人α-心钠素基因的串联

将α-心钠素(α-hANF)基因克隆到PUC_(18)载体上,经菌落原位杂交筛选鉴定出有α-hANF基因的克隆株。用BamⅡ和BamH Ⅰ消化并分离纯化得到含5′端部分α-hANF基因及PUC_(18)载体的F_1片段。用DNA合成仪合成3′端部分α-hANF基因的F_2接头,在基因3′端加入谷氨酸的密码子GAA,作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位置,并去掉基因3′端的终止信号TGA,将原BamH Ⅰ接头改为EcoR Ⅰ接头。最后,将F_1和F_2片段与α-hANF基因酶促连接后进行转化,通过双酶切筛选出含有双拷贝α-hANF基因的转化子,并用双脱氧链终止法进行序列分析,证明核苷酸顺序正确。     

人肿瘤特异抗原MAGE-3基因疫苗的构建和表达

目的：克隆肿瘤特异性共享抗原mage-3基因，制备基于α－病毒复制酶的高效黑色素瘤特异性基因疫苗。方法：用RT-PCR方法从黑色素瘤细胞系LB373中制备mage-3基因，以含α－病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART2a为载体，构建重组DNA疫苗。重组子用载体中的T7和T3启动子序列为测序引物进行自动测序。再将鉴定过的重组质粒用脂质体法转化293细胞，用免疫印迹法和免疫组化法鉴定转化细胞中mage-3蛋白的表达。结果：正确构建了mage-3/pSMART2a重组质粒，并且在转化此质粒的293细胞中检测出了mage-3蛋白的表达。结论：此重组mage-3/pSMART2a质粒可以作为肿瘤特异的DNA疫苗，可进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及相关免疫学效应研究。     

小鼠肥大细胞瘤基因疫苗的免疫治疗作用研究

目的：探讨α－病毒RNA复制酶对基因疫苗的免疫学效应的加强作用，寻找更好的基因疫苗形式。方法：将小鼠肥大细胞瘤P815的肿瘤特异抗原PIA基因克隆到含SFV的RNA复制酶的真核表达载体pSMART2a中，以此作为肿瘤基因疫苗，观察该疫苗对P815种植瘤的防治作用、特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗体的生成情况。结果：该重组基因疫苗在体外有很好的表达，注射后CTL的最大杀伤率为60%，而普通载体疫苗形式pCI-neo/PIA则只有40%的杀伤活性；在观察期限内，前者的动物成瘤率和动物生存率分别为20%和40%。后者则分别为60%和20％。两种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生。结论：α－病毒RNA复制酶对基因疫苗的免疫学效应有加强作用。     

α-病毒载体在基因治疗中的作用

基因治疗是近10年来随着现代医学与分子生物学相结合而出现的，基因治疗的研究已迅速扩大到肿瘤、艾滋病、心血管病和神经系统疾病等。而且，基因载体(包括质粒、病毒和脂质体等)的研究也进展迅速，各种新型载体不断出现。近10年来，α-病毒的多个成员已经被作为表达载体，并被引入基因治疗领域，其中最常用的是森林病毒(Semliki forest virus，SFV)、     

美研究发现可助艾滋病病毒复制的基因

本刊讯近日,美国罗切斯特大学教授罗伯特·班巴拉等宣布其发现了帮助艾滋病病毒在人体内传播和复制的基因,这项成果将有望应用于开发治疗艾滋病的新药或疫苗。     

胃癌组织中黑色素瘤抗原基因-1,3基因的表达及其意义

目的 了解胃癌组织中黑色素瘤抗原基因(MAGE)-1、3基因的表达，并探讨其作为免疫治疗的靶抗原在胃癌中的应用价值。方法 采用RT—PCR法检测36例胃癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁“正常”黏膜中MAGE-1、3基因的表达情况，并以37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织和4株胃癌细胞株作为对照。结果 36例胃癌组织中，MAGE-1表达阳性率为72．22％(26／36例)，MAGE-3表达阳性率为69．44％(25／36例)，MAGE-1、3表达双阳性率为52．78％(19／36例)，MAGE-1、3任一基因表达阳性者32例，阳性率为88．89％(32／36例)。癌旁“正常”黏膜中MAGE-1、3基因表达阳性率分别为47．22％(17／36例)和44．44％(16／36例)，MAGE-1、3表达双阳性率为30．56％(11／36例)。37例慢性胃炎组织中，MAGE-1、3表达阳性率分别为29．73％(11／37例)和27．03％(10／37例)，MAGE-1、3表达双阳性率为8．11％(3／37例)。胃癌组织MAGE-1、3基因表达阳性率均高于癌旁“正常”黏膜组织和慢性胃炎患者。4株胃癌细胞株MAGE-1、3基因表达均为阳性。结论 基于MAGE-1、3基因在胃癌中的高表达率，可利用其作为靶分子进行免疫治疗，同时也可作为一种有临床价值的随访指标。     

人黑色素瘤相关抗原基因-12基因疫苗对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及体内抗体水平的影响

目的:研究人黑色素瘤相关抗原基因-12(MAGE-12)基因疫苗pEGFP-C3-MAGE-12对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及体内抗体水平的影响.方法:小鼠80只,随机分为4组,每组20只.疫苗组、空质粒组和生理盐水(NS)组接种Lewis肺癌瘤组织制备Lewis肺癌小鼠模型.接种癌组织前14 d、7 d、0 d,疫苗组按每次每只0.2 mL(75 ng/L)于右下肢内侧肌肉群内注射pEGFP-C3-MAGE-12;空质粒组和NS组每只每次注入pEGFP-C3空质粒或NS;空白对照组小鼠不做任何处理.每3 d观察并记录1次肿瘤大小.接种瘤组织后14 d每组取10只小鼠,ELISA法检测血清MAGE-12-Ab,余小鼠(每组10只)自然死亡,记录生存时间.结果:3组7 d成瘤率均为100%.空质粒组、NS组及疫苗组生存期分别为(27.0±0.3) d,(27.2±0.3) d和(28.9±0.6) d;肿瘤体积分别为(179.775±9.085) mm3,(173.172±9.085)mm3和(144.923±9.528)mm3;疫苗组血清MAGE-12-Ab水平为(711.16±174.78),其他3组未检测到MAGE-12-Ab;与空质粒组、NS组比较,疫苗组生存期短(P<0.05),肿瘤体积小(P<0.05),体内抗体水平高(P<0.05).结论:MAGE-12基因疫苗具有免疫治疗作用.     

腺相关病毒与人α1干扰素基因重组体的构建

目的 构建腺相关病毒载体(pWP8A)与人α1干扰素(hIFNα1)基因重组体。方法 用多聚酶链反应(PCR)方法扩增获得hIFNα1基因；以T-A克隆方法将PCR扩增hIFNα1基因亚克隆到PCR2，1质粒中，产生PCR2．1—hIFNα1；用EcoRI酶切PCR2．1—hIFNα1，后回收hIFNα1基因片断，将此片断连接到pWP8A的EcoRI位点上，构建重组体pWP8A—hIFNα1；pWP8A—hIFNα1转化JM109大肠杆菌扩增，hIFNα1基因经测序鉴定符合Genebank中hIFNα1序列，并用BanH I酶和Xbal I酶双酶切鉴定hIFNα1基因插入方向。结果 经MR扩增获得567bp hIFNα1基因；构建重组体pWP8A—hIFNα1，经测序证实pWP8A—hIFNα1中的hIFNα1与Genebank中hIFNα1序列相同，用BamH I酶和Xbal I酶双酶切鉴定hIFNα1基因插入方向正确的重组体pWP8A—hIFNα1。结论 成功构建腺相关病毒载体(pWP8A)与人α1干扰素(hIFNα1)基因的重组体。     

人乳头瘤病毒疫苗研究进展

HPV感染和宫颈癌的发生密切相关，HPV疫苗的研制对于预防和治疗HPV感染所导致的宫颈癌有着重要的意义。目前，HPV疫苗的研究主要集中于预防性疫苗和治疗性疫苗两个方面。本文就HPV疫苗的最新进展、几种类型疫苗的研究策略和改进方法等作一阐述。     

人乳头瘤病毒结构蛋白及其疫苗的研究进展

由人乳头瘤病毒(Human papillomaviruses，HPV)感染引起的疾病在全球有很高的发病率。已发现HPV有100多种型别，根据HPV DNA的检测和流行病学资料，分为高危型别和低危型别，高危型别主要为HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV45和HPV56等型，低危型别主要为：HPV6、HPV11型。低危型别HPV6、HPV11感染主要引起尖锐湿疣，而高危型别HPV16、HPV18感染与官颈癌发病密切相关。尖锐湿疣在我国发病率呈逐年上升，有些地区发病人数占全部性传播疾病(STDs)人数的20％左右，跃居STDs发病的第2位；宫颈癌为女性生殖道常见的恶性肿瘤，严重威胁我国育龄妇女的生命健康，目前，仍缺乏有效方法来预防和治疗HPV感染及其相关肿瘤如尖锐湿疣及宫颈癌。     

幽门螺杆菌基因工程疫苗的研究

目的：口服基因工程疫苗是研发幽门螺杆菌（Hp）疫苗唯一可行的途径。较为肯定的Hp保护性抗原为尿素酶B亚单位和Hp粘附素。大肠杆菌不耐热肠毒素突变体LTK63及其A和B亚单位是目前公认效果较好的粘膜免疫佐剂，霍乱弧菌肠毒素B亚单位适于注射免疫。Hp菌株感染的蒙古长爪沙鼠和SS1株感染的BaLb/C或C57BL/6小鼠是较为理想的动物模型。     

Immunity of Unloaded Dendritic Cells in Lung Melanoma of Mice

In order to investigate the immunity of unloaded dendritic cells(DCs) derived from murine bone marrow to preexisting lung melanoma metastases of mice,MO5 were intravenously in-jected to induce lung metastases in syngeneic C57BL/6 mice.Unloaded GM-CSF DCs,PBS and DCs SIINFEKEL were subcutaneously injected into the mice,which were divided as experimental group,negative control group and positive control group respectively.Monoclonal antibody was used to deplete NK or T cells separately.The immunity-inhibitory effects on the lung melanoma were ob-served and the corresponding effector cells were examined.It was found that in the experimental and positive groups,the regression was induced in metastatic nodules in the lungs of tumor-bearing mice,but abrogated by treatment with anti-asialo-GM1 but not anti-CD8.It was concluded that the unloaded DCs could suppress the lung melanoma metastases to some extent,which was mediated by NK cells,and could be used as a potent therapeutic agents for lung tumor.     

乙肝疫苗接种无、弱应答与遗传因素关系

从现场流行病学和实验研究两方面探讨乙肝疫苗接种无、弱应答是否与遗传因素有关。方法健康小学生６３４名接种３针血源性乙肝疫苗,共筛选出２９我、弱应答,同时选择３０名强应答作为对照,对无、弱应答和强应答一级亲属中符疫苗接种条件的对象接种３针乙肝疫苗,观察免疫反应。另外,从无、弱应答和强应答中选择部分对象检测了人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－Ａ,Ｂ,Ｃ,ＤＲ,ＤＱ座位等位基因。结果小学生无、弱应答率为     

有机锗GeM10对黑色素瘤细胞增殖及其与内皮细胞粘连的影响

目的 :探讨锗 Ge M1 0对黑色素瘤细胞增殖的作用 ,及其对高转移性黑色素瘤细胞与内皮细胞粘连的影响。方法 :用 3H- Td R掺入实验检测了 Ge M1 0对 A375黑色素瘤细胞增殖的影响 ;用细胞粘连抑制实验测定了 Ge M1 0对内皮细胞和 A375黑色素瘤细粘连的影响。结果 :Ge M1 0能抑制 A375黑色素瘤细胞 DNA合成 ,浓度为 1 80～ 30 0 μg/ml时抑制率最大 ,可达 73% ,作用时间 2 4 h各浓度 Ge M1 0抑制效果最强。Ge M1 0能部分阻断由L PS和 TNF刺激的内皮细胞和 A375的粘连 ,和对照组比较有显著性差异。结论 :Ge M1 0抗癌活性不仅表现在对肿瘤细胞的直接抑制增殖作用 ,而且可以抑制高转移性黑色素瘤细胞与内皮细胞粘连 ,从而抑制转移瘤形成     

恶性疟口服活菌苗的免疫原性及安全性的初步研究

在减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１中表达了人工合成的恶性疟杂合４５肽抗原基因，并在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及家兔中诱发出一定水平的特异性体液免疫及细胞免疫。在减毒菌中表达的融合抗原ＧＺ－Ａ可特异地识别兔抗ＧＺ－Ａ血清、鼠抗Ｐｆ血清及恶性疟患者血清，滴度分别为１：６４００、１：１０２４０及１：４。小鼠口服（ｐｏ）重组疫苗图ＳＬ３２６１（ｎＷＲＡ）后，细菌在肠道至少可寄生１月以上，且在体外仍然可以表达目的抗原。静脉注射（ｉｖ）活菌后首日可见菌血症。１０￣８ｃｆｕ量全身免疫（ｉｐ、ｉｖ）后可致小鼠死亡。ｉｐ、ｉｖ组脾脏肿大１～２倍，肝脏轻度肿大，而ｐｏ组则未见明显改变。清理切片显示肝脏轻度充血，汇管区有淋巴细胞聚集，枯否氏细胞轻度增生等；脾小体增生扩大，巨细胞明显增生等，上述改变以ｉｐ及ｉｖ组较为明显。结果说明，ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡ）所表达的恶性疟原虫杂合抗原可特异地被抗Ｐｆ抗体所识别，活菌苗口服后可在肠道较长久地寄生，且不引起明显的毒副作用。     

基于MOMP衣原体疫苗的研究进展

主要外膜蛋白(MOMP)是衣原体外膜复合物的主要成分,与衣原体的免疫原性、侵袭力及毒力密切相关,是衣原体的主要疫苗候选抗原。本文主要对MOMP及其相关疫苗研究进行综述,以望为靶向MOMP的新型或临床衣原体疫苗研发提供理论依据。     

668例接种基因乙肝疫苗免疫效果观察

我国是世界上的“乙肝”大国，现有HBsAg携带者1．2亿。用于预防乙型肝炎传播的血源性乙肝疫苗早已广泛应用于乙肝的预防接种，且免疫效果已得到充分肯定，注射三针后HBsAb阳转率一般为70％。80％。但因其要用人血清制备，其来源受到很大限制且存在生物制品安全问题，正逐渐被基因工程疫苗所取代。鉴于基因工程疫苗的实际应用效果的报道很少，     

人用精制狂犬疫苗临床使用不良反应观察

目的 了解人用精制狂犬疫苗临床使用不良反应发生情况。方法 对312例3岁以上全程5针注射精制狂犬疫苗的人群发生的不良反应进行调查。结果 体温升高、发红、头晕、疼痛、发痒百分率依次为0.96、1.60、0.96、1.28、2.24，以前4针多见。结论 人用精制狂犬疫苗临床使用不良反应少，安全、可靠。