麝香黄芪复方滴丸对体外缺血缺氧血脑屏障通透性及相关调节蛋白的影响

目的探究麝香黄芪复方滴丸调控体外缺血缺氧性血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)模型的作用机制。方法利用大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvessel endothelial cells,BMEC)与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型及缺血缺氧BBB模型。随机分为正常对照组、模型组、麝香黄芪复方滴丸高剂量组(500μg/mL)、中剂量组(100μg/mL)、低剂量组(10μg/mL)及依达拉奉对照组。通过跨内膜电阻(TEER)、辣根过氧化物酶法(HRP)检测BBB通透性变化情况。Western Blot法检测紧密连接(tight junction,TJ)相关蛋白闭合蛋白-5(Claudin-5)、连接黏附分子-A(junctional adhesion molecule,JAM-A)、跨膜蛋白的咬合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(zonula Occludens,ZO-1)表达水平。结果TEER及HRP实验显示,与正常对照组相比,模型组血脑屏障通透性增加(P<0.05);麝香黄芪复方滴丸高、中、低剂量组和依达拉奉组1 d、2 d、3 d各组通透性明显降低(P<0.05);WB结果显示,模型组Claudin-5、JAM-A、Occludin、ZO-1蛋白表达较正常组显著降低(P<0.05);麝香黄芪复方滴丸高、中剂量组较模型组Claudin-5、JAM-A、Occludin、ZO-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论麝香黄芪复方滴丸能降低缺血缺氧性BBB模型的通透性,其作用机制与调控紧密连接蛋白而达到修复BBB的作用有关。     

电针配合冰片对小鼠血脑屏障通透性的影响

目的:观察电针配合冰片对小鼠血脑屏障通透性的影响,并通过检测P-糖蛋白功能和血脑屏障(BBB)超微结构的变化,探讨针药结合干预BBB通透性的相关机制。方法:伊文思蓝(EB)含量测定实验中将小鼠分为空白组、电针组、低剂量冰片组、高剂量冰片组、电针+低剂量冰片组、电针+高剂量冰片组。各电针组电针"百会"哑门",频率2 Hz,强度1 mA,持续20 min。连续治疗14 d后紫外荧光酶标法检测脑组织EB含量。另取小鼠分空白组、电针组、低剂量冰片组、高剂量冰片组、电针+低剂量冰片组、电针+高剂量冰片组、维拉帕米组。连续处理14 d后,检测血浆和脑组织中罗丹明(Rh)123含量和通透指数Kp,并利用透射电镜检测血脑屏障超微结构。结果:与空白组比较,电针组、低剂量冰片组、高剂量冰片组、电针+低剂量冰片组、电针+高剂量冰片组、维拉帕米组均显著增加小鼠脑内EB含量,增加脑内Rh 123浓度,提高小鼠BBB的Kp(P<0.05,P<0.01);此外,在低剂量冰片的基础上配合电针干预可见小鼠脑内EB含量进一步增加(P<0.05)。BBB超微结构结果显示冰片处理以及电针+冰片处理均能减少脑毛细血管内皮细胞的紧密连接,但电针组未见改变。结论:电针和冰片均能提高血脑屏障通透性,冰片的这一作用与其对P-糖蛋白的抑制以及脑毛细血管内皮细胞的紧密连接减少有关,而电针的这一作用根据本次研究结果显示可能仅与P-糖蛋白相关,此外这两种处理方式可能还具有潜在的协同效应。     

芳香开窍药对正常小鼠血脑屏障通透性的影响

目的：观察四味芳香开窍药（冰片、麝香、苏合香、安息香）及其不同提取部位对正常小鼠血脑屏障（BBB）通透性的影响。方法：各组小鼠灌胃给予相应药物3天后,尾静脉注射伊文思蓝（Evans blue,EB）250mg/kg,采用甲酰胺浸泡法测定小鼠脑组织中EB含量以评价药物对BBB通透性的影响。结果：冰片全药（200mg/kg）,麝香全药与麝香石油醚提取部位（66.6mg/kg）,苏合香全药、苏合香石油醚与乙醚提取部位（1.332g/kg）,安息香全药（1g/kg）与溶媒对照组比较,能极显著性地升高正常小鼠脑组织中EB含量。结论：冰片、麝香、苏合香与安息香四味药物对小鼠生理状态下的血脑屏障具有一定的开放效应,可能是该类药物芳香善于走窜而发挥开窍醒神功效的药理基础之一。实验结果亦提示药物的脂溶性部位可能是其作用于脑组织的物质基础。     

石菖蒲对血脑屏障超微结构及通透性的影响

目的:研究石菖蒲对大鼠血脑屏障超微结构及通透性的影响,证实其"醒脑开窍"之药理作用.方法:用电镜观察大鼠大脑皮层血脑屏障的超微结构在给药前后的变化,测定伊文思蓝(EB)的含量,并采用HPLC测定石菖蒲对中枢神经系统药苯妥英钠在脑内的蓄积程度的影响.结果:石菖蒲可以影响大鼠血脑屏障的超微结构,使内皮细胞之间的紧密连接松弛;同时,增加伊文思蓝透过血脑屏障的含量,促进中枢神经系统药苯妥英钠在脑内的蓄积,即增加血脑屏障的通透性.结论:说明石菖蒲能够提高血脑屏障通透性,具有醒脑开窍的药理作用.     

补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠血脑屏障通透性的影响

目的探讨补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠血脑屏障通透性的影响及其机制。方法雄性小鼠随机分成对照组、模型组、治疗组(吡拉西坦0.62g·kg-1·d-1)、补阳还五汤高剂量组(37.06g·kg-1·d-1)、补阳还五汤中剂量组(18.53g·kg-1·d-1)、补阳还五汤低剂量组(9.26g·kg-1·d-1),连续治疗28d后取材。检测小鼠脑组织含水量、EB含量。采用双抗体夹心法测定脑组织IL-6水平。结果与对照组比较,模型组小鼠脑组织含水量、EB含量和IL-6含量明显升高(P0.05);与模型组比较,补阳还五汤组脑组织含水量、EB含量和IL-6含量明显降低(P0.05)。结论补阳还五汤可以有效降低阿尔茨海默病模型小鼠血脑屏障破坏的程度。     

血脑屏障模型及中药对其通透性影响研究进展

血脑屏障(BBB)作为脑毛细血管壁与神经胶质细胞形成的血浆与脑细胞之间的屏障和由脉络丛形成的血浆和脑脊液之间的屏障,能够阻止某些物质(多半是有害的)脑组织,从而保持脑组织内环境的基本稳定,但同时其阻止大多数药物进入颅内,给颅脑疾病的治疗带来困难。血脑屏障实验模型的建立是进行颅脑疾病药物治疗的一个关键技术。因此,对血脑屏障模型的建立及其通透性改变的研究,将深化对神经-血管相互作用的认识,为中枢神经系统疾病的诊疗提供重要的理论依据。中药可通过影响脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、抑制髓过氧化物酶(MPO)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,影响闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的表达或上调紧密连接蛋白-5 (Claudin-5)等的表达抑制病理条件下BBB通透性,对BBB起到保护作用。中药也可通过影响细胞黏着因子-1(CAM-1),ZO-1和纤维状肌动蛋白(F-actin),P-糖蛋白(P-gp)及增加5-羟色胺(5-HT)等的表达来促进BBB通透性改变,或与其他药物共递送,增加药物透过率。本文对近年来血脑屏障实验模型建立的方法、优缺点及中药单体及有效成分、中药复方等对血脑屏障通透性作用的文献进行整理,为下一步中西医治疗颅内疾病提供重要的指导意义和方向。     

中药不同组分对小鼠缺血脑组织蛋白表达谱的影响

目的 运用蛋白质组学技术分析中药不同组分对小鼠缺血脑组织蛋白表达谱的影响.方法 黄芩苷、栀子苷、胆酸、珍珠母分别干预缺血再灌小鼠3h后,断头取脑,提取蛋白,用蛋白质芯片比较分析以上组分对小鼠缺血脑组织蛋白表达谱影响的差异.结果 黄芩苷、栀子苷、胆酸、珍珠母可影响5373Da,5707Da,15103Da 3个靶点蛋白的表达,中药对蛋白表达具有多靶点性和差异性.结论 蛋白质芯片技术是探索中药药理机制的有效手段.     

千叶素A对缺氧损伤下血脑屏障通透性的影响及其机制研究

目的 研究千叶素A对缺氧损伤下血脑屏障通透性的影响及其调控机制.方法 利用原代培养大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)建立体外血脑屏障模型,缺氧诱导损伤.荧光分光光度法检测千叶素A对BMEC异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖的荧光强度,观察其对体外血脑屏障模型通透性的影响;RT-PCR法检测千叶素A对BMEC紧密连接蛋白ZO-1、claudin-1基因表达的影响,Cell-Based ELISA法检测千叶素A对BMEC中ZO-1蛋白表达的影响.结果 缺氧使体外血脑屏障模型对FITC-葡聚糖的通透量明显增加,脑微血管内皮细胞ZO-1基因和蛋白表达下调;千叶素A能明显拮抗缺氧造成的上述损伤.结论 千叶素A对缺氧损伤体外血脑屏障具有保护作用,其机制与其影响ZO-1表达有关.     

芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障通透性的影响

目的观察4味芳香开窍药(冰片、麝香、苏合香、安息香)及其不同提取部位对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法结扎小鼠双侧颈总动脉30min再灌注1h后,小鼠尾静脉注射伊文思蓝(Evans blue,EB)250mg.kg-1,采用甲酰胺浸泡,荧光法测定小鼠脑组织中EB含量以评价药物对缺血再灌注损伤小鼠BBB通透性的影响。结果冰片全药(200 mg.kg-1)、麝香全药与麝香石油醚提取部位(66.6 mg.kg-1)能显著性降低脑缺血再灌注损伤模型小鼠脑组织中EB含量;苏合香生药(1.33 2 g.kg-1)、安息香生药与石油醚提取部位(1 g.kg-1)有降低EB含量的趋势。结论麝香、冰片能对抗不完全缺血再灌注损伤模型小鼠血脑屏障通透性的异常增高,表现出对病理状态下血脑屏障功能的保护作用。苏合香与安息香的作用强度弱于麝香、冰片。该类药物对病理状态下血脑屏障功能的保护效应是其用于治疗缺血性脑病的药理学基础之一。实验结果亦提示药物的脂溶性部位可能是其作用于脑组织的物质基础。     

冰片对血脑屏障通透性的双向调节作用影响因素及机制探讨

有关冰片的研究较多但缺乏规律性总结以及作用机制的深入分析。该文综合整理和分析了近20余年来有关冰片对血脑屏障的影响因素及其作用机制。依据现有研究结果得出如下结论:冰片对血脑屏障通透性影响因素有:(1)不同来源冰片旋光性差异对作用效果无显著影响;(2)冰片剂量在50.00~200.00 mg·kg~(-1)单用或者配伍使用并不影响其作用方向,仅影响其作用强度;(3)冰片单用对生理性血脑屏障能开放其通透性,对病理性血脑屏障能降低其通透性;(4)冰片对于不同大脑疾病模型的血脑屏障,单用或配伍麝香使用均能降低其通透性;(5)冰片配伍黄芪、梓醇、葛根素对病理性血脑屏障通透性有促开放和促进药物透过的作用。冰片对血脑屏障通透性双向调节作用的靶点和机制,与大脑内皮细胞的特殊结构即紧密连接的结构与功能,以及高表达的P-gp外排作用和低胞饮内运作用有关。冰片可通过抑制NF-κB下调P-gp,降低外排作用,提高血脑屏障通透性;也可通过促进血脑屏障胞饮作用,提高血脑屏障通透性;可通过抑制IL-1β,MMP-9表达,对抗其对血管外基膜和紧密连接的降解,降低血脑屏障通透性;通过影响Ca~(2+)-eNOS-NO,VEGF-eNOS-NO等通路对血脑屏障通透性可能具有双向调节作用。冰片调控血脑屏障通透性作用的详细机制较为复杂,有待进一步阐明。     

不同运动量对小鼠微循环和耐缺氧能力的影响

目的：考察不同运动量对小鼠微循环及耐缺氧能力的影响。方法：昆明种小鼠采用转笼法运动4周后,采用BI-2000图像分析系统测定小鼠耳廓微血管管径及血流速度,采用小鼠急性脑缺血性缺氧实验、亚硝酸钠模型常压耐缺氧实验,观察并记录小鼠断头后张口呼吸时间及耐缺氧存活时间。结果：与空白对照组比较,高运动组小鼠耳廓微动脉、微静脉流速、微动脉管径均显著增加（p〈0．05）;中运动组小鼠耳廓微动脉管径均显著增加（p〈0．01）;低运动组小鼠耳廓微动脉流速及微动脉管径均显著增加。高、中、低运动组小鼠断头后张口呼吸时间均显著延长;高、低运动组小鼠亚硝酸钠模型常压耐缺氧时间均显著缩短。结论：运动训练具有改善小鼠微循环,增强小鼠耐缺氧能力的作用,且与运动量有一定的相关性。     

高良姜不同提取物对急性脑缺血小鼠脑血管通透性的影响

目的:研究高良姜不同提取物对急性脑缺血小鼠脑血管通透性的影响。方法:昆明种小鼠随机分为9组:空白对照组、模型对照组、尼莫地平组、高良姜水提取物(WEAH)6.66,3.33,1.67 mg·kg-1组、高良姜乙醇提取物(EEAH)6.66,3.33,1.67 mg·kg-1组。连续ig 10 d后,采用双侧颈总动脉结扎法制备小鼠急性脑缺血模型,干湿重法观察脑含水量变化,通过收集透出脑血管外的伊文思蓝(Evans blue,EB)含量考察脑血管通透性的变化。结果:急性脑缺血发生后3 h,模型组小鼠与空白对照组相比较,脑含水量及脑组织内EB含量显著增加(P<0.05)。与模型组比较,尼莫地平组小鼠脑含水量及脑组织内EB含量均显著降低(P<0.05);高良姜水提取物6.66 mg·kg-1、乙醇提取物3.33 mg·kg-1及1.67 mg·kg-1组小鼠脑含水量显著降低(P<0.05);高良姜水提取物3个剂量组小鼠脑组织内EB含量均显著降低(P<0.05),乙醇提取物组小鼠脑组织内EB含量有降低趋势,但无显著性差异。结论:高良姜水及乙醇提物可有效降低急性脑缺血后脑含水量和脑血管的通透性,对脑血管有一定的保护作用。     

干姜对缺氧和受寒小鼠的影响

抗缺氧实验表明,干姜醚提物可能是通过减慢机体耗氧速度,延长常压密闭缺氧和KCN中毒缺氧模型小鼠的存活时间,也能延长断头小鼠的张口动作持续时程,但对NaNO₂中毒小鼠存活时间仅有延长倾向。     

高良姜对缺氧和受寒小鼠的影响

给小鼠灌服高良姜醚提物和水提物都能延长断头小鼠张口动作持续时间和KCN中毒小鼠的存活时间,但不影响NaNO_2中毒小鼠存活时间。高良姜醚提物还能延长常压密闭缺氧小鼠的存活时间和减慢机体耗氧速度,其水提物不延长常压密闭缺氧小鼠的存活时间,但提高小鼠在低氧条件下的氧利用能力。高良姜醚提物和水提物对受寒小鼠的存活时间都无影响。     

黄芪蜜炙及配伍对小鼠抗疲劳和耐缺氧作用影响的比较

目的:对黄芪蜜炙前后及黄芪复方抗疲劳和耐缺氧作用进行比较。方法:小鼠随机分为空白组、黄芪组(19.5 g/kg)、炙黄芪组(19.5 g/kg)、补中益气丸黄芪组(4.68 g/kg)、补中益气丸炙黄芪组(4.68 g/kg),分别进行常压耐缺氧和抗疲劳试验,通过测定游泳时间、小鼠耐缺氧时间以及乳酸、尿素氮等指标的含量,比较各组间小鼠抗疲劳和耐缺氧的程度。结果:黄芪水煎液,含黄芪的补中益气丸与空白组相比较均能明显延长小鼠负重游泳时间和缺氧存活时间;明显降低乳酸和尿素氮含量。各项指标炙黄芪作用均强于生黄芪,并以补中益气丸炙黄芪组抗疲劳和耐缺氧作用最强,明显优于其他各组。结论:生黄芪、炙黄芪及其复方对小鼠均具有一定的抗疲劳和耐缺氧作用,炙黄芪优于生黄芪,各组间以补中益气丸炙黄芪组作用最强,表明黄芪蜜炙后可增强小鼠抗疲劳和耐缺氧能力。     

醒脑静注射液对大鼠脑出血模型血脑屏障通透性及相关蛋白的影响

目的 观察醒脑静注射液对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)大鼠血脑屏障通透性及其相关蛋白表达的影响。方法 将27只雄性SD大鼠随机分为假手术组9只和模型组18只,采用右侧尾状核微量注射胶原酶Ⅶ的方法制备大鼠脑出血模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组和醒脑静组,每组9只。连续给药3天后,采用伊文思蓝(evens blue,EB)法观察各组大鼠血脑屏障通透性;透射电镜观察脑组织的超微结构并分析计算星形胶质细胞足突的水肿面积;免疫组化法检测脑组织水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测脑组织AQP4、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白(tight junction protein,ZO-1)的表达。分别比较假手术组与模型组、模型组与醒脑静组血脑屏障的EB渗透程度、足突水肿面积以及血脑屏障相关蛋白的表达。结果(1)与假手术组相比,模型组大鼠脑出血后血脑屏障EB渗透性增加;与模型组相比,醒脑静组大鼠脑组织血脑屏障EB渗透性降低。(2)与假手术组相比,模型组大鼠脑组织中星形胶质细胞足突水肿面积明显增加,星形胶质细胞和血管内皮细胞结构明显被破坏,AQP4、VEGF蛋白表达升高(P 0. 05);与模型组相比,醒脑静组大鼠脑出血后脑组织水肿减轻,星形胶质细胞以及血管内皮细胞的结构有所改善,AQP4、VEGF蛋白表达显著降低(P 0. 05)。(3)与假手术组相比,模型组大鼠脑组织Occludin、ZO-1表达降低(P 0. 05);与模型组相比,醒脑静组大鼠脑组织Occludin、ZO-1蛋白表达升高(P 0. 05)。结论 醒脑静注射液可通过减轻星形胶质细胞足突水肿,改善血脑屏障结构和相关蛋白表达,降低血脑屏障通透性可能是其减缓脑出血后脑组织损伤的作用机制。     

不同羊胎盘制剂对小鼠免疫功能和缺氧耐受力的影响

目的:观察不同羊胎盘制剂对小鼠免疫功能和缺氧耐受力的影响.方法:测定各组小鼠的免疫器官指数,脾淋巴细胞增殖反应;记录中毒缺氧存活时间及急性脑缺氧存活时间的影响.结果:制剂Ⅱ号组与对照组相比小鼠胸腺指数明显增加(P＜0.05),与对照组相比各实验组脾脏指数明显增加(P＜0.05);制剂Ⅰ号组小鼠脾淋巴细胞增殖与对照组相比差异性显著(P＜0.05),制剂Ⅰ号与Ⅱ号组小鼠的中毒存活时间和脑缺氧存活时间与对照组相比显著延长(P＜0.05),中毒存活试验中胎盘提取物组达到极显著水平(P＜0.01);而脑缺氧试验中羊胎盘提取物组差异则不显著(P＞0.05).结论:羊胎盘制剂Ⅰ、Ⅱ号及胎盘提取物均对小鼠机体免疫功能和缺氧耐受力具有一定的促进增强作用,且羊胎盘制剂Ⅰ号的促进作用最强.     

仙鹤草不同提取物对小鼠运动性疲劳及耐缺氧能力的影响

目的考察仙鹤草不同提取物对运动性疲劳小鼠抗疲劳及耐缺氧能力的影响。方法将KM种小鼠随机分为空白组20只和造模组140只,造模组小鼠定时分批进行游泳训练2周。选造模达标运动性疲劳小鼠随机分为模型组、水提取物组、70%乙醇组、正丁醇组、石油醚组、乙酸乙酯组、二氯甲烷组,20只/组。各给药组在游泳训练后30 min灌胃给予相应药物(生药量) 2.4 g/kg,空白组及模型组分别给予同体积蒸馏水,均1次/d,连续1周。末次给药30 min后,每组随机取10只小鼠,测定血清乳酸(LAC)、尿素氮(BUN)水平及肝组织中肝糖原(LG)含量和脑组织中谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)、5-羟色胺(5-HT)含量;各组剩余10只小鼠依次放入内置10 g新鲜钠石灰的广口瓶内,记录封口后至小鼠呼吸停止所需时间(耐缺氧存活时间)。结果模型组小鼠血清LAC、BUN水平均显著高于空白组(P均0.05),肝组织中LG含量显著低于空白组(P0.05),耐缺氧存活时间显著短于空白组(P0.05);水提取物组、正丁醇组、乙酸乙酯组小鼠血清LAC水平和70%乙醇组、正丁醇组、乙酸乙酯组血清BUN水平均显著低于模型组(P均0.05),水提取物组、70%乙醇组、正丁醇组、乙酸乙酯组小鼠肝组织中LG含量显著高于模型组(P均0.05),正丁醇组、乙酸乙酯组小鼠耐缺氧存活时间显著长于模型组(P均0.05)。模型组小鼠脑组织中GLU含量显著低于空白组(P0.05),GABA、5-HT含量均显著高于空白组(P均0.05);各给药组小鼠脑组织中GLU、GABA含量与模型组比较差异均无统计学意义(P均0.05),正丁醇组小鼠脑组织中5-HT含量与模型组比较显著降低(P0.05)。结论仙鹤草的正丁醇与乙酸乙酯提取物可能是其抗疲劳的主要有效部位,作用机制与干预机体能量代谢、保护缺氧组织有关,其正丁醇提取物对中枢疲劳也有一定影响。     

原花青素对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性和自由基含量的影响

目的探讨原花青素（procyanidin,PC）对缺血再灌注损伤大鼠脑组织含水量、血脑屏障通透性和自由基含量的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、PC低剂量治疗组和PC高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。观察缺血90min再灌注24h大鼠脑含水量和伊文斯蓝（EB）含量变化及超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量变化,并进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色。结果与假手术组比较,缺血再灌注组脑含水量和EB含量明显升高;与缺血再灌注组比较,PC高、低剂量治疗组脑含水量和EB含量明显降低（P〈0.05）,高、低剂量组之间差异亦具有统计学意义（P〈0.05）。与缺血再灌注组比较,PC治疗组显著降低MDA含量,增加SOD活性,高、低剂量组之间差异亦有统计学意义（P〈0.05）。PC高、低剂量治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论PC对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,可能与减轻再灌注损伤后血脑屏障通透性和氧化性损伤有关。