肺岩宁方调控MALAT1抑制A549肺癌细胞侵袭的机制研究

目的探讨肺岩宁方调控肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)抑制A549肺癌细胞侵袭的机制。方法向A549细胞转染LV-vector、LV-over/MALAT1慢病毒载体,应用肺岩宁方(0～500μg/ml)干预细胞,应用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测MALAT1表达情况;应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测肺岩宁方对肿瘤细胞增殖的影响;细胞侵袭实验检测肿瘤侵袭能力;Western blot法检测Wnt/β-catenin/EMT信号通路相关蛋白的表达。结果细胞侵袭实验结果显示,过表达MALAT1可增强A549细胞的侵袭能力,与正常对照组和慢病毒载体组相比,差异有统计学意义(P0.01);与正常对照组相比,肺岩宁方可抑制A549细胞侵袭,差异有统计学意义(P0.01),但过表达MALAT1后可减弱肺岩宁抑制细胞侵袭的能力。MTT结果显示,肺岩宁方可抑制肺癌A549细胞增殖,且呈浓度依赖性。qRT-PCR结果显示,肺岩宁方可下调MALAT1表达。Western blot结果显示,MALAT1可下调E-cadherin蛋白,上调N-cadherin、Snail及细胞核中β-catenin的蛋白水平,肺岩宁方能上调E-cadherin蛋白,下调N-cadherin、Snail及细胞核中β-catenin的蛋白水平,但过表达MALAT1可削弱肺岩宁对这些蛋白的调控作用。结论 MALAT1过表达通过激活Wnt/β-catenin通路,加速EMT进程促进A549肺癌细胞侵袭;肺岩宁方能够通过下调MALAT1,抑制Wnt/β-catenin/EMT信号轴,从而阻止A549肺癌细胞侵袭。     

石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。方法不同浓度石见穿多糖(0、0.25、0.5、1 mg/mL)处理人OS MG63细胞24 h,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR检测人OS细胞β-catenin mRNA表达,Western blot检测人OS MG63细胞Vimentin、E-cadherin蛋白表达。结果石见穿多糖抑制细胞迁移、侵袭(P0.01),降低β-catenin mRNA及Vimentin蛋白表达(P0.05,P0.01),促进E-cadherin蛋白表达(P0.01),且上述作用呈现剂量依赖性。结论石见穿多糖能抑制人OS MG63细胞的迁移和侵袭能力,这种作用可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而阻断EMT过程而引起的。     

益肺解毒汤对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移的影响及相关机制

目的:观察益肺解毒汤对肺癌A549细胞侵袭转移的影响,并探讨该方对细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:常规培养肺癌A549细胞,Co Cl2化学模拟肺癌A549细胞缺氧微环境,设空白组,以150μmol·L~(-1)Co Cl2,150μmol·L~(-1)Co Cl2+15 g·L~(-1)益肺解毒汤,15 g·L~(-1)益肺解毒汤处理细胞,镜下观察细胞形态学改变,transwell实验观察细胞侵袭能力;细胞划痕实验测细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定A549细胞上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中上皮细胞、间质细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达,转录因子Snail蛋白表达,信号分子β-链蛋白(β-catenin)、磷酸化糖原合成酶激酶-3(p-gsk-3β)表达。结果:缺氧可诱导A549细胞发生形态改变,益肺解毒汤可抑制缺氧诱导的形态改变。与空白组比较,Co Cl2组细胞侵袭和迁移能力增强(P0.05);与Co Cl2组比较,Co Cl2+益肺解毒汤组的细胞侵袭能力明显减弱(P0.01),迁移能力亦减弱(P0.05)。与空白组比较,Co Cl2组细胞EMT相关蛋白,E-cadherin表达下调,Vimentin,Snail表达上调(P0.05),说明缺氧使细胞发生了EMT;与Co Cl2组比较,Co Cl2+益肺解毒汤组可上调Ecadherin,p-gsk-3β,下调Vimentin,Snail,β-catenin蛋白表达(P0.05)。结论:益肺解毒汤能抑制缺氧诱导的A549细胞的形态变化、侵袭及迁移能力,还能抑制缺氧诱导的EMT的发生,其机制可能与Wnt/β-catenin通路有关。     

芪术抗癌方对肝癌细胞上皮间质化的影响

【目的】探讨芪术抗癌方对肝癌HepG2细胞上皮间质化的影响。【方法】将HepG2细胞分为空白对照组,转化生长因子β1 （TGF-β1） 组,TGF-β1+芪术抗癌方1 mg/mL组,TGF-β1+芪术抗癌方2 mg/mL组等4组,显微镜下观察处理24 h后细胞的形态变化,划痕实验观察24 h细胞迁移能力,蛋白免疫印迹法检测细胞上皮间质化相关蛋白E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）、Vimentin、Snail、纤黏蛋白（Fibronectin）的表达情况。【结果】 HepG2细胞加入TGF-β1后出现上皮间质化样多形改变,而芪术抗癌方2个治疗组均能抑制这一细胞形态改变。划痕实验结果显示,TGF-β1组划痕愈合百分比较空白对照组显著增加（P < 0.05）,而芪术抗癌方2个治疗组划痕愈合百分比较TGF-β1组显著减小（P < 0.05）。蛋白免疫印迹法结果显示：TGF-β1组E-cadherin表达水平较空白对照组降低,N-cadherin、Vimentin、Fibronectin和Snail表达水平较空白对照组均升高,其中2组的Fibronectin表达水平比较,差异有统计学意义（P < 0.05）;与TGF-β1组比较,芪术抗癌方2个治疗组E-cadherin表达水平均升高,N-cadherin、Vimentin、Snail和Fibronectin表达水平均降低,其中,芪术抗癌方1 mg/mL组Vimentin、Snail 表达水平,与 TGF-β1 组比较,差异有统计学意义（均 P < 0.05）,芪术抗癌方 2 mg/mL 组 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Fibronectin表达水平,与TGF-β1组比较,差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。【结论】 芪术抗癌方对TGF-β1诱导的HepG2细胞上皮间质化具有抑制作用。     

解毒三根汤对结肠癌SW480细胞侵袭转移及AKT/GSK-3β信号通路的影响

目的探讨解毒三根汤抗结肠癌侵袭转移的可能作用机制。方法在结肠癌SW480细胞中建立蛋白激酶B (AKT)敲减和相应阴性的细胞稳定株。实验分为阴性对照组、阴性三根汤组、AKT敲减对照组、AKT敲减三根汤组。首先用终浓度为50 ng/ml表皮细胞生长因子诱导各组细胞48 h建立上皮间质转化(EMT)模型。再用6 g/L解毒三根汤干预阴性三根汤组和AKT敲减三根汤组48 h。通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞侵袭转移能力,采用Western blot法检测EMT相关标记物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Occludin、Twist、Slug、Snail、ZEB1)及蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(AKT/GSK-3β)信号通路相关蛋白表达。结果与阴性对照组比较,其余3组细胞12 h及24 h迁移距离均缩短,迁移及侵袭过膜细胞数均减少(P 0. 05);与AKT敲减对照组比较,AKT敲减三根汤组细胞12 h及24 h迁移距离缩短,迁移及侵袭过膜细胞数减少(P 0. 05)。与阴性对照组比较,其余3组细胞E-cadherin、Occludin上调,N-cadherin、Vimentin、Slug、Twist、Snail、ZEB1、AKT、GSK-3β下调(P 0. 05)。与AKT敲减对照组比较,AKT敲减三根汤组E-cadherin、Occludin上调,N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Twist、ZEB1、AKT、GSK-3β下调(P 0. 05)。结论解毒三根汤可能通过AKT/GSK-3β信号通路逆转结肠癌细胞的EMT,从而抗结肠癌侵袭转移。     

樟芝三萜酸A通过Wnt/β-catenin信号抑制人肝癌细胞HepG_2上皮-间质转化的研究

目的:研究樟芝三萜酸A通过Wnt/β-catenin信号抑制人肝癌细胞HepG_2上皮-间质转化的机制。方法:将常规培养的HepG_2细胞分为空白对照组、Sailnomycin(163 nmol/L,IC_(50))阳性组及樟芝三萜酸A低(10 mg/L)、中(50 mg/L)、高(100 mg/L)浓度组。CCK-8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,光镜下观察细胞形态改变,细胞划痕检测各组细胞迁移能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力和趋化运动能力,Western blot法检测各组细胞中β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平,Elisa法检测Wnt蛋白的含量。结果:樟芝三萜酸A对于HepG_2有显著的增殖抑制作用,但无明显细胞毒性。樟芝三萜酸A可抑制细胞的迁移和侵袭,降低Wnt/β-catenin信号的表达水平,上调上皮-间质化相关N-cadherin、Vimentin蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达。结论:樟芝三萜酸A能通过抑制Wnt/β-catenin信号来逆转HepG_2细胞的上皮-间质转化,这是樟芝三萜酸A抑制肿瘤转移侵袭的机制之一。     

苦豆碱对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨苦豆碱(aloperine, Alo)对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 体外培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468,加入不同浓度(50、100、200μmol/L)Alo干预处理,免疫细胞化学法观察三阴性乳腺癌细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;Real-time qPCR法检测三阴性乳腺癌细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)及EMT相关标志物如：E-cadherin、胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1, ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、间质细胞钙黏蛋白(N-cadherin)和Snail的mRNA水平;Western blot法检测三阴性乳腺癌细胞内TGF-β1、ZO-1、Vimentin、 N-cadherin及Snail的表达;Transwell小室法检测三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。结果 Alo可上调MDA-MB-231和MDA-MB-4...     

常春藤皂苷元对肠癌SW480细胞上皮-间质转化(EMT)及侵袭的影响

目的:探讨常春藤皂苷元(HG)通过调控上皮-间质转化(EMT)途径抑制大肠癌侵袭转移的机制。方法:以肠癌细胞SW480细胞为研究对象,不同质量浓度HG干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW480细胞,作用24 h后噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力。转移小室(Transwell)实验检测细胞侵袭能力。实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin),蜗牛同源物1(果蝇)样1蛋白(Snail)及侵袭转移标志分子信号传导蛋白和转录激活物(STAT3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),MMP~(-1)4,伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达变化。结果:HG可抑制TGF-β1诱导的肠癌SW480细胞增殖、干预EMT和降低侵袭能力,降低EMT标志分子N-cadherin,Vimentin,Snail及侵袭转移标志分子STAT3,MMP-9,MMP~(-1)4表达,增强E-cadherin,RECK的表达,与TGF-β1组比较均具有统计学差异(P0.05)。结论:HG可通过抑制EMT途径影响大肠癌细胞SW480侵袭转移。     

重楼总皂苷对LiCl诱导人胃癌MKN-45细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨重楼总皂苷(Rhizoma Paridis total saponin,RPTS)在体外对人胃癌MKN-45细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,探讨其作用的可能机制。方法体外培养MKN-45细胞,取对数生长期细胞,加入不同质量浓度RPTS(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/m L)处理24h,采用MTT法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验、Transwell小室实验检测RPTS对MKN-45细胞迁移和侵袭的影响;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测RPTS对LiCl诱导的MKN-45细胞上清液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的上调表达的影响;免疫印迹技术(Western blotting)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分别检测RPTS(10、20、40μg/m L)对Li Cl诱导的MKN-45细胞中肿瘤侵袭转移相关分子血管内皮生长因子(VEGF)、环加氧酶-2(COX-2)以及Li Cl作用靶点糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白和基因表达水平的影响。结果与对照组比较,RPTS 5.0、10.0、20.0、40.0μg/m L可明显下调MKN-45细胞的增殖活性(P0.05、0.001);RPTS 2.5、5.0、10.0μg/m L可抑制MKN-45细胞的迁移和侵袭能力(P0.01、0.001)。与模型组比较,RPTS能够显著下调Li Cl诱导的MKN-45细胞上清液中MMP-9的表达水平(P0.05、0.01);下调细胞中VEGF、COX-2 mRNA和蛋白表达水平;上调Li Cl作用位点GSK-3βm RNA和蛋白表达水平(P0.05、0.001)。结论 RPTS具有体外抑制MKN-45细胞迁移和侵袭的能力,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。     

莲子心新碱对转化生长因子β1 诱导的H1299 细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制

目的构建转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC） H1299 细胞上皮-间充质转化（EMT）模型,并探讨莲子心新碱（Neoliensine,NeoL）对其侵袭和迁移能力的抑制 作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·mL-1 的TGF-β1 诱导H1299 细胞构建EMT 模型;以15 ng·mL-1 的 TGF-β1 诱导H1299 细胞作为EMT 模型组,以法舒地尔（Fas）为阳性药,设置1、2、3 μmol·L-1 的莲子心新碱 实验组。采用倒置荧光显微镜观察诱导后的细胞形态;用CCK-8 法检测莲子心新碱对H1299 细胞的抑制率; Western Blot 法检测细胞黏附因子E-钙黏蛋白（E-cadherin）以及间充质标记物N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形 蛋白（Vimentin）以及ROCK 1 与P-Smad 2/3 蛋白的表达;Transwell 法检测莲子心新碱对TGF-β1 诱导的H1299 细胞侵袭、迁移的抑制作用;免疫荧光法检测H1299 细胞内ROCK 1 蛋白的表达及分布。结果TGF-β1 诱导 后H1299 细胞形态呈现间充质特性。与对照组比较,随着TGF-β1 浓度的升高,E-cadherin 表达明显降 低（P＜0.05,P＜0.01）,N-cadherin 与Vimentin 表达明显升高（P＜0.01,P＜0.001）,并且ROCK 1 蛋白的表达 也在这一过程中升高（P < 0.05）。莲子心新碱可以抑制H1299 细胞的活力,IC50 为5.04 μmol·L-1;同时与模型 组比较,莲子心新碱抑制了TGF-β1 促进的H1299 细胞EMT 过程及侵袭迁移作用（P＜0.001）,中、高剂 量组明显增加E-cadherin 蛋白的表达（P＜0.05）,明显减少N-cadherin 和Vimentin 蛋白的表达（P＜0.001）,还 明显降低了H1299 细胞内因TGF-β1 诱导而升高的ROCK 1（P＜0.001）和P-Smad2/3（P＜0.001）蛋白的水平。 免疫荧光结果显示莲子心新碱可以抑制TGF-β1 诱导的H1299 细胞胞质中ROCK 1 蛋白的表达及分布。 结论TGF-β1 可以诱导H1299 细胞发生EMT,莲子心新碱可以有效抑制这一过程,其机制可能是抑制了 TGF-β1/Smad/RhoA/ROCK 通路。     

益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)。方法:通过暴露于TGF-β_1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达。结果:镜下可见经TGF-β_1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β_1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β_1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β_1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程。结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移。     

健脾活血方阻止EMT,抑制LPS诱导的HepG2细胞迁移和侵袭研究

目的:探讨健脾活血方对LPS诱导的Hep G2细胞的迁移侵袭以及EMT的影响。方法:培养人肝癌细胞株Hep G2细胞,LPS诱导24 h后采用健脾活血方血清进行治疗,然后采用Transwell检测Hep G2细胞的迁移和侵袭,Western blot检测N-cadherin、Vimentin和E-cadherin的表达。结果:和Hep G2细胞相比,LPS+对照组中Hep G2细胞的迁移和侵袭显著增加(P均0.05),同时N-cadherin和Vimentin蛋白表达显著增加,而E-cadherin蛋白表达显著降低(P均0.05)。进一步研究表明,和LPS+对照组相比,LPS+健脾活血方能够显著能够抑制Hep G2细胞的迁移、侵袭,降低Vimentin和E-cadherin蛋白的表达(P均0.05),而促进N-cadherin蛋白的表达(P0.05)。结论:LPS处理能够促进肝癌Hep G2细胞发生EMT、迁移和侵袭,而健脾活血方治疗能够阻止LPS诱导的Hep G2细胞发生转移侵袭以及EMT。     

臭牡丹总黄酮通过调控Wnt/β-catenin通路影响A549细胞上皮间质转化研究

目的探讨臭牡丹总黄酮对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法将pcDNA3.1+空载体与S45位点突变的β-链蛋白(S45A-β-catenin)真核过表达载体转染A549细胞,给予臭牡丹总黄酮干预。MTT法检测细胞的相对存活率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转录因子Snail 2(Slug)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β的表达水平。结果转染S45A-β-catenin质粒后,A549细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显增强,β-catenin、vimentin蛋白表达水平显著上调,E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β蛋白的表达水平显著下调。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭能力,对转染S45A-β-catenin质粒组的细胞作用尤为明显。对转染空载质粒的A549细胞,可上调E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β表达,下调β-catenin、vimentin表达;对转染S45A-β-catenin质粒的A549细胞,可下调β-catenin、vimentin表达。结论抑制细胞中β-catenin的高表达并调控下游的一系列因子,从而影响Wnt/β-catenin通路诱导的上皮间质转化(EMT)现象可能是臭牡丹总黄酮抑制肺癌侵袭、转移的重要作用机制之一。     

毒痰瘀脾虚方含药血清对HepG2肝癌细胞影响的实验研究

目的:研究毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中相关基因及细胞侵袭、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR实验观察毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响;Transwell细胞侵袭和迁移实验,观察其对Hep G2肝癌细胞侵袭和迁移的影响;AnnexinV-FITC双染流式细胞法检测其对Hep G2肝癌细胞凋亡的影响。结果:RT-qPCR结果显示,与阴性组比较,毒痰瘀脾虚方含药血清能下调HepG2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA的表达,差异有统计学意义(P0.01或P0.05);Transwell细胞侵袭实验和迁移实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.01),对细胞的迁移无明显影响(P0.05);细胞凋亡实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能促进Hep G2细胞的凋亡,与阴性组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞侵袭,促进细胞凋亡,并能抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达。     

健脾解毒方通过Wnt/β-catenin信号通路下调幽门螺杆菌诱导的胃癌血管生成因子的研究

  目的：研究健脾解毒方对幽门螺杆菌(HP)感染胃癌细胞诱导的血管生成因子(VEGF)、血管生成素-2(Ang-2)、成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响,并探讨其可能的机制。  方法：采用HP标准株NCTC11637与人胃癌MKN45细胞共培养的方法感染MKN45细胞,分为对照组、HP感染组、健脾解毒方醇提物低中高剂量组(低中高剂量分别为0.5 g/L、1.0 g/L和2.5 g/L),采用ELISA法检测健脾解毒方对HP感染诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF、bFGF、Ang-2表达的影响;使用Wnt/β-catenin特异性抑制剂FH-535(20 μmol/L)抑制Wnt/β-catenin活性后,再进行HP感染,ELISA法检测人胃癌MKN45细胞VEGF、bFGF、Ang-2蛋白表达的变化。Western blotting检测健脾解毒方对HP感染激活的人胃癌MKN45细胞Wnt/β-catenin信号通路活性的调控作用。  结果：HP感染MKN45细胞12 h后,VEGF、bFGF、Ang-2蛋白的表达明显上调(P<0.01)。健脾解毒方醇提物低中高剂量组均可下调HP诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF、bFGF、Ang-2蛋白的表达,并呈一定的剂量依赖效应。采用Wnt/β-catenin特异性抑制剂FH-535抑制Wnt/β-catenin活性后可明显抑制HP诱导的VEGF、bFGF、Ang-2蛋白的表达 (P<0.01)。HP感染胃癌MKN45细胞12 h后,胞浆和胞核β-catenin蛋白表达明显上调(P<0.01),健脾解毒方可下调胞浆和胞核β-catenin蛋白表达,并呈一定的剂量依赖效应。  结论：健脾解毒方可下调HP诱导的人胃癌细胞VEGF、bFGF、Ang-2表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路是其机制之一,这可能是该方抗胃癌作用的重要机制。     

粉防己碱调控miR-21表达抑制卵巢癌上皮间质转化的实验研究

目的研究粉防己碱(TET)调控miR-21表达抑制卵巢癌上皮间质转化(EMT)的作用。方法以人卵巢癌细胞(A2780细胞)、人卵巢透明癌细胞(ES-2细胞)和正常人卵巢上皮细胞(IOSE80细胞)作为研究对象,采用MTT法测定0、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μmol/L的TET对上述3种细胞增殖的影响。实验分为IOSE80细胞对照组、A2780细胞对照组、ES-2细胞对照组、A2780细胞TET组、ES-2细胞TET组,采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)测定各组细胞miR-21表达水平;迁移实验和侵袭实验考察TET对细胞迁移和侵袭的影响;蛋白印迹法(Western blot)测定各组细胞GSK3β、p-GSK3β、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果①与对照组相比,TET浓度在1.0～20.0μmol/L时,A2780细胞和ES-2细胞存活率随着TET浓度的增加显著降低(P0.05);为减少TET药物对细胞的毒性,采用TET对A2780细胞和ES-2细胞的处理浓度分别为5.0μmol/L和3.0μmol/L进行后续实验。②与IOSE80细胞组相比,A2780细胞对照组和ES-2细胞对照组miR-21表达水平显著升高(P0.05);与A2780细胞对照组和ES-2细胞对照组相比,A2780细胞5.0μmol/L TET组和ES-2细胞3.0μmol/L TET组miR-21表达水平、迁移能力、侵袭能力、GSK3蛋白磷酸化水平、β-catenin蛋白表达水平、N-cadherin蛋白表达水平、Vimentin蛋白表达水平明显降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论 TET可能通过下调miR-21表达水平,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌EMT。     

基于Wnt/β-catenin通路探讨西黄丸对三阴乳腺癌细胞4T1增殖及干性成球能力的影响

目的 基于Wnt/β-catenin信号通路评价西黄丸对三阴乳腺癌细胞4T1的增殖及干性成球能力的影响.方法 制备西黄丸浸提液,采用CCK8的方法,筛选最佳给药浓度,检测其对4T1细胞增殖能力的影响,采用无血清干细胞成球实验检测其对4T1细胞干性成球能力的影响,通过Transwell实验检测其对4T1细胞的迁移和侵袭能力的影响,RT-PCR实验检测Wnt/β-catenin信号通路介导的上皮细胞间充质转化(EMT)的相关mRNA的表达.结果 西黄丸可以抑制细胞的增殖、干细胞成球能力和肿瘤细胞的迁移侵袭,RT-PCR结果显示E-cadherin相对上调,Vimentin、β-catenin表达下调,且西黄丸可协同Wnt/β-catenin通路活性抑制剂XAV939抑制细胞的增殖、干细胞成球能力和肿瘤细胞的迁移侵袭.结论 西黄丸可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路介导的EMT,干预肿瘤细胞的"干性",从而防治肿瘤转移.     

桂皮醛通过PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β1诱导的结肠癌细胞LoVo上皮间质转化

目的:探讨桂皮醛对转化生长因子-β_1(Transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)诱导的结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其与磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:通过TGF-β_1诱导结肠癌细胞株LoVo发生上皮间质转化,使用桂皮醛(0,20,40,80 mg·L-1)干预由TGF-β_1诱导的LoVo细胞的增殖,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测桂皮醛对TGF-β_1诱导的细胞增殖能力的影响。转移小室(transwell)侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)及PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达。采用PI3K/Akt抑制剂LY290004来验证桂皮醛通过PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β_1诱导的EMT。结果:与空白组比较,桂皮醛能有效抑制TGF-β_1诱导的增殖及侵袭能力(P0.01),显著增加E-cadherin的表达,抑制N-cadherin,Vimentin及TGF-β_1刺激的p-Akt和p85的表达(P0.01);同时通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活逆转TGF-β_1诱导的EMT(P0.01)。结论:桂皮醛可通过调节PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β_1诱导的结肠癌细胞LoVo的上皮间质转化,降低其侵袭能力。     

汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响研究

目的:探讨汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-连接素(β-catenin)信号通路的影响。方法:常规培养3种常见胃癌细胞株(SGC7901、BGC-823及MKN-45)至对数生长期,采用终浓度0、20、50、100、200μmol/L汉黄芩素处理24、48、72、96 h后采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞的凋亡率及迁移、侵袭能力,Western blotting检测各浓度汉黄芩素作用48 h后SGC7901细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子C-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)的蛋白水平。结果:汉黄芩素在20~200μmol/L范围内可呈浓度和时间依赖性抑制SGC7901、BGC-823及MKN-45细胞增殖。与汉黄芩素0μmol/L组比较,各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞凋亡率均升高,迁移距离和穿膜细胞数均降低(P0.05);除汉黄芩素20μmol/L组的β-catenin水平外,其余浓度SGC7901细胞β-catenin、C-myc及Cyclin D1蛋白水平均低于0μmol/L(P0.05),其作用呈量-效关系。结论:汉黄芩素对胃癌细胞的增殖有抑制作用,同时可诱导凋亡和抑制细胞侵袭和迁移,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

积雪草酸对前列腺癌细胞增殖及转化生长因子 β1 诱导的上皮间质转化的影响

目的观察积雪草酸对前列腺癌细胞DU145 和PC-3 增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其对上皮间质转 化（EMT）的影响和潜在调控机制。方法体外培养DU145 和PC-3 细胞,以不同浓度积雪草酸干预后,采用 MTT 法检测其对细胞活力的影响;通过克隆形成实验检测其对细胞克隆形成能力的影响;通过细胞划痕实 验、Transwell 迁移及侵袭实验观察低浓度积雪草酸（10、20 μmol·L-1）对转化生长因子β1（TGF-β1,5 ng·mL-1） 诱导后DU145 和PC-3 细胞迁移、侵袭的影响;采用Western Blot 法检测DU145 细胞的血管内皮生长因子A （VEGFA）和EMT 相关纤维连接蛋白（Fibronectin）、波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N-Cadherin）、Snail 及 E-钙黏蛋白（E-Cadherin）的表达情况。结果积雪草酸可浓度及时间依赖性地抑制DU145 和PC-3 细胞增殖, 干预24、48、72 h 后的IC50 值分别为29.10、17.52、11.53 μmol·L-1 和27.91、21.43、14.82 μmol·L-1。积雪草 酸（10、20 μmol·L-1）能够明显抑制DU145 及PC-3 细胞克隆形成能力。与空白组比较,TGF-β1 能够明显促进 DU145 和PC-3 细胞的划痕愈合（P＜0.01）,促进DU145 细胞的侵袭（P＜0.05）,上调DU145 细胞内VEGFA 蛋 白和间质指标Fibronectin、Vimentin、N-Cadherin、Snail 蛋白的表达（P＜0.05,P＜0.01）,下调上皮指标 E-Cadherin 蛋白表达（P＜0.05）,进而诱导细胞EMT 进程。与TGF-β1 组比较,10、20 μmol·L-1 浓度的积雪草 酸能明显抑制TGF-β1 诱导后的DU145、PC-3 细胞划痕愈合及Transwell 细胞迁移、侵袭（P＜0.05,P＜ 0.01）,且呈现浓度依赖性;10 μmol·L- 1 浓度的积雪草酸能明显下调TGF-β1 诱导的DU145 细胞内的 VEGFA、Fibronectin、Vimentin、N-Cadherin、Snail 蛋白表达（P＜0.05）, 上调E-Cadherin 蛋白表达（P＜ 0.05）,进而逆转TGF-β1 诱导的EMT 进程。结论积雪草酸可抑制前列腺癌细胞DU145 和PC-3 增殖,并逆 转TGF-β1 诱导的前列腺癌细胞DU145 的EMT 进程,从而发挥其抗前列腺癌细胞侵袭、转移的作用。