眼内麻醉剂对兔角膜内皮细胞影响的实验研究

目的:研究不同眼内麻醉剂对离体兔角膜内皮细胞的作用。方法:将实验用兔角膜取下后,分别用10g/L利多卡因、1g/L塞罗卡因及BSS处理。通过台盼蓝-茜素红联合染色观察兔角膜内皮细胞的形态学改变,并用计算机自动图像分析系统对兔角膜内皮细胞的损伤情况进行定量分析;对处理后的兔角膜内皮细胞进行扫描电镜观察,了解其超微形态学改变。结果:①各实验组中,10g/L利多卡因作用后兔角膜内皮细胞的损伤率分别为(0.91±0.12)%,(1.23±0.27)%,(2.42±0.31)%,(3.61±0.14)%;10g/L塞罗卡因作用后的兔角膜内皮细胞的损伤率分别为(0.68±0.16)%,(0.89±0.17)%,(1.84±0.34)%,(2.58±0.34)%。二者差异均具有显著性。(P<0.05,P<0.01)。②眼内麻醉剂的作用时间与兔角膜内皮细胞的损伤率呈正相关,相关系数分别为0.974、0.976。③眼内麻醉剂作用后,10g/L利多卡因造成的兔角膜内皮细胞的损伤情况较10g/L塞罗卡因更为严重。结论:10g/L利多卡因及10g/L塞罗卡因都会对兔角膜内皮细胞造成损伤。比较而言,不含防腐剂的塞罗卡因更安全。     

国产利多卡因对兔角膜内皮细胞影响的实验研究

目的：通过检查不同浓度国产利多卡因对兔角膜内皮细胞的影响,确定其用于前房麻醉的可行性及适用浓度。方法：注入药液30min后检查中央角膜内皮细胞,以面积变异系数、六角形细胞百发率、细胞密度3个参数为分析指标。结果：面积变异系数和六角形细胞百分率在2％与1％利多卡因组有显著性差异（分别为P＜0.001,P＜0.01）,在1％组与对照组无显著性差异（分别为P＞0.01,P＞0.05）。细胞密度3对比无明显差异。结论：国产1％利多卡因用于前房麻醉是安全可行的。     

应用全自动角膜内皮细胞分析仪对保存兔角膜内皮细胞定量研究

目的研究保存的兔角膜内皮细胞活性四项定量指标的变化.方法应用非接触式眼库镜及计算机角膜内皮细胞形态定量分析系统对42只(84片)实验兔角膜内皮细胞进行四项指标(平均细胞面积、细胞密度、六棱细胞比率、变异系数)定量分析,并同时检测内皮细胞活性率,其结果进行对比研究.结果改良K3液组与K液对照组保存5天时,四项指标两组无显著性差异(P＞0.05),保存7、10天时,四项指标两组有显著性差异(P＜0.05).改良K3液组及K液组分别与正常兔组进行比较改良K液组在保存10天时,四项指标与正常兔组差异有显著性(P＜0.05).K液对照组在保存7、10天时,四项指标与正常兔组差异有显著性(P＜0.05).改良K3液组在保存10天时,内皮细胞活性率在93.36±1.96%,而四项指标与正常兔组差异已有显著性.K液对照组在保存7、10天时,内皮细胞活性率分别为90.84±1.9%,79.8±4.48%,四项指标均与正常兔组差异有显著性.结论完整的评价角膜植片的活性,单纯依靠既往的内皮细胞活性率测定是不全面的,在有条件的情况下应同时结合四项定量指标进行综合评价,才能确保供体角膜片的质量.     

真空冷冻干燥保存兔角膜内皮细胞酶的实验研究

目的　通过光/电镜酶组织细胞化学方法测定兔角膜内皮细胞酶活性,探讨真空冷冻干燥保存法(冻干法)对于兔角膜内皮细胞活性的影响。方法　按随机及配对原则将兔眼分为新鲜对照组、冷冻对照组、冻干实验组。对冷冻组进行角膜深低温冷冻保存。对冻干组进行真空冷冻干燥保存。将冷冻及冻干保存的兔角膜片分别复水及复温后,与新鲜的角膜片同时进行三磷酸腺苷酶(AT Pase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的光镜及电镜酶组织细胞化学染色,观察三组酶的活性是否有差异。结果　在新鲜组、冷冻组、冻干组中,ATPase及DSH的酶组织化学染色在光镜观察下均呈阳性反应。三组样本内皮细胞ATPase和SDH酶的平均积分光密度值(IOD)差异具有统计学意义(P <0 .0 1)冻干组活性较低。电镜酶组织细胞化学染色见三组样本角膜内皮细胞膜上均有电子致密颗粒沉着。结论　真空冷冻干燥保存法可使离体角膜内皮细胞保持一定的活性。与新鲜及冷冻保存的兔角膜相比,活性较低。但可以推测冻干法有望成为一种新的角膜长期保存方法     

角膜内皮细胞高压力损伤机制的实验研究

目的探讨青光眼急性高眼压对角膜内皮细胞的损伤机制。设计实验性研究。研究对象体外培养的角膜内皮细胞。方法采用后弹力层撕除联合酶消化法获取角膜内皮细胞,免疫组化法鉴定细胞。实验分两组：A组：急性压力增高组,压力为6．67kPa;B组：压力仿生培养,压力为2．0kPa。倒置显微镜定期观察细胞形态及生长规律;HE染色观察细胞形态结构变化;台盼兰一茜素红染色观察高压对细胞的损伤作用;流式细胞术分析细胞活性;免疫荧光检测细胞胞浆中细胞色素C（CytC）的表达。主要指标角膜内皮细胞形态结构、凋亡率及胞浆中CytC的表达。结果获取的细胞经免疫法证实为角膜内皮细胞表型。两组细胞分别培养24hr后,流式细胞术分析显示,高压力组的早、晚期细胞凋亡率分别为（16．40±0．95）％和（41．37±1．29）％;而正常压力组早、晚期细胞凋亡率分别为（1．07±0．40）％和（0．70±0．00）％,差异有统计学意义（P=0．000）。免疫荧光检测到高压力组角膜内皮细胞胞浆CytC呈阳性表达。结论高压力对角膜内皮细胞损伤呈时间敏感性,细胞的凋亡启动是其角膜内皮细胞损伤的机制之一。f眼科,2011,20：155-159）     

电焊弧光致眼内严重损伤一例

电焊弧光损害常以眼外层组织为主,表现为电光性眼炎,但引起眼内严重损伤者却非常少见。最近我院遇到一例因用祼眼观看电焊弧光致虹膜、晶状体、视网膜严重损伤的患者,报道如下:     

人表皮生长因子对体外培养兔角膜内皮细胞影响的实验研究

目的：明确人表皮生长因子（ｈｕｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ,ｈＥＧＦ）对角膜内皮细胞的影响。方法：采用体外培养的兔角膜内皮细胞,观察接种后不同时点ｈＥＧＦ对其生长状态的影响;兔角膜片内皮损伤模型,离体培养后行Ｈ－Ｅ染色和Ｈ＾３－ＴｄＲ掺入放射自显影,观察ｈＥＧＦ对其修复的影响。结果：兔角膜内皮细胞体外培养ｈＥＧＦ组细胞数高于对照组,并使细胞形态产生纺锤形改变;角膜内皮细胞     

保存兔角膜内皮细胞形态学的研究

保存不同时间的兔角膜内皮细胞,SEM:六角形边界不清,仅可见细胞轮廓,细胞有水肿,细胞间连接处有空泡。TEM:核膜尚完整,胞浆内有空泡,还有细胞器存在。术后48天及11个月植片,可见六角形边界的内皮细胞,呈镶嵌型排列,细胞核膜完整,细胞器丰富。提示:保存角膜内皮细胞形态学上的改变在活体房水中的再水合作用或培育下是可以恢复的。     

碱性成纤维细胞生长因子治疗兔角膜上皮及基质损伤的实验研究

目的 通过动物实验探讨碱性纤维细胞生长因子对角膜上皮细胞、基质细胞损伤的治疗作用。为受损角膜的愈合提供一条新的、有效的途径。方法 将２４只兔全麻下切除角膜前板层,直径８ｍｍ,约１／３角膜厚度。将其随机分为３组,分别滴生理盐水,０．１μｇ／ｍｌ及１．０μｇ／ｍｌ碱性成纤维细胞因子溶液。术后定期用计算机图像处理系统测量角膜损伤后愈合面积,并用放射自显影方法观察角膜基质细胞生长及分布情况。结果 术后１～     

角膜胶原交联治疗兔角膜碱烧伤的实验研究

目的评价核黄素-紫外线A角膜胶原交联(CXL)联合药物治疗兔角膜碱烧伤的效果。方法前瞻性实验研究。40只健康新西兰大白兔,做左眼角膜碱烧伤模型,随机分为模型组、药物组、交联组和联合组,每组10只。其干预措施分别为:不予治疗、药物治疗、CXL治疗和CXL联合药物治疗。术后1个月及3个月比较各组的治疗效果。结果模型组、药物组、交联组和联合组角膜上皮愈合时间依次为(32.9±5.8)天、(12.8±2.3)天、(25.9±3.2)天和(10.7±2.5)天,各组间比较差异有统计学意义(F=67.647,P=0.000)。联合组角膜浑浊度明显低于其他组,其次是药物组,模型组最重(F=6.446,P=0.001);单个共聚焦显微镜视野(400 μm ×400 μm)下角膜内炎症细胞数依次为(162.6±33.3)个、(46.0±21.3)个、(87.9±7.5)个和(8.3±6.5)个。各组间比较差异有统计学意义(χ^2=36.040,P=0.000).病理结果示,联合组角膜胶原最为致密,其次是交联组。结论CXL联合药物治疗角膜碱烧伤的效果优于单纯药物疗法或单纯CXL疗法。     

EDTA对兔角膜内皮细胞增殖的影响

目的 观察不同浓度的EDTA对免角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)增殖的影响.方法 采取揭取角膜后弹力层联合酶消化法分离培养兔CECs;分别用0.5 mmol·L-1、2.5 mmol·L-1、5.0 mmol·L-1的EDTA作用于体外培养的免CECs 1h然后于24 h、48 h、72 h、96 h观察不同浓度的EDTA对免CECs的影响.采用CCK-8检测方法测定在450 nm处各吸光度(A值)来判断CECs的增殖状况采用流式细胞检测仪对各组细胞周期进行检测同时采用倒置显微镜观察细胞形态的变化.结果 揭取带内皮细胞的后弹力层联合酶消化法培养的兔CECs可很快贴壁、增殖,并在4～5 d融合为单层 CCK-8检测结果显示0.5 mmol·L-1、2.5 mmol·L-1、5.0 mmol·L-1的EDTA作用后各个时间点均能使CECs的吸光度发生改变,同一时间点0.5 mmol·L-1的EDTA对细胞增殖的作用最为显著,各摩尔浓度的EDTA对兔CECs作用后96h吸光度改变最明显(A值分别为:2.595 2±0.053 0、2.090 4±0.159 2、0.939 1±0.077 2).作用48 h后0.5mmol·L-1组兔CECs的S+C2/M期细胞所占比例(A值为1.292 5±0.018 3)与阴性对照组比较,差异有统计学意义,而2.5mmol·L-1、5.0 mmol·L-1组与阴性对照组(A值为0.921 2±0.084 8)比较,差异均无统计学意义.结论 0.5 mmol·L-1的EDTA作用于兔CECs 1 h后的不同时间均有明显的促进增殖的作用.     

神经生长因子对兔角膜内皮细胞增殖的影响

目的 探讨神经生长因子（NGF）对角膜内皮细胞增殖的影响。方法 在培养兔角膜内皮细胞的培养液中分别添加5U／ml,50U／ml和500u/ml的NGF,加药后第3,7天采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,在酶标仪上测定570nm波长处的吸光度值来观测细胞增殖情况。结果 与对照组比较,加药后第3,7天,3组的NGF对培养的兔角膜内皮细胞增殖均促进作用（P＜0．01）,且呈剂量依赖性。其中50U／ml组及500U／ml组作用强于5U／ml（P＜0．05）,而50U／ml组和500U／ml组比较作用无差异（P＞0．05）。结论 外源性NGF对培养的兔角膜内皮细胞增殖有明显的促进作用。     

组织粘合剂对兔角膜内皮细胞的影响

组织粘合剂在眼科的应用是治疗学上的一个进展。国外曾系统观察了角膜表面及实质层内使用该类粘合剂后的角膜、前房角等组织学改变，本文进一步观察国产ZA眼胶对角膜内皮细胞形态及密度的影响，以了解其毒副作用，为临床应用提供材料．材料和方法一、材料1．深圳南光医用胶公司产α-氨基丙烯酸正辛脂，商品名ZA医用眼胶。2．纯种日本大耳白家兔15只，体重24kg。3．0．25％锥兰和0．2％pH635菌素红溶液．4刀lymPus光学显微镜。二、方法1．动物模型：30只眼分3组，每组10眼。I组角膜层间涂胶组，兔戊巴比妥的静脉麻醉后在角膜中央剖切4X4m…     

压力仿生培养对兔角膜内皮细胞调控的研究

目的 探讨体外压力仿生培养系统下不同梯度压力对角膜内皮细胞形态和功能的调控作用。设计 实验性研究。研究对象 兔角膜内皮细胞。 方法 将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞分为五组：A组为无压力常规培养（空白对照）,B组为正常压力仿生培养（15 mmHg）,C组为压力波动组,将压力设为15mmHg、25 mmHg、20 mmHg、10 mmHg,D组30 mmHg压力培养,E组50 mmHg压力培养。细胞均培养24h,免疫法鉴定原代角膜内皮细胞,HE染色和电镜观察细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞活性。主要指标 角膜内皮细胞的形态、存活率。 结果 获取的所有细胞证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染。五组细胞分别培养24h后,经HE染色和电镜检测发现正常压力微环境培养的角膜内皮细胞排列紧密,六边形细胞居多,细胞表面微绒毛丰富,细胞核染色质丰富,而高压力培养的角膜内皮细胞活性差,细胞间隙加大。经流式细胞术分析显示,正常压力组、30 mmHg组、压力波动组、50 mmHg组的角膜内皮细胞培养24 h后细胞存活率分别为（98.16±0.45）%、（78.83±1.65）%、（70.2±3.54）%、（41.33±0.25）%（P=0.016）。高压力培养组中随着压力的升高和持续时间延长,细胞活性显著下降。结论 正常压力微环境培养对角膜内皮细胞形态和功能具有正向调节作用,而高压力对角膜内皮细胞具有损伤性,并随时间延长而加重。（眼科,2017,26： 56-60）     

接触电焊弧光致双眼角膜上皮严重剥脱一例

茹×,男,32岁,个体修理工。门诊号0863。于1990年9月11日下午就诊。主诉:双眼视糊、剧烈灼痛伴畏光、流泪。病史:于入院前在自己的修理店露天强阳光下,双眼裸眼电焊操作约10分钟,然后停止操作50分钟,双眼开始稍     

兔角膜缘损伤分级和治疗的研究

各种因素引起的角膜缘受损是眼表损伤最常见的病因，以受损区相应范围的角膜结膜化为主要特征。不同程度和范围的角膜缘受损导致不同程度的眼表损伤，其治疗方法也不相同。本实验拟根据干细胞损失程度对角膜缘受损进行分级，并探讨各级损伤的合理治疗方案。     

波动的压力对兔角膜内皮细胞的影响

目的　观察波动的压力对角膜内皮细胞的影响。方法　将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞分为两组:Ａ组为压力波动组（压力设置为:１５ｍｍＨｇ～２５ｍｍＨｇ～２０ｍｍＨｇ～１０ｍｍＨｇ,每个压力持续６ｈ;１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ）;Ｂ组为３０ｍｍＨｇ压力组;Ｃ组为无压力组。三组细胞分别培养２４ｈ。免疫细胞化学染色法鉴定原代角膜内皮细胞形态;台盼蓝-茜素红联合染色检测细胞活性,ＨＥ染色观察细胞形态;Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测细胞中Ｂｃｌ-２和Ｐ５３蛋白的表达水平。结果　获取的所有细胞证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染。三组细胞分别培养２４ｈ后,经台盼蓝-茜素红染色和ＨＥ染色证实:两个压力培养组的细胞活性较无压力培养组明显下降,其中压力波动组的细胞活性低于３０ｍｍＨｇ压力组。同时无压力组、３０ｍｍＨｇ压力组和压力波动组细胞中Ｐ５３蛋白的相对表达量分别为０．１５０±０．００５、０．２５３±０．０１４、０．６７０±０．０１９,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论　证实了高压力及非生理性波动的压力对角膜内皮细胞均具有损伤作用。     

LASIK对角膜内皮细胞酶活性影响的实验研究

目的 :研究准分子激光原位角膜磨镶术 (LASIK)对兔角膜内皮细胞酶活性的影响。方法 :以酶组织化学染色法测定Lasik术后 1,3 ,7,10 ,15 ,60天以及三种不同切削深度兔角膜内皮细胞乳酸脱氢酶 (LDH ) ,还原型辅酶I (NADH)的活性改变。结果 :Lasik术后不同时间组与对照组以及三种不同切削深度组的角膜内皮细胞两种酶活性比较均未见显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :Lasik术对角膜内皮细胞代谢无显著影响     

紫外线对角膜损伤的实验研究

电光性眼炎、雪盲等是常见的紫外线所致的眼外伤。因临床上很难得到此种眼球标本,对其进行组织病理学研究比较困难。本文用紫外线杀菌灯照射小白鼠眼部观察了角膜组织病理学的改变。     

高糖对兔角膜内皮细胞的形态学影响

目的：研究高糖环境下兔角膜内皮细胞形态学的变化。方法：用细胞培养的方法模拟体内高糖环境,原代培养兔角膜内皮细胞,用倒置相差显微镜和扫描电镜对高糖组及地照组进行形态学观察及分析比较。结果：高糖组角膜内皮细胞出现肿胀、六边形细胞比例减少、细胞间隙增大、细胞表面出现裂纹、微绒毛消失、细胞核皱缩等一系列的形态学改变,且这种改变程序与葡萄糖浓度基本呈正相关。结论：高糖对角膜内皮细胞存在影响,提示糖尿病病人角膜内皮细胞的修复和代偿能力下降,故当糖尿病病人进行眼部手术或存在眼部病变、损伤时,注意保护角膜内皮细胞非常重要。