低浓度弹力蛋白酶不同腔内灌注压力对建立兔腹主动脉瘤模型的影响

目的探讨不同灌注压力条件下,经腹主动脉腔内灌注低浓度弹力蛋白酶对兔腹主动脉瘤(AAA)成瘤率及死亡率的影响。方法 30只雄性新西兰大白兔随机分为A、B、C三组,每组各10只,均经双腔导管向腹主动脉腔内注入10μl浓度为50 u/ml的弹力蛋白酶,灌注保持时间为7～10 min,灌注保持压力分别为A组0 mmHg,B组100～200 mmHg,C组300～400 mmHg,分别于术前及术后第7天行腹主动脉超声检查,计算各组腹主动脉扩张率、成瘤率及存活率,后处死动物,对血管灌注部位行组织病理及免疫组织化学染色。结果将灌注后血管直径大于正常腹主动脉内经的50%者定义为腹主动脉瘤形成。A组存活10只,灌注部位血管扩张率为(16±9.4)%,成瘤率为0%,存活率为100%;B组存活10只,灌注部位血管扩张率为(98.8±16.4)%,成瘤率100%,存活率为100%;C组存活4只,存活动物灌注部位血管扩张率为(110±13.3)%,成瘤率100%,存活率为40%。结论经腹主动脉腔内灌注低浓度弹力蛋白酶(50 u/ml),将灌注压保持在100～200 mmHg,能够在较短时间内成功制备腹主动脉瘤模型,且成瘤率高、死亡率低。     

不同浓度弹力蛋白酶对建立兔腹主动脉瘤模型成瘤率的影响

目的通过腹主动脉腔内低压力灌注猪胰弹力蛋白酶建立兔腹主动脉瘤模型,探索不同浓度猪胰弹力蛋白酶对兔腹主动脉成瘤率的影响。方法新西兰雄兔50只,体质量(2.50±0.20)kg,随机分为5组:A组、B组、C组、D组、E组,每组各10只。A组经双腔导管注入生理盐水10μl,其余4组经双腔导管注入10μl浓度分别为1U/ml、10U/ml、100U/ml、200U/ml的猪胰弹力蛋白酶,灌注保持7min。术后第7天处死动物,分别于术前及术后第7天行腹主动脉彩超检查,观察灌注血管部位变化。结果 E组实验动物存活率较A组、B组、C组及D组明显下降(40%vs 90%、90%、90%及90%)。腹主动脉术后最大直径随给予灌注浓度增加而增大。与术前最大直径比较,A组及B组术后最大直径未见明显扩张;C组、D组及E组术后最大直径明显扩张;D组及E组较A组、B组及C组,术后第7天腹主动脉扩张率[(125.40±16.10)%及(248.20±5.60)%vs 0%、(24.90±2.50)%及(43.90±7.69)%,P0.05]及成瘤率[100.0%及100.0%vs 0%、0%及33.3%,P0.05]均明显升高。结论高浓度猪胰弹力蛋白酶(100U/ml)在低压力状态下较短时间灌注可成功建立兔腹主动脉瘤模型,且成瘤率高、死亡率低。     

高浓度弹力蛋白酶不同灌注保持时间对建立兔腹主动脉瘤模型的影响

目的通过经腹主动脉腔内灌注高浓度弹力蛋白酶建立兔腹主动脉瘤(AAA)模型,观察不同灌注保持时间对兔AAA成瘤率及死亡率的影响。方法 24只新西兰雄兔随机分为A组、B组、C组各8只,每组均经双腔导管注入10μl、浓度为100 U/ml的弹力蛋白酶,灌注保持时间A组3~5 min,B组7~10 min,C组20~30 min;后用生理盐水冲洗管腔3次;分别于术前及术后第7天行腹主动脉彩超检查,术后第7天处死动物,行组织学病理染色观察血管灌注部位组织学变化。结果 A组存活8只,灌注局部血管扩张率40.3%~63.1%,其中5只扩张率大于50%,达到AAA成瘤标准,成瘤率62.5%,术后7 d存活率100%;B组存活8只,局部血管扩张率87.5%~109.2%,均达到成瘤标准,成瘤率100%,术后7 d存活率100%;C组存活3只,灌注局部血管扩张率237.7%~252.0%,成瘤率100%,术后7 d存活率为37.5%。结论高浓度弹力蛋白酶制作兔AAA模型,灌注时间保持7~10 min具有成瘤率高、死亡率低、操作简易等优点,易于推广。     

高血压对兔腹主动脉瘤进展过程及管壁炎症活动的影响

目的探讨高血压对腹主动脉瘤进展过程及管壁炎症活动的影响。方法将新西兰雄性大白兔30只随机分为A组和B组,各15只,2组采用高浓度弹力蛋白酶(100IU/ml)在低压力状态下腔内灌注的方法制备肾下腹主动脉瘤模型,B组于手术成功后次日起持续给予1000ng/(kg·min)的血管紧张素Ⅱ泵注。分别于术前、术后1、2和4周行腹主动脉超声检测及耳缘静脉采血,动态监测血压;观察动脉瘤体直径、扩张率和增长率;检测血清基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、C反应蛋白(CRP)水平。之后每组各处死5只,留取动脉组织标本进行病理及免疫组织化学染色。结果与A组比较,B组术后1、2和4周血压明显增高,差异有统计学意义(P0.01);瘤体直径均增加,差异有统计学意义(P0.01);与术后1周比较,2组术后2和4周扩张率增加,差异有统计学意义(P0.01);A组与B组术后1、2和4周时扩张率比较,差异有统计学意义[(51.66±5.72)%vs (57.21±6.16)%,(91.25±6.84)%vs (106.84±6.86)%,(94.10±7.41)%vs (133.20±9.51)%,P0.05];与A组比较,B组术后增长率明显增快,差异有统计学意义(P0.05)。与A组比较,B组术后血清MMP-9、MMP-2、CRP及免疫组织化学CD68巨噬细胞染色面积百分比明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论高血压可以通过上调MMP-9、MMP-2、CRP表达加重血管壁炎症活动,明显促进兔腹主动脉瘤进展。     

不同进展速度兔腹主动脉瘤的PET/CT活体成像研究

目的探讨PET/CT用于评估腹主动脉瘤(AAA)进展速度的价值及其机制。方法成年新西兰雄性大白兔30只,随机抽签分为两组,A组动脉瘤组(15只),B组高血压动脉瘤组(15只),均采用高浓度弹力蛋白酶(100 IU/ml)在腔内灌注的方法制备肾下AAA模型。B组于手术成功后次日起持续以1000 ng/(kg·min)速度泵注AngⅡ。监测血压,超声动态随访,观察血清单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、基质金属蛋白酶(MMP9、MMP2),对比术后14 d时PET/CT扫描平均标准化摄取值(SUVmean)结果。PET/CT后,两组各处死10只家兔,留取瘤体组织观察病理改变(HE、弹力纤维EVG、胶原纤维masson)及测定巨噬细胞(CD68)、基质金属蛋白酶(MMP9)。结果与A组比较,B组家兔血压明显升高,术后14 d时动脉瘤增长速度明显快于A组,血清MMP9、MMP2,免疫组化CD68、MMP9结果均增加,差异有统计学意义(P0.01),而两组间血清MCP-1差异无统计学意义。病理结果显示A组动脉壁组织层次较为紊乱,弹力纤维变细、断裂、碎片及空泡形成,胶原纤维增多;B组动脉壁组织层紊乱,相比于A组弹力纤维断裂、破碎程度较重。PET/CT方面,相较于A组,B组瘤体部位SUVmean升高明显(P0.01),相关性分析显示SUVmean值与巨噬细胞阳性累积光密度值(IOD)(r=0.751,P0.01)及MMP9 IOD(r=0.597,P0.05)呈正相关。结论 PET/CT可以客观反映腹主动脉瘤局部炎症浸润状态,并可通过SUVmean值定性评估腹主动脉瘤的进展速度。     

改良大鼠腹主动脉瘤模型的建立

目的研究一种简便、稳定、可靠的构建大鼠腹主动脉瘤模型的方法。方法选用SD雄性大鼠50只,随机分为弹力蛋白酶(Elastase)组、CaCl2组、CaCl2+Elastase组、生理盐水组、正常组,每组10只。五组大鼠分别于术中进行不同处理,术后14 d观察各组大鼠的存活率,计算腹主动脉的直径扩张率,取腹主动脉组织进行HE染色,维多利亚蓝弹力纤维染色以及平滑肌凋亡实验。结果 Elastase组、CaCl2组、CaCl2+Elastase组、生理盐水组、正常组大鼠的术后存活率分别为:80%,100%,70%,100%,100%;腹主动脉的直径扩张率分别为:220.3%,100%,220.3%,112.3%,100%;HE染色:Elastase组、CaCl2组、CaCl2+Elastase组的各层结构分界不明显,动脉壁破坏明显,其中CaCl2组和CaCl2+Elastase组炎症细胞浸润增多;维多利亚蓝弹力纤维染色:Elastase组和CaCl2+Elastase组主动脉壁结构紊乱,中膜弹力纤维减少或消失,胶原纤维增多。平滑肌凋亡实验:Elastase组和CaCl2+Elastase组中凋亡小粒明显增多。结论注入20 U Elastase并用浸润有CaCl2溶液的纱布包绕腹主动脉所制作的大鼠腹主动脉瘤模型,较为符合人腹主动脉瘤的病理改变。     

趋化素样因子1在大鼠腹主动脉瘤病情发展中的作用

目的探讨氢气抑制趋化素样因子1(Cklf1)在大鼠腹主动脉瘤病情发展中的作用。方法取雄性SD大鼠20只,随机分为腹主动脉瘤组和腹主动脉瘤干预组(腹腔注射氢气饱和生理盐水),建立腹主动脉瘤模型。术后28 d开腹取材,观察腹主动脉扩张情况,采用苏木素-伊红(HE)染色和弹力纤维染色检测炎症浸润和腹主动脉中膜弹力纤维破坏情况,免疫组化法检测Cklf1(r Cklf1)、金属蛋白酶(MMP2)蛋白表达情况,RT-PCR检测r Cklf1、MMP2基因表达情况。结果腹主动脉瘤组大鼠腹主动脉扩张率明显高于腹主动脉瘤干预组(P0.01)。腹主动脉瘤组大鼠瘤壁r Cklf1 mRNA、MMP2 mRNA表达量均明显高于腹主动脉瘤干预组(P0.01);r Cklf1、MMP2主要在腹主动脉瘤壁中层病变严重区域表达上调;与腹主动脉瘤组相比,干预组r Cklf1、MMP2阳性表达明显减弱,炎症浸润、弹力纤维破坏程度明显减轻。结论氢气可通过抑制r Cklf1表达,抑制炎性细胞向腹主动脉受损区域聚集,降低MMP2表达合成,减缓中膜弹力纤维降解,干预腹主动脉瘤进展。     

阿托伐他汀抑制腹主动脉瘤基质金属酶9及核因子κB表达的实验研究

目的研究阿托伐他汀对腹主动脉瘤基质金属酶9及核因子κB影响,探讨其临床应用价值。方法成年雄性WISTER大鼠24只,随机分为实验组和对照组,每组12只;分别皮下注射阿托伐他汀4 mg/(kg.d)和等容积的生理盐水。用弹力酶灌注法建立大鼠腹主动脉模型。观察两组动脉瘤形成率和动脉壁病理学改变。HE染色、弹力纤维EVG染色观察腹主动脉瘤组织学变化,逆转录聚合酶链反应检测动脉基质金属酶9及核因子κB mR-NA的表达水平,免疫组织化学分析基质金属酶9及核因子κB的蛋白表达水平。结果弹力酶灌注2周后实验组大鼠腹主动脉瘤形成率为20%,对照组动脉瘤形成率为90%,实验组动脉组织弹力纤维未见明显断裂消失等受损表现,仅有少量炎症细胞浸润及基质金属酶9及核因子κB的表达。对照组动脉壁组织弹力纤维严重受损,可见明显炎症细胞浸润,基质金属酶9及核因子κB的表达显著增高。结论阿托伐他汀能够降低动脉壁组织基质金属酶9及核因子κB的表达及炎症细胞的浸润,减少弹力纤维的降解,从而抑制实验性大鼠腹主动脉瘤的形成。     

两种实验性腹主动脉瘤大鼠模型的比较

为探讨和比较两种腹主动脉瘤大鼠模型特征，以便进一步为腹主动脉瘤体内研究提供基础，选取SD大鼠肾下腹主动脉猪胰腺弹力蛋白酶恒压灌注，或使用豚鼠肾下腹主动脉正位替换。利用特殊染色和免疫组化技术，分别于术后2周和4周，观察腹主动脉形成率、形态学变化及基质金属蛋白酶水平。结果发现，64%酶灌注大鼠和88%异种移植大鼠形成腹主动脉瘤，均无出血或腔内血栓形成。与灌注型腹主动脉瘤相比，移植型腹主动脉瘤壁损伤更为严重，基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶9表达也显著增高。证明两种方法均能诱导腹主动脉瘤形成，但以移植模型更为稳定可靠。     

尼古丁联合血管紧张素Ⅱ诱导老年小鼠腹主动脉瘤形成的研究

目的:探讨尼古丁联合血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导腹主动脉瘤发生的效果和机制。方法:将10~12个月龄的雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、尼古丁组、AngⅡ组、联合组,各组分别皮下灌注生理盐水、尼古丁、AngⅡ、尼古丁+AngⅡ,持续28d后,观察各组腹主动脉瘤发生情况,采用免疫组化和Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的蛋白表达,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性。结果:(1)联合组诱导了腹主动脉瘤的发生,成瘤率为50%;(2)与对照组相比,联合组的主动脉组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平和活性均显著增高(P0.05)。结论:尼古丁联合AngⅡ可能通过调控MMP表达和活性诱导腹主动脉瘤形成。