三种方法检测儿童肺炎支原体的比较分析

目的 探讨合理的早期诊断儿童肺炎支原体肺炎的方法.方法 对312例疑似肺炎支原体感染的患儿,留取咽拭子和血清,分别进行荧光定量PCR法、快速培养法和血清抗体法检验,对比分析3种方法 的阳性率.结果 荧光定量PCR法、快速培养法和血清抗体法的阳性率分别为25.00%、26.68%和16.67%,PCR法与快速培养法的阳性率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);PCR法、快速培养法阳性率较血清抗体法高(P＜0.05).结论 PCR法与快速培养法均能有效的检测肺炎支原体,快速培养法能满足临床需求而且成本较低,较适合基层医院应用.     

肺炎支原体感染动物模型的建立以及PCR技术在感染检测中的应用与研究

用人工接种法建立肺炎支原体感染动物模型,模拟人的发病过程,采用动物肺脏和气管做肺炎支原体分离培养,同时采用PCR技术对动物肺脏和气管标本进行检测,并用探针杂交方法作特异性分析,探讨PCR技术检测肺炎支原体感染的可行性。结果表明,从接种动物的肺脏和气管中分离出肺炎支原体,PCR检测与分离培养结果相同。PCR技术简便,快速,无交叉反应,适宜于临床推广使用。     

PCR定量检测肺炎支原体在肺炎支原体肺炎中的应用分析

目的:探讨PCR定量检测在肺炎支原体肺炎诊断中的可行性及优越性。方法:选取186例接受治疗的肺炎患者,分别用MP快速培养法和实时PCR进行检测。记录并比较两组检测方法下的灵敏度及特异性等相关数据。结果:快速培养法与实时PCR法诊断肺炎支原体肺炎的灵敏度、阳性预测值、假阴性率及诊断符合率差异无统计学意义(P>0.05);实时PCR法诊断肺炎支原体肺炎的特异性为85.5%(65/76),明显高于快速培养法的77.6%(59/76),假阳性率为14.5%(11/76),明显低于快速培养法的22.4%(17/76),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:快速培养法与实时PCR法诊断肺炎支原体肺炎的敏感度差别不大,而实时PCR法的特异性优于快速培养法。临床上应用这两种不同原理的检测方法组合检测,取长补短,在提高肺炎支原体感染检出率的同时,还可以互相佐证,减少实验误差,提高检测的准确性。     

肺炎支原体PCR产物杂交检测技术的应用

目的:考察PCR产物杂交检测技术在诊断支原体肺炎中的价值。方法:采用肺炎支原体PCR产物分子杂交技术对106例呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物进行检测。结果:106份标本中,检出肺炎支原体19例,阳性率17.92%。结论:肺炎支原体核酸分子杂交检测技术为一种快速、简捷,敏感性高、特异性强的检验技术。     

肺炎支原体培养与抗肺炎支原体抗体检测的临床评价

目的:探讨肺炎支原体快速培养与抗肺炎支原体抗体检测在儿童及成人肺炎支原体感染早期诊断的价值及比较。方法:应用肺炎支原体快速培养法、SERODIA-MYCOⅡ凝集试验分别对呼吸内科、儿科疑似肺炎支原体感染的初诊患者同时进行肺炎支原体培养与抗肺炎支原体抗体检测。结果:358例急性下呼吸道感染患者咽拭子肺炎支原体培养阳性49例、SERODIA-MYCOⅡ凝集试验检出血清抗肺炎支原体抗体阳性53例,两种方法检测肺炎支原体感染阳性率差异无显著性(P>0.05)。儿科组与内科组肺炎支原体感染阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论:肺炎支原体快速培养法与SERODIA-MYCOⅡ凝集试验检测肺炎支原体,对肺炎支原体感染早期诊断具有重要的参考价值,肺炎支原体在成人下呼吸道感染应引起临床高度重视。     

RNA恒温扩增法在肺炎支原体检测中的应用

目的 探讨RNA恒温扩增法检测肺炎支原体的可行性及其应用价值.方法 采集2016年5~7月在我院住院治疗的200例患急性呼吸道感染儿童咽拭子,分别用RNA恒温扩增法和PCR荧光探针法进行肺炎支原体检测,分别计算两种检测方法的检出率,根据公式计算灵敏度和特异性,并进行统计学分析.结果 RNA恒温扩增法检出肺炎支原体17例,检出率为8.5%,PCR荧光探针法检出肺炎支原体18例,检出率为9.0%,两种方法的检出率比较差异无统计学意义(P>0.05);RNA恒温扩增法与PCR荧光探针法相比灵敏度为88.9%、特异度为99.5%.结论 RNA恒温扩增法与PCR荧光探针法检出率相当,具有较高的灵敏度和特异度,可以作为一种新的方法用于肺炎支原体临床检测.     

荧光偏振和多重聚合酶链技术在肺炎支原体、肺炎衣原体检测中的应用

目的:应用多重聚合酶链反应和荧光偏振检测技术建立一种方便可靠、简单经济的肺炎支原体、肺炎衣原体DNA同步检测方法.方法:以与肺炎衣原体、肺炎支原体16SRNA序列互补的特异、无交叉反应的两对引物在同一反应体系中行多重聚合酶链反应扩增阴阳性对照及521例患儿咽喉分泌物,将荧光偏振检测技术与模板指导的DNA末端延伸反应(TDI -FP)结合,对样本PCR扩增产物进行进一步检测,并与测序方法结果比较.结果:应用多重聚合酶链反应和TDI -FP技术检测患者521例,肺炎衣原体感染阳性121例,肺炎支原体感染阳性113例,与测序检测方法符合率100%,其中肺炎衣原体、肺炎支原体双重感染阳性10例.结论:建立了基于荧光偏振技术检测肺炎衣原体、肺炎支原体的新方法,具有良好的特异性,方便简单,无需标记探针,可用于临床检测.     

儿童肺炎支原体感染三种实验诊断方法评价

目的:探讨儿童肺炎支原体感染的快速、简便、有效的临床实验室诊断方法。方法:对2016年12月收集的200例临床呼吸道感染患儿的咽拭子和静脉血样本进行肺炎支原体快速鉴定培养镜检、抗体检测、抗原检测及荧光定量PCR(Polymerase chain reaction)分析。以快速培养鉴定镜检法为诊断肺炎支原体感染金标准,比较抗体检测、抗原检测及荧光定量PCR三种诊断方法的灵敏度、特异度和Youden指数(正确诊断指数)。结果:抗体检测的灵敏度、特异度和Youden指数分别为76.3%、77.9%、54.2%;抗原检测为37.7%、89.5%、27.2%;荧光定量PCR为93.0%、96.5%、89.5%。荧光定量PCR法的灵敏度、特异度和Youden指数均高于抗体检测和抗原检测法(P0.05),三者Youden指数两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:荧光定量PCR具有较高的灵敏度、特异度和Youden指数,可以在未来替代快速鉴定培养镜检、抗体检测和抗原检测法,作为临床诊断儿童肺炎支原体感染的快速、简便而有效的实验室诊断方法。     

咽拭子标本FQ-PCR技术联合快速培养法对肺炎支原体肺炎患儿诊断效能的影响

目的 观察咽拭子标本实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术联合快速培养法对肺炎支原体肺炎患儿诊断效能的影响。方法 选取我院肺炎支原体肺炎患儿256例(2017年12月～2018年11月)设为试验组,均经X线检查证实,另选同期健康体检儿童41例设为参照组,均实施咽拭子标本FQ-PCR技术、快速培养法检测,统计咽拭子标本FQ-PCR技术、快速培养法单一及联合检测肺炎支原体肺炎结果,比较咽拭子标本FQ-PCR技术、快速培养法单一及联合检测肺炎支原体肺炎诊断价值。结果经快速培养法检测肺炎支原体肺炎真阳性176例,经咽拭子标本FQ-PCR技术检测肺炎支原体肺炎真阳性208例,经联合检测肺炎支原体肺炎真阳性249例;咽拭子标本FQ-PCR技术、快速培养法联合检测肺炎支原体肺炎的诊断准确性97.31%、诊断特异性97.56%、诊断灵敏性97.27%较单一检测高(P＜0.05)。结论 咽拭子标本FQ-PCR技术、快速培养法联合检测肺炎支原体肺炎,可显著提升诊断准确性、特异性、灵敏性,利于疾病早期诊疗及临床控制。     

多聚酶链反应检测肺炎支原体、肺炎衣原体的体会

肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)感染在多聚酶链反应(PCR)技术问世之前一直缺少快速、敏感、特异的诊断方法.1984年PCR技术出现后,只需要简单的实验条件,2～3h就能大量扩增核苷酸片段,敏感性比杂交方法高100～1 000倍,是国内外近年来发展较快的检测支原体、衣原体的方法之一.     

检测肺炎支原体的实时荧光PCR方法的建立

目的 采用Taqman探针技术,组建肺炎支原体荧光PCR基因检测方法.方法 对GenBank登录的肺炎支原体的基因序列进行生物信息学分析.针对16s核糖体蛋白基因的保守区域设计引物和探针,组建实时荧光PCR方法检测.采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价.采用倍数稀释的方法进行灵敏度的评价.对来自南方医院的522份临床咽拭子样本进行检测.结果 用实时荧光PCR方法检测甲型流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒均无特异性反应.该方法可以检测出稀释浓度约为103/mL的肺炎支原体样本.对本院的临床样本检出39份.结论 实时荧光PCR检测肺炎支原体具有较高的特异性和灵敏度,可用于肺炎支原体感染的诊断.     

6h快速肺炎支原体培养阳性率的影响因素分析

目的:探讨6 h快速肺炎支原体培养法在儿童肺炎支原体肺炎中培养阳性率的影响因素。方法:比较1 258例儿童6 h快速肺炎支原体培养检测中,不同性别、季节、年龄、患儿就诊类型等的肺炎支原体培养的阳性率。结果:肺炎支原体培养阳性率女童高于男童,差异有统计学意义(P<0.05);季节交替的4月和10月肺炎支原体培养阳性率偏高,5～9月份培养阳性率均<20%,差异有统计学意义(P<0.05);除1岁以下的婴儿阳性率为16.60%外,其他年龄段都在20%～23%之间,各年龄段之间比较差异无统计学意义(P>0.05);肺炎支原体培养阳性率门诊患儿为23.24%,住院患儿为18.92%,门诊与住院患儿之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:6 h快速肺炎支原体培养检测儿童肺炎支原体感染结果准确、快速,操作简单,可及时为临床医师提供诊断参考;6 h快速培养阳性率女童高于男童,季节交替的4月、10月培养阳性率较高,年龄、就诊类型与培养阳性率无关。     

肺炎衣原体实时定量PCR检测方法的建立

目的:探讨实时定量PCR检测肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,Cpn)的方法.方法:根据GenBank提供的肺炎衣原体基因序列,选取高特异性和保守型的区域进行引物设计,并建立实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)的检测方法.同时用肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒对Cpn引物的特异性进行分析.对呼吸道感染患者200个咽拭子样本和68个肺泡冲洗液样本进行检测,以荧光抗体检测法作对照,评价实时定量PCR检测Cpn的准确性.结果:Cpn PCR引物对肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒均显示阴性,对Cpn显示为阳性,特异性良好;荧光实时定量PCR技术检测的准确性优于荧光抗体检测法.结论:荧光实时定量PCR技术检测Cpn体灵敏度高、周期短,可作为临床诊断Cpn的手段.     

咽拭子检测肺炎支原体DNA100例临床分析

目的 探讨小儿呼吸道肺炎支原体感染患者咽拭子检测肺炎支原体DNA临床价值。方法 采用荧光PCR技术检测患儿咽拭子肺炎支原体DNA。并与临床诊断进行相关分析。结果100例临床诊断支原体肺炎患儿咽拭子阳性71例(71％)。结论咽拭子检测肺炎支原体DNA技术快捷、简便、敏感性高、儿童顺应性好,值得临床推广应用。     

血肺炎支原体IgM与小儿呼吸道感染疾病

近年来,随着对肺炎支原体(MP)检测手段的不断进步,有关肺炎支原体感染的报道日见增多.在基层医院不能开展PCR技术的情况下,我们采用酶联免疫法(ELISA)微滴技术检测血肺炎支原体IgM,以了解血肺炎支原体IgM(MP-IgM)与小儿呼吸道感染疾病种类及年龄的关系.     

儿童肺炎支原体肺炎MP-DNA检测和评价

目的:探讨肺炎支原体DNA(MP-DNA),超敏C反应蛋白(SCRP)对诊断支原体肺炎的敏感性和特异性,为临床提供准确快速的诊断依据?方法:采用MP荧光定量PCR法检测患儿呼吸道分泌物标本中的MP-DNA水平,同时检测血清SCRP和MP-IgM的浓度,并与WBC计数进行比较?结果:MP-DNA和SCRP对诊断支原体肺炎的敏感性均高于WBC计数,3个指标的敏感性以SCRP最高;特异性和阳性预测值以MP-DNA最高;阴性预测值和约登指数,MP-DNA和SCRP两者相差无几?结论:MP-DNA检测对肺炎支原体的早期诊断有一定价值?     

聚合酶链反应诊断小儿支原体肺炎及其临床意义

目的:研究用聚合酶链反应技术检测小儿支原体肺炎鼻咽分泌物中肺炎支原体 DNA。方法:采用快速制备 DNA 模板的方法。结果:检测70例,52例阳性,阳性率75.7%,而用支原体培养方法,阳性率仅53.8%(χ~2检验 P<0.05),相差显著。结论:该方法既保持了 PCR 的敏感性和特异性,又简化过程,能够检测到相当于50个基因组 DNA,可用于常规检测肺炎支原体,有助于支原体肺炎的早期诊断、早期治疗及疗效评价。     

咽拭子检测肺炎支原体DNAl00例临床分析

目的探讨小儿呼吸道肺炎支原体感染患者咽拭子检测肺炎支原体DNA临床价值。方法采用荧光PCR技术检测患儿咽拭子肺炎支原体DNA。并与临床诊断进行相关分析。结果100例临床诊断支原体肺炎患儿咽拭子阳性71例(71％)。结论咽拭子检测肺炎支原体DNA技术快捷、简便、敏感性高、儿童顺应性好，值得临床推广应用。     

三种快速检测肺炎支原体方法的比较

肺炎支原体（MP）检测对支原体肺炎的早期诊断和治疗有重要意义。目前检测肺炎支原体的方法很多，但缺乏既快速又简易可靠的方法，无法及时对临床诊治提供指导。为此，本试验选用了聚合酶链反应试验（PCR）、酶链免疫吸附试验（ELISA）、胶体金渗滤试验（GIFA）3种方法对相同的样品进行同上检测，通过试验结果的比较，以确定哪种检测方法更快速更灵敏。     

荧光定量PCR法和ELISA检测儿童呼吸道感染病原体的意义

儿童呼吸道感染是儿童秋冬季节常见的疾病,临床症状以发热、咳嗽、流涕等为主,近年来除了常见的细菌与病毒感染以外,肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)和肺炎衣原体(chlamydiapliel pneumoniae,CP)也逐渐成为急性呼吸道感染的主要病原体.由于该两类病原体的分离培养方法复杂,所需时间长,不便于临床快速诊断[1],早期检测出病原体而成为临床诊断棘手的问题.目前大多数医院对该两类病原体的检测仍以血清学方法(如ELISA)为主.但近年来随着分子生物学技术的发展,聚合酶链(PCR)反应,尤其是荧光定量PCR技术的广泛使用[2],为病原体的检测提供了新的技术与手段.本研究拟同时采用ELISA和荧光定量PCR技术对儿童呼吸道感染病原体进行检测,比较2种方法对病原体检出的阳性率、一致性和优越性.