参葵通脉颗粒对慢性心衰心肌重塑及TGF-β1、p-Smad3表达影响的实验研究

目的:探讨参葵通脉颗粒治疗慢性心衰(CHF)的可能作用机制。方法:SD大鼠采用腹主动脉缩窄法制备慢性心衰模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性药(盐酸贝那普利)组和参葵通脉颗粒低、中、高剂量组,另以10只仅游离腹主动脉不缩窄的大鼠为假手术组。各组大鼠灌胃给予相应药物,模型组和假手术组灌胃等容积蒸馏水,每日1次,各组均干预4周。干预结束后采用生理多导仪检测各组大鼠血流动力学指标;分离大鼠左心室,称重,计算左心室指数(LVMI);马松(Masson)染色检测心肌纤维化情况;免疫印迹(western blot)检测各组大鼠心肌转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-Smad3蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠左心室舒张期末压(LVEDP)显著升高,左心室内压最大上升及下降速率(±dp/dt max)显著降低(P0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒各剂量组LVEDP显著降低,+dp/dt max、-dp/dt max显著升高(P0.05);参葵通脉颗粒高剂量对上述指标的改善明显优于阳性药物(P0.05)。假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,形态正常;模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,大量条状、束状胶原纤维增生;各给药组大鼠心肌细胞轻度肥大,肌细胞排列较整齐,有少量胶原纤维增生。模型组LVMI和胶原容积指数明显高于假手术组;各给药组上述指标均较模型组显著降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织TGF-β1、p-Smad3蛋白表达水平显著升高(P0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒各剂量组TGF-β1、p-Smad3蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论:参葵通脉颗粒对CHF心肌重塑具有良好的改善作用,且可以减少心肌组织TGF-β1、p-Smad3蛋白的表达,这可能是其治疗CHF的机制之一。     

基于AMPK-mt TFA-PINK1信号探讨参葵通脉颗粒改善慢性心衰心肌线粒体损伤的机制

目的探讨参葵通脉颗粒治疗慢性心衰的可能作用机制。方法采用腹主动脉缩窄法制备慢性心衰大鼠模型,随机分为模型组,参葵通脉低、中、高剂量组,阳性药组,另以10只不缩窄腹主动脉的大鼠为假手术组。根据分组给予相应药物,模型组和假手术组给予等容积蒸馏水灌胃,每天1次,各组均干预4周。生理多导仪检测大鼠血流动力学指标变化;电镜检测心肌超微结构的变化;分光光度法检测Ca~(2+)-ATP酶与Na~+-K~+-ATP酶活性;Western Blot检测p-AMPKα、AMPKα、NRF-1、mt TFA、PINK1、p-parkin、parkin的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD显著升高,LVEF、FS显著降低(P0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒各组LVEDD、LVESD显著降低,LVEF、FS显著升高(P0.05),提示参葵通脉颗粒对慢性心衰具有良好的改善作用。与假手术组比较,模型组大鼠心肌超微结构损伤,线粒体出现空泡等变化,给药干预组损伤明显减轻(P 0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠Ca2+-ATP酶与Na+-K+-ATP酶显著下降(P 0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒各组Ca~(2+)-ATP酶与Na~+-K~+-ATP酶显著上升(P 0.05)。与正常组相比,模型组NRF-1、mt TFA显著降低(P 0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒3个剂量组NRF-1、mt TFA显著增加(P 0.05)。与正常组相比,模型组p-AMPKα/AMPKα、PINK1、p-parkin/parkin有一定增加;与模型组比较,参葵通脉颗粒可促进p-AMPKα/AMPKα、PINK1、p-parkin/parkin的进一步增加(P 0.05)。结论参葵通脉颗粒对慢性心衰模型大鼠具有良好的治疗作用。慢性心衰模型大鼠心肌线粒体损伤明显增加,参葵通脉颗粒可以调控AMPK-mt TFA-PINK1信号轴,改善心肌细胞线粒体自噬,促进线粒体生成。     

丹参饮颗粒抑制NLRP3炎症小体抗大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:观察丹参饮颗粒对心肌缺血再灌注损伤的作用及其通过氧化应激和NLRP3炎症小体活化途径的作用机制。方法:采用冠状动脉左前降支结扎制备大鼠心肌缺血再灌注模型,随机分为模型对照组、丹参饮颗粒1 g/kg组、3 g/kg组和9 g/kg组,缺血1 h后进行再灌注,另设假手术对照组。于再灌注前0.5 h和再灌注20 h时分别灌胃给予丹参饮颗粒溶液或纯水。再灌注24 h后检测大鼠心功能,测定心肌梗死范围、血清心肌酶谱、心肌炎症因子、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(T-AOC),心肌冰冻切片染色观察活性氧(ROS)含量,免疫印迹分析NLRP3炎症小体活化水平。结果:与假手术对照组比较,模型对照组LVESD明显升高,而EF和FS亦急剧降低,梗死区面积明显增加,血清中AST、LDH、CK-MB、MDA含量明显升高(P<0.05或P<0.01),SOD活性和T-AOC活力显著降低,心肌组织TNF-α、IL-1β和IL-6含量显著升高,ROS水平明显升高,NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、成熟型半胱天冬酶-1(cleaved Caspase-1)和白介素-1β(cleaved IL-1β)蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,丹参饮颗粒3 g/kg、9 g/kg组大鼠心功能明显提高,心肌梗死范围减小,血清心肌酶水平、心肌组织炎症因子和ROS水平显著降低,MDA含量降低,而SOD和T-AOC活力升高(P<0.05或P<0.01),还明显下调NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1和cleaved IL-1β蛋白水平。结论:丹参饮颗粒具有显著的抗心肌缺血再灌注损伤作用,可能与其抑制氧化应激、抑制NLRP3炎症小体活化和缓解炎症有关。     

参葵通脉颗粒对慢性心衰大鼠模型心肌细胞焦亡及相关因子的影响

目的:探讨参葵通脉颗粒治疗慢性心衰(CHF)的作用机制。方法:腹主动脉缩窄制备CHF模型,随机分为模型组、参葵通脉颗粒低、中、高剂量组、贝那普利组,另以10只不缩窄腹主动脉大鼠为假手术组,根据分组给予相应药物,每日1次共4周。彩色超声系统检测LVEF与FS,化学发光法检测NT-proBNP,TUNEL法检测心肌程序性坏死程度,western blot检测TLR4、NF-κB、Caspase 1及IL-1β。结果:与假手术组比较,模型组LVEF、FS明显下降,NT-proBNP、TUNEL阳性细胞、TLR4、NF-κB、Caspase 1、IL-1β表达明显增加,与模型组比较,参葵通脉颗粒各组LVEF、FS明显上升,NT-proBNP、TUNEL阳性细胞、TLR4、NF-κB、Caspase 1、IL-1β表达明显降低。结论:参葵通脉颗粒可改善CHF大鼠模型心脏功能,降低心肌细胞焦亡与TLR4、NF-κB、Caspase 1、IL-1β的表达。     

降香通脉汤对心肌缺血再灌注大鼠炎症因子及NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路的影响

目的：观察降香通脉汤对心肌缺血再灌注大鼠炎症因子及NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路的影响。方法：将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及降香通脉高、中、低剂量组,每组10只,给药14天后,采用大鼠冠状动脉前降支结扎30 min再复流1 h的方法建立I/R模型。ELISA法检测大鼠血清指标,HE染色观察心肌形态学改变,Western blot法检测心肌组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达。结果：与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、血清LDH、AST、CK-MB、IL-1β及IL-6水平及NLRP3、Caspase-1、ASC表达均增高（P﹤0.05）;与模型组比较,降香通脉组上述各指标明显降低（P﹤0.05）,且高剂量组下降最明显。结论：降香通脉汤可以降低再灌注大鼠心肌梗死面积,能降低大鼠血清AST、CK-MB、LDH指标和炎症因子IL-1β和IL-6的水平。其机制可能是通过抑制NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路对再灌注心肌起到保护作用。     

金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响

目的观察金刚藤颗粒对急性盆腔炎(APID)模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响。方法将雌性SD大鼠105只随机分为假手术组、模型组及金刚藤颗粒低、中、高剂量组,每组均15只,灌胃治疗15 d后,ELISA检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察子宫组织的病理形态;实时定量PCR及Western blotting分别检测NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平。结果 HE染色显示,模型组大鼠子宫内膜上皮细胞脱落坏死,腔壁结构紊乱,全层炎性细胞浸润,有充血水肿;与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组症状较模型组有显著改善;与对照组、假手术组比较,模型组血清IL-1β、IL-18水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组IL-1β、IL-18水平显著降低(P 0.05);与对照组比较,模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著降低(P 0.05);模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达水平显著高于假手术组(P 0.05),金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Cas-pase-1蛋白表达水平较模型组显著降低(P 0.05)。结论金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠具有显著治疗作用,其可能通过抑制NLRP3炎症小体通路发挥免疫作用。     

苓桂术甘汤对慢性心衰模型大鼠心肌组织TNF-α及血清NF-κB和IL-1β的影响

目的 观察苓桂术甘汤对慢性心力衰竭模型大鼠心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白及mRNA表达、血清核因子-κB (NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平的影响,探讨苓桂术甘汤防治慢性心衰的作用机制.方法 采用冠状动脉结扎法制备慢性心衰大鼠模型,造模4周后将模型大鼠随机分为模型组,卡托普利(4.375 mg/kg)阳性对照组,苓桂术甘汤低、中、高剂量(生药2.1、4.2、8.4 g/kg)组,另设假手术组,每天给药1次,连续给药4周.Westem blotting、RT-PCR法分别检测各组大鼠心肌组织TNF-α蛋白及mRNA的表达,ELISA法检测血清中NF-κB、IL-1β水平.结果 与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织TNF-α蛋白及mRNA表达增强,血清NF-κB、IL-1β水平显著升高(P＜0.01);与模型组相比,苓桂术甘汤及卡托普利均能显著抑制模型大鼠心肌组织TNF-α蛋白及mRNA表达、降低模型大鼠血清NF-κB、IL-1β水平(P＜0.05、0.01).结论 苓桂术甘汤干预慢性心衰的机制与其调节细胞因子网络有关.     

化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏NLRP3、Caspase1、IL-1β表达的影响

目的观察化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3[NOD(nucleotide-binding oligomerization domain)-like receptor protein 3,NLRP3]、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β表达的影响。方法将40只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(10只)、造模组(30只),采用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)手术复制梗阻性肾病模型,成功后随机分为模型组、西药组和中药组,每组各10只。西药组给予依普利酮100 mg/(kg·d),中药组给予化瘀解毒方13.7 g/(kg·d),假手术组和模型组给予等量生理盐水,连续给药10天。检测各组血清IL-1β含量,检测肾脏NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,检测肾脏TUNEL阳性细胞率。结果假手术组NLRP3表达不明显,Caspase-1及IL-1β呈弱表达,仅见少量TUNEL阳性细胞。与假手术组比较,模型组血清IL-1β含量升高(P0.01),肾组织NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达升高(P0.01);NLRP3主要表达于肾间质巨噬细胞及肾小管上皮细胞,Caspase-1及IL-1β主要见于肾小管上皮细胞胞浆;TUNEL阳性细胞增多,以间质扩张的远端小管上皮细胞为主(P0.01)。与模型组比较,两个给药组血清IL-1β含量降低(P0.01),NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达降低,TUNEL阳性细胞率降低(P0.05,P0.01)。结论化瘀解毒方可下调NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,减轻肾组织炎症损伤。     

灵宝护心丹对心肌梗死大鼠心肌NLRP3/Caspase-1细胞焦亡信号通路的影响

目的 探讨灵宝护心丹对心肌梗死大鼠心肌NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)细胞焦亡信号通路的影响。方法 将50只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、倍他乐克组（0.9 mg/kg）、灵宝护心丹低剂量组（0.9 mg/kg）、灵宝护心丹高剂量组（1.8 mg/kg）,每组10只,连续灌胃3周,末次给药24 h后行急性心肌梗死造模手术,假手术组只穿线不结扎。造模24 h后取材检测相关指标。利用TTC染色测量大鼠心肌梗死面积,采用苏木精-伊红（HE）、铁-苏木素（Heidenhain）染色观察心肌组织病理改变,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血清白介素（IL）-1β、IL-18水平,采用Western Blot检测大鼠心肌组织NLRP3、Caspase-1水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠均出现不同程度的心肌梗死范围（P<0.01）,心肌组织发生炎症反应、心肌缺血情况,大鼠血清IL-1β、IL-18水平升高（P<0.01）,心肌组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平升高（P<0.01）;...     

基于ROS/NLRP3/Caspase-1通路的鹿芪方对慢性心力衰竭小鼠心肌细胞焦亡的影响

目的观察鹿芪方对慢性心力衰竭小鼠心肌细胞焦亡的影响,从ROS/NLRP3/Caspase-1通路探讨其作用机制。方法 60只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、鹿芪方组、培哚普利组,采用冠状动脉前降支结扎法制备慢性心力衰竭小鼠模型。鹿芪方组和培哚普利组分别予相应药液灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃,连续6周。超声检测小鼠心功能,HE染色、Masson染色检测小鼠心肌组织病理变化和胶原纤维沉积,DHE荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,Westernblot检测心肌组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达,免疫组化检测白细胞介素(IL)-1β表达,透射电镜观察心肌组织超微结构。结果与假手术组比较,模型组小鼠左室射血分数(LVEF)和左室收缩分数(LVFS)降低,左室舒张末期内径(LVIDd)与左室收缩末期内径(LVIDs)升高;心肌细胞明显增大,排列不规则,有较多炎性细胞聚集及胶原纤维沉积;心肌组织ROS含量增加,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及IL-1β表达升高,差异均有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,鹿芪方组与培哚普利组小鼠LVEF和LVFS升高,LVIDd和LVIDs降低;心肌细胞损伤改善,胶原纤维沉积明显减少,心肌纤维化明显减轻;心肌组织ROS含量减少,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及IL-1β表达降低,差异均有统计学意义(P0.01)。结论鹿芪方能有效减轻慢性心力衰竭小鼠心肌细胞焦亡,其机制可能与抑制ROS/NLRP3/Caspase-1通路活化,减轻心肌炎症反应相关。     

芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响

目的观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、芍药苷低剂量组、芍药苷高剂量组,每组12只。采用线栓阻断法制作大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h后进行再灌注,再灌注后1 h腹腔注射芍药苷(2.5、5 mg/kg),每日1次,连续7 d。Zea Longa 5分评价方法对大鼠进行神经功能评分。ELISA检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。RT-PCR和Westernblot分别检测大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠神经功能评分各时点均降低,芍药苷低剂量组第7日和芍药苷高剂量组第3、5、7日神经功能评分差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均升高,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1和NLRP3m RNA和蛋白表达均上调;与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白表达显著下调(P0.01)。结论芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与抑制NLRP3炎症体信号通路分子的表达、减轻炎症反应相关。     

祛寒逐风颗粒对骨性关节炎大鼠炎症反应的影响

目的:观察祛寒逐风颗粒对膝骨性关节炎(KOA)大鼠炎症反应和NF-κB介导NLRP3炎性小体活化的影响。方法:建立骨性关节炎大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、祛寒逐风颗粒组(3,6,9 g/kg)和阳性药组,测量大鼠机械性痛阈值和膝关节直径,采用酶联免疫吸附实验测量大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-6的含量变化,采用RT-PCR法测量大鼠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA含量,采用苏木精-伊红染色和阿尔新蓝染色观察组织的病理学变化,采用蛋白免疫印迹法检测大鼠软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17的蛋白水平。结果:与模型组比较,祛寒逐风颗粒组和阳性药组大鼠的机械性痛阈值增大,膝关节直径变小,血清中IL-1β、TNF-α和IL-6含量减少,组织中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA水平下调,软骨损伤和纤维化缓解,软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17蛋白表达下调。结论:祛寒逐风颗粒可能通过抑制NF-κB介导的NLRP3炎性小体活化显着改善KOA大鼠的炎症反应并缓解疼痛,对骨关节炎发挥治疗作用。     

温阳振衰颗粒对肾间质纤维化模型大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响

目的 观察温阳振衰颗粒对肾间质纤维化大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响,从NLRP3/Caspase-1通路探讨其干预机制。方法 50只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、抑制剂组和温阳振衰颗粒组,每组10只。以结扎并剪断左侧输尿管建立肾间质纤维化大鼠模型,分别予相应药物干预,连续14 d。试剂盒检测血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）含量,HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化检测肾组织转化生子因子（TGF）-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）表达,Western blot和RT-PCR检测肾组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素（IL）-18、IL-1β蛋白和mRNA表达,免疫荧光双染法检测细胞焦亡。结果 与假手术组比较,模型组大鼠SCr、BUN含量显著增加（P<0.01）,肾小管扩张,炎性细胞浸润,间质纤维化明显,肾组织TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达显著升高（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白和mRNA表达显著升高（...     

金银花提取物对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠ROS-NLRP3炎症小体信号通路的影响

目的观察金银花提取物(HFE)对重症急性胰腺炎大鼠肺组织的保护作用,并初步探究可能的作用机制。方法将大鼠分为假手术组、模型组及银花提取物低、中、高剂量组、地塞米松组,每组16只。评估大鼠生存状态;测定大鼠肺组织湿/干重比率(W/D)、动脉血氧分压;HE染色观察大鼠胰腺、肺组织病理形态学变化;酶联免疫法检测BALF中白细胞介素-1β(IL-1β)\白细胞介素-18(IL-18)水平,血细胞计数仪分析总细胞数量和多形核白细胞数量;氮蓝四唑光还原法检测肺组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)水平,比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,二氢乙啶(DHE)法检测活性氧(ROS);免疫印迹法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶(Caspase-1)、IL-1β蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组生存状况评分降低,胰腺、肺组织病理评分降低,动脉血二氧化碳分压、胰腺、肺组织W/D升高,血氧分压降低;BALF中IL-1β、IL-18、总细胞数量、多形核白细胞数量升高;肺组织SOD水平降低,MDA、ROS水平升高,肺组织中NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达升高(P 0.05)。与模型组相比,金银花提取物各组以及地塞米松组生存状况评分升高,胰腺、肺组织病理评分升高,动脉血二氧化碳分压、胰腺、肺组织W/D降低,血氧分压升高,BALF中IL-1β、IL-18、总细胞数量、多形核白细胞数量降低,肺组织SOD水平升高,MDA,ROS水平降低,肺组织中NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达降低(P 0.05)。结论金银花提取物对重症急性胰腺炎大鼠的肺损伤具有保护作用,且这种作用可能通过抑制ROS产生,进而抑制NLRP3炎症小体通路介导的促炎因子IL-1β和IL-18的释放,缓解肺组织炎症损伤。     

基于NALP3炎性体信号通路研究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎的作用机制

目的:探究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎以及对NALP3炎性体(NACHT-LRR-PYD-containing proteins-3,NALP3)信号通路的影响。方法:将SD大鼠分为6组,分别为正常组,模型组(踝关节腔注射尿酸钠制备),栀黄止痛颗粒低、中、高剂量(1.0,2.5,5.0 g·kg-1)和阳性药组(秋水仙碱,3.0 g·kg-1),酶联免疫吸附法(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)含量,造模后24 h评定大鼠步态以及关节炎症指数,造模前、造模后6,12,24,48 h测定大鼠裸关节肿胀度。苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节组织病理学变化,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot),免疫组化法检测关节组织中NLRP3,IL-1β,凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱天冬酶-1(Caspase-1)表达。结果:与正常组比较,模型组血清中TNF-α,IL-6,IL-1β含量显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组显著降低TNF-α,IL-6,IL-1β含量(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠步态较差、关节肿胀显著(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、药物处理组步态、关节肿胀得到所改善,随着药物剂量浓度的增加,步态、关节肿胀分级逐渐降低(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组踝关节组织中NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组均显著降低NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白的表达(P0.01)。免疫组化显示,与正常组比较,模型组NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1表达阳性表达量显著升高,而与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒中、高剂量组显著降低阳性表达率(P0.01),具有剂量依赖性。结论:栀黄止痛颗粒能够缓解痛风性关节炎大鼠关节肿胀,其机制可能与抑制NALP3炎性体信号通路有关。     

黄芪预处理对大鼠肠系膜缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的:研究黄芪预处理对大鼠肠系膜缺血再灌注损伤的保护作用。方法:取120只实验用大鼠随机分假手术组、模型组、银杏叶提取物(3.15 mg/kg)预处理组和黄芪(5、10和20 g/kg)预处理组;术前7天开始腹腔注射给药(1次/d),假手术组和模型组给予等体积生理盐水;通过夹闭肠系膜上动脉45 min后去夹恢复血流再灌注的方法制备肠系膜缺血再灌注损伤大鼠模型;再灌注2 h后,取肠组织观察并测定肠组织含水量,HE染色观察肠组织病理变化并进行损伤评分(Chiu's氏评分);检测肠组织中抗氧化酶(SOD、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;酶联免疫法(ELISA)测定肠组织中炎症细胞因子(CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10)含量;末端标记法(TUNEL)检测肠系膜细胞凋亡状况并计算凋亡指数(Apoptosis Index,AI),通过比色法定量分析肠组织中Caspase-3、Caspase-9活性,Western blot法测定肠组织中NF-κB蛋白表达并进行半定量分析。结果:与模型组比较,黄芪预处理组大鼠肠组织外观明显红润、水肿状况明显改善,其中10、20 g/kg预处理组肠组织含水量显著降低(P0.05,P0.01);黄芪预处理各组大鼠肠组织病变明显较轻,其中10、20 g/kg预处理组Chiu's氏评分显著低于模型组(P0.05、P0.01);黄芪(10、20 g/kg)预处理组肠组织中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05,P0.01),CRP、TNF-α、IL-6含量显著降低(P0.05,P0.01),20 g/kg预处理组IL-1β含量显著降低且IL-10含量显著升高(P0.05);黄芪预处理各组肠系膜细胞凋亡状况明显较轻,其中10、20 g/kg预处理组肠系膜细胞AI显著低于模型组(P0.01),肠组织中Caspase-3、Caspase-9活性显著降低、NF-κB蛋白表达显著下调(P0.05,P0.01)。结论:黄芪预处理对大鼠肠系膜缺血再灌注损伤具有保护作用;作用机制可能与黄芪能够改善抗氧化酶活性、提高自由基清除能力,抑制炎症细胞因子表达,降低Caspase-3、Caspase-9活性,抑制NF-κB蛋白表达有关。     

飞扬肠胃炎胶囊对盆腔炎性后遗症大鼠的治疗作用及机制探讨

目的:观察飞扬肠胃炎胶囊对盆腔炎性后遗症大鼠的药效及其作用机制。方法:15%苯酚胶浆注入大鼠右侧子宫复制盆腔炎性后遗症动物模型,造模15d后,将动物随机分为假手术组,妇科千金胶囊组(1.2g/kg),飞扬肠胃炎胶囊低剂量组(0.6g/kg)、飞扬肠胃炎胶囊中剂量组(1.2g/kg)、飞扬肠胃炎胶囊高剂量组(2.4g/kg)和模型组,灌胃给药30d后,观察大鼠子宫外观形态变化,HE染色评价病理改变情况,ELISA检测血清中白介素1-β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,免疫组化检测子宫中核转录因子(NF-ΚB)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清中IL-1β、TNF-α显著升高,组织中NF-ΚB、Caspase-3表达升高,经飞扬肠胃炎胶囊中剂量(1.2g/kg)、飞扬肠胃炎胶囊高剂量(2.4g/kg)治疗后,血清中IL-1β、TNF-α含量显著降低,组织中NF-ΚB表达降低,Caspase-3表达升高。结论:飞扬肠胃炎胶囊中(1.2g/kg)、飞扬肠胃炎胶囊高剂量(2.4g/kg)对盆腔炎性后遗症大鼠有良好的治疗作用,其作用机制可能与其抑制NF-ΚB通路激活和上调凋亡通路上的Caspase-3蛋白表达有关。     

黄芪预处理对大鼠肠系膜缺血/再灌注损伤的影响及机制

[目的]研究黄芪预处理对大鼠肠系膜缺血/再灌注损伤的影响并探讨其机制。[方法]取120只实验用大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶提取物(3.15 mg/kg)预处理组和黄芪(5、10、20 g/kg)预处理组,每组20只,术前7 d开始腹腔注射给药(每日1次),采用夹闭肠系膜上动脉45 min的方法制备肠系膜缺血再灌注大鼠模型。再灌注2 h后,取肠组织观察并测定肠组织含水量,苏木精-伊红(HE)染色观察肠组织形态结构变化并进行Chiu’s评分。检测肠组织中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性、丙二醛(MDA)含量、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)含量、细胞凋亡状况并计算凋亡指数(AI)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)活性、NF-κB蛋白表达并进行半定量分析。[结果]与模型组比较,黄芪预处理组大鼠肠组织外观明显红润、水肿状况明显改善,肠组织病变明显较轻。黄芪(10、20 g/kg)预处理组肠组织含水量显著降低,Chiu’s评分显著低于模型组,肠组织中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,CRP、TNF-α、IL-6含量显著降低,其中20 g/kg预处理组IL-1β含量显著降低且IL-10含量显著升高。黄芪预处理各组肠系膜细胞凋亡状况明显较轻,其中黄芪(10、20 g/kg)预处理组AI显著降低,肠组织中Caspase-3、Caspase-9活性显著降低、NF-κB蛋白表达显著下调,上述差异均具有统计学意义(P0.05或P0.01)。[结论]黄芪预处理具有抑制大鼠肠系膜缺血/再灌注损伤的作用,其作用机制可能与黄芪能够降低氧化应激损伤、抑制炎症反应和细胞凋亡有关。     

辛温开窍中药对脑梗死大鼠NLRP3炎性反应通路的影响

目的观察辛温开窍中药对脑梗死大鼠NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18的影响,探讨脑卒中的炎性反应通道及辛温开窍中药对缺血大鼠脑组织炎症反应的影响。方法将健康成年雄性SD大鼠120只随机分为假手术组、缺血组、常规中药组和辛温开窍组,每组30只。除假手术组外,其余组均选择从颈总动脉插入线栓直达颈内动脉末端栓塞一侧大脑中动脉法制备脑梗死模型。在术前连续3 d(每天2次)及术后(每6 h 1次)给予各组大鼠灌胃,常规中药组灌胃常规中药方煎剂,辛温开窍组灌胃常规中药方煎剂和麝香0.5 g,假手术组和缺血组灌胃生理盐水。分别于术后24 h和48 h取缺血区脑组织,采用Western Blot检测NLRP3、Caspase-1表达水平,采用酶联免疫法(ELISA)检测IL-18、 IL-1β表达水平,采用组织免疫荧光染色法检测NLRP3表达情况。结果术后24 h和48 h,缺血组、常规中药组和辛温开窍组大鼠脑组织中NLRP3、Caspase-1、IL-18、 IL-1β表达水平均显著高于假手术组(P均0.05),但常规中药组和辛温开窍组均显著低于缺血组(P均0.05),且辛温开窍组均显著低于常规中药组(P均0.05)。结论脑组织缺血后存在炎性因子的表达和NLRP3炎性通道反应;辛温开窍中药可显著下调缺血脑组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平,可能与麝香快速通过血脑屏障,抑制缺血后脑组织NLRP3炎症通道有关。     

中药参附对心肌缺血/再灌注大鼠血红素氧化酶-1表达的影响

目的通过实验观察中药注射液参附对心肌缺血/再灌注大鼠血红素氧化酶-1表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组10只、假手术组10只、模型对照组20只、参附注射液组20只。分别测定每组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平以及心肌组织中血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白及HO-1mRNA的表达水平。结果模型对照组心肌组织中MDA含量显著高于假手术组,SOD水平显著低于假手术组。参附注射液组心肌组织中MDA含量显著低于模型对照组,SOD水平显著高于模型对照组。模型对照组及参附注射液组HO-1mRNA和蛋白表达较假手术组明显升高,且参附注射液组HO-1mRNA和蛋白表达显著高于模型对照组。结论该研究结果表明参附注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其保护机制可能通过增加HO-1表达从而激活抗氧化因子SOD活性,灭活氧自由基MDA有关。