基于高通量测序的无创产前筛查技术在产前诊断中的应用

目的运用高通量测序的无创产前检测(Non-invasive Prenatal Testing,NIPT)技术探讨在产前筛查的高危人群中,对胎儿染色体非整倍体异常的诊断效率和可行性分析。方法选取2017年5月至2019年5月在我院产前诊断中心因无创DNA阳性做羊水穿刺的高危孕妇共62例进行回顾性分析,羊水穿刺的结果使用核型和FISH进行分析验证,最终对其染色体异常的类型和比例进行数据分析。结果 NIPT检出孕妇外周血62例阳性病例,其中21三体,13三体,18三体,性染色体异常例数分别为:31例,2例,3例,26例。这些阳性病例均进行了介入性产前诊断—羊水穿刺术,羊水细胞培养100%成功,通过介入性产前诊断最终确定21三体31例,13三体1例,18三体1例,性染色体9例。阳性预测值分别为:100.0%,50.00%,66.67%,34.62%。结论 NIPT技术对21三体检测有较高的敏感度和特异度,但是对其他染色体的检测准确度较低,因此,NIPT阳性结果仍需进一步做介入性产前诊断来确诊,联合 NIPT 方案可以提高产前诊断率,大大降低了出生缺陷的发生。     

羊水细胞高通量测序产前诊断Williams综合征

目的通过对羊水细胞DNA高通量测序(即第二代基因测序技术,next?generation?sequencing,NGS)诊断Williams综合征,探讨NGS在产前诊断中的应用价值。方法对1例超声发现胎儿生长发育异常的孕妇进行羊膜腔穿刺术,提取羊水细胞DNA,进行测序分析。结果高通量测序结果显示胎儿染色体7q11.23区域存在2.42Mb的缺失,家系调查该缺失来自孕妇本人。结论对超声发现胎儿生长发育异常时,建议进行羊水细胞DNA高通量测序,产前诊断排除Williams综合征等染色体微缺失/微重复。     

基于高通量并行测序的无创DNA产前检测的应用价值

正近年来,随着国家开放二胎政策的实施,优生优育与出生缺陷再度成为社会各界备受关注的热点议题。遗传因素在出生缺陷中占据约70%,并且遗传性疾病中染色体异常为主要致病原因~([1])。以医学现有水平对于染色体异常依然无法解释其病因并进行有效的干预和治疗,而减少出生缺陷的措施主要有赖于广泛开展产前筛查,诊断及适时终止妊娠。目前产前诊断方法分为有创性和无创性两大类。     

高通量测序技术在介入性产前诊断中的应用

目的通过高通量测序技术(NGS)检测孕妇羊水细胞与染色体核型分析结果行对比,探讨NGS在羊水细胞产前诊断中的实际应用。方法选择2014年9月-2018年1月在新疆医科大学第一附属医院就诊的符合条件的孕妇共77例作为研究对象,年龄22～42(31±5)岁,孕龄18～27+4w。抽取孕妇羊水,提取羊水细胞DNA,制备测序文库,应用测序仪检测,所得的DNA序列与人类DNA参考数据库比对并作统计分析,并与同一样本染色体核型分析结果行对照分析。结果 77例羊水样本NGS技术检测结果例染色体数目异常,7例染色体片段缺失/重复;羊水核型结果:1例染色体结构异常,1例9号染色体臂间倒位,1例13号染色体与15号染色体罗伯逊异位。结论利用NGS检测羊水中胎儿DNA染色体数目异常,其敏感性高于染色体核型分析技术。染色体核型分析技术与高通量测序技术相结合,将在产前诊断工作中具有较好的临床实际应用价值。     

唐氏综合征的无创产前诊断研究进展

唐氏综合征是最常见的染色体非整倍体遗传病,该病尚无有效治疗手段,出生干预是预防该病的有效措施。传统的产前筛查与产前诊断均具有一定的缺陷,无创产前诊断是未来发展的趋势。本文从母血胎儿细胞、母血胎儿游离DNA、母血胎儿游离RNA三个角度对目前唐氏综合征的无创产前诊断研究作一综述,以期对相关领域的研究发展有所帮助。     

高通量测序染色体拷贝数变异检测在359例羊膜腔穿刺产前诊断中的临床研究

目的探讨高通量测序染色体拷贝数变异检测在产前诊断中的临床价值。方法对359例有相关产前诊断指征行经羊膜腔穿刺的孕妇行细胞培养染色体核型分析和染色体拷贝数变异检测,比较两种方法的检测结果,分析其临床应用价值。结果核型分析共发现11例染色体异常,阳性率为3.1%(11/359);染色体拷贝数变异检测共发现26例染色体异常,阳性率7.2%(26/359)。细胞培养染色体核型分析正常的15例标本中,经染色体畸变技术检测3例存在微缺失/微重复。结论染色体拷贝数变异检测技术对染色体非整倍体和微缺失/微重复具有高准确性、可靠性和可重复性,对产前诊断胎儿异常具有重要临床意义。     

无创DNA检测在产前诊断中的应用

目的探讨无创DNA产前检测在胎儿染色体异常疾病筛查中的应用及意义。方法收集2016年1月1日至2017年6月30日在我院接受孕妇外周血中游离胎儿DNA检测者共2788例,对无创DNA提示阳性者劝说接受进一步羊水/脐血细胞核型分析,阴性者进行电话跟踪和出生后随访。结果 2788例患者中无创提示阳性37例,包含17例21-三体,3例18三体,14例性染色体异常,其他染色体异常3例,分别是1例Chr13-/Multi,1例4号染色体q12-q13.1处重复4.6Mb,1例13-染色体单体或部分缺失。其中28例接受进一步产前诊断,确诊10例21-三体,3例18三体,6例性染色体异常。结论无创DNA检测对21-三体准确率达到83.33%,对18-三体检测准确率达到100%,性染色体检测准确率达到50%。无创DNA检测对胎儿的非整倍体疾病检出率比较高,对性染色体和其他染色体异常的检出率还有待进一步提高。     

高通量测序技术在颈项透明层增厚胎儿产前诊断中的应用价值

目的 探讨高通量测序技术在颈项透明层增厚胎儿产前诊断中的应用价值。方法 使用染色体核型分析技术联合高通量测序技术对281例NT增厚进行产前诊断的胎儿进行检测分析。结果 在281例NT增厚的孕妇产前诊断分析中,染色体核型分析检出异常率为15.66%(44/281)。其中占比最高的21三体检出28例（63.64%）。高通量测序检出异常59例（21%）。将NT厚度2.5～2.9 mm、3.0～3.4 mm及≥3.5 mm的产前诊断病例分为3组,核型分析异常检出率分别为20.79%、9.28%、16.87%,对应高通量测序异常检出率分别为23.76%、16.49%、22.89%。两种检测方法对染色体异常率的检测结果差别显著,高通量测序的阳性检出率要高于染色体核型分析检测技术,比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 NT增厚与染色体异常具有相关性,且NT值处于临界增厚或增厚时仍有一定量的染色体异常发生。联合使用核型分析技术和高通量测序技术可减少漏诊的发生率。     

利用无创方法对耳聋家系进行产前诊断的研究

目的目前单基因病的产前诊断都是在孕中期抽取孕妇羊水进行基因检测,但羊水穿刺有流产的风险,孕妇往往不易接受。本研究旨在探讨利用母源外周血中胎儿游离DNA进行单基因病无创产前诊断的可行性。方法已明确为遗传性耳聋的两个家系,均已出生一名耳聋患儿,且患儿与父母突变类型与位点均已确定。两家系孕妇于孕12w后抽取外周血,提取游离DNA,利用cSMART技术检测胎儿的基因型。并于孕中期抽取羊水进行验证,胎儿出生后采集新生儿足跟血进一步验证。结果通过母源外周血中胎儿游离DNA准确的鉴定了两家系胎儿的基因型,与羊水和新生儿足跟血结果吻合。结论无创的方法对胎儿进行产前诊断有广阔的应用前景。     

应用高通量测序的染色体组拷贝数分析技术在先天性心脏病产前诊断中的应用

目的探讨高通量测序的染色体组拷贝数变异(Copy number variation,CNV)分析技术在先天性心脏病产前诊断中的应用价值。方法以2015年1月至2016年12月经本院产前诊断中心确诊存在胎儿CHD的孕妇为研究对象,进行产前染色体核型分析与高通量测序技术CNV检测。结果核型分析检出异常核型4例,异常检出率为8.16%,其中21三体3例,染色体结构异常1例;CNV检出异常9例,异常检出率为18%,其中21三体3例,22q11微重复综合征2例,22q11微缺失综合征1例,9号染色体部分重复1例,其他微缺失/微重复2例;临床意义不明CNV变异3例。结论 CNV检测可以比核型分析发现更加复杂的异常,可以作为传统染色体核型分析技术的补充方法,可有效预防CHD胎儿的风险,对优生优育有重要意义。     

高通量测序全基因组拷贝数变异检测联合染色体核型分析在产前诊断中的应用

目的分析产前诊断使用高通量测序全基因组拷贝数变异(NGS-CNVs)检测联合染色体核型分析的诊断价值。方法回顾性分析2017年7月～2018年9月因各种高危因素来本院产前诊断中心就诊并自愿进行NGS-CNVs和染色体核型分析且检测成功产前诊断300例孕妇产检资料,依据分析方式不同分为NGS-CNVs组、染色体核型组、联合使用NGSCNVs和染色体核型分析组。比较3种方式染色体异常检出率的情况。结果 NGS-CNVs组、染色体核型组、联合组染色体异常检出率分别为23.67%、21.33%和25.00%,3组异常检出率差异无统计学意义(P0.05),NGS-CNVs组染色体数目异常检出率(19.33%),染色体核型组为(19.67%),联合组为(19.67%),仅联合组与染色体核型组之间有统计学意义(P0.05)。联合组和NGS-CNVs组对结构异常检出率(5.67%和4.33%)高于染色体核型组(1.67%),仅联合组与染色体核型组之间有统计学意义(P0.05)。NGS-CNVs组检出染色体结构性异常CNVs13例;传统染色体核型分析检出结构异常5例;NGS-CNVs组检测多态性CNVs15例,其中1例染色体核型为Y倒位,属染色体正常变异。结论 NGS-CNVs联合染色体核型分析可以有效提高羊水细胞染色体异常检出率,尤其是检测染色体微缺失和微重复作用显著,能更好降低出生缺陷率。     

无创产前DNA检测与传统产前诊断在产前诊断中应用的比较分析

目的比较无创产前DNA检测与传统产前诊断在产前筛查高风险和高危因素孕妇中的应用。方法选择2012年9月-2013年8月可随访的单胎接受传统产前诊断或无创产前DNA检测的孕妇388例,其中接受传统产前诊断的孕妇84例作为对照组,接受进行无创产前DNA检测的孕妇304例为研究组。结果研究组与对照组在干预措施选择、检测阳性率方面有显著差异,在结果准确性、并发症方面无显著差异。结论目前传统产前诊断有其不可取代的优势,但无创产前DNA检测更易于孕妇接受,随着分子生物学的发展,无创产前DNA检测有望发展成为一种非侵入性产前诊断的新技术。     

无创产前检测与有创染色体核型分析在产前诊断中联合应用的研究

目的探讨应用无创非整倍体产前检测技术对孕妇进行无创性产前诊断的价值,且与有创染色体核型分析技术联合应用的临床意义。方法应用无创非整倍体检测技术来检测母体血浆中富集的胎儿游离DNA,分析胎儿染色体的非整倍性信息。同时进行羊水或脐血细胞的染色体核型分析,统计分析两种方法检测结果的一致性。结果 350名孕妇中,通过无创的DNA产前诊断提示21例胎儿染色体非整倍性为高风险。胎儿羊水或脐血标本均培养成功,成功率为100%,共检测出22例胎儿染色体核型异常,两种检测技术相比较,无创非整倍体检测技术在T21检测上敏感度,特异性均为100%。T18的敏感度,特异性均为100%,T18嵌合型的准确性有待提高。T13敏感度为100%,特异性为50%。性染色体的非整倍体检测敏感度100%,特异性为66.7%。阳性预测值为81.0%。结论无创非整倍体检测技术在染色体疾病产前诊方面具有很好的应用价值,其敏感度,特异性均较高,随着以后技术成熟进步,项目价格降低,可以作为产前诊断筛查项目进行普及推扩,而有创的染色体核型分析仍是金标准,除了对无创整倍体检测进行确认,还可以分析染色体的结构的异常,因此是其在临床应用上不可或缺的补充。     

自然流产遗传病因的高通量测序检测

目的应用高通量测序技术(HT-NGS,High throughput-next generation sequencing technologies)研究自然流产发生的遗传学病因分布情况。方法提取孕早期流产绒毛组织或孕中期流产胎盘组织,裂解细胞后提取DNA。采用高通量测序技术检测染色体异常图谱。结果共检测174例流产组织,诊断成功率100%。诊断正常核型110例,占63.2%,女男比例1:1.39。诊断染色体数目异常64例,占总病例的36.8%。其中45,X 14例,占数目异常的21.9%;21-三体10例,占数目异常的15.6%;16-三体、14-三体和22-三体各5例,分别占数目异常的7.8%;18-三体和13-三体各4例,分别占数目异常的6.3%;69,XXX、69,XXY及3-三体各2例,分别占数目异常的3.1%。诊断CNV81例,占46.6%。其中有临床意义的28例,占16.1%,无意义及意义不明的占30.5%;正常核型合并CNV58例,占CNV总数的71.6%,染色体数目异常合并CNV23例,占CNV总数的28.4%。其中1例患者检测到13号染色体大段缺失。174例组织中,早期妊娠135例,其中染色体数目异常61例,占早期妊娠病例的45.2%;检测46,XN 74例,占早期妊娠病例的54.8%。结论高通量测序技术为发展的新技术,可用于任何孕期诊断。其取材量少,检测成功率高,快速、覆盖面广,但缺点是价格贵,对于平衡易位无法诊断。     

无创产前筛查后FISH在产前诊断中的应用价值

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术在产前诊断胎儿染色体异常中的临床应用价值和现状。方法对99例孕17-23周、有产前诊断指征(25例经无创产前筛查为阳性)的孕妇,在B超引导下经腹抽取羊水后,应用特异性探针针对未经过培养的羊水间期细胞进行荧光原位杂交。同时进行常规羊水细胞培养和核型分析。结果 FISH和核型分析共检出染色体数目异常21例,异常率为21.2%,分别为15例21-三体、6例18-三体,结果一致;染色体核型分析检测出4例结构异常:46,XX,15ph+、46,XY,add(3)(p26.3)、46,XX,t(7;19)(p15;p13)、46,XX,inv(9)(p11q12)。结论在产前诊断中FISH检测适用于染色体(13,18,21,X,Y)数目异常的的快速诊断,缩短孕妇等待时间,减轻孕妇的焦虑。不能检测出结构异常,不能单独用于产前诊断。     

基于高通量测序技术的育龄妇女SMA基因筛查结果分析

目的 了解金华地区育龄妇女脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)基因携带率,对出生缺陷防控提供参考.方法 收集2016年10月-2020年9月符合标准的育龄妇女742例的临床资料,用高通量测序技术进行SMA基因筛查,对阳性携带者进行MLPA(multiplex ligation-dep...     

胎儿出生缺陷产前筛查及无创基因测序技术的临床应用研究

目的对胎儿出生缺陷产前筛查及无创DNA产前检测技术的临床应用以及羊水细胞染色体检查结果或基因检测分析。方法采用时间分辨法进行孕中期血清学产前筛查,高危人群进一步无创DNA产前检测,检测结果阳性者进行羊水穿刺胎儿染色体核型分析或单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分型的基因芯片分析确诊。结果自2012年5月2016年10月,对开封地区2678例进行无创DNA产前检测的孕妇中,检出异常38例,占1.42%。38例孕妇外周血无创DNA检测异常结果与羊水染色体核型分析结果对比及妊娠结局分析,胎儿、新生儿异常21例,占55.26%。其中,21三体阳性12例,羊水结果证实12均为21三体综合征。18三体阳性2例,羊水结果1例确诊;1例正常,但新生儿出生后诊断为先天性心脏病(先天性动脉导管未闭,卵圆孔未闭)。18单体阳性1例,未做羊水染色体检查,新生儿正常。13三体阳性2例,羊水结果2例正常,2例新生儿正常。13三体嵌合体阳性1例,羊水结果正常,出生一正常男孩。12三体阳性1例,羊水结果正常,新生儿正常。10三体嵌合体1例,未做羊水染色体检查,胚胎停止发育。性染色体异常16例,羊水结果提示:2例确诊为特纳综合征;其中,1例为45,X;1例缺陷45,X[2]/46,XX[48],保留胎儿;1例孕妇染色体为47,XXX/46,XX(60%:40%),羊水胎儿染色体正常,新生儿正常;2例未做羊水已胚胎停止发育和中孕流产;5例羊水提示正常,新生儿正常;6例未做羊水染色体检查,新生儿正常;1例Cri-Du-Chat Syndrome,羊水结果正常,SNP:5p15.33p15.1存在16.7M片段性UPD,保留胎儿;1例chr x-(y)/chr 18-/chr17+,羊水结果正常。育龄妇女对唐氏综合征的产前筛查、无创DNA产前检测和产前诊断应引起高度重视。2678例进行无创DNA产前检测的孕妇中,阴性2640例,占98.58%。随访结果,2例中孕流产,1例新生儿先天性巨结肠,282例尚未出生外,2355例新生儿正常。结论高通量无创DNA产前基因测序技术能准确检出唐氏综合征,相对于产前筛查和产前诊断技术能大大降低孕妇流产的风险和减轻其心理负担。对18三体,13三体,性染色体检测稳定性欠佳,而后继研究需要不断克服技术难题,并逐步推向临床。因此,高通量无创DNA产前检测技术对唐氏综合征的检出具有很高的临床应用价值。     

基于ANSYS的无创呼吸机叶轮研究

叶轮是无创呼吸机中重要的部件。本文利用Solidworks软件对无创呼吸机叶轮进行建模,并基于ANSYS软件对叶轮进行可行性研究,讨论了叶轮在外界载荷下的应力和位移。此分析的结果为叶轮的可靠性设计提供了验证依据。     

基于二代测序的mini-STR分型技术应用于无创产前亲权鉴定的可行性研究

目的 探讨基于二代测序技术(next generation sequencing,NGS)检测孕妇血浆中胎儿短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因座的方法应用于无创产前亲权鉴定的可行性.方法 收集28组家庭样本,首先用毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)法...