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高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用[摘要]以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FCl、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析。结果发现这6种株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点。基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实具有很好的特异性。由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒性血凝素单抗可适用H5N1病毒的诊断…     

甲肝病毒单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的 :为甲肝研究和诊断提供大量高效价标准化抗体。方法 :用已培养的 NJ-3株甲肝病毒 (HAV)免疫 BALB/c小鼠 ,经细胞融合技术、IFA筛选和有限稀释克隆法。结果 :建立了 6株能稳定分泌抗 HAV-单克隆 (Mc Ab)的杂交瘤细胞。经鉴定 ,其上清和腹水的抗体效价分别为 0 .5× 10 3 ～ 1× 10 3 及 1× 10 3 ～ 2× 10 5。用免疫印迹法和间接 EL ISA分析 ,这 6株抗体分别能与 HAV的 3个抗原位点结合。结论 :成功的制备了抗 HVA的Mc Ab,在 HAAg检测中 ,简化了操作步骤     

抗CD28分子单克隆抗体的制备及其免疫学特性

目的制备抗人CD28单克隆抗体,对其免疫学特性进行分析。方法利用多肽技术合成的CD28抗原免疫BALb/c小鼠,应用细胞杂交技术,获得抗CD28的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行了分析。结果经过融合、亚克隆成功获得了9株抗人CD28的杂交瘤细胞株,均为IgG,4株为IgG2a,5株为IgG2b。利用竞争抑制实验分别对其中的5株进行了抗原位点测定,5株分别针对三个不同的抗原位点。结论此单抗细胞株的建立,对于深入研究CD28单抗对T淋巴细胞的作用机理有重要意义。     

抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

目的:制备抗-戊型肝炎病毒的单克隆抗体,并将其用于分析戊型肝炎病毒不同毒株结构蛋白的抗原表位。方法:采用来自墨西哥株(Mexicanstrain)的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Mex)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性克隆,并将获得的单克隆抗体与戊型肝炎病毒缅甸株(Burmastrain)和美国株(USAstrain)的重组蛋白(p166Bur、p166US)进行交叉反应测定。结果:最终获得4株能稳定分泌抗-p166Mex的杂交瘤细胞株,即D8G10、E5E12、D4A3、B7E6。其中D8G10,E5E12和B7E6细胞株的培养上清液,还能分别与p166Bur和p166US重组蛋白发生阳性反应。结论:利用已获得的抗-p166Mex单克隆抗体,初步确定3种不同的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Bur、p166US、p166Mex)含有一种共同的抗原表位。     

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的 制备抗恶性疟原虫EBA-175的单克隆抗体(McAb),为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法 以恶性疟原虫EBA-175(II区F2段)重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westernblot试验分析其特异性。结果 筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4A1、4C3、4H9,6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1,1株为IgG2a,6株McAb的培养上清ELISA效价为1:256~1:512,腹水效价为1:12800~1:25600,间接ELISA显示其中4株McAb1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合,而只有1F3、4A1、4H9在Westernblot试验中识别恶性疟原虫M_r约35000的虫源蛋白。结论 获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

乙型肝炎病毒前蛋白文献介绍

1.单克隆抗PreS2细胞系的建立鉴定及初步应用/夏孟琪(北京医大肝病研究所)等∥北京医科大学学报/北京医科大学-1987,(5)-275～298本文报道用聚合人血清白蛋白(PHSA)受体阳性的乙肝病毒(HBV)颗粒致敏的BALB/C鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)做融合,得到一株可抑制PHSA受体活性的单克隆抗体细胞株(2-E_2)。经鉴定确认为对HBV上PreS2抗原特异。免疫球蛋白类别属IgG1。现该细胞株已具备稳定、高滴度的抗体分泌能     

全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备与鉴定

目的:利用人源IgM转基因小鼠制备全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对其进行初步鉴定?方法:以灭活的狂犬病病毒CTN株作为抗原免疫人IgM转基因小鼠?采用杂交瘤技术结合酶联免疫吸附试验(ELISA)高通量交叉筛选技术(HTS)制备全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体?通过双抗体夹心ELISA鉴定单抗的人源性和抗体型,间接ELISA?斑点杂交(Dot Blot)实验及Western blot检测单抗的特异性,BiaCore X-100测定单抗结合抗原的亲和力?结果:建立了2株稳定分泌抗狂犬病病毒人源性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为9E3和9F2?双抗体夹心ELISA结果显示2株单抗均为人源性免疫球蛋白IgM型?间接ELISA?斑点杂交实验结果表明2株单抗均能特异性识别灭活的狂犬病病毒CTN株?Western blot结果显示2株单抗均能与狂犬病病毒糖蛋白特异性结合?2株单抗与狂犬病病毒CTN株抗原结合的亲和力分别为 2.62 × 10-10 mol/L?4.06 × 10-11 mol/L?结论:筛选制备了2株特异性?高亲和力的全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体?本研究为进一步筛选人源抗狂犬病病毒免疫预防性中和抗体及其免疫治疗的应用奠定了基础?     

抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性.方法 分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗).纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶.分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA.结果 获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株.用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50 μg/L的gp36.结论 为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗.     

分泌抗人A型、B型单克隆抗体细胞系的建立及初步应用

本文共得到分泌血型抗体的杂交瘤细胞6株,其中抗A 5株,抗B 1株。杂交瘤细胞系AN3/77、92、58、60、90(抗A)和AN1/4、25、45、40(抗B),经详细鉴定,其结果如下:(1)抗A 细胞系和抗B 细胞系在试管中传代3个月以上,稳定地分泌抗体,属鼠IgM。(2)小鼠腹腔接种后,腹水抗体效价为1:10000～1:20000(抗A)和1:320000～1:640000(抗B)。(3)吸附试验和阻断试验,证明抗A McAb 和抗B McAb 具有高度特异性。(4)随机抽样人血样品656份,用常规标准血清和本文所得两种单抗体,进行血型鉴定,结果二者完全相符。     

抗人肝癌细胞单克隆抗体的研制及鉴定

利用杂交瘤技术,以人肝癌细胞株HC_(108)免疫Balb/c小鼠,4周后取其脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经细胞抗原ELISA和间接酶桥法筛选,获得一株能稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体的杂交瘤株,其染色体众数为96～110个,DNA指数为3.0。此单抗为IgM型,轻链为k链。免疫组化证实此单抗与2例胚胎肝脏组织、胚胎结肠组织呈现较弱的阳性反应;除与3例宫颈癌细胞有很弱的着色反应外,与5例肝癌组织和肝癌细胞株均呈明确的阳性反应,而与其他肿瘤细胞,胚胎组织,正常成人肝脏、心脏、肾脏、肺脏、结肠、胰腺等均未见反应。琼脂糖免疫双扩散和单抗吸收试验证实此肿瘤抗原与甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(Ferritin)、癌糖蛋白(CA_(19-9))无免疫相关性。免疫酶电镜染色显示此肝癌相关抗原定位于细胞膜,Western Blot显示其分子量为38kD。是一株特异性良好,阳性反应率较高的抗人肝癌单克隆抗体。     

丹参和黄芪治疗气虚血瘀型心力衰竭的作用

本文报道91例气虚血瘀型心力衰竭(心衰)病人选用丹参和黄芪治疗作用。16例作气囊漂浮导管监测,发现黄芪明显增加心排出量、每搏量及心脏指数,而丹参无此作用,提示黄芪有正性肌力作用;30例给黄芪加党参,治疗后心功能分级及某些异常的血液流变学指标均有改善;44例先丹参,继之丹参加黄芪,治疗后心功能分级有明显改善,且能改善异常的血液流变学指标,明显抑制血小板聚集功能。提示丹参具有活血化瘀改善血液流变学及抑制血小板的聚集性,黄芪有补气强心改善心功能的作用。     

对“合格血”用固相放射免疫法复检乙型肝炎病毒感染标记的研究

为了评价现有供血员筛检方法的质量,1984～1985年对武汉市某医院血库供应的128份“合格血”,用固相放射免疫(SPRIA)法进行复检HBsAg、抗-HBs、抗-HBc。结果均阴性者21.88％(28/128),HBsAg或/和抗-HBc阳性者71.88％(92/128),其中HBsAg阳性10.94％(14/128)。抗-HBc阳性46.88％(60/128),HBsAg和抗-HBc双阳性为14.06％(18/128)。并对供血员筛检方法提出建议。     

乙型肝炎病毒免疫逃避株表面抗原决定簇编码区的序列分析

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物直接测序，在国内首次发现１例持续高滴度乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和抗一ＨＢｓ共存者携带的乙型肝炎病毒ＤＮＡ第５３２位碱基Ａ被Ｇ取代，推导其“ａ”决定簇中第１２６位苏氨酸被丙氨酸取代，提示该株“ａ”决定簇第一个结构环疏水性增加，由此可能导致其抗原性改变，而诱发免疫逃避株形成。     

“茵陈胆道汤”制剂对胆石症病人T管胆汁成石性影响的初步观察

在28例已行胆囊切除带T管引流的胆石症病人中,静脉滴注我院中药制剂“茵陈胆道汤”。发现,在胆酸丢失、胆汁成石指数增高、胆汁成石性增高的情况下,应用该制剂时,胆汁成石指数无明显变化;并且胆汁中总胆红素、非结合胆红素浓度及胆汁UCB/T Bil％值等均较注药前明显降低。提示该制剂具有阻止胆固醇过饱和之成石性胆汁生成和阻止胆色素性成石性胆汁的生成作用。     

乙型肝炎表面抗原亚型决定簇“a”单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本研究中用纯化乙型肝炎表面抗原(HBsAg)“adr”免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合。以ELISA和RIA法检测抗体,获得9孔抗-HBs阳性的杂交瘤,经过5次有限稀释,建立4株单克隆细胞。选其中一株SH_1D_9杂交瘤细胞进行体外连续传代,接种小鼠腹腔,抗-HBs滴度在组织培养上清液中为1∶10,000,小鼠腹水为1∶50,000。经特异性、稳定性鉴定,证明其抗-HBs对HBsAg具有持续的和良好的亲和性,正常人血清无交叉反应,经亚型及Ig亚类鉴定为抗-HBs“a”亚型决定簇,IgG型单克隆抗体,杂交瘤细胞染色体平均为104个。本文并对HBsAg免疫Balb/c小鼠采取的不同方案及建立单克隆抗体杂交瘤细胞株的实验方法加以讨论。     

泻心汤的抗菌作用研究

目的:研究中药泻心汤的抗菌效应.方法:以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌及绿脓杆菌为受试菌,采用倍比稀释法,观察泻心汤的最低抑菌浓度;采用血清药理学方法,观察大鼠灌服泻心汤12g/kg后15 min、4 h血清的抑菌效应.结果:泻心汤在体外对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为6.25、6.25和100mg/ml;而大鼠给药后含药血清仅具有较弱的抑菌作用.结论:泻心汤在体外具有一定抑菌效应,其含药血清抑菌作用较弱,有待进一步研究.     

ANALYSIS OF HBsAg FROM DIFFERENT SOURCES WITH 5 ANTI-A McAbs AGAINST DIFFERENT EPITOPES

Five anti-a monoclonal antibodies (McAbs) wereselected and directed to separate epitopes of gro'upa determinant on hepatitis B surface antigen (HBs.Ag).The method was set up to define the quantitativedifferencc of these epitopes on HBsAg identified byMcAbs with 12sl.labelled rabbit anti-mouse immunoglo-bulin antibody ('2'I.R.M.Ab). The difference ofepilope numbers on HBsAg was expressed as epitopedensity. Each of the 5 epitopes was of the same densityin 3 subtypes of HBsAg (adr, 5 samples; adw, 3; anday, 4). The average density of the 5 epitopes, iden-tified by McAbs, MHSA 11, 1H9 G11-D7, MHSA l,3CI-H7 and 288-E8, on the 12 HBsAg samples wasexpressed as 39+370, 27+270, 17+'l.T0 12+270 and6+170, respectively. The 3 epitope densities identified by MHSA l,MHSA 11 and lH9 G11-D7 0n yeast derived recombinant HBsAg were statistically different from thoseon plasm derived HBsAg and cell derived recom-binant HBsAg (P<0.05). There were some changesof group a determinant between them.     

应用捕捉法ELISA检测乙肝患者血清中IgG类HBsAg特异性免疫复合物

本文建立了一种检测HBsAg/IgC—CIC(Circulating ImmuneComplex)捕捉法ELISA(Enzyme Linked Immunosorbert Assays)。该法特异性强,敏感性高,重复性好,避免了固相抗HBs双抗体ELISA受血清中游离HBsAg的抑制作用而影响HBsAg/IgG—CIC检出的缺点。并行检测HBsAg/IgG—CIC和血清C_3发现,乙肝患者血清中HBsAg/IgG—CIC检出率血清C_3下降显著高于非下降组,提示HBsAg/IgG—CIC可能是导致乙肝患者血清C_3下降的又一重要因素。     

高位隐睾应用“长袢输精管”睾丸固定术12例报告

对于高位隐睾不能Ⅰ期手术降入阴囊者采用了“长袢输精管”固定术,共治疗12例17侧隐睾,16侧效果满意。随访中对睾丸部位、大小、弹性作了估价。认为手术成功的关键在于高位切断精索、保留输精管血管及睾丸引带侧支。     

高等医学院校普通话水平测试组织方法研究

该文对山西大同大学医学院开展普通话水平测试工作的情况进行了介绍。重点介绍了开展此项工作的程序和需要事先进行的具体安排。该文对拟开展普通话水平测试工作的其他医学院校有一定指导意义。