)s]较对照组[ (23±16)s]延长(P<0 05);平台象限搜索时间HBO组[ (30±5)s]、HIBD组[ (29±6)s]较对照组[ (51±5)s]缩短 (P<0.05);平台象限搜索距离HBO组 [ (572±92)cm]、HIBD组 [ (548±92 )cm]较对照组[ (989±101)cm]缩短(P<0.05);左脑重量HBO组[ (598±46)mg]、HIBD组[ (601±59)mg]较对照组[ (984±18)mg]减轻 (P<0 05 );海马CA1区存活神经元数HBO组 [ ( 97±27 )个 /mm]、HIBD组[ (100±27)个 /mm]较对照组 [ ( 183±8 )个 /mm]减少 (P<0 05 );AchE纤维面积百分比HBO组 [ (18.4±2.2)% ]、     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的：研究神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用。方法：将新生7日龄SD大鼠40只随机分为NGF治疗组(n=16),对照组(n=16)和假手术组(n=8),缺氧缺血(HI)后即刻腹腔注射100 U NGF或等量生理盐水(假手术组不注射),然后观察NGF对HIBD模型鼠的体重增长、脑组织病理及超微结构改变的影响,并用TUNEL法原位标记DNA片段,观察NGF对HIBD后脑细胞凋亡的影响。结果：NGF治疗组体重增长(4.16±0.24) g明显高于对照组(2.86±0.17) g,(P<0.01);TUNEL检测结果,HIBD后24 h治疗组左侧海马和皮质凋亡细胞数(分别为199.75±19.61,182.75±19.12)明显低于对照组(分别为285.50±32.67,271.00±28.36)(P<0.01);HIBD后48 h治疗组左侧海马、皮质凋亡细胞数(分别为77.75±15.76,82.50±19.15)亦明显低于对照组(分别为106.50±16.96,122.75±16.56)(P<0.01)。结论：外源性NGF对HIBD后脑细胞凋亡可能具有一定的保护作用。     

NMDA受体介导戊二酸尿症Ⅰ型纹状体神经元损伤

目的探讨NMDA受体在戊二酸尿症Ⅰ型纹状体神经元兴奋性损伤中的作用。方法利用构建的特异性沉默戊二酰辅酶A脱氢酶(GCDH)慢病毒载体感染原代培养纹状体神经元结合高浓度赖氨酸培养构建GA1细胞模型。Western-Blot检测NMDA受体蛋白表达水平变化。NMDA受体拮抗剂MK-801预处理神经元,再行慢病毒及高浓度赖氨酸干预,MTT检测神经元活性及Hoechst3342检测神经元凋亡情况。结果与对照组比较,实验组的NR2B蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.001)。实验组、对照组以及MK-801预处理组三组间神经元活性和正常核比例的差异均有统计学意义(P0.01);两两比较发现,实验组神经元活性和正常核比例较对照组明显下降,MK-801预处理后神经元活性和正常核比例较实验组明显升高,但仍低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 NR2B受体介导戊二酸尿症Ⅰ型体内代谢累积物致纹状体神经元损伤。     

诱导型一氧化氮合酶和缺氧缺血脑损伤

缺氧缺血可导致严重的神经系统疾病,如脑卒中、新生儿缺氧缺血性脑病。诱导型一氧化氮合酶在缺氧、缺血过程中被诱导表达,产生过量一氧化氮,导致神经系统的炎症反应及神经元死亡,加重神经损伤。抑制诱导型一氧化氮合酶表达在体内体外实验及临床应用中显示了一定的神经保护作用。该文综述了诱导型一氧化氮合酶在中枢神经系统中的表达及与缺氧缺血脑损伤的相关性,展望了诱导型一氧化氮合酶抑制剂作为缺氧缺血脑损伤治疗策略的前景。     

缺氧缺血性脑病大鼠脑多巴胺含量的动态变化及病理观察

目的：探讨多巴胺（DA）在缺氧缺血性脑损伤（HIBD）中的变化规律，揭示HIBD中细胞形态变化及其死亡形式，为缺氧缺血性脑病（HIE）的发病机制提供实验和理论依据。方法：利用7日龄SD大鼠99只，随机分为对照组，假手术组和实验组，用高效液相－电化学检测法测定脑损伤后0min,30min,1h,3h,6h,9h,12h,24h,48h皮层、纹状体、脑干DNA含量的动态变化。光镜下观察组织的病理改变。结果：1．动物缺氧缺血（HI）后DA在30min即有明显上升，纹状体和皮层、脑干内DA含量分别在HI后6h,9h达高峰，之后缓慢下降。2．细胞病理改变；HI后3h时水肿，6h时有局灶性坏死，12h,24h及48h出现大量坏死的神经细胞。3．凋（APO）出现在细胞坏死之前，HI后3h APO细胞出现，6h后APO细胞明显增加。结论：1．新生鼠HI后早期脑细胞内DA含量即增高，6h,9h可达到最高水平，脑细胞损伤与DA含量有关。2．HI后脑细胞死亡有APO和坏死两种形式。     

磷酸蛋白聚糖在脑发育、脑损伤方面的研究进展

磷酸蛋白聚糖是中枢神经系统一种重要的硫酸软骨素蛋白聚糖,在脑发育期介导多巴胺能神经元迁移方面发挥了重要作用.在脑损伤后可抑制轴突再生,防止脑损伤再次发生.其核心蛋白氨基末端重组蛋白质P1可促进变性神经元死亡.     

Neonatal brain infections

Infections of the brain in the neonatal period differ considerably from infections in the older child, due to a variety of age-specific factors that are related not only to the child, but also to the mother, and to specific pathogenic organisms. It has been recognized that clinical and neurological signs are often non-specific, sometimes scarce, and seldom correlate with the extent of neuroimaging findings, thus warranting early imaging to ensure timely therapy and improved outcome.     

Hypoglycemic brain injury

Hypoglycemia frequently occurs in newborn infants who previously have suffered asphyxia, who are offspring of diabetic mothers, or who are low birthweight for gestational age (IUGR). Many infants who are hypoglycemic do not exhibit clinical manifestations, while others are symptomatic and at risk for the occurrence of permanent brain damage. This review emphasizes the clinical, neuropathologic, and neuro-imaging features of hypoglycemia in newborn infants, especially those who are symptomatic. Neurologic morbidity occurs particularly in those infants who have suffered severe, protracted, or recurrent symptomatic hypoglycemia. Experimental observations emphasize the resistance of the immature brain to the damaging effect of hypoglycemia; such resistance occurs as a consequence of compensatory increases in cerebral blood flow, lower energy requirements, higher endogenous carbohydrate stores, and an ability to incorporate and consume alternative organic substrates to spare glucose for energy production. Hypoglycemia combined with hypoxia-ischemia (asphyxia) is more deleterious to the immature brain than either condition alone.     

Childhood brain tumors

Primary malignant tumors of the central nervous system (CNS) account for about 16% of all childhood malignancies. These tumors are the second most common type of childhood cancer and the most frequent of the solid tumors. The small increase in incidence noted over the past two decades most likely represents advancements in diagnostic technologies rather than true changes in disease frequency, though this is controversial. CNS tumors are diverse, representing many histological types and arising in a variety of anatomic sites. The most common malignant tumors include astrocytomas (52%), medulloblastomas/primitive neuroectodermal tumors (PNETs) (21%), gliomas (19%), and ependymomas (9%). The current 5-year survival rate for all pediatric CNS tumors is 67%, but rates differ considerably among tumor types. Treatment modalities also differ according to histological type. Currently, about 25% of patients are treated with surgery alone, 40% undergo surgery plus radiation, and 30% are treated with surgery, radiation, and chemotherapy. Survivors of childhood brain tumors are at substantial risk for increased morbidity and late mortality. Five-year survivors of brain tumors are 13 times more likely to die than healthy age- and sex-matched peers. Disease recurrence remains the single most common cause of late deaths (70%). Neurological, neurocognitive, and endocrine disturbances are the most prevalent disabilities observed among long-term survivors of pediatric brain tumors.