针刺对备用根猫背根节神经元IGF-Ⅰ表达的影响

目的观察胰岛素样生长因子-I（IGF—I）在正常猫、部分去背根猫及针刺部分去背根猫的L6手术侧背根节（DRG）表达的时空变化，以了解IGF—I与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法25只成年健康雄猫随机分为5组：即正常组、备用根术后7d组与14d组（动物行单侧部分去背根手术，即切除一侧L1～L5、L7～S2背根节，保留L6为备用根）、针刺备用根术后7d组与14d组（动物行单侧部分去背根术后针刺L6脊神经外周支配区内的两组穴位）。动物于术后7d、14d分别处死，取各组（手术侧）L。背根节，-20℃恒冷箱切片，片厚20μm，用兔抗IGF—I（1：200）抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节IGF—I阳性神经元的分布、含量及时空变化。结果针刺备用根7d组，DRGIGF—I阳性神经元数较术后7d组明显增加（P〈0．05），但仍低于正常水平；针刺14d，DRG阳性神经元比术后14d亦增多（P〈0．01），且恢复至正常水平。与针刺7d组比较，DRGIGF—I阳性神经元在针刺14d时明显增多（P〈0．05）。结论针刺可增加针刺侧DRG内IGF—I阳性中小神经元数。提示针刺后IGF—I在背根节的表达变化可能与针刺促进脊髓可塑性有关。     

针刺对备用背根节神经元NP-1表达的影响

目的探讨针刺对备用背根节（dorsal root ganglion,DRG）NP-1表达的影响。方法将25只成年雄猫分为5组,即假手术组、单侧备用背根手术7d组、单侧备用背根手术并针刺7d组、单侧备用背根手术14d组和单侧备用背根手术并针刺14d组。通过免疫组化ABC法,观察各组备用DRG中NP-1的免疫反应神经元数目。结果在假手术组,NP-1阳性神经元主要定位于部分中小神经元及少数大神经元胞浆中;部分背根切断7d后NP-1阳性中小神经元数较假手术组明显减少（P〈0．05）,NP-1阳性大神经元数与假手术组者差异无统计学意义（P〉0．05）;而术后14d,NP-1阳性中小神经元数较7d组明显增多（P〈0．05）,且回升至假手术组水平,NP-1阳性大神经元数与手术7d组差异无统计学意义（P〉0．05）;针刺7d组较手术7d组NP-1阳性中小神经元数增多（P〈0．05）,但尚未回升至假手术组水平,NP—1阳性大神经元数减少（P〈0．05）;针刺14d组各类阳性神经元数目与手术14d组及针刺7d组差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论针刺可上调NP-1在备用DRG中小神经元的表达。     

针刺对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的 观察NT-4在针刺部分去背根猫的L6背根节（手术侧和非手术侧）和脊髓表达的时空变化,以了解NT-4与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法 25只成年健康雄猫随机分为5组：即正常组,备用根术（动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根）后7d组与14d组、针刺备用根术（动物行单侧部分去背根术后针刺）后7d组与14d组。动物处死后,取L6背根节及L3、L5、L6节段脊髓,用兔抗NT-4（1：200）抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层（L3、L5、L6）和背核（L3）中NT-4的分布及含量。结果 针刺备用根7d组,针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7d组减少（P＜0．05）,较相应非针刺侧多（P＜0．05）;针刺14d组,针刺侧DRG阳性神经元数比针刺7d组术后14d和同组非针刺侧增高（P＜0．05）,且恢复至正常水平。针刺7d,针刺侧脊髓L6Ⅱ板层NT-4阳性神经元数较术后7d组及正常组增加（P＜0．01）。针刺14d时,L5、L6Ⅱ板层阳性神经元数较正常组及术后14d组相应节段均增加（P＜0．01）。针刺后L3背核NT-4阳性神经元数无明显变化（P＞0．05）。L5Ⅱ板层NT-4阳性神经元在针刺后14d时比针刺后7d时增多（P＜0．05）。结论 以上结果提示NT-4与针刺促进脊髓可塑性有关;针刺备用背根对非针刺侧DRG NT-4的表达亦有影响,提示非针刺侧背根节NT-4亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性。     

部分背根切断对备用背根节GDNF、FGF-2表达的影响

目的 探讨部分背根切断后不同时相备用背根节(DRG)中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、成纤维细胞神经生长因子(FGF-2)的表达变化。方法 15只猫分正常组、单侧部分背根切断7d及14d组,每组5只。分别于术后7d、14d处死动物,取正常组一侧、模型组手术侧L6DRG,用兔抗GDNF、FGF-2抗体行免疫组化ABC法染色,计数DRG内两因子阳性总细胞及阳性大、中小细胞的数量。结果 GDNF在正常猫DRG大、中小细胞均有分布;去部分背根后,两时相备用DRG GDNF阳性神经元总数均有下降且呈进行性递减。DRG阳性中小细胞数亦为术后两时相进行性下降,DRG阳性大神经元术后两时相均较正常组显著减少,但术后14d与术后7d组无显著性差异。FGF-2在脊髓DRG大、中小细胞亦有分布;去部分背根后7d,FGF-2阳性神经元总数下降,14d时又恢复至正常,中小细胞亦表现为先减少后上升的趋势,而大细胞则术后两时相与正常组间无显著差异。结论 去部分背根手术可致备用DRG中GDNF阳性神经元总数进行性下降,FGF-2表现为术后7d下降,14d时恢复。     

部分背根切断及针刺促进备用背根节c-jun的表达

目的 探讨部分背根切断术及针刺对背根节（DRG）c-jun表达的影响。方法 针成年雄猫15只，分假手术组，手术组和术后针刺组，每组5只。手术组动物行单侧备用根术，术后针刺组动物经单侧备用根术后，针刺后肢手术侧L6脊神经分布区中的两组穴位，足三里和悬中：伏兔和三阴交，每天一次，每次30min，连续针刺7d，通过免疫组化ABC法，用c-jun特异抗体（1:1000,Santa Cruz)对切片进行染色，DAB呈色。观察并测量DRG中c-jun阳性神经元的分布，数量及反应强度。结果 在假手术组DRG中，只有部分神经元染色。手术组c-jun阳性神经元的数值较假手术组显著增多（P＜0．05），其免疫反应水平较假手术组，显著上升（P＜0．05）。术后针刺组较手术组的c-jun免疫反应强度增强，而阳性神经元的数量没有显著差异。结论 部分背根切断后备用DRG神经元中c-jun的表达增加，针刺促使c-jun的表达进一步上调。     

针刺对备用根猫背根节神经元IGF-表达的影响

目的观察胰岛素样生长因子-(IGF-)在正常猫、部分去背根猫及针刺部分去背根猫的L6手术侧背根节(DRG)表达的时空变化,以了解IGF-与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法25只成年健康雄猫随机分为5组:即正常组、备用根术后7d组与14d组(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1~L5、L7~S2背根节,保留L6为备用根)、针刺备用根术后7d组与14d组(动物行单侧部分去背根术后针刺L6脊神经外周支配区内的两组穴位)。动物于术后7d、14d分别处死,取各组(手术侧)L6背根节,-20℃恒冷箱切片,片厚20μm,用兔抗IGF-(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节IGF-阳性神经元的分布、含量及时空变化。结果针刺备用根7d组,DRGIGF-阳性神经元数较术后7d组明显增加(P<0.05),但仍低于正常水平;针刺14d,DRG阳性神经元比术后14d亦增多(P<0.01),且恢复至正常水平。与针刺7d组比较,DRGIGF-阳性神经元在针刺14d时明显增多(P<0.05)。结论针刺可增加针刺侧DRG内IGF-阳性中小神经元数。提示针刺后IGF-在背根节的表达变化可能与针刺促进脊髓可塑性有关。     

针刺对备用根猫背根节神经元IGF-Ⅰ表达的影响

目的观察胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在正常猫、部分去背根猫及针刺部分去背根猫的L6手术侧背根节(DRG)表达的时空变化,以了解IGF-Ⅰ与针刺促进脊髓可塑性的关系.方法 25只成年健康雄猫随机分为5组:即正常组、备用根术后7 d组与14 d组(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1～L5、L7～S2背根节,保留L6为备用根)、针刺备用根术后7 d组与14 d组(动物行单侧部分去背根术后针刺L6脊神经外周支配区内的两组穴位).动物于术后7 d、14 d分别处死,取各组(手术侧)L6背根节,-20 ℃恒冷箱切片,片厚20 μm,用兔抗IGF-Ⅰ(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色.观察、计数并比较各组背根节IGF-Ⅰ阳性神经元的分布、含量及时空变化.结果针刺备用根7 d组,DRG IGF-Ⅰ阳性神经元数较术后7 d组明显增加( P <0.05),但仍低于正常水平;针刺14 d,DRG阳性神经元比术后14 d亦增多( P <0.01),且恢复至正常水平.与针刺7 d组比较,DRG IGF-Ⅰ阳性神经元在针刺14 d时明显增多( P <0.05).结论针刺可增加针刺侧DRG内IGF-Ⅰ阳性中小神经元数.提示针刺后IGF-Ⅰ在背根节的表达变化可能与针刺促进脊髓可塑性有关.     

部分背根神经切断对脊髓Ⅱ板层GDNF表达的影响

目的：为探讨胶质源性神经营养因子（GDNF）与脊髓Ⅱ板层可塑性的关系。方法：将成年雄猫5只行单侧部分背根切断术（切除一侧的L1-L5，L7-S2DRG，保留L6DRG为备用根）。术后动物存活10d，取L3脊髓制作20цm厚冰冻切片。用GDNF抗体（1：1500）按常规ABC法染色，观察GDNF样免疫反应在脊髓的分布，计数Ⅱ板层GDNF阳性神经膨体密度。测定Ⅱ板层GDNF的平均灰度值以间接反映其相对含量。结果：正常侧，GDNF的免疫阳性反应物主要分布在脊髓灰质神经元，胞浆染色，Ⅱ板层亦见少量GDNF阳性神经膨体，白质胶质细胞亦有GDNF阳性反应，部分去背根后10d，L3平面手术侧Ⅱ板层GDNF含量及神经膨体密度均明显较非手术侧减少。结论：部分背根切断后，手术侧Ⅱ板层GDNF的含量减少提示GDNF不仅与脊髓的生理功能有关，且可能在脊髓Ⅱ板层可塑性中发挥作用。     

部分背根切断对备用背根节trkC表达的影响

为探讨去部份背根（切除一侧L1－L5, L7－S2背根节,保留L6背根为备用根）猫备用L6背根节（DRG）trkC表达的变化,用特异的trkC兔抗血清以免疫组织化学方法染片,观察trkC在DRG的分布。计数正常组一侧,术后3天及10天组手术侧L6 DRG大、小神经元trkC的阳性细胞数,结果用q检验进行统计分析。结果：trkC的免疫阳性反应（trkC－IR）主要分布于DRG的大细胞及少数小神经元胞浆内。部分去背根后3天, L6 DRG大、小 trkC－IR阳性神经元数与正常组者比较无显著变化（P＞0.05）。但10天组者,trkC阳性大神经元的数量明显减少,而小神经元数则明显增多（P＜0.05）,表明部分背根切断使备用DRG trkC的表达在大神经元减少,而小神经元则增加。以上提示,备用DRG trkC的表达变化可能与脊髓可塑性有关系。     

部分背根切断对备用背根节神经元Bax、Bcl-2及Caspase-3表达的影响

目的　研究部分去背根对备用背根节 (DRG)神经元 Bax、Bcl- 2、Caspase- 3表达的影响。方法　制作单侧备用背根模型 ,3d、7d和 14 d后取备用背根节分别用兔抗 Bax、Bcl- 2及 Caspase- 3行免疫组化 ABC法染色 ,同时另设一正常对照组。分别计数单位面积内各组大、中小阳性神经元的数量。结果　正常组 Bax、Bcl- 2、Caspase-3阳性反应物主要分布于背根节的中小神经元和少数大神经元。术后 3d,Bax总阳性神经元数较正常组明显增加(P<0 .0 5 ) ,至术后 14 d Bax总阳性神经元数下降并恢复到正常水平。各时间段 Bcl- 2总阳性神经元数无显著性差异。3d组 Caspase- 3总阳性神经元数与正常组比较显著增加 (P<0 .0 5 ) ;7d组、14 d组与 3d组无显著差异。 Bax、Bcl- 2和 Caspase- 3阳性大神经元数在各时间段均无显著性差异 ,阳性中小神经元数的变化规律与总阳性神经元数的变化规律相同。结论　部分去背根主要对备用 DRG中小神经元 Bax、Bcl- 2、Caspase- 3表达有影响 ,三因子表达高峰可能在术后 3～ 7d。     

针刺对备用背根节神经元TrkC表达的影响

目的：探讨针刺对备用背根节（DRG）TrkC表达的影响。方法：将成年雄猫分为三组，即假手术组、单侧部分背根切除术组、单侧部分背根切除术并针刺组。通过免疫组化ABC法，观察各组L6DRG中TrkC免疫反应（TrkC-IR)神经元数量。结果：在假手术组TrkC-IR主要定位于L6DRG的大神经元及少数中小神经元胞浆内：部分背根切断后，TrkC-IR大神经元数量明显减少，而中小神经元数量则明显增多（P＜0．05）；针刺后，TrkC-IR大神经元数量较手术组又明显增多，且反应强度明显增加（P＜0．05），而对中小神经元TrkC阳性细胞数无明显影响。结论：针刺促进TrkC在大神经元的表达上调，提示TrkC可能与脊髓可塑性有关。     

部分背根切断对备用背根节神经元CNTF、PDGF表达的影响

目的　研究部分去背根对备用背根节神经元睫状神经营养因子 (CNTF)和血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。方法　制作猫备用背根模型 ,分别在 3d、7d及 14 d时取备用背根节用 CNTF抗血清、PDGF抗血清行免疫组织化学 ABC法染色。分别计数各组阳性神经元总数以及大、中小阳性神经元的数量。结果　两因子在备用背根节的大、中小神经元均有表达。 CNTF阳性神经元总数及中小阳性神经元数均在 3d时明显减少 (P<0 .0 5 ) ,7d、14 d时与正常比较无差异 ,大阳性神经元在各个时间段与正常相比无差异。PDGF阳性神经元总数及中小阳性神经元数在 3d、7d时均较正常显著减少 (P<0 .0 5 ) ,14 d时与正常无差异 ,大阳性神经元数各个时间段均无差异。结论　部分背根切断对备用背根节内不同神经元表达 CNTF、PDGF有不同的影响。     

部分去背根促进神经营养因子在初级感觉神经元顺行转运的研究

目的探讨部分去背根是否促进BDNF、NT-3和GDNF在初级感觉神经元顺行转运。方法将5只成年猫行单侧部分背根切断术,切除一侧的L1～L5,L7～S2背根神经节(DRG),保留同侧L6DRG为备用根,在L6背根距DRG1cm处捆绑双侧背根。术后3d取两侧L6背根制作20μm厚冰冻切片,分别用BDNF、NT-3、GDNF抗血清按免疫组织化学ABC法染色。观察实验侧和对照侧捆绑背根部位的近DRG端和近脊髓端各因子的免疫反应强度。结果对照侧捆绑处两端NT-3、GDNF的免疫反应强度均为弱阳性反应,BDNF捆绑处近DRG端的免疫反应( )较近脊髓端者强( )。实验侧捆绑处近DRG端。BDNF、NT-3和GDNF的免疫反应( )较捆绑处近脊髓端强,且较对照组近DRG强。结论部分去背根动物背根近DRG端BDNF、NT-3和GDNF的免疫反应强度增加可能提示部分去背根可促进BDNF、NT-3、GDNF从备用背根节神经元顺行转运进入脊髓。     

部分去背根猫Sema3A及其受体NP-1在脊髓和背根节的表达

目的研究部分去背根对神经生长抑制因子Sema3A在脊髓及其受体NP-1在备用背根节内表达的影响。方法建立猫的单侧备用背根模型,分别在术后7d、14d取L3、L5、L6脊髓节段及手术侧L6背根节进行免疫组织化学ABC法染色,同时设置正常对照组。脊髓背角内检测Sema3A免疫阳性产物的平均光密度值(OD值),背根节内计数NP-1阳性中小神经元数。结果在L3脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.25±0.14)、14d(0.27±0.09)较正常对照组(0.37±0.87)减弱(P<0.05);在L5脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.26±0.11)较正常组减弱(P<0.05),术后14d(0.33±0.09)时有所恢复;L6脊髓节段各组Sema3A的表达无明显变化。背根节内,术后7dNP-1阳性中小神经元数(30.85±10.26)较正常组(45.06±12.47)减少(P<0.05),14d时阳性中小神经元数(40.73±12.25)较7d时有所增加(P<0.05)。结论脊髓部分去背根后,Sema3A及其受体NP-1表达的时空变化可能与脊髓损伤后可塑性有关。     

The expression of trkC in spared dorsal root ganglion following unilateral dorsal root rhizotomy]

This study sought to explore the expression of trkC in spared dorsal root ganglion(DRG) following unilateral dorsal root rhizotomy. 15 cats were divided into three groups: the intact group, the 3-day and 10-day groups after operation (unilaterral L1-L5 DRG and L7-S2 DRG were sectioned, but L6 DRG was spared). The animals were sacrificed on the 3rd day and 10th day after operation, respectively. The L6 DRG from the three groups were taken and cut into frozen sections (20 microns). The sections were stained using specific antiserum for trkC by the immunohistochemical ABC method. The numbers of large sized neurons (> 57 microns) and small sized neurons (< 42 microns) for trkC-IR were counted respectively. The results showed that the number of positive large sized neurons for trkC of the 10-day group after operation decreased significantly than that of the intact group and the 3-day group after operation, while the number of positive small sized neurons for trkC of the 10-day group increased apparently than that of the intact group and the 3-day group after operation (P < 0.05). This experiment demonstrated that unilateral partial dorsal root rhizotomy could change the expression of trkC might in large neurons and small sized neurons, and the results suggested that trkC might involve in the spinal cord plasticity following partial dorsal root rhizotomy.