阳和化岩汤对HER-2高表达型乳腺癌细胞PI3K/Akt通路HER-2,PI3K,p-Akt表达的机制

目的:观察阳和化岩汤与磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)抑制剂LY294002对乳腺癌细胞株SK-BR-3[人表皮生长因子受体-2(HER-2)高表达型]PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路中HER-2,PI3K,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达的影响,研究阳和化岩汤的干预机制。方法:制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3分为空白组,阳和化岩汤组,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组,阳和化岩汤(125 g·L-1),LY294002 (0. 05 g·L-1),阳和化岩汤+LY294002 (阳和化岩汤125 g·L-1,LY294002 0. 05 g·L-1),用药干预24 h后通过免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HER-2,PI3K,p-Akt蛋白表达,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HER-2,PI3K,p-Akt mRNA表达。结果:与空白组比较,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组均能抑制乳腺癌细胞株HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05);阳和化岩汤组能抑制乳腺癌细胞株HER-2,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05),但对PI3K的抑制作用不明显;联用LY294002较单用LY294002具有进一步抑制PI3K表达的作用(P 0. 05)。与阳和化岩汤组,LY294002组比较,LY294002+阳和化岩汤组能够明显抑制HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05)。结论:阳和化岩汤能够抑制乳腺癌脉管生成和侵袭,主要作用机制为通过干预PI3K/Akt通路,降低通路中HER-2,PI3K,p-Akt表达。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型裸鼠荷瘤模型微淋巴管生成及PI3K/Akt交互调控通路的影响

目的探讨阳和化岩汤治疗乳腺癌的可能作用机制。方法通过SK-BR-3细胞株接种建立Balb/c裸鼠荷瘤模型,将20只成瘤阳性的裸鼠随机分为模型组、中药组、西药组、中西药组,每组5只。模型组每天灌胃0. 4 ml生理盐水;中药组用阳和化岩汤18 g/(kg·d)灌胃;西药组给予曲妥珠单抗1 mg/kg,每周2次,腹腔注射;中西药组给予阳和化岩汤和曲妥珠单抗,用法同中药组和西药组。给药4周后观察各组淋巴结转移抑制率,检测肿瘤组织中磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)、血管内皮生长因子C (VEGFC)的表达,计数微淋巴管数量及VEGFC评分。结果各组裸鼠乳腺原位均有实体肿瘤生长,呈椭圆形或分叶状,原位移植乳腺癌模型裸鼠均有腋窝淋巴结转移。与模型组比较,各给药组淋巴结抑制率均上升,VEGFC评分及PI3K、p-Akt、VEGFC mRNA表达均降低,微淋巴管数量减少(P 0. 05或P 0. 01);与中药组、西药组比较,中西药组淋巴结抑制率明显升高,VEGFC评分及PI3K、p-Akt、VEGFC mRNA表达均降低,微淋巴管数量减少(P 0. 05或P 0. 01)。VEGFC评分与微淋巴管数量之间存在正相关关系(r=0. 894,P 0. 05)。结论阳和化岩汤能有效抑制HER-2高表达型裸鼠荷瘤模型微淋巴管生成,抑制血管生成调控通路及VEGFC表达,其机制可能与有效抑制PI3K/Akt交互调控通路活化有关。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型裸鼠荷瘤模型肿瘤血管生成的影响及机制研究

目的:研究阳和化岩汤与与曲妥珠单抗对乳腺癌细胞株SK-BR-3(HER-2高表达型)裸鼠荷瘤模型血管生成情况的影响及对干预脉管生成机制。方法:建立裸鼠荷瘤模型,随机分为模型组、阳和化岩汤组、曲妥珠单抗组、阳和化岩汤+曲妥珠单抗组4组,药物干预1 w后处死裸鼠,免疫荧光双染法观察组织血管生成,Western blot法检测分析PI3K/Akt交互调控通路中关键靶蛋白PI3K、p-Akt、HER-2、VEGFC的表达。结果:各给药组肿瘤血管生成及PI3K、p-AKT、HER-2、VEGFC蛋白表达均受到抑制,且阳和化岩汤+曲妥珠单抗作用优于单用曲妥珠单抗(P0.05)。结论:阳和化岩汤能有效抑制血管生成,其干预PI3K/Akt信号通路的能力不如曲妥珠单抗,但能进一步增强曲妥珠单抗的疗效。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型裸鼠荷瘤模型肿瘤血管生成的影响及机制的研究

目的:研究阳和化岩汤与与曲妥珠单抗对乳腺癌细胞株SK-BR-3(HER-2高表达型)裸鼠荷瘤模型血管生成情况的影响及对干预脉管生成机制研究。方法:建立裸鼠荷瘤模型,随机分为模型组、阳和化岩汤组、曲妥珠单抗组、阳和化岩汤+曲妥珠单抗组4组,药物干预1 w后处死裸鼠,免疫荧光双染法观察组织血管生成,westernblot法检测分析PI3K/Akt交互调控通路中关键靶蛋白PI3K、p-Akt、HER-2、VEGFC的表达。结果:各给药组肿瘤血管生成及PI3K、p-AKT、HER-2、VEGFC蛋白表达均受到抑制,且阳和化岩汤+曲妥珠单抗作用优于单用曲妥珠单抗(P0.05)。结论:阳和化岩汤能有效抑制血管生成,干预PI3K/Akt通路活化其抑制PI3K/Akt信号通路的能力不如曲妥珠单抗,但能进一步增强曲妥珠单抗的疗效。     

阳和化岩汤联合曲妥珠对HER-2高表达型乳腺癌细胞PTEN-PI3K/Akt通路及VEGFC的影响研究

目的:观察阳和化岩汤联合曲妥珠体外对乳腺癌细胞株SK-BR-3(HER-2高表达型)PTEN-PI3K/Akt通路及血管内皮生长因子(VEGFC)的影响。方法:制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3随机分为对照组、中药组、曲妥珠组、中药+曲妥珠组,分别予相应药物干预72h后,应用westernblot法及RT-PCR法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷脂酞肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)、血管内皮生长因子(VEGFC)蛋白及其m RNA表达。结果:与对照组比较,曲妥珠组、曲妥珠+中药组乳腺癌细胞株PTEN蛋白与m RNA表达明显升高,PI3K、p-Akt、VEGFC蛋白与m RNA表达明显降低(P0.05,P0.01);中药组p-Akt蛋白表达明显降低(P0.05),VEGFC蛋白与m RNA表达明显降低(P0.05)。与曲妥珠组比较,中药+曲妥珠组PTEN蛋白与m RNA表达明显升高(P0.05),PI3K、p-Akt蛋白与m RNA表达明显降低(P0.05),VEGFC蛋白表达明显降低(P0.05)。各药物组效果曲妥珠+中药组最佳,曲妥珠组次之,中药组作用稍弱。结论:阳和化岩汤肠吸收液联合曲妥珠能有效干预PTEN-PI3K/Akt通路,增强PTEN表达,降低PI3K、p-Akt、VEGFC表达,效果优于单用曲妥珠,提示温阳散结中药对曲妥珠在HER-2高表达型乳腺癌的治疗中可能存在辅助作用。     

阳和化岩汤通过ER/PI3K/Akt/mTOR通路逆转乳腺癌他莫昔芬耐药

目的:通过观察阳和化岩汤对他莫昔芬(TAM)耐药型乳腺癌移植瘤的作用,及对雌激素受体(ER)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)交互通路的影响,探讨阳和化岩汤逆转乳腺癌TAM耐药的可能机制。方法:50只小鼠随机分为5组,空白组、模型组、阳和化岩汤组、依维莫司组以及阳和化岩汤+依维莫司组。通过切除双侧卵巢建立肾虚模型,其中空白组行假手术处理。造模后恢复3 d,5组小鼠均通过皮下肿瘤接种乳腺癌TAM耐药细胞(MCF-7/TAM-)建立乳腺癌TAM耐药型移植瘤模型。建模成功后,阳和化岩汤组给予阳和化岩汤灌胃(给药剂量为中药制剂20 mL·kg^-1),依维莫司组给予依维莫司腹腔注射(10 mg·kg^-1),阳和化岩汤+依维莫司组给予阳和化岩汤灌胃+依维莫司腹腔注射,空白组、模型组给予磷酸盐缓冲液(PBS)灌胃+腹腔注射;均连续给药28 d,1次/d。给药结束后分离肿瘤组织、称质量,计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理学改变;免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测肿瘤组织PI3K,Akt,mTOR,ER蛋白和mRNA表达情况。结果:与模型组比较,阳和化岩汤组d12,d20,d28肿瘤体积、瘤质量显著降低(P<0.01),抑瘤率显著增加(P<0.01);阳和化岩汤组能明显降低肿瘤细胞密度,引起肿瘤细胞坏死;与模型组比较,阳和化岩汤组、依维莫司组和阳和化岩汤+依维莫司组均能抑制PI3K,Akt,mTOR蛋白及mRNA的表达(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,阳和化岩汤组、依维莫司组和阳和化岩汤+依维莫司组均能抑制ER蛋白及mRNA的表达(P<0.01);与模型组比较,阳和化岩汤+依维莫司组ER mRNA表达量显著减少(P<0.01)。结论:阳和化岩汤可抑制TAM耐药型乳腺癌移植瘤生长,其机制可能是通过下调ER/PI3K/Akt/mTOR交互信号通路关键分子的表达,从而达到逆转乳腺癌TAM耐药的作用。     

阳和化岩汤联合曲妥珠对HER-2高表达型乳腺癌细胞PTEN-PI3K/Akt通路及

目的：观察阳和化岩汤联合曲妥珠体外对乳腺癌细胞株SK-BR-3（HER-2高表达型） PTEN-PI3K/Akt通路及血管内皮生长因子（VEGFC）的影响。方法：制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3随机分为对照组、中药组、曲妥珠组、中药+曲妥珠组,分别予相应药物干预72h后,应用westernblot法及RT-PCR法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）、磷脂酞肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶（p-Akt）、血管内皮生长因子（VEGFC）蛋白及其mRNA表达。结果：与对照组比较,曲妥珠组、曲妥珠+中药组乳腺癌细胞株PTEN蛋白与mRNA表达明显升高,PI3K、p-Akt、VEGFC蛋白与mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;中药组p-Akt蛋白表达明显降低（P<0.05）,VEGFC蛋白与mRNA表达明显降低（P<0.05）。与曲妥珠组比较,中药+曲妥珠组PTEN蛋白与mRNA表达明显升高（P<0.05）,PI3K、p-Akt蛋白与mRNA表达明显降低（P<0.05）,VEGFC蛋白表达明显降低（P<0.05）。各药物组效果曲妥珠+中药组最佳,曲妥珠组次之,中药组作用稍弱。结论：阳和化岩汤肠吸收液联合曲妥珠能有效干预PTEN-PI3K/Akt通路,增强PTEN表达,降低PI3K、p-Akt、VEGFC表达,效果优于单用曲妥珠,提示温阳散结中药对曲妥珠在HER-2高表达型乳腺癌的治疗中可能存在辅助作用。     

血府逐瘀汤通过PI3K/Akt通路缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究

目的:研究血府逐瘀汤通过PI3K/Akt通路缓解大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、血府逐瘀汤10 g/kg、20 g/kg组、血府逐瘀汤20 g/kg+LY294002 0.3 mg/kg组,各组分别灌胃给予相应药物或蒸馏水,血府逐瘀汤20 g/kg+LY294002 0.3 mg/kg组灌胃及腹腔注射,连续干预14天后采用左冠状动脉前降支结扎的方式建立心肌I/R模型,比较心肌梗死面积、血清心肌酶含量、心肌组织细胞凋亡率及凋亡基因、信号通路基因的蛋白表达量。结果:缺血再灌注组大鼠的心肌梗死面积、血清LDH、CK、CK-MB的含量、心肌组织细胞凋亡率及Bax、Caspase-3的表达量均明显高于假手术组,心肌组织Bcl-2、p-PI3K、p-Akt的表达量均明显低于假手术组;血府逐瘀汤10 g/kg、20 g/kg组大鼠的心肌梗死面积、血清LDH、CK、CK-MB的含量、心肌组织细胞凋亡率及Bax、Caspase-3的蛋白表达量均明显低于缺血再灌注组,心肌组织Bcl-2、p-PI3K、p-Akt的蛋白表达量均明显高于缺血再灌注组;血府逐瘀汤20 g/kg+LY294002 0.3 mg/kg组的心肌梗死面积、血清LDH、CK、CK-MB的含量、心肌组织细胞凋亡率及Bax、Caspase-3的蛋白表达量均明显高于血府逐瘀汤20 g/kg组,心肌组织Bcl-2、p-PI3K、p-Akt的蛋白表达量均明显低于血府逐瘀汤20 g/kg组。结论:血府逐瘀汤具有缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用且该作用可能由PI3K/Akt通路的激活所介导。     

二仙汤对过氧化氢诱导的成骨细胞蛋白组学及PI3K信号通路的影响

采用过氧化氢(H_2O_2)复制细胞氧化应激模型,探讨二仙汤对过氧化氢(H_2O_2)刺激的成骨细胞蛋白组学的影响及其保护机制。取新出生(24 h以内)乳鼠的头盖骨培养原代成骨细胞,实验分为正常组、模型组、福善美组、二仙汤组4组,空白组和模型组加入空白血清,福善美组和二仙汤组则分别加入福善美含药血清和二仙汤含药血清干预45 h后,除正常组外,各组均加入H_2O_2刺激3 h后,提取细胞蛋白,采用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测,Protein Discovery软件进行蛋白鉴定,SIEVE软件进行相对定量定性分析;另外用LY294002(10μmol·L~(-1))阻断PI3K信号通路,实验分为空白对照组、模型组、LY294002组、二仙汤组、二仙汤+LY294002组,观察LY294002干预下二仙汤含药血清对H_2O_2刺激成骨细胞后细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及BMP-2、OPG、p-Akt、p-FoxO1蛋白表达的影响。结果显示,二仙汤组与模型组比较共发现78个差异蛋白,这些蛋白参与PI3K/Akt、胰高血糖素、雌激素、胰岛素等信号通路的调节;使用LY294002后,二仙汤对成骨细胞增殖的促进作用被削弱,OPG、p-FoxO1表达显著下调,BMP-2、p-Akt表达有下调趋势但无显著性,然而LY294002和二仙汤均提高了成骨细胞ALP活力,这可能与细胞状态、细胞分化进程有关。以上结果表明,二仙汤含药血清对H_2O_2刺激的成骨细胞有保护作用,PI3K/Akt信号通路是内在机制之一。     

石菖蒲挥发油联合人参总皂苷通过调节PI3K/Akt/mTOR通路对痴呆模型APP/PS1双转基因小鼠的Aβ_(40)和GFAP的影响

目的:研究石菖蒲挥发油联合人参总皂苷对APP/PS1双转基因小鼠的Aβ_(40)和GFAP的含量变化及对调节PI3K/Akt/mTOR通路的影响。方法:112只APP/PS1双转基因小鼠随机分为8组,模型组、人参总皂苷75 mg/kg组、石菖蒲挥发油15 mg/kg组、石菖蒲挥发油15 mg/kg+人参总皂苷75 mg/kg、石菖蒲挥发油30 mg/kg+人参总皂苷150 mg/kg、石菖蒲挥发油60 mg/kg+人参总皂苷300 mg/kg、雷帕霉素0. 5 mg/kg组和LY294002 0. 75 mg/kg组。正常组和模型组灌胃等体积的生理盐水,各组连续给药30 d。末次给药后采用免疫组化检测GFAP; ELISA检测Aβ_(40)和GFAP; Western blot检测p-mTOR和p-Akt。结果:与正常组比较,模型组的Aβ_(40)和GFAP表达显著增加,p-mTOR和p-Akt表达显著减少。与模型组比较,人参总皂苷组、石菖蒲挥发油组和联合各剂量组的的Aβ_(40)和GFAP表达都显著减少,雷帕霉素组的p-mTOR表达显著减少及p-Akt的表达显著增加,LY294002组的p-mTOR表达显著增加及p-Akt的表达显著减少,联合各剂量组的p-mTOR和p-Akt的表达显著增加。与人参总皂苷组和石菖蒲挥发油组比较,其中联合各剂量组的Aβ_(40)和GFAP表达都显著减少。与LY294002组比较,雷帕霉素组和联合各剂量组的p-mTOR表达显著减少及p-Akt的表达显著增加。与雷帕霉素组比较,联合各剂量组的p-mTOR表达显著增加及p-Akt的表达显著减少。结论:石菖蒲挥发油联合人参总皂苷通过上调PI3K/Akt/mTOR通路来减少APP/PS1双转基因小鼠中Aβ_(40)和GFAP表达。     

阳和化岩汤对大鼠乳腺癌癌前病变的抑制及ki67表达的影响

目的探讨阳和化岩汤对大鼠乳腺癌癌前病变的抑制作用以及对ki67蛋白及mRNA表达的影响。方法采用二甲基苯并蒽（DMBA）诱导建立大鼠乳腺癌癌前病变模型,9周后随机分为空白对照组、模型组、阳和化岩汤组、散结化痰汤组、平消片组及三苯氧胺组,每天分别采用饮用水、阳和化岩汤（组成：鹿角霜1 2 g熟地9 g肉桂6 g白芥子3 g莪术12 g山慈菇1 5 g浙贝母9 g甘草6 g）7.2 g/kg、散结化痰汤（组成：白花蛇舌草15 g半枝莲15 g栝蒌15 g半夏9 g）5.4 g/kg、平消片144 mg/kg及三苯氧胺4 mg/kg灌胃治疗4周。取大鼠乳腺组织,HE染色观察病理形态学变化,免疫组化法检测ki67蛋白表达的阳性率和灰度值,q-PCR检测ki67 mRNA表达。结果与模型组比较,其他各治疗组一般增生与癌前病变发生率高,浸润性癌发生率低,差异有统计学意义（P〈0.05）;除散结化痰汤组外,其他治疗组ki67蛋白表达灰度值升高,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）;ki67阳性率及ki67 mRNA表达除平消片组外均下降,差异均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。与阳和化岩汤组比较,各治疗组癌前病变与浸润性癌发生率差异无统计学意义（P〉0.05）;平消片组ki67表达阳性率及ki67 mRNA表达均升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论阳和化岩汤能够部分阻断逆转乳腺癌癌变,并具有抑制ki67蛋白及mRNA表达的作用,其作用优于平消片,与三苯氧胺接近,适用于乳腺癌癌前病变的预防治疗。     

葛根素调控PI3K/Akt信号对甲状腺癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨葛根素抑制PI3K/Akt信号对甲状腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:12.5、25、50、100、200μmol/L的葛根素处理人甲状腺癌K1、FTC-133、8505C细胞48 h及200μmol/L葛根素处理细胞24、48、72 h,CCK8检测细胞活力。后续研究分为对照组、葛根素组、PI3K/Akt信号抑制剂LY294002组和葛根素+LY294002组,CCK8检测各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS含量;Western blotting检测p-Akt、PCNA、survivin蛋白表达。结果:葛根素可呈时间及浓度依赖性抑制人甲状腺癌K1、FTC-133、8505C细胞活力;葛根素和LY294002均可抑制K1细胞活力,诱导细胞凋亡,诱导ROS产生,下调p-Akt、PCNA、survivin蛋白表达,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05),两者联合对细胞活力抑制、诱导凋亡、ROS产生及p-Akt、PCNA、survivin表达下调作用更显著,且与葛根素组和LY294002组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:葛根素可抑制甲状腺癌细胞活力和诱导凋亡,其机制可能与诱导ROS产生及抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

电针刺激头部运动区调控PI3K/Akt信号通路对脑瘫鼠海马神经元凋亡的影响

目的:证明电针刺激脑瘫鼠头部运动区具有调控PI3K/Akt信号通路抑制海马神经元凋亡作用。方法:构建脑瘫大鼠模型,将实验大鼠分为正常组、模型组、头部电针组,电针+LY294002组,每组15只;正常组仅进行假手术处理,模型组进行造模手术,头部电针组造模后直接给与电针刺激脑瘫鼠头部运动区干预;头部电针+LY294002组在造模前20 min脑室内注射PI3K抑制剂LY294002,造模后给与电针刺激脑瘫鼠头部运动区干预;在造模后的不同时间节点各组取5只实验大鼠,先后进行BBB运动功能等级评分,Western blot法检测海马组织Akt、p-Akt的表达,脑组织海马神经元凋亡情况观察。结果:与模型组比较,头部电针组的运动功能评分在各时段都较高,海马神经细胞凋亡减少,海马组织Akt、p-Akt的表达明显,有统计学意义(P0.05);而头部电针+LY294002组与模型组比较均无显著差异。结论:通过调控PI3K/Akt信号通路抑制海马神经元凋亡可能是电针刺激脑瘫鼠头部运动区治疗脑瘫的机制之一。     

醒脑益智汤对AD模型小鼠tau蛋白及Aβ表达的影响

目的观察醒脑益智汤对AD模型小鼠tau蛋白及Aβ表达的影响。方法小鼠右侧海马注射3μL老化的Aβ_(25-35)(3 nmol/L)构建AD模型,将114只ICR小鼠随机分成假手术组、模型组、醒脑益智汤组(18 g生药/kg)、醒脑益智汤组(9 g生药/kg)、醒脑益智汤组(4.5 g生药/kg)、多奈哌齐组(1.3 mg/kg)。造模后第2天,小鼠分别灌胃给予不同剂量的醒脑益智汤及盐酸多奈哌齐,灌胃28 d。第23天进行Morris水迷宫训练;第28天,ELISA及硫黄素S染色测定Aβ表达;Western blot测定tau蛋白磷酸化位点(Ser 202,Thr 231)、PI3K/Akt及NEP、IDE蛋白表达。结果醒脑益智汤可降低AD模型小鼠的游泳潜伏期,降低Aβ表达,抑制tau蛋白化点(Ser 202,Thr 231)发生磷酸化,增加p-PI3K、p-Akt、NEP及IDE的表达(P0.05)。结论醒脑益智汤可能是通过PI3K/Akt信号通路,抑制tau蛋白位点的异常磷酸化,通过增加NEP、IDE的表达,抑制AD模型小鼠脑内的Aβ表达,进而改善其学习记忆能力。     

益气活血中药配伍双联抗血小板药物对人脐静脉内皮细胞损伤和内皮血小板黏附的影响

目的基于PI3K/Akt通路研究益气活血中药联合双联抗血小板药物对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤及损伤内皮诱导的血小板黏附的作用及机制。方法将HUVEC随机分为空白组、模型(80 mg/L ox-LDL)组、双抗(15μg/m L阿司匹林+10μg/m L氯吡格雷+80 mg/L ox-LDL)组、西洋参茎叶总皂苷(Panax Quinquefolium saponins,PQS,160μg/m L)+三七总皂苷(Panax Notoginseng saponins,PNS,160μg/m L)+双抗组和LY294002(30μg/m L)+PQS+PNS+双抗组,共5组。利用流式细胞术检测HUVEC凋亡率和内皮-血小板黏附情况;生化法检测HUVEC上清液乳酸脱氢酶浓度(lactate dehydrogenase,LDH);放射免疫法检测HUVEC上清液细胞间黏附分子浓度(intercellular adhesion molecule,ICAM);Western blot检测HUVEC中p-PI3K、p-Akt蛋白表达。结果与空白组比较,模型组HUVEC凋亡率、平均荧光强度(mean fluorescence indicator,MFI)、LDH、ICAM浓度均升高(P0.05),HUVEC p-Akt蛋白表达降低(P0.05)。与模型组比较,双抗组HUVEC凋亡率和LDH浓度均升高(P0.05),MFI和ICAM浓度均降低(P0.05);PQS+PNS+双抗组凋亡率、MFI、LDH、ICAM均降低(P0.05),PQS+PNS+双抗组HUVEC中p-Akt表达增加(P0.05)。与双抗组比较,PQS+PNS+双抗组HUVEC凋亡率、MFI、LDH及ICAM均明显降低(P0.05),HUVEC中p-Akt表达升高(P0.05);加入PI3K特异性抑制剂LY294002后,HUVEC中p-Akt表达被抑制,益气活血中药配伍双抗发挥的上述保护作用均消失。结论益气活血中药配伍双抗通过上调内皮细胞PI3K/Akt通路,减轻ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡以及损伤内皮诱导的血小板黏附。     

针刺对戊四唑诱发癫痫大鼠海马PI3K、Akt蛋白表达的影响

目的:观察针刺对戊四唑诱发癫痫大鼠海马神经元PI3K、Akt蛋白表达的影响。方法:SD大鼠60只随机分为5组(n=12):癫痫模型组、LY294002组、针刺治疗组、针刺+LY294002组、正常对照组。各组分别于癫痫发作后4h与24h两个时间段左心灌注固定取脑组织,免疫组化法测PI3K、Akt蛋白表达。结果:针刺+LY294002组和LY294002组两个时间段均未见明显PI3K和Akt蛋白表达;癫痫模型组可见PI3K和Akt蛋白阳性表达,其中癫痫发作4h表达较24h明显(P0.01);针刺组PI3K和Akt蛋白阳性表达量明显增多,其中4h时间点蛋白阳性表达量增加更为明显(与24h时间点比较,P0.05)。结论:针刺具有明显调节PI3K和Akt蛋白表达,其作用与细胞内PI3K/Akt信号转导通路有关。     

基于PI3K-Akt-eNOS通路探讨松果菊苷对脊髓损伤大鼠的神经保护作用

目的基于PI3K-Akt-eNOS通路探讨松果菊苷(ECH)对脊髓损伤(SCI)大鼠的神经保护作用并探讨其机制。方法大鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、松果菊苷干预组、PI3K抑制剂LY294002组和松果菊苷干预+PI3K抑制剂LY294002组。采用改良的Allen法建立SCI大鼠模型。通过脊髓运动功能(BBB)评分评估大鼠运动功能,HE染色观察脊髓组织病理变化,TUNEL检测脊髓组织细胞凋亡率,试剂盒检测血清一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量,qRT-PCR法检测各组脊髓组织eNOS和iNOS mRNA表达水平,Western blotting法检测脊髓组织Bax、Bcl-2、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达。结果与假手术比较,脊髓损伤组大鼠BBB评分、血清NO和eNOS水平、脊髓组织eNOS m RNA以及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达显著降低(P 0.05),血清iNOS水平、脊髓组织细胞凋亡数、iNOS m RNA、Bax蛋白表达均显著升高(P 0.05)。与脊髓损伤组比较,松果菊苷干预组大鼠BBB评分、血清NO和eNOS水平、脊髓组织e NOS mRNA以及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达显著升高(P 0.05),血清iNOS水平、脊髓组织细胞凋亡数、iNOS mRNA、Bax蛋白表达均显著降低(P 0.05)。PI3K抑制剂LY294002组和松果菊苷干预+PI3K抑制剂LY294002组两组大鼠各检测指标差异均无统计学意义(P 0.05)。结论 ECH可能通过激活PI3K-Akt-eNOS信号通路对SCI大鼠发挥神经保护作用。     

定心方经PI3K/Akt通路抑制人脐静脉内皮细胞迁移的研究

目的:探讨定心方(DXR)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移的分子机制。方法:将HUVEC分为空白组、模型组、DXR低、中、高剂量组和LY294002阻制剂组。除正常对照组外,其他组采用ox-LDL(终浓度为100 mg/L)造成HUVEC损伤模型,用不同浓度定心方含药血清(终浓度为0%,5%,10%,20%)和PI3K特异性抑制剂LY294002(浓度为4μmol/L)干预培养24 h。采用MTT法检测细胞增殖;细胞划痕实验和迁移实验检测各组细胞迁移情况;Western blotting法检测各组细胞中MMP9、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组可显著促进HUVEC增殖和细胞迁移,上调HUVEC内p-PI3K、p-Akt、MMP9蛋白的表达(P0.05);与模型组比较,DXR高、中剂量组和LY294002阻制剂组可显著抑制HUVEC增殖,降低细胞迁移数目,抑制HUVEC内p-PI3K、p-Akt、MMP9蛋白的表达(P0.05)。结论:体外实验表明,DXR可抑制ox-LDL诱导的HUVEC迁移,其机制可能与下调PI3K/Akt通路抑制MMP9表达有关。     

阳和化岩汤对乳腺癌癌前病变细胞凋亡关键因子Bcl-2、细胞色素C表达影响的机制研究

目的:观察阳和化岩汤对乳腺癌细胞株Bcl-2、细胞色素C的蛋白及基因表达的影响,研究阳和化岩汤治疗乳腺癌的作用机制。方法:将乳腺癌癌前病变细胞株随机分为阳和化岩汤组、拆方温阳组、拆方活血组、拆方化痰组、拆方解毒组、空白对照组、三苯氧胺组,通过Western blot、RT-PCR法分别检测七组乳腺癌癌前变细胞株Bcl-2、细胞色素C的蛋白及基因表达,观察阳和化岩汤对乳腺癌的作用效果。结果:与空白对照组比较,三苯氧胺组、阳和化岩汤组明显降低Bcl-2蛋白及mRNA表达(P<0.05),三苯氧胺组、阳和化岩汤组、化痰组、解毒组明显提高细胞色素C蛋白及mRNA表达(P<0.05)。结论:阳和化岩汤可降低Bcl-2蛋白及mRNA表达,激活细胞色素C,加速癌细胞的凋亡,阻断相关通路活化,进而抑制癌变进程。     

基于PI3K/AKT通路探讨电针预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制

目的:基于PI3K/AKT通路探讨电针预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针预处理组和LY294002组,采用线栓法建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察脑缺血再灌注后大鼠神经功能缺损情况及TTC染色观察脑梗死体积,应用western blot法检测缺血脑组织中p-Akt、HIF-1α和Caspase-3蛋白表达水平。结果:电针预处理对脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损具有明显的改善作用,能够明显降低脑梗死范围。western blot结果发现:模型组中p-Akt和HIF-1α的表达明显高于假手术组;与模型组比较,电针预处理组中p-Akt和HIF-1α的表达明显增加,LY294002组中p-Akt的表达明显低于模型组;模型组中Caspase-3的表达明显增加;与模型组比较,电针预处理组中Caspase-3的表达明显减少,LY294002组脑组织中Caspase-3的表达明显增加。结论:电针预处理对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其可能机制与激活PI3K/Akt信号通路、上调p-Akt和HIF-1α蛋白表达、降低Caspase-3表达有关。