知母宁抗流感病毒作用研究

目的:考察知母宁抗流感病毒的作用.方法:采用人流感病毒A型(H1N1)滴鼻感染小鼠,以利巴韦林作为阳性对照药,对知母宁抗病毒活性进行评价.结果:与生理盐水对照组相比,知母宁可改善感染小鼠的临床症状,减少14 d内动物的死亡数,并能延长其平均存活时间.组织病理学检查表明25,50及75 mg/kg的知母宁对小鼠肺部感染均有一定的疗效,随剂量的降低疗效减弱.其中75 mg·kg-1的知母宁治疗作用与利巴韦林(15 mg·kg-1)相似.结论:知母宁具有较强的抗流感病毒A型(H1N1)的活性.     

知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型体外活性研究

目的:对知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的活性进行研究.方法:采用MTT比色法测定知母宁对Vero细胞的毒性作用.采用中性红染色法,以阿昔洛韦为阳性对照药物,考察不同给药方式与不同药物处理时间下知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-ⅠSm44)的活性.结果:MTT法测得Vero细胞对知母宁的最大耐受浓度与半数中毒浓度(TC50)分别为0.29与3.66mg*ml-1.不同加药方式下,知母宁与阿昔洛韦均对HSV-ⅠSm44表现出综合抑制作用并能抑制病毒吸附后的复制增殖过程,这些作用总体上随药物浓度升高而增强,其中知母宁抗病毒有效率(ER%)最高达76.42%.知母宁预防HSV-Ⅰ病毒吸附的作用较弱,但其在高浓度(2.08mg*ml-1以上)对HSV-Ⅰ具强的直接杀伤作用,最高ER%值为98.86%.随药物处理时间延长,低浓度知母宁抗HSV-Ⅰ的ER%值递减,2.08mg*ml-1以上知母宁的ER%值变化小.在不同药物处理时间下,知母宁及阿昔洛韦组病毒的感染性均较平行设置的病毒对照组减弱,且知母宁组的感染力较阳性药物组更弱.知母宁组病毒感染力下降值△lgTCID50随处理时间增加而增加.结论:知母宁在体外从多个作用点较强地抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型活性.     

中西医结合体外抗甲型流感病毒的实验研究

目的研究中西医结合药物体外对甲型流感病毒的抑制作用。方法体外接种甲型流感病毒鼠肺适应株H1N1于狗肾细胞（MDCK）,观察各组药物体外抗病毒作用。结果根据实验,测得各组药物对甲型流感病毒的选择指数,利巴韦林注射液组为4.68;痰热清注射液组为5.50;达菲组为5.53;中西医结合组为14.48。结论中西医结合组具有明显的体外抗甲型流感病毒的作用。     

松针叶绿素-胡萝卜素软膏的体外抗甲型流感病毒作用研究

目的 观察松针叶绿素-胡萝卜素软膏的体外抗甲型流感病毒作用.方法 接种甲型流感病毒于狗肾传代细胞(MDCK),评价松针叶绿素-胡萝卜素软膏的细胞毒性及体外抗病毒作用.结果 松针叶绿素-胡萝卜素软膏对MDCK细胞的半数中毒浓度(TC50)为56 μg· mL-1,治疗和预防给药方式均有抗甲型流感病毒作用,半数抑制浓度(IC50)分别为30、29μg·mL-1,治疗指数(TI)均为1.9.结论 松针叶绿素-胡萝卜素软膏具有明显的抗流感病毒作用,且在安全浓度范围内呈现一定的量效关系,浓度越高抗病毒作用增强.     

通窍止咳液体外抗甲型人流感病毒作用研究

目的:研究通窍止咳液体外抗甲型人流感病毒的作用。方法:以利巴韦林作阳性对照药物,采用存留细胞结晶紫染色法测定通窍止咳液不同加药方式对甲型人流感病毒H3N2的体外抑制作用及其时效关系。结果:通窍止咳液对甲型人流感病毒具有良好的综合抑制作用及抑制病毒吸附后的复制增殖作用;通窍止咳液对病毒吸附的预防作用弱,无直接杀伤病毒的作用;随药物作用时间延长,通窍止咳液在低浓度时的抗病毒有效率呈降低趋势,在高浓度时的抗病毒能力基本不变。结论:通窍止咳液具有较好的体外抗甲型人流感病毒的作用。     

天然多糖在体外抗甲型流感病毒作用的普遍性

目的研究各种天然多糖在体外抗甲型流感病毒的作用,探索多糖未来的抗病毒药学用途.方法 以云芝、虫草、灵芝、猴头菇4种天然多糖和葡聚糖为研究对象,观察天然多糖对狗肾传代细胞(MDCK)上甲型流感病毒的直接灭活作用、治疗作用、预防作用和综合阻断作用:观察天然多糖对鸡胚中甲型流感病毒的直接灭活作用.结果 云芝、虫草、灵芝、猴头菇4种天然多糖对甲型流感病毒有体外灭活作用,这种作用呈剂量和时间依赖关系;毒性低,对病毒感染有一定的治疗作用,安全指数均大于14;没有明显的预防作用;有一定程度的综合阻断作用.结论 在随机获取的5种多糖中,云芝等4种天然多糖具有抗甲型流感病毒的活性,说明天然多糖分子可能普遍具有抗病毒活性,如何在实际中运用多糖这一特征防治病毒感染值得进一步研究.     

热毒宁注射液体外抑制甲型H1N1流感病毒的研究

目的 研究热毒宁注射液体外抑制甲型H1N1流感病毒的作用。方法 以奥司他韦为阳性对照,采用CPE和MTT法观察热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒的抑制作用。结果 CPE法结果表明热毒宁注射液最大无毒浓度（TC₀）为16.2 mg/mL,半数中毒浓度为（TC₅₀）为（24.5±8.1）mg/mL;MTT法测定结果表明热毒宁注射液TC₀为16.2 mg/mL,TC₅₀为（21.7±9.4）mg/mL。热毒宁注射液体外抑制甲型H1N1流感病毒结果显示,CPE法和MTT法热毒宁注射液作用感染细胞1次组半数有效浓度（IC₅₀）为（900.0±173.2）、（933.3±57.7）μg/mL,治疗指数（TI）为27.2、23.2;热毒宁注射液作用感染细胞3次组IC₅₀为（666.7±115.5）、（866.7±208.1）μg/mL,TI为36.7、25.0。结论 热毒宁注射液具有明显体外抗甲型H1N1流感病毒的作用。     

蒲公英有机萃取物的抗甲型H1N1流感病毒作用

目的 通过检测蒲公英不同的萃取物体外抗甲型H1N1流感病毒作用,探讨其在甲型H1N1流感治疗上的应用。方法 首先用乙醇萃取而得到蒲公英的乙醇萃取物,然后依次采用乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、水萃取蒲公英的乙醇萃取物,得到不同溶剂的萃取物;选用狗肾传代MDCK细胞作为病毒的宿主对病毒进行培养和扩增;通过血凝效价和Real time RT-PCR实验,间接或直接检测蒲公英不同萃取物对病毒的中和作用和增殖抑制作用。结果 4种不同溶剂的蒲公英萃取物作用病毒后,只有石油醚、乙酸乙酯组的血凝效价数值出现了一定程度的下降,其中乙酸乙酯萃取物组的值下降了2~4倍;而石油醚萃取物在96 h时,中和实验组和增殖抑制组的血凝效价值分别下降了256倍和128倍。Real time RT-PCR检测表明,石油醚和乙酸乙酯萃取物明显抑制病毒的扩增量。作用96 h时,无论是中和实验还是增殖抑制实验,石油醚萃取物的作用都是最显著的,病毒扩增率较阳性对照分别减少了92.4%和95.6%。结论 蒲公英乙酸乙酯萃取物和石油醚萃取物在体外有明显的抗甲型H1N1流感病毒的作用。     

干扰素诱导跨膜蛋白抗甲型流感病毒的研究进展

干扰素诱导跨膜蛋白（interferoninducibletransmembraneproteins,IFITM）是20世纪80年代人们通过小干扰RNA技术研究中发现的一种抗病毒蛋白,目前该蛋白的抗病毒作用及其机制已成为研究热点。迄今的研究发现,IFITM的抗甲型病毒感染作用是通过多种途径实现的。IFTIM能够有效作用于甲型流感病毒表面糖蛋白血凝素与宿主细胞表面受体结合之后、流感病毒包膜与内吞形成的胞内体膜融合之前的流感病毒感染的胞内体途径。在该作用过程中,IFITM下调网格蛋白的表达,扰乱液泡ATP酶（V型ATP酶,vacuolarATPase,v—ATPase）的酸化功能,破坏胞内体胆固醇的平衡,从而抑制病毒包膜与胞内体膜融合,阻断病毒RNA释放到细胞质中。此外,IFITM也能够影响感染细胞与正常细胞之间的半融合,发挥抑制病毒感染的作用。近年来的研究提示,IFITM通过诱导记忆T细胞选择性高表达该蛋白,继而保护细胞免受甲型流感病毒感诳．     

金莲花醇提物体外抗甲型流感病毒作用研究

目的研究金莲花醇提物的抗呼吸道甲型流感病毒作用。方法采用鸡胚培养流感病毒,并用鸡红血球凝集试验检测药物对病毒在鸡胚尿囊液中增殖的抑制作用。结果在药物和病毒先在体外直接作用后的共同接种试验中,金莲花醇提物对甲型流感病毒具有体外直接灭活作用;在甲型流感病毒先感染鸡胚后再接种药物试验中,金莲花醇提物可抑制病毒在鸡胚内的增殖。结论金莲花醇提物在体外对甲型流感病毒具有直接杀灭作用,对甲型流感病毒在鸡胚中的增殖具有抑制作用。     

流感病毒核酸检测试剂注册申报临床研究技术要求探讨

本文综合我国流行性感冒病毒既往流行特点、相关法规要求以及获得上市批准的检测试剂等方面内容,探讨流行性感冒病毒核酸检测试剂注册申报时的临床试验设计要求。本文重点阐述了伦理要求、方案设计、参比方法、临床研究单位选择、统计学分析以及临床报告撰写等内容,为此类体外诊断试剂的注册申报提供指导性建议。     

EGCG通过p38信号因子诱导IFN-β抗甲型流感病毒感染的研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）通过p38信号因子诱导IFN-β抑制甲型流感病毒H1N1复制作用机制。方法 将EGCG作用于人气管上皮细胞（BEAS-2B）,通过qRT-PCR和ELISA检测BEAS-2B中IFN-β mRNA和蛋白的表达,Western blotting检测p38和p-p38蛋白表达;使用p38抑制剂抑制p38信号因子的信号传导,检测EGCG作用BEAS-2B细胞诱导的IFN-β蛋白和mRNA表达;用IFN-β抗体中和细胞中IFN-β的产生,通过qRT-PCR和Western blotting检测EGCG作用H1N1后NP蛋白和mRNA的表达。结果 与EGCG（0 μg·mL^-1）相比,随着EGCG剂量增加,IFN-β蛋白和mRNA明显增加。与作用0 h相比,EGCG（20 μg·mL^-1）作用细胞12 h时诱导IFN-β蛋白表达显著（P<0.01）。EGCG可促进BEAS-2B中p38磷酸化;使用p38抑制剂抑制p38信号通路后,EGCG诱导IFN-β mRNA和蛋白表达减少（P<0.01）。与EGCG单独治疗感染H1N1的细胞相比,EGCG和IFN-β抗体共同治疗,可明显升高感染细胞中NP蛋白和mRNA表达水平（P<0.05）。结论 EGCG可通过上调p38信号因子磷酸化水平诱导BEAS-2B产生IFN-β,从而抑制H1N1复制。     

抗H7N9流感病毒中和抗体快速检测方法的建立及应用

目的：对建立的抗H7N9流感病毒中和抗体快速检测方法进行方法学验证及初步应用。方法：分别采用不同代次细胞对高、中、低不同滴度的阳性血清进行多次平行检测,考察细胞代次对检验结果的影响;采用NIBSC提供的参考品对方法学的特异性进行验证;同时应用抗H7N9的阳性血清检测进一步评估方法的准确性和精密性;采用ELISA-MNT法和血凝抑制（hemagglutination inhibition,HI）试验分别接种H7N9灭活流感疫苗免疫的小鼠血清样本20份,分析两种方法检测结果的相关性。结果：采用ELISA-MNT中和法,使用不同代次MDCK细胞（25、30和35代）检测相同的血清样本的中和抗体滴度结果相同;该方法只对羊抗H7N9的血清具有较高保护力,对其他血清基本没有交叉反应;该方法准确性良好;该方法组间、组内精密性的平均变异系数分别为4%和11%。该方法测定H7N9型流感疫苗免疫后的小鼠血清抗体效价,其结果与HI抗体的相关系数为0.61,表明两种方法的检测结果之间呈良好的正相关性。结论：建立的微量病毒中和法能够满足H7N9流感病毒中和抗体效价检测的要求,可用于H7N9新型大流行流感疫苗的免疫评价。     

玉叶解毒颗粒抗甲1型流感病毒的作用

目的:研究玉叶解毒颗粒体内外抗甲1型流感病毒(Influenza virus)作用。方法:体内试验检测玉叶解毒颗粒对小鼠感染流感病毒所致肺炎的抑制作用和死亡保护;体外实验通过对狗肾细胞(MDCK)的培养,探讨玉叶解毒颗粒在细胞上对感染流感病毒的抑制作用。结果:玉叶解毒颗粒对小鼠肺内的流感病毒有一定的清除作用,能减轻小鼠肺内的炎性病变,在剂量为15g.kg-1时对小鼠有死亡保护作用,体外实验在125g.L-1时能抑制流感病毒。结论:玉叶解毒颗粒在体内外具有明显的抗流感病毒作用。     

甲型流感病毒的变异及其跨物种传播

甲型流感病毒基因组由8个节段组成,其众多的血清型构成其变异的基础,不同病毒株之间的重配导致其能够跨越物种屏障传播。因此给人类造成极大的威胁。本文对甲型流感病毒的基本特性、变异机制、跨物种传播机制及在世界范围内的分子流行学进行综述。