缺氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶基因在缺氧性肺动脉高压大鼠发病过程中的表达

背景:关于缺氧性肺动脉高压发病过程中缺氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶在肺动脉壁内的动态变化尚需探讨。目的:观察不同缺氧时间点肺动脉壁内缺氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶基因表达,探讨其在缺氧性肺动脉高压发病机制中的作用。设计:对比观察的动物实验。单位:南华大学附属第二医院呼吸内科。材料:选用健康雄性Wistar大鼠40只,清洁级,6～8周龄,体质量(220±10)g。按随机表法分为对照组(n=8)和缺氧组(n=32),其中缺氧组又分为缺氧后3,7,14,21d4个时间点进行观察,每个时间点8只。方法:实验于2004-08/2005-12在南华大学肿瘤研究所完成。缺氧组大鼠按李启芳报道的方法进行干预。对照组大鼠置于同一室内,除不缺氧外,余同缺氧组。按照观察时间点将大鼠麻醉后,右颈外静脉插入微导管,连接多导生理记录仪,检测大鼠肺动脉平均压。将大鼠处死取出心脏称量右心室、左室加室间隔的质量,以右室肥大指数反映右心室肥厚程度。取大鼠右上肺组织,进行苏木精-伊红染色和弹性纤维染色。用病理图像分析软件测定肺动脉管壁面积/管总面积、管腔面积/管总面积、肺细小动脉中膜平滑肌细胞密度、肺细小动脉中膜厚度作为肺小血管重塑指标。对肺小血管壁缺氧诱导因子1α,诱导型一氧化氮合酶进行原位杂交和免疫组织化学检测,以肺细小动脉管壁平均吸光度值作为mRNA表达和蛋白水平的相对含量。主要观察指标:①大鼠肺动脉平均压、右心室肥厚程度和肺小血管重塑指标的变化。②缺氧诱导因子1和诱导型一氧化氮合酶的表达及其与肺动脉平均压,肺血管重塑的关系。结果:共纳入Wistar大鼠40只全部进入结果分析。①缺氧7d时肺动脉平均压明显高于对照组(P<0.05),14d达到最高水平,之后维持于此水平。②缺氧14d右心室肥大指数高于对照组(P<0.05)。③缺氧7d肺小动脉管壁增厚,管腔变窄,肺动脉管壁面积/管总面积、管腔面积/管总面积与对照组比较,差异明显(P<0.05);缺氧14d可见肺小动脉中膜和肺细小动脉中膜平滑肌细胞密度增高,肺细小动脉中膜厚度明显增加(P<0.05)。21d管腔进一步变窄,平滑肌增生明显。④缺氧诱导因子1和诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达:对照组大鼠呈弱阳性表达;缺氧3d和7d缺氧诱导因子1αmRNA相对量无明显变化,14d时明显增高,此后维持于高水平。诱导型一氧化氮合酶mRNA在缺氧3d明显高于对照组,7d达到高峰,14d接近对照组水平,21d再次升高,但低于缺氧3d时。⑤缺氧诱导因子1α主要表达于血管内膜和中膜,而诱导型一氧化氮合酶表达涉及血管全层。诱导型一氧化氮合酶在对照组肺血管内膜和中膜均弱阳性表达,缺氧3d与对照组差异不明显,7d中膜、内膜表达明显,14d血管中膜增厚,表达增强。在血管外膜,对照组诱导型一氧化氮合酶为阴性,各缺氧组均阳性表达。⑥mPAP与肺血管重塑正相关(r=0.976,P<0.01),缺氧诱导因子1αmRNA与诱导型一氧化氮合酶蛋白正相关(r=0.927,P<0.05)。结论:缺氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶均在大鼠缺氧性肺动脉高压的发病过程中发挥作用,且缺氧诱导因子1α与诱导型一氧化氮合酶基因表达可能存在相互调控。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠模型转化生长因子表达及粉防己碱干预的研究

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型转化生长因子表达及粉防己碱的干预作用。方法:气管内注入少量内毒素与熏香烟复合法建立COPD大鼠模型,并分成正常对照组(Ⅰ组)、COPD疾病模型对照组(Ⅱ组)、COPD疾病模型(气虚型)+粉防己碱治疗组(Ⅲ组)、COPD疾病模型(阴虚型)+粉防己碱治疗组(Ⅳ)、COPD疾病模型(血瘀型)+粉防己碱治疗组(Ⅴ组),测定大鼠肺组织支气管黏膜转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。结果:Ⅰ组TGF-β1在支气管黏膜上皮呈弱阳性表达(+);Ⅱ组上述部位呈强阳性表达(+++);Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组TGF-β1在上述部位表达强度介于Ⅰ组和Ⅱ组之间。Ⅱ组TGF-β1相对含量为0.457±0.047,高于Ⅰ组的0.213±0.034,有显著差异(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组TGF-β1相对含量为0.250±0.019、0.270±0.028、0.242±0.034,低于Ⅱ组(P<0.01),Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组之间差异无显著性。结论:粉防己碱能减缓支气管平滑肌厚度,减少支气管肺组织中TGF-β1的表达,能抑制COPD的气道重塑形成。     

低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞中Kv2.1基因表达的变化

目的:探讨肺动脉平滑肌细胞门控钾离子通道Kv2.1基因在缺氧性肺动脉高压发病中的作用。方法:①实验于2003-04/2004-06在武汉大学人民医院胸心血管外科实验室完成。选用健康成年雄性普通级Wistar大鼠48只。随机将大鼠分为6组,分别为对照组、缺氧8h组及缺氧3,7,14和28d组,每组8只。将动物置于常压低氧仓,仓内注入流通氮氧混合气,调节仓内氧浓度保持在(10±5)%,将大鼠造成常压缺氧性肺动脉高压模型。对照组:不造成缺氧性肺动脉高压大鼠模型。缺氧8h组及缺氧3,7,14和28d组:分别将大鼠置于缺氧环境中8h,3,7,14和28d。②记录肺动脉压力波,计算肺动脉平均压。测定血浆中游离钾、钙离子浓度。应用全自动图像心肺血管分析软件测定肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及肺细小动脉中膜厚度。③对肺动脉平滑肌细胞进行染色及显色后,镜下观察肺动脉平滑肌细胞表面核抗原以及bcl-2抑凋亡因子表达。bcl-2抑凋亡因子表达:0为不表达,+为微弱表达,为中等阳性,为强阳性。④以图像分析系统(IBAS)对杂交点进行密度扫描,以经同样处理的β-actin基因mRNA表达量作为内参照,肺动脉平滑肌细胞Kv2.1基因mRNA表达以两者的积分吸光度(A值)的比值表示。⑤对数据进行方差分析处理,组间比较采用t检验。结果:大鼠48只均进入结果分析。①随着缺氧时间延长,大鼠平均肺动脉压、肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及肺细小动脉中膜厚度逐渐升高。各缺氧组大鼠平均肺动脉压明显高于对照组(P<0.01),缺氧3,7,14,28d组大鼠肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及肺细小动脉中膜厚度明显高于对照组(P<0.05～0.01)。②随着缺氧时间延长,大鼠血浆中游离K+浓度逐渐降低、Ca2+浓度逐渐升高。缺氧3,7,14,28d组大鼠血浆中游离K+浓度明显低于对照组(P<0.05～0.01),缺氧7,14,28d组大鼠血浆中游离Ca2+浓度明显高于对照组(P<0.05～0.01)。③随着缺氧时间延长,大鼠平滑肌细胞中增殖细胞核抗原阳性表达及bcl-2表达逐渐上升和增强。缺氧3,7,28d组大鼠平滑肌细胞中增殖细胞核抗原阳性表达明显高于对照组(P<0.05～0.01)。④随缺氧时间的延长,Kv2.1基因mRNA转录水平呈下降趋势,与内参照β-action基因mRNA的A值比值分别为0.94,0.90,0.64,0.36,0.26。结论:①Kv2.1基因在正常大鼠肺动脉平滑肌细胞上表达正常,而在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞上的表达则降低。②钾离子通道活性降低抑制细胞凋亡,并增加细胞中的钙离子浓度,从而导致血管重建,产生肺动脉高压。     

重型再生障碍性贫血患者Th3细胞、调节T细胞数量和转化生长因子β1的水平

目的测定重型再生障碍性贫血(SAA)患者外周血辅助性T细胞Ⅲ型(Th3)、CD+ CD25+调节T细胞(Tr)数量和血浆中转化生长因子β1(TGF-β1)水平,探索SAA患者细胞免疫耐受被打破的机制。方法用流式细胞术检测20例发病期和10例免疫抑制治疗(IST)后恢复期的SAA患者外周血表达TGF-β1的CD4+细胞(Th3)数量;用流式细胞术检测12例新发SAA患者、9例IST后未恢复和10例恢复期SAA患者的Tr数量,并与12名正常对照比较,分析其与CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞及CD3+CD4+／CD3+CD8+细胞比值的相关性;采用ELISA法检测25例SAA患者血浆中TGF-β1水平,分析其与Th3细胞、血小板计数的相关性。结果正常对照组Th3细胞、CD8+TGF-β1+细胞及Th3／CD8+TGF-β1+细胞比值分别为(5．10±0．91)％,(4．93±0．97)％、1．20±0．19;SAA发病组分别为(1．33±0．20)％,(1．72±0．24)％,1．00±0．25,Th3细胞、CD8+TGF-β1+细胞比例明显下降(P< 0．01和P<0．05);SAA恢复组分别为(2．19±0．21)％,(2．07±0．33)％,1．71±0．52,Th3细胞、CD8+ TGF-β1+细胞比例均较SAA发病组升高,但仍明显低于正常对照组(P值均<0．05);正常对照组Tr比例为(8．25±1．96)％;新发SAA组为(3．32±0．81)％,明显低于正常对照组;SAA治疗后未恢复组Tr为(7．09±1．84)％,较新发SAA组明显升高(P<0．05),与正常对照组差异无统计学意义;SAA恢复组Tr为(7．49±1．27)％,较新发SAA组明显升高(P<0．05),与正常对照组差异无统计学意义;SAA患者Tr与CD3+CD4+细胞、CD4+／CD8+细胞比值呈正相关(r=0．855,P<0．01:r=0．729,P< 0．01),而与CD3+CD8+细胞呈负相关(r=-0．488,P<0．05);正常对照组血浆TGF-β1水平为(11．06±0．49)μg／L,SAA组为(2．49±0．51)μg／L,较正常对照组明显下降(P<0．01);SAA组血浆TGF-β1水平与Th3细胞呈正相关(r=0．396,P<0．05),与血小板水平呈正相关(r=0．701,P<0．01)。结论SAA患者外周血Th3细胞、Tr数量和血浆中TGF-β1水平下降可能导致SAA患者细胞免疫耐受被打破。     

低强度激光照射对小鼠烫伤创面转化生长因子-β1和白细胞介素-1β基因表达的影响

目的观察低强度激光照射后烫伤小鼠创面的变化及其对小鼠创面炎症介导因子转化生长因子-β1（TGF-β1）和白细胞介素-1β（IL-1β）基因表达的影响。 方法将清洁级雄性BALB/c小鼠60只随机分为激光照射组与对照组,每组30只。2组小鼠均采用蒸汽烫伤造模。激光照射组小鼠行低强度氦氖激光照射烫伤创面,对照组治疗时间和疗程同激光照射组,但仪器处于电源关闭状态。2组小鼠均于烫伤后即刻和烫伤1、3、7和14d后计算创面愈合率,并取全层创面组织标本,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TGF-β1、IL-1β的基因表达。 结果烫伤7和14d后,激光照射组小鼠的创面愈合率分别为（51.48±5.89）%和（73.96±7.25）%,与对照组同时间点比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。烫伤1、3d后,激光照射组TGF-β1基因的表达显著增强,并于烫伤7d后达到峰值,上述3个时间点TGF-β1基因表达情况分别与对照组同时间点比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;烫伤14d后,激光照射组TGF-β1基因的表达显著低于对照组同时间点（P<0.05）。烫伤1和3d后,激光照射组IL-1β基因的表达显著降低,并于烫伤7d后降至最低,上述3个时间点IL-1β基因表达情况分别与对照组同时间点比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论低强度氦氖激光照射可以加速烫伤创面愈合,这可能与其调节烫伤创面TGF-β1和IL-1β因子表达相关。     

大鼠蛛网膜下腔出血后额叶脑组织转化生长因子β_1的表达

目的探讨蛛网膜下腔出血后大鼠额叶脑组织中转化生长因子β1表达的变化及其意义。方法枕大池2次注血法制备蛛网膜下腔出血模型。30只成年健康雄性SD大鼠,随机分为对照组(仅在蛛网膜下腔注入等量生理盐水,n=6)和SAH组(n=24),其中SAH组分别于第1、3、5、7天随机均分为4组(n=6)。通过HE染色光镜下观察基底动脉的病理学变化,测定血管腔内径,免疫组化法检测各组大鼠额叶脑组织中TGF-β1在不同时间点的表达。结果与对照组比较,SAH各组基底动脉内径明显减小(P<0.01);SAH1 d时额叶脑组织TGF-β1表达增加,3 d时达高峰,而5、7 d时低于1、3 d(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.01)。结论SAH后额叶脑组织中TGF-β1的表达发生了变化,并与CVS有关,提示TGF-β1参与了CVS的病理过程。     

The clinicopathological significance of transforming growth factor-β1, transforming growth factor-β1 receptor Ⅱ ,Smad4 and Smad7

Objective To investigate the clinicopathological significance of transforming growth factor-β1 (TGF-β1), transforming growth factor-β1 receptor Ⅱ (TGF-βRⅡ ), Smad4 and Smad7 protein expressions in gastric carcinomas. Methods 109 cases of gastric carcinomas,28 of high grade dysplasia,20 of low grade dysplasia,30 of chronic atrophic gastritis,29 of intestinal metaplasia, and 21 of normal gastric mucosa were selected for the detection of the expression level of TGF-β1,TGF-βRⅡ , Smad4 and Smad7 proteins by immunohistochemistry. Results The expression of TGF-β1,TGF-βRⅡ and Smad7 proteins in gastric carcinomas and dysplasia (high and low grade) were significantly higher than those in chronic atrophic gastritis, intestinal metaplasia and normal gastric mucosa (all P <0. 001 ) ,whereas the expression of Smad4 was significantly increased in high and low grade dysplasia (cytoplas-mic IS :4.89±2.38,5.80±1.54, respectively; nuclear IS: 3.89± 1.52,3.80±1.33, respectively), and decreased in gastric carcinomas (cytoplasmic IS:2.41±2.27,nuclear IS:2.02±2. 14) (P <0.001 ,P <0.001 ,respective-ly). Meanwhile,the expressions of TGF-β1,TGF-βRⅡ and Smad7 were higher in advanced gastric cancer (4.36± 2.66,3.05±1.93,4.84±3.06, respectively) than those in early gastric cancer ( 2.93±1.85,2. 17±1.87, 4. 14±2.46, respectively) ( P < 0.01, P < 0.05, P < 0. 05, respectively ) ; however the expression of Smad4 protein was much higher in early gastric cancer (P < 0. 001 ). The expression of Smad4 protein was significantly correlated with tumor size( P < 0.05 ), lymph node metastasis ( P < 0. 001 ), T stage ( P < 0. 001 ) and chnical stage ( P < 0.001) ,and the expressions of TGF-βRⅡ and Smad4 proteins were correlated with patients' 5-year survival rate (P<0.05 ,P < 0.01 ). TGF-β1 showed the positive correlation with TGF-βRⅡ and Smad7 (r1= 0.45 ,P <0. 05; r2 = 0.49, P <0. 05), but negative correlation with Smad4 ( r = - 0.21,P < 0.05 ). Conclusion TGF-β1, TGF-βR Ⅱ, Smad4 and Smad7 protein may play an important role in the carcinogenesis of gastric carcinoma,and smad4 is the key in TGF-β pathway. Also, the detection of these proteins expression can be a useful marker for predicting the gas-tile cancer invasion,metastasis and patients' prognosis.     

血液透析对转化生长因子β_1及补体调节蛋白CD59基因表达的影响

目的 研究不同透析膜对维持性血液透析(MHD)患者外周血转化生长因子β1及补体调节蛋白CD59活性表达的影响。方法 通过流式细胞术和酶联免疫吸附方法测定长期采用铜仿膜(CU)和聚砜膜(PSU)透析患者外周血TGF-β1水平和CD59活性表达。结果 MHD患者血浆TGF-β1水平明显增加(P<0.05),其中CU组为[(2.62±0.:18)ng/ml];PSU组为[(1.19±0.12)ng/ml],与正常对照组相比均有显著差异(P<0.01,P<0.05);而PSU组与CU组相比,外周血TGF-β1水平明显下降(P<0.05)。CD59在正常人外周血单个核细胞中无表达,而在尿毒症未透析组及血液透析组均有表达,其中未透析组表达较低,而血液透析组表达较高,CU膜血液透析组较PSU血液透析组表达要高(P<0.05)。经相关分析结果显示:CU组与PSU组内TGF-β1水平与CD59表达均呈现良好的相关性(r=0.6409与0.583,P<0.05)。结论 血液透析通过血液-透析膜间相互反应可活化补体,诱导外周血单个核细胞(PBMC)合成TGF-β1增多,异常增高的TGF-β1水平,则可上调CD59基因表达,抑制补体异常活化造成的细胞破坏,对机体具有代偿性保护意义。然而从生物相容性的角度看,不同透析膜如CU和PSU对MHD患者TGF-β1与CD59的影响有所不同,从细胞因子基因表达水平看,铜仿膜生物相容性较聚砜膜差。     

黄芪对糖尿病大鼠肾组织的保护作用

目的:探讨黄芪对糖尿病(DM)肾损害的保护作用机制。方法:建立2型DM模型,黄芪组给予5mL/(只·d)灌胃。12周测体重、血糖、微量白蛋白排泄率(UAE)、尿肌酐(Cr),处死大鼠,用PAS及Masson染色观察肾脏病理变化。用免疫组化方法检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad7的蛋白质表达。结果:与对照组相比,DM组大鼠血糖、UAE及肾重/体重比值、Ccr比值均显著上升(P<0.05/0.01),肾小球系膜及基底膜相对面积、肾间质纤维组织相对面积均显著增大(P<0.01),肾组织TGF-β1和Smad7的蛋白质表达均显著上调(P<0.05/0.01))。黄芪注射液治疗组,上述上调指标除血糖外都被显著抑制(P<0.05/0.01)。结论:黄芪注射液对2型DM大鼠肾组织有保护作用,其疗效可能与下调肾组织TGF-β1表达相关,使TGF-β1诱导的内源性Smad7产生减少,从而发挥抗纤维化作用。     

急性脑梗死患者血清白细胞介素-6和转化生长因子β1含量变化与神经功能缺损

目的：探讨白细胞介素-6(IL-6)和转化生长因子β1(TGF-β1)在脑梗死的发病过程中所起的作用、临床意义及二者的相关性。方法：采用双抗体夹心ELISA法对30例急性脑梗死患者在起病后第1，3，7，14天连续检测IL-6，TGF-β1浓度。结果：脑梗死组在病程1，3，7d3个时间点上血清IL-6水平[(55．91&;#177;23．74)，(10．33&;#177;1．61)，(9．29&;#177;1．68)ng／L]升高，与正常对照组(2．86&;#177;0．86)ng／L相比，差异有显著性意义(F=73，P&;lt;0．05)。TGF-β1水平减低，与正常对照组相比，差异有显著性意义(F=106，P&;lt;0．05)。至14d．血清IL-6(4．39&;#177;1．49)ng／L，TGF-β1(40．83&;#177;8．90)μg／L则均接近正常水平。脑梗死患者血清IL-6水平与梗死面积大小呈正相关(P&;lt;0．05)，而血清TGF-β1水平与梗死面积大小无关(P&;gt;0．05)。神经功能受损程度与血清IL-6水平呈正相关(P&;lt;0．05)。而与TGF-β1水平无关(P&;gt;0．05)。IL-6水平与TGF-β1水平无明显相关性(r=0．289，P&;gt;0．05)。结论：IL-6，TGF-β1与脑梗死的病理生理过程密切相关。IL-6浓度测定对判断脑梗死的病情严重程度具有一定意义。     

环氧合酶-2抑制剂对梗阻性肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子表达的影响

目的：探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对梗阻性肾病大鼠模型肾组织结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响及机制。方法：采用单侧输尿管结扎(UUO)建立梗阻性肾病模型,并随机分为模型组和治疗组,另设假手术组作对照。治疗组每日给予塞来昔布100mg／kg,模型组、假手术组每日给予等体积的生理盐水于造模前1d至造模后14d灌胃,分别于UUO后3d、7d、14d分批处死,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1、CTGF的基因表达,免疫组化技术检测TGF-β1、CTGF、α-SMA、FN的蛋白表达,放免法检测组织内cAMP的水平。结果：与假手术组相比,模型组TGF-β1、CTGF的基因表达显著上调,cAMP的水平下降(P<0．001)。塞来昔布对梗阻肾TGF-β1的表达无显著改变,但能升高组织内cAMP水平,抑制CTGF的表达,纤维化程度减轻。结论：在梗阻性肾病大鼠中TGF-β1、CTGF的表达均显著升高,选择性COX-2抑制剂通过升高组织内cAMP的水平来抑制TGF-β1的下游因子——CTGF的表达延缓肾间质纤维化。     

慢性气道阻塞性疾病的发病机制研究：转化生长因子β1对大鼠气道重塑的影响

目的：观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)对大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell，ASMC)增殖的影响。方法：ASMC取自1只健康雄性SD大鼠。应用体外培养的方法，加入不同浓度的TGF-β1，通过MTT法观察其对ASMC增殖的影响。实验分4组：对照组[20mL／L胎牛血清(FCS)／低糖Dulbecco最低必须培养液(DMEM)]，100mL／L FCS／DMEM组，10μg／L TGF-β1组和100μg／L TGF-β1组。结果：细胞培养第2天，MTT法检测的10μg／LTGF-β1组A值(O．36&;#177;0．043)和100μg／LTGF-β1组(0．37&;#177;0．050)明显高于对照组(0．126&;#177;0．052)(t=5．44，7．63，P&;lt;0．05)和100mL FCS／DMEM组(0．182&;#177;0．051)(t=5．97．5．88．P&;lt;0．05)。100mL FCS／DMEM组(0．38&;#177;0．034)于细胞培养第3天A值与对照组(0．20&;#177;0．035)比较增高(t=8．18，P&;lt;0．05)。镜下观察发现，10μg／L TGF-β1组和100μg／L TGF-β1组ASMC于培养第3天铺满96孔培养板，而100mL／L FCS／DMEM组细胞于第5天铺满培养板。结论：TGF-β1对气道平滑肌细胞的增殖具有明显的促进作用。     

慢性缺氧对内源性腺苷含量变化的影响

目的 观察内源性腺苷含量在慢性缺氧性肺动脉高压中的动态变化和可能作用。方法 50只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成对照组、缺氧7d、14d、21d、28d组，每组8只。测各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、右心室肥大指数（RVHI）、用HPLC法测定右心室心肌内源性腺苷含量。结果 缺氧7d后大鼠内源性腺苷含量升高，与对照组比较差异有显著性（P＜0.05），并随着缺氧时间的延长而增加。但14d与21d组间差异无显著性。缺氧性肺动脉高压、右心室肥大于缺氧7d后出现。结论 缺氧诱导内源性腺苷含量变化可能在大鼠缺氧性肺动脉高压中起重要作用。     

大鼠蛛网膜下腔出血后额叶脑组织转化生长因子β1的表达

目的探讨蛛网膜下腔出血后大鼠额叶脑组织中转化生长因子β1表达的变化及其意义。方法枕大池2次注血法制备蛛网膜下腔出血模型。30只成年健康雄性SD大鼠，随机分为对照组（仅在蛛网膜下腔注入等量生理盐水，n=6）和SAH组（n=24），其中SAH组分别于第1、3、5、7天随机均分为4组（n=6）。通过HE染色光镜下观察基底动脉的病理学变化，测定血管腔内径，免疫组化法检测各组大鼠额叶脑组织中TGF-β1在不同时间点的表达。结果与对照组比较，SAH各组基底动脉内径明显减小（P〈0．01）；SAH1d时额叶脑组织TGF-β1表达增加，3d时达高峰，而5、7d时低于1、3d（P〈0．01），但仍高于对照组（P〈0．01）。结论SAH后额叶脑组织中TGF-β1，的表达发生了变化，并与CVS有关，提示TGF—β1参与了CVS的病理过程。     

脂多糖诱导帕金森病模型中炎症因子的机制

目的:探讨脂多糖诱导帕金森病大鼠模型过程中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶等细胞毒性因子的作用。方法:实验于2003-07/2004-07在中山大学附属第一医院神经科实验室进行,取35只雄性SD大鼠随机分为4组:7,14,30d组,每组10只,对照组5只。对照组不做任何处理,3个不同时间点组立体定位注射脂多糖(20μg,质量浓度5g/L)入大鼠黑质。于注射后不同时间点观察大鼠行为学改变,并采用免疫组织化学及原位杂交等方法动态观察酪氨酸羟化酶神经元、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶等的表达。结果:29只动物进入结果分析。①行为学改变:脂多糖术后7d仅表现为轻度的旋转,每30min旋转(85±13)r,至14d时旋转次数增多,每30min旋转(121±17)r,30d时达高峰,每30min旋转(295±21)r。②7,14,30d组术侧黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数量较正常组明显下降(P<0.001),30d组下降达高峰;正常组仅有少量或无肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶的表达,术后7d各阳性神经元表达较正常组显著增多(P<0.05),术后14d表达至高峰,术后30d较14d明显下降但仍高于正常对照组,其中诱导型一氧化氮合酶阳性神经元表达于术后30d仍维持较高水平。③各组均检测到酪氨酸羟化酶mRNA表达,7,14,30d组表达     

转录因子MSX-1对人牙乳头间充质细胞增殖在牙胚发育中的意义

目的 观察体外培养的人牙乳头间充质细胞经转化生长因子β1(TGF-β1)作用下，肌节同源盒基因l(MSX-1)的表达变化，探讨MSX—l基因在牙胚发育中的意义。方法 第5代体外培养的人牙乳头间充质细胞经50μg／L的TGF-β1刺激后，MTT方法及流式细胞仪分析观察对照组、TGF-β1处理组细胞的增殖变化，原位杂交检测两组细胞中MSX基因扩增水平的变化。结果 实验组细胞培养3d细胞增殖为0．44&;#177;0．03，培养5d为0．53&;#177;0．05，培养7d为0．83&;#177;0．07，与对照组比较差异具有显著性意义(P&;lt;0．0l，t=6．603，6．562，6．052)。对照组G1期细胞为94．7％，S期细胞为4．0％，G2M期细胞为1．3％，实验组细胞中的G1期降低(83．8％)，S期升高(7．8％)，G2M期细胞升高(9．3％)(t=5．327，P&;lt;0．01)，反映细胞增殖活力的增殖指数PrI值(S+G2M)对照组为5．3，实验组为17．1两者相比有显著差异(t=7．327，P&;lt;0．01)。结论 MSX基因有可能在TGF-β1的调控下表达，对人牙乳头间充质细胞的增殖分化可能具有重要的调节作用。     

和胃接骨胶囊对家兔骨折愈合中转化生长因子-β1表达的影响

目的:观察和胃接骨胶囊对家兔骨折愈合过程中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达变化的影响,探讨其促进骨折愈合的机制.方法:将48只家兔制成单侧桡骨中上1/3标准骨折模型,随机分为3组:实验用药组给予和胃接骨胶囊1粒;阳性对照组给予麝香接骨丹1粒;空白对照组给予安慰剂1粒;均连用14 d.分别于术后7、14和28 d行X线摄片、骨折处组织学观察,免疫组化染色观察TGF-β1的表达.结果:7、14和28 d时实验用药组与空白对照组的TGF-β1表达差异均有显著性(P均＜0.01).7 d和14d时实验用药组与阳性对照组比较TGF-β1表达差异有显著性(P＜0.01和P＜0.05),28 d时实验用药组与阳性对照组比较差异无显著性(P＞0.05).X线骨骼片和组织学观察均显示实验用药组和阳性对照组效果优于空白对照组.结论:和胃接骨胶囊能明显促进骨折愈合过程中TGF-β1的表达.     

过氯酸铵致肺纤维化作用的研究

目的研究过氯酸铵(AP)致肺纤维化作用。方法 AP染毒大鼠肺泡巨噬细胞(AM)24 h, 取AM上清液培养肺成纤维细胞(FB),检测AM转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达水平及FB增殖活性、细胞内羟脯氨酸(Hyp)含量。采用气管内注入方式对大鼠进行AP染毒,3 d后处死,测定肺组织中TGF- β1 mRNA的表达。结果 AP低、高剂量组TGF-β1细胞阳性率和AP高剂量组TGF-β1光密度值均显著高于对照组(P<0．01)。各AP染毒组FB增殖活性和FB Hyp含量与对照组比较,差异无显著性(P>0．05)。AP 低、中、高剂量组肺组织TGF-β1mRNA表达水平均高于对照组(P<0．05或P<0．01)。结论 AP增加了 AM和肺组织TGF-β1表达,但尚未表现出致肺纤维化作用。     

转化生长因子-β_1在先天性心脏病伴肺动脉高压患者中的表达及意义

目的:研究转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与先天性心脏病肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)的形成及肺血管重建的关系。方法:将40例先天性心脏病患儿按其肺动脉收缩压分为中重度PH组12例、轻度PH组14例、无PH组14例;另选取10例非心脏疾患手术患者10例作为对照组。采用透射电镜及原位杂交法,观察各组患儿肺细小动脉超微结构、肺细小动脉转化生长因子-β1基因表达的变化。结果:(1)电镜下,中重度PH组肺细小动脉中膜平滑肌增生,外膜胶原纤维密集;轻度PH组肺细小动脉中膜平滑肌细胞和外膜胶原纤维增生轻于中重度PH组;无PH组肺细小动脉结构改变不明显。(2)原位杂交则显示中重度PH组、轻度PH组肺细小动脉TGF-β1平均吸光度值显著高于无PH组(P<0.01)。结论:TGF-β1可能参与了先天性心脏病PH的形成与肺血管结构重建。     

大鼠心肌梗死后非梗死区域心室重构的研究

目的：通过观察大鼠心肌梗死后非梗死区域心肌细胞凋亡、增殖分化和心肌肥大改变情况，探讨其在梗死后心肌重塑中的地位与可能的生物学意义。方法：结扎大鼠左冠状动脉制备心肌梗死模型．观察大鼠心肌梗死后心肌组织病理形态；免疫组织化学方法检测原位细胞凋亡（TUNEL）、增殖细胞核抗原（PCNA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达量。结果：大鼠心肌梗死后，TUNEL、PCNA、TGF-β1阳性率与对照组比较分别为（0.414±0.05）％vs（0.223±0.04）％，（0.419±0．04）％vs（0.188±0.03）％，（7.2±1.4）％vs（2.2±0.8％）。结论：心肌梗死后非梗死区域凋亡、增殖和心肌肥大较对照组明显增加，三者共同参与了心肌梗死后非梗死区域的心室重构。[著者文摘]