甲型H1N1、季节性H1N1及H3N2亚型流感病毒的多重荧光RT-PCR方法的建立

目的构建一种可同时检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2亚型流感病毒的多重荧光RT-PCR方法。方法根据不同流感亚型HA与NA的差异,设计五对引物及五条探针,构建合适的检测体系,分析特异性、灵敏度、可重复性、仪器适用性,并将其与常用检测试剂盒进行比对。结果本研究成功构建多重荧光RT-PCR检测体系,能同时检出甲型H1N1、季节性H1N1及H3N2亚型流感病毒,检测灵敏度为101~102拷贝/μl,可重复性好(变异系数为0.47%~4.03%),比常用检测试剂具有更好的荧光值水平,可适用于多种常见的荧光定量PCR仪。结论本方法所构建检测流感亚型体系具有较好的特异性、灵敏度、可重复性、仪器适用性,适用于各基层疾控及医疗机构。     

甲型H1N1流感双重荧光PCR快速筛查方法的研究

目的 优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法.方法 根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针.通过改进反应条件与参数,优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法.结果 该方法敏感度高,特异性强,重复性好.应用该方法检测患者实际样品,结果与WHO推荐方法的检测结果一致;应用该法可在4 h内完成对样品中甲型H1N1流感的检验.结论 本研究优化的甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法可用于甲型H1N1流感的诊断.     

定量实时PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒

目的:对采集来的疑似甲型H1N1流感患者咽拭标本进行核酸检测,不断摸索快速检测流感的PCR方法。方法:实验方法按照WHO标准的实时PCR(Real-time PCR)检测法操作,选取343份疑似甲型H1N1流感咽拭子采用实时定量核酸检测和快速分型。结果:在343份咽拭子标本检测结果中,甲型H1N1流感病毒核酸阳性为52份,阳性率15.16%,乙型流感病毒阳性11份,甲3型流感病毒阳性13份,甲1型流感病毒未检出。结论:实时PCR技术操作方法简便、耗时短、特异性强、灵敏度高,是一种适合应用于甲型H1N1流感病毒可靠、快速诊断的检测方法。     

2009年海南省甲型H1N1流感病毒核酸检测结果

目的及时了解海南省2009年流感样病例及其密切接触者中甲型H1N1流感病毒感染情况。方法应用实时荧光定量PCR法对呼吸道鼻咽拭子标本中的流感病毒核酸进行定性检测。结果全年共检测哨点监测和爆发疫情标本1 148份,荧光定量PCR法检测结果：流感病毒A型核酸阳性为686份,B型核酸阳性为7份。流感样病例中流行型别以A型为主,占59.6%;A型中甲型H1N1流感病毒核酸阳性为500例,占72.9%（500/686）,其中学生占84.8%（424/500）。10月-11月份达到流行高峰。随机抽取30份核酸阳性标本进行核酸序列测定,27份为甲型H1N1流感病毒。结论 2009年海南省流感样病例中甲型H1N1流感病毒感染主要以学生为主,开展流感病毒核酸检测,有助于尽早了解流感样病例中流感病毒感染情况,为及时了解甲型H1N1流感疫情的动态变化以及制定科学有效的甲型H1N1流感防控策略提供可靠的实验室依据。     

甲型H1N1流感的检测

通过阐述甲型H1N1流感病毒的生物学特性以及标本采集和常用检测方法,以提高人们防范甲型H1N1流感病毒的意识,有利于该疾病的早期发现、早期诊断,防止该疾病的流行传播。     

荧光定量RT—PCR检测发热患者甲型H1N1流感效果

目的探讨荧光定量RT—PCR检测新型甲型H1N1流感在发热患者中的分布规律,为甲型H1N1流感疫情的防控提供参考。方法对发热门诊233例患者咽拭子标本进行荧光定量RT—PCR检测甲型H1N1流感病毒核酸。并对检测结果进行统计计算。结果甲型流感病毒检出率为51。5％;甲型H1N1流感病毒的检出率为14．2％;没有猪甲型流感病毒检出。结论方法灵敏度高、特异性强、检测时间短,能安全、及时、有效开展发热门诊甲型H1N1流感病例检测工作。     

流感病毒快速检测法对甲型H1N1流感的临床诊断价值

目的探讨流感病毒快速检测法对甲型H1N1流感的临床诊断应用价值。方法对河南省平顶山市疾病预防控制中心2011年9月～12月之间收治的40例流感患者采取流感病毒快速检测法进行检测(A组),同时采取聚合酶链式反应进行检测流感病毒(B组),观察两组的检查率、敏感性与特异性。结果 A组流感病毒阳性率为67.5%,B组流感病毒阳性率为62.5%,两组病毒阳性检测率比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组的假阳性表达率为15.0%(6/40),假阴性表达率为5.0%(2/40);而B组的假阳性表达率为10.0%(4/40),假阴性表达率为10.0%(4/40)。A组的敏感度为91.3%(21/23),特异性为64.7%(11/17);B组的敏感度为84.0%(21/25),特异性为73.3%(11/15),两组敏感度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采取流感病毒快速检测法在甲型H1N1流感的检测中具有较高的敏感性,能够满足临床中甲型H1N1流感的快速诊断,具有重要的临床诊断价值。     

检测甲型H1N1流感病毒富集方法的初步探索

目的探索甲型H1N1流感病毒的富集方法,提高流感病毒核酸检测的灵敏度。方法分别用ProteinA/G及H1N1特异性血清处理流感病毒样品,根据国家流感中心设计的H1N1亚型检测通用引物,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,扩增产物为527bp,来评价病毒的富集效果。结果两种富集方法均能提高检测灵敏度,用ProteinA/G富集处理后检测灵敏度可达10-6,用H1N1特异性血清沉淀富集处理后灵敏度为10-5。结论初步建立的富集甲型H1N1流感病毒方法,有效提高了流感病毒RT-PCR检测的灵敏度,可用于甲型H1N1流感病毒的检测。     

浅谈甲型H1N1流感

在人类繁衍发展的历史进程中,人与病原微生物的斗争总是周而复始,循环往复,但几乎每次都会以人类战胜病原微生物而告一段落,而后又会有新的病原微生物卷土重来,给人类造成一次又一次的灾难。2009年3月,一种新的流感病毒再次袭击人类,后经研究发现造成此次疫情的病毒株包含有猪流感、     

季节性流感病毒H1N1实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种快速定量检测季节性流感病毒H1N1核酸的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。方法选择季节性流感病毒H1N1的保守基因NP基因作为检测靶目标,应用Clustal W软件进行序列同源性比对分析,筛选出季节性流感病毒H1N1特异性的保守序列作为引物候选区域,然后应用Primer Express及PrimerPremier 5.0软件包对候选引物进行进一步配对及筛选,得到最优特异性检测引物。同时,由病毒全长cDNA扩增出NP基因,琼脂糖凝胶电泳检测NP基因的扩增情况并对目的条带进行切胶回收及纯化,对回收后的NP全长基因进行核酸浓度测定,并换算成拷贝数,作为定量标准品。结果应用ABI公司的Power SYBR Green PCR MasterMix及StepOne实时荧光定量PCR仪,该检测系统灵敏度可达102 copies/μL,不同梯度标准品间线性关系(R2)达0.999,斜率为-0.3433,扩增效率为95.572%,所有标准品均在83.2℃出现尖且窄的特异性熔解峰。结论利用该检测系统可以快速定量检测季节性流感病毒H1N1,灵敏度高,可用作基础及临床实验室对季节性流感病毒H1N1感染的辅助诊断方法和临床效果的监测手段,对实验操作者要求相对较低,具有实际的应用价值。     

我国研制出快速检测甲型H1N1流感病毒试剂盒

军事医学科学院军事兽医研究所近日研制成功能快速检测出甲型H1N1流感病毒的试剂盒——流感病毒RT-PCR检测试剂盒，能特异性检测H1、H3、H5、H7、H9亚型流感病毒，可对甲型H1N1流感病毒进行特异性分型检测。     

中西医结合防治甲型H1N1流感病毒的研究

甲型H1N1流感是传染性较强的传染性疾病,被世界卫生组织、中国卫生部列为乙类甲型传染病.根据相关新闻报道该病毒已传染多个国家和地区,尤以美国、日本传染病例最多.     

一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒

目的 建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术.方法 针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系.通过盲法实验与实时荧光RT-PCR进行比对来评价方法的准确性,并应用于临床评价方法的实用性和有效性.结果 琼脂糖凝胶电泳分析多重RT-PCR产物,结果显示目的扩增片段条带清晰明亮,没有非特异性产物出现,可见该方法扩增效率高,特异性强.50份样本的盲法实验结果显示两种方法检测结果完全一致,符合率为100%.结论 建立的多重RT-PCR方法能通过一次实验快速、准确地同时筛检A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒,是一项成本低廉、对流感的疫情监测和早期诊断具有实用价值的筛检技术.

Abstract：

Objective To developed a multiplex RT-PCR assay for simultaneous screening of type A, B and novel A (H1N1)influenza viruses. Methods Two pairs of universal primers in were designed for amplifying the M gene and NS gene of type A and B influenza viruses, respectively. A pair of specific primers of HA gene was designed to detect novel A (H1N1) influenza virus. A one-step method was used to establish the multiplex RT-PCR system. A blinded experiment was carried out to validate the accuracy of this assay in comparison with the results of real-time fluorescence RT-PCR. The clinical practicability and efficacy of this assay was also evaluated. Results The RT-PCR products were analyzed using agarose gel electrophoresis,which yielded distinct bands of the target fragments without non-specific reactions, suggesting the high efficiency and specificity of the multiplex RT-PCR. Blinded study of 50 samples demonstrated a concordance rate of 100%. Conclusion This multiplex RT-PCR assay allows one-step simultaneous detection of type A, B and novel A (H1N1) influenza viruses rapidly and accurately, and provides a valuable low-cost screening technique for influenza epidemic monitoring and early diagnosis.     

2009～2010年深圳市福田区甲型H1N1流感病毒监测分析

目的检测深圳市福田区2009-2010年流感监测样本,分析甲型H1N1流感病毒的流行病学特点。方法采用实时荧光定量（Real Time RT-PCR）进行核酸检测和型别鉴定,同时进行病毒分离和血凝实验。结果 2009年8月-2010年12月共检测467份咽拭子样品,核酸检测阳性129份,阳性率为27.62%;病毒分离毒株101株,阳性率为21.63%。结论在2009年8月份甲型H1N1流感开始流行并成为流行的优势毒株,并持续到2010年3月份;5～59年龄人群甲型H1N1流感病毒分离率较高,而5岁以下及≥60岁年龄组分离率反而较低。     

荧光PCR仪检测甲型H1N1流感病毒DNA结果分析

目的探讨一种甲型H1N1流感病毒的快速检测方法。方法对650名疑似甲型H1N1流感病例采集鼻拭子、咽拭子混合标本,采用胶体金现场快速诊断法和核酸检测分析。结果共检测甲型H1N1流感疑似病例650例,其中经PCR确诊的甲型H1N1流感病例120例。部分确诊病例经复核准确率达100%。结论荧光PCR检测甲型H1N1流感病毒快速、准确,值得推广。     

2009甲型H1N1流感病毒新进展

甲型猪源性流感病毒属正粘病毒科,其可引起猪、禽和人的上呼吸道感染。2009年3月在美国和墨西哥的流感样患者的呼吸道标本中检测出新的不能分型的甲型流感病毒,并经确认为甲型H1N1流感病毒（简称2009甲型H1N1流感病毒）。这种病毒在美国和墨西哥引起暴发流行,并蔓延到世界各地,引起一些感染者死亡。文中综述了2009甲型H1N1流感病毒在基因分型、抗原特征、传播特点、致病特点、治疗等方面与已知各流感病毒不同的特征。     

甲型H1N1流感病毒性肺炎呼吸衰竭危险因素分析

目的分析我院收治的46例甲型H1N1流感病毒性肺炎(甲流肺炎)患者的临床特点,探讨其发展为呼吸衰竭的危险因素。方法收集我院2009年10月至2010年1月收治的46例甲型H1N1流感病毒性肺炎患者的一般情况、症状、体征、实验室结果,治疗方案等资料,并分为呼吸衰竭组和非呼吸衰竭组。结果 14例甲流肺炎患者发生呼吸衰竭,其中1例自动出院。所有非呼吸衰竭患者痊愈。呼吸衰竭组与非呼吸衰竭组患者在呼吸困难(10例vs6例)、咯血(10例vs5例)、淋巴细胞减少(158±18)/μlvs(192±26)/μl、氧合指数(182±23)mmHgvs(426±45)mmHg、器官功能不全评分中位数(4vs1)、入院时胸片浸润影(2.3±1.3)vs(1.2±0.8)存在显著差异(P<0.01)。与非呼衰竭组相比,呼吸衰竭组患者住院中位时间长(26 dvs5 d,P=0.000 1)。多因素Logistic回归分析显示甲流肺炎患者发生呼吸衰竭与发病至首剂奥司他韦超过48 h,淋巴细胞计数≤600/μl,入院时SOFA评分≥4分,X线检查肺部浸润影≥75%相关。结论发病至首剂使用奥司他韦超过48 h,淋巴细胞计数≤600/μl,入院时SOFA评分≥4分,X线检查肺部浸润影≥75%是甲流肺炎发生呼吸衰竭的危险因素。     

江门市新会区居民甲型H1N1流感病毒抗体水平调查

目的了解新会区居民对甲型H1N1流感的免疫水平。方法采用多阶段分层随机抽样方法,三次分别在新会区的城镇和农村对不同年龄人群进行问卷调查并采集血清检测甲型H1N1流感病毒抗体。结果三轮调查共抽样480人,抗体阳性107人,阳性率为22.29%。不同年龄组中4~6和7~19岁阳性率分别为30.00%和31.77%,高于其他年龄组（χ2=26.75,P〈0.05）。疫苗接种组抗体阳性率高于未接种疫苗组。有症状和无症状者的抗体阳性分别为25.72%和18.83%,差异无统计学意义（χ2=3.47,P〉0.05）,抗体阳性者中42.06%没有出现过任何流感症状。结论新会区已经有22.29%人群具有甲型H1N1流感病毒抗体,人群中已经建立一定的免疫屏障。     

接种甲型H1N1流感疫苗后感染甲型H1N1流感31例临床分析

目的:了解接种甲型H1N1流感疫苗后感染甲型H1N1流感的临床表现特点.方法:回顾性分析2011年2月广西某中学一起甲型H1N1流感爆发31例临床资料,调查接种甲型H1N1流感疫苗情况.结果:31例均为学生,其中临床诊断病例26例,确诊病例5例.所有患者于发病前11个月～14个月均已接种甲型H1N1流感疫苗.1例有支气管哮喘病史.发热28例,流涕14例,鼻塞7例,咽部充血18例,咳嗽27例,乏力5例,肺部啰音1例.白细胞异常7例,其中＜4.0×109/L 5例,＞10.0×109/L 2例,最高19.71×109/L,淋巴细胞分类升高2例.心肌激酶升高3例.C-反应蛋白升高1例.CT两下肺少许斑点状模糊影1例.并发肺炎1例.予奥司他韦及中药治疗,并发肺炎合用抗生素,全部治愈.结论:接种甲型H1N1流感疫苗后仍然可以感染甲型H1N1流感,但临床症状尤其是头痛、全身酸痛、乏力等全身症状轻微.尽早使用奥司他韦预后良好.     

甲型H1N1流感20例

目的探讨甲型H1N1流感患者的临床特征,提高对该病的认识、治疗和预防。方法对20例甲型H1N1流感患者的临床特征进行分析。结果20例患者均表现为流感样症状,发热持续时间2～3d,临床症状相对较轻,未给予抗病毒治疗,临床以对症、支持治疗为主。结论掌握甲型H1N1流感患者的临床特征,及早发现、及早诊断、及早隔离,对轻型患者可采取家庭隔离的方法,可有效控制疾病的传播。