肾衰泄浊汤对BMP_7、α-SMA调节作用的探讨

目的:观察肾衰泄浊汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织骨形态蛋白-7(BMP7)、α平滑肌动蛋白(α-SMA)的调节作用。方法:采用UUO动物模型,将72只大鼠随机分为:假手术组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、苯那普利组,观察术后第7天、第14天梗阻侧大鼠肾组织病理改变及肾组织BMP7、α-SMA蛋白表达。结果:第7天、第14天中药各组和苯那普利组大鼠BMP7较假手术组减弱,但较模型组增强;而α-SMA则相反,且BMP7表达与α-SMA蛋白表达呈明显负相关。结论:该方可能是通过诱导BMP7蛋白表达,抑制a-SMA蛋白表达,减轻肾间质的纤维化。     

肾衰方及其拆方对UUO模型大鼠周细胞中PDGF/PDGFR-β信号通路表达的影响

目的通过观察中药复方肾衰方及其拆方对周细胞中PDGF/PDGFR-β信号通路的表达影响,阐述肾衰方抗肾间质纤维化的机理。方法将108只SD雌性大鼠随机分为:假手术组、模型组(UUO模型)、肾衰方组、袪邪方组、补虚方组、贝那普利组,每组18只,各组大鼠分别于术后第7、14、21天给药2h后各处死6只。检测大鼠肾功能;取肾脏组织行HE、Masson染色,并测定大鼠术侧肾脏肾小管损伤程度评分及肾小管间质纤维化指数;Western blot、RT-PCR法测定肾脏组织中α-SMA、PDGF、PDGFR-β的表达情况。结果同时期模型组与假手术组相比,模型组大鼠血尿素氮、血清肌酐均比模型组升高(P0.05);同时期各治疗组与模型组相比,各治疗组大鼠血尿素氮、血清肌酐均较模型组下降,且以肾衰方组下降更明显(P0.05)。通过HE、Masson染色,从不同时间段观察各组大鼠肾脏病理组织的变化,发现术后7d多以炎症和坏死病变为主,术后14d多以纤维化和炎症病变为主,21d纤维化程度更加明显,模型组病理表现最为明显。经Western blot法测定发现,各治疗组的α-SMA、PDGF、PDGFR-β蛋白阳性表达均低于同时期模型组,以肾衰方组降低更明显(P均0.05);RT-PCR法检测结果显示,模型组及各治疗组大鼠α-SMA、PDGF、PDGFR-βmRNA表达量均高于假手术组(P均0.05),各治疗组α-SMA、PDGF、PDGFR-βmRNA表达较同时期的模型组降低明显(P均0.05),以肾衰方组降低更明显。结论中药复方肾衰方可通过调节周细胞上PDGF/PDGFR-β信号通路的传导,同时下调α-SMA蛋白的表达,达到抗肾间质纤维化的作用。     

肾衰泄浊汤及其拆方对UUO大鼠中β-catenin、MMP7、PAI-1因子表达的影响

目的:研究中药复方肾衰泄浊汤及其拆方对Wnt/β-catenin信号通路中MMP7、PAI-1因子及该信号通路中β-catenin的表达影响,阐述肾衰泄浊汤抗肾间质纤维化的机理。方法:采用单侧输尿管梗阻动物模型,将SD雌性大鼠72只按体质量随机分为:假手术组、模型组、肾衰泄浊汤组、补虚方组、袪邪方组、盐酸贝那普利组,每组12只,各组大鼠分别于术后第7、14天处死,取肾脏组织行HE、Masson染色,光镜下观察肾脏组织病理改变,并测定肾小管间质纤维化指数;免疫组化法检测β-catenin、MMP7及PAI-1蛋白在肾间质的表达情况,另采用原位杂交法检测各组大鼠肾组织β—cateninmRNA的表达。结果:经HE、Masson染色后,从不同时间段观察模型组及各治疗组的病理表现,术后7 d相对以炎症和坏死病变为主,术后14 d以纤维化和炎症为主,特别是模型组更为明显,假手术组在各时期无明显病理改变。免疫组化结果显示,各治疗组大鼠肾组织MMP7蛋白阳性表达均高于模型组,以肾衰泄浊汤组更加明显(均P0.05);而PAI-1蛋白阳性表达均低于模型组,尤以肾衰泄浊汤组更佳(均P0.05)。原位杂交结果:模型组及各治疗组大鼠β-cateninmRNA表达明显高于假手术组(均P0.05),各治疗组β-cateninmRNA表达较同时期的模型组减少显著(均P0.05),尤以肾衰泄浊汤组更明显。结论:复方肾衰泄汤可通过调节UUO大鼠肾间质的MMP7、PAI-1蛋白及β-catenin的表达,减少细胞外基质的沉积,从而达到抗肾间质纤维化的作用。     

肾衰泄浊汤对BMP_7、TGFβ_1调节作用的探讨

目的:观察肾衰泄浊汤对肾间质纤维化大鼠肾组织骨形态蛋白-7(BMP7)、转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白的调节作用。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,将72只大鼠分为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组及苯那普利组,观察术后第7d、第14d梗阻侧大鼠肾组织病理改变及BMP7、TGFβ1蛋白表达。结果:第7d、第14d中药各组和苯那普利组大鼠BMP7较假手术组减弱,但较模型组增强;而TGFβ1则相反,且BMP7与TGFβ1呈明显负相关。结论:该方可能是通过诱导BMP7表达,抑制TGFβ1表达,减轻肾间质纤维化。     

肾衰泄浊汤及其补虚、祛邪组分对UUO大鼠肾间质纤维化的影响

目的:研究肾衰泄浊汤及其补虚,祛邪组分对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法:通过结扎单侧输尿管建立UUO大鼠模型。SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,贝那普利组,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组;每组24只。手术后第3天,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组大鼠均按0. 8 g·mL-1肾衰泄浊汤浓缩剂给药,即给药剂量为8. 0 g·kg-1·d-1体质量灌胃;贝那普利组大鼠给贝那普利1. 5 mg·kg-1·d-1体质量灌胃,假手术组,模型组大鼠给等量生理盐水灌胃。术后第7,14,21天,分别用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织中周细胞及相关信号通路标志物表达情况。结果:与模型组比较,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组在UUO后第14,21天的间质损伤评分和间质胶原的积累均显著降低(P0. 05)。除假手术组外,各组在第14,21天的肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),血小板衍生生长因子A(PDGFA),神经/胶质细胞2型硫酸软骨素糖蛋白(NG-2),血管内皮生长因子A(VEGFA),血管内皮生长因子受体1(VEGFR1),血小板源性生长因子β(PDGF-β),血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)的蛋白表达均较第7天显著增加(P0. 05)。在手术后第21天,肾衰泄浊汤组的肾组织中NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGFR-β蛋白表达均显著低于模型组(P0. 05)。与模型组比较,肾衰泄浊汤组在手术后第21天的肾组织中α-SMA,PDGFA,NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGF-β,PDGFR-βmRNA相对表达量均显著降低(P0. 05),并且肾衰泄浊汤组在手术后第21天α-SMA,NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGFR-βmRNA相对表达量显著低于贝那普利组(P0. 05)。结论:肾衰泄浊汤复方及其补虚,祛邪组分对UUO大鼠肾间质纤维化均具有拮抗作用,其作用机制与抑制周细胞及其相关细胞信号通路激活有关。     

肾衰方及其拆方对肾间质纤维化VEGF、VEGFR2、a-SMA的影响

目的探讨肾衰方及其拆方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)及VEGF、VEGFR2、a-SMA的影响。方法采用单侧输尿管梗阻建立RIF大鼠模型。将108只无特定病原体(SPF)级健康成年SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组,每组18只。UUO术后1 d起连续灌胃给药3周,肾衰方组、补虚方组、祛邪方组大鼠分别按19.5、9.5、11.0 g/(kg·d)进行灌胃,贝那普利组给予1.05 mg/(kg·d),假手术组和模型组每日给予等量生理盐水灌胃。造模后各组分别在第7、14、21天各处死6只大鼠,检测其血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),同时计算左肾肾脏脏器指数;采用苏木精-伊红染色和马松染色进行肾脏组织病理检测,采用Western Blot检测VEGF、VEGFR2、a-SMA的表达,实时荧光定量RT-PCR检测VEGF、VEGFR2、a-SMAmRNA的表达。结果 (1)与假手术组比较,同时期模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组血清BUN、Scr、左肾肾脏脏器指数均升高(P0.05)。与模型组相比,同时期肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组血BUN、Scr、肾脏脏器指数均降低(P0.05),与其他治疗组相比,肾衰方组在降低BUN、Scr、肾脏脏器指数更明显(P0.05)。(2)肾脏病理改变:与假手术组比较,同时期模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组肾小管间质损伤指数和胶原阳性面积均增加(P0.05)。与UUO模型组比较,同时期肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组肾小管间质损伤指数和胶原阳性面积均降低(P0.05);与其他治疗组相比,肾衰方组在减轻肾小管间质损伤指数和胶原阳性面积更明显(P0.05)。(3)与假手术组比较,同时期模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组VEGF、VEGFR2、a-SMA蛋白和VEGF、VEGFR2、a-SMAmRNA表达量均增加(P0.05);与模型组相比,同时期肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组VEGF、VEGFR2、a-SMA和VEGF、VEGFR2、a-SMAmRNA表达均有不同程度降低(P0.05),与其他治疗组相比,肾衰方组降低VEGF、VEGFR2、a-SMA蛋白和VEGF、VEGFR2、a-SMAmRNA表达量更明显。结论肾衰方改善肾功能,减轻肾脏病理损害可能是通过抑制VEGF、VEGFR2、a-SAM蛋白和mRNA表达。     

和解聚散方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织α-SMA表达的影响

目的:观察和解聚散方对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白表达的影响,初步探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型,将雄性SD大鼠120只随机分为4组:假手术组,模型组,洛丁新组,和解聚散方组,每组30只,从造模后第2天开始灌胃,洛丁新组为1.0mg/kg/d,和解聚散方组为9.8g/kg/d,假手术组、模型组灌胃生理盐水3ml/只。分别于造模后7,14,21天取梗阻侧肾脏进行HE、Masson染色,观察肾组织病理结构变化;采用免疫组化方法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:模型组、洛丁新组、和解聚散方组中α-SMA在术后7天、14天、21天表达均明显高于假手术组,两个治疗组的表达水平明显低于模型组,和解聚散方组14天与洛丁新组14天组比较有显著性差异。结论:和解聚散方可以降低肾组织中α-SMA的表达,这可能是和解聚散方抗肾纤维化的作用机制之一。     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β_1、smad7蛋白表达的影响

目的:观察温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:将雄性SD大鼠(120只)随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组30只。采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型(假手术组只分离但不结扎输尿管),于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦(10 mg·kg-1·d-1),温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方(9.8 g·kg-1·d-1)。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、smad7蛋白的表达。结果:造模后第14天温肾活血化湿方较模型组明显降低尿蛋白定量(P0.05),第21天温肾活血化湿方与模型组比较有极显著降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较smad7蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:温肾活血化湿方通过抑制TGF-β1,上调smad7蛋白表达,从而延缓肾间质纤维化的进程。     

清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β1和α-SMA表达的影响

目的:观察清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其抗肾纤维化的作用机制。方法:72只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新组及清化固肾排毒颗粒组,除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法 (UUO)建立肾纤维化梗阻大鼠模型,术后各组分别予相应药物或生理盐水灌胃,每天1次。第7、14、21天,各组大鼠禁食不禁水1天,处死,取肾组织做病理检测,HE染色观察其病理变化,免疫组织化学染色检测TGF-β1和α-SMA在肾间质的阳性染色表达。结果:与假手术组比较,干预第7、14、21天,模型组、洛丁新组、清化固肾排毒颗粒组大鼠肾小管间质损伤指数显著增加,肾组织TGF-β1和α-SMA的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,干预第7、14、21天,洛丁新组和清化固肾排毒颗粒组大鼠肾小管间质损伤指数明显减轻,肾组织TGF-β1和α-SMA的表达均明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:清化固肾排毒颗粒可能通过下调TGF-β1和α-SMA的表达来抑制上皮细胞间充质转化和细胞外基质的过度积聚,实现改善肾间质纤维化的作用。     

清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β1和α一SMA表达的影响

目的：观察清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1） 和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响,探讨其抗肾纤维化的作用机制。方法：72只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新组及清化固肾排毒颗粒组,除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法（UUO）建立肾纤维化梗阻大鼠模型,术后各组分别予相应药物或生理盐水灌胃,每天1次。第7、14、21天,各组大鼠禁食不禁水1天,处死,取肾组织做病理检测,HE染色观察其病理变化,免疫组织化学染色检测TGF-β1和α-SMA在肾间质的阳性染色表达。结果：与假手术组比较,干预第7、14、21天,模型组、洛丁新组、清化固肾排毒颗粒组大鼠肾小管间质损伤指数显著增加,肾组织TGF-β1和α-SMA的表达均明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较,干预第7、14、21天,洛丁新组和清化固肾排毒颗粒组大鼠肾小管间质损伤指数明显减轻,肾组织TGF-β1和α-SMA的表达均明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：清化固肾排毒颗粒可能通过下调TGF-β1和α-SMA的表达来抑制上皮细胞间充质转化和细胞外基质的过度积聚,实现改善肾间质纤维化的作用。     

益肾解毒汤对UUO实验性大鼠肾功能及CTGF、α-SMA蛋白表达的影响

目的:探讨益肾解毒汤对UUO实验性大鼠肾血清肌酐、血清尿素氮及血清CTGF、α-SMA的影响。方法:采用单侧输尿管结扎术(UUO)建立大鼠肾纤维化模型。90只Wistar大鼠分为假手术组、模型组、益肾解毒汤低、中、高剂量组及贝那普利组。在7天、14天、21天不同时间点,观察实验大鼠治疗前后肾功能变化情况;采用免疫组化二步法检测肾组织中CTGF、α-SMA蛋白表达水平。结果:益肾解毒汤各治疗组大鼠血肌酐、血尿素氮水平均有所降低,与模型组比较有显著性差异(P0.05);益肾解毒汤高剂量组能减少肾间质中CTGF、α-SMA的过度表达,效果明显,与贝那普利组比较有显著性差异(P0.05)。结论:益肾解毒汤能下调肾间质组织CTGF、α-SMA蛋白表达水平,保护肾功能,对UUO模型大鼠肾间质纤维化进程有显著的干预作用。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织结缔组织生长因子表达的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的拮抗作用及对结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,初步探讨其可能的分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术(Sham)、UUO组和UUO AM治疗组(AM组).在造模后第7、14 d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中CTGF和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠CTGF mRNA和α-SMA mRNA表达量.用Western blot检测大鼠CTGF蛋白表达量.结果:与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾脏病理损害进行性加重,CTGF和α-SMA mRNA和蛋白表达随梗阻时间延长逐渐增高;黄芪治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的CTGF和α-SMA降低(P<0.05).结论:黄芪可能从核酸和蛋白水平抑制CTGF的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

和解聚散方对单侧输尿管梗阻大鼠CTGF和LN表达的影响

目的:观察和解聚散方对单侧输尿管梗阻(UUO)致大鼠肾间质纤维化的结缔组织生长因子(CTGF)和层黏连蛋白(LN)的影响。方法:采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型,随机分为模型组、贝那普利组和和解聚散方组,给予相应药物灌胃,并设假手术组;UUO术后7天、14天和21天取材,采用免疫组化法检测各组手术侧肾组织CTGF和LN的表达。结果:与假手术组相比,UUO模型组7天、14天和21天的CTGF和LN的表达均增高(P0.05);与模型组相比,和解聚散方组7天、14天和21天肾组织中的CTGF和LN表达均减少(P0.05);21天和解聚散方组CTGF的表达比贝那普利组显著降低(P0.05)。结论:和解聚散方可以降低肾间质纤维化不同时间点CTGF和LN的表达,表明了和解聚散方的有效性,验证了肾络聚散消长病机学说指导下的和解聚散法为延缓慢性肾脏病肾间质纤维化进展的有效治法。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响,初步探讨其抗纤维化分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、UUO组和UUO AM治疗组(AM组).在造模后7、14天处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和胶原Ⅰ(col Ⅰ)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠α-SMA mRNA表达量.用Westemblot检测大鼠α-SMA蛋白表达量.结果:与假手术组相比,UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重,α-SMA、FN和col Ⅰ表达显著增高(P<0.05);AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的α-SMA、FN和col Ⅰ明显降低(P<0.05).结论:黄芪可能通过抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织NF-κB表达的影响

目的:探讨温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型,将雄性SD大鼠80只随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组20只;于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予等量生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦[10 mg/(kg·d)],温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方汤剂[9.8 mg/(kg·d)]。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织NF-κB的表达。结果:第7、14、21天UUO组中NF-κB表达较假手术组高(P0.05),治疗组在第7天较UUO组低(P0.05)。结论:温肾活血化湿方可能通过抑制NF-κB的过度表达从而延缓肾间质纤维化的进程。     

益气活血降浊复方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β_1、α-SMA、HGF的影响

目的:研究益气活血降浊复方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织TGF-β1、α-SMA、HGF蛋白及其mRNA表达的影响,探讨本方抑制肾间质纤维化的作用机制。方法:132只雄性SD大鼠以单侧输尿管结扎术建立肾间质纤维化动物模型,造模成功后大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,西药组,益气活血降浊复方大、中、小剂量组。益气活血降浊复方大剂量组给药34.6g/kg,中剂量组17.3g/kg,小剂量组8.6g/kg灌胃给药,模型组和假手术组、正常组灌入相应0.9%氯化钠溶液,西药组灌胃福辛普利钠10g/kg,1次/d。采用免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1、α-SMA、HGF蛋白表达,采用Real-time PCR方法检测TGF-β1、α-SMA、HGF mRNA表达。结果:与正常组、假手术组相比,模型组大鼠第1、2、3周肾间质中TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显增多(P0.01),益气活血降浊复方大、中、小剂量组及西药组正常组、假手术组在各个时间点TGF-β1、α-SMA蛋白表达有所增加,但与模型组比较显著降低(P0.01)。正常组肾小管上皮细胞胞浆中HGF呈弱阳性表达,随着梗阻时间的延长模型组HGF蛋白表达逐渐减少,益气活血降浊复方大、中、小剂量组与模型组相比,HGF蛋白阳性表达显著增加(P0.01)。与正常组、假手术组相比,造模后第3周模型组肾组织TGF-β1、α-SMA基因高表达(P0.05,P0.01),益气活血降浊复方大、小剂量组和福辛普利钠组与模型组比较TGF-β1、α-SMA基因低表达(P0.05)。造模后第1周,正常组、假手术组HGF基因低表达,益气活血降浊复方大、中、小剂量组与模型组比较HGF基因高表达(P0.05)。结论:益气活血降浊复方可以促进内源性HGF蛋白和基因的生成,使肾组织α-SMA基因、TGF-β1基因表达降低,抑制肾间质纤维化的发展。     

和络泄浊方对缺血性肾脏病大鼠血管紧张素Ⅱ及肾间质纤维化的影响

目的 观察和络泄浊方对缺血性肾脏病大鼠血管紧张素Ⅱ及间质纤维化的影响,探讨防治慢性缺血性肾脏病病变的机制。方法 SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组,每组10只。采用单侧肾动脉不全结扎建立模型。实验第14天处死大鼠,取肾组织做光镜,观察各组大鼠肾脏形态学改变;采用免疫组化法检测肾组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、聚合酶链反应（PCR）法检测肾组织血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)表达。结果 光镜下模型组和药物组大鼠的肾间质均有损伤。与假手术组比较,模型组和药物组肾小球硬化指数评分及肾小管间质损伤评分均明显升高（P<0.05）,而药物组较模型组低（P<0.05）。药物组、模型组α-SMA、Ang Ⅱ表达均高于假手术组,且与模型组比较,药物组α-SMA、Ang Ⅱ表达下降（P<0.05）。结论 和络泄浊方可以通过下调α-SMA、Ang Ⅱ表达减轻缺血性肾脏的纤维化。     

肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠HGF、TGF β1的调节作用

目的:观察中药复方肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠肾组织肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白表达的调节作用,探讨其抗肾间质纤维化的机制。方法:将60只小鼠随机分为假手术组,模型组,中药低、高剂量组,苯那普利组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,术后7天观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织HGF、TGFβ1蛋白,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN的表达。结果:中药高剂量组和苯那普利组较模型组小鼠肾组织HGF蛋白表达增强,TGFβ1蛋白表达减弱,而Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、FN生成减少,两组无显著差异,而HGF表达与TGFβ1表达呈明显负相关。结论:肾衰泄浊汤可能是通过诱导HGF蛋白表达,抑制TGFβ1表达,抑制Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN等ECM的过度沉积,加强肾保护作用,对抗肾间质纤维化。     

和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠治疗作用机理探讨

目的:通过对肾间质纤维化大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的研究,探讨和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠的治疗作用机理。方法:采用单侧输尿管结扎法(UUO)进行肾间质纤维化模型制备,48只W ister大鼠随机分为假手术组、模型组、中药灌胃组。术后第3、10、20、30天每组各处死4只大鼠。HE染色法观察肾脏病理改变,评定各组大鼠肾小管间质损害程度,免疫组化法检测肾脏α-SMA、Ⅳ型胶原蛋白表达,采用RT—PCR法检测肾脏MMP-9、TIMP-1mRNA的表达。结果:α-SMA、Ⅳ型胶原蛋白表达模型组明显增强(P<0.01),中药灌胃组各时间点的表达均少于模型组,假手术组表达无明显异常。模型组肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达明显高于假手术组(P<0.01),并随时间延长表达增强,中药灌胃组肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达亦高于假手术组(P<0.01),但较模型组表达弱(P<0.01)。MMP-9表达在模型组术后明显升高,第10天达到高峰,中药灌胃组在第20、30天时间点高于模型组(P<0.01)。结论:和络泄浊方通过调节α-SMA、Ⅳ型胶原及MMP-9/TIMP-1的基因表达,影响细胞外基质的降解过程,从而减轻肾间质纤维化。     

肾衰泄浊汤及其拆方对UUO模型大鼠细胞外基质的影响

目的:基于补虚通腑泄浊法探讨中药复方肾衰泄浊汤及其拆方(补虚方、祛邪方)对UUO模型大鼠细胞外基质的影响。方法:将SD雌性大鼠72只按体重随机分为:假手术组、模型组(UUO模型)、肾衰泄浊汤组、补虚方组、袪邪方组、贝那普利组,每组12只,各组大鼠分别于灌胃给药后第7、14d处死,检测大鼠24h尿蛋白、血肌酐、尿素氮水平;取肾脏组织行HE、Masson染色,并对肾小管损伤程度、肾小管间质纤维化评分;免疫组化法检测肾脏组织中ɑ-SMA、FN、PAI-1的表达情况。结果:同期模型组与假手术组比较,大鼠24h尿蛋白明显升高(P0.05),各治疗组与模型组比较,各治疗组24h尿蛋白定量减少(P0.05);模型组与假手术组比较,血尿素氮、血清肌酐均升高(P0.05),经治疗后各组血尿素氮、血清肌酐均有所下降,肾衰泄浊汤组疗效最显著(P0.05)。经HE、Masson染色后,从不同时间段观察模型组及各治疗组的病理表现,术后7d以炎症和坏死病变为主,术后14d以纤维化和炎症为主,特别是模型组更为明显。免疫组化结果显示,各治疗组ɑ-SMA、FN、PAI-1蛋白阳性表达均低于模型组,同时期各蛋白阳性表达强弱在中药各治疗组中依次为:补虚方组祛邪方组肾衰泄浊汤组,且表达差异有统计学意义(P0.05)。结论:肾衰泄浊汤及其拆方均可改善UUO大鼠肾功能,这种改善作用可能是通过抑制ECM沉积实现的,ECM沉积的中医病机可能是本虚标实,补虚通腑泄浊法是治疗的基本大法。