人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中Kir2．1通道的表达

OBJECTIVE: Detected in non-transformed bone marrow-derived macrophages (BMDM) and identified as one of the key channels in modulating macrophage proliferation, activation and apoptosis, Kir2.1 channel is also characterized to play a crucial role in cell differentiation. The purpose of this study was to investigate the expression of Kir2.1 channel mRNA and protein during human monocyte-derived macrophage differentiation into foam cells. METHODS: Human peripheral blood monocytes were isolated from healthy male volunteers by density gradient centrifugation and then by adherence method. The macrophages identified as a homogeneous population of adherent cells were obtained after 5 days of culture. Expression of Kir2.1 channel during human macrophage differentiation into foam cells was investigated by RT-PCR, Western blotting and immunocytochemistry, respectively. RESULTS: After incubation of the macrophages with 30 mg/L OxLDL at 37 degrees C for 60 h, the cells were obviously enlarged in size and numerous red lipid granules observed under optical microscope. The cellular contents of the total cholesterol (TC), free cholesterol (FC) and cholesterol ester (CE) were markedly increased from 54.79+/-28.304 mg/g, 47.968+/-26.787 mg/g and 6.822+/-3.437 mg/g to 229.775+/-57.453 mg/g, 96.241+/-24.003 mg/g and 133.535+/-36.292 mg/g, respectively; the CE/TC ratio rose from (14.437+/-6.781)% to (57.946+/-3.507)% (n=7, P<0.05), suggesting the phenotype of foam cells. However, there was no significant difference in the relative expression of Kir2.1 channel mRNA between the macrophages and foam cells [(59.074+/-10.566)% vs (46.98+/-12.527)%, n=5, P>0.05], nor was there significant difference in the relative expression of Kir2.1 channel protein between them [(60.527+/-18.621)% vs (50.243+/-11.583)%, n=6, P>0.05]. CONCLUSION: Incubation of human monocyte-derived macrophages with 30 mg/L OxLDL for 60 h induces the differentiation of the cells into foam cells, but the expression of Kir2.1 channel does not change obviously.     

人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中MaxiK通道α-亚单位的表达

目的研究人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中MaxiK通道α-亚单位的表达.方法采用密度梯度离心法从男性健康志愿者外周血中分离单核细胞,经培养后分化为巨噬细胞,并通过加氧化型低密度脂蛋白(OxLDL),建立人巨噬细胞源性泡沫细胞模型,采用RT-PCR、蛋白质印迹及免疫细胞化学方法研究MaxiK 通道α-亚单位的表达.结果巨噬细胞同30 mg/L OxLDL孵育60 h后,细胞内总胆固醇(TC),游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)显著增加,并且CE/TC从(14.437±6.781)%提高到(57.946±3.507)%.同时,MaxiK通道α-亚单位表达被下调,但同巨噬细胞相比差异无统计学意义(P>0.05).结论人单核细胞源性巨噬细胞同30 mg/L OxLDL孵育60 h后可分化为泡沫细胞,但MaxiK 通道α-亚单位的表达无明显改变.     

阻断Kv1.3和Kir2.1抑制人巨噬细胞源性泡沫细胞分化

目的:研究泡沫细胞分化过程中离子通道Kv1.3和Kir2.1的表达及作用。方法:用30mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育巨噬细胞60h建立泡沫细胞模型。采用免疫细胞化学、RT-PCR和Western印迹检测人单核细胞源性巨噬细胞和泡沫细胞上Kv1.3和Kir2.1的表达。观察Kv1.3和Kir2.1特异性阻断剂rMargatoxin和BaCl2对巨噬细胞胆固醇代谢的影响。结果:ox-LDL(30mg/L)孵育巨噬细胞60h后,细胞内总胆固醇(TC),游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)显著增加,CE/TC从(14.4±6.8)%提高到(57.9±3.5)%(P<0.05);但Kv1.3和Kir2.1的表达水平在巨噬细胞组和泡沫细胞组无明显区别(P>0.05)。Kv1.3和Kir2.1分别被rMargatoxin(0.1,10nmol/L)和BaCl2(75,125μmol/L)阻断后,细胞内TC和CE水平显著降低,CE/TC低于50%(P<0.05)。结论:Kv1.3和Kir2.1对泡沫细胞的分化均起关键作用,特异性阻断后能够抑制人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化。     

双氯芬酸对人巨噬细胞钾通道Kv1.3、Kir2.1表达的抑制作用及其对膜电位和泡沫细胞形成的影响(英文)

目的分研究双氯芬酸对人巨噬细胞电压依赖性钾通道Kv1.3、内向整流钾通道Kir2.1表达的影响及意义。方法以健康人外周血单核细胞源性巨噬细胞为对象,采用Real-time RT-PCR及Western blot技术研究双氯芬酸对Kv1.3和Kir2.1表达的影响;电压敏感染料膜电位标测技术分析膜电位的变化,并用酶荧光化学法检测摄取氧化修饰低密度脂蛋白(OxLDL)的巨噬细胞内胆固醇酯(CE)的构成比率。结果双氯芬酸(1.5和15μmol/L)抑制巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1的表达。同对照组相比,Kv1.3mRNA下降分别超过80%和90%(P<0.05),Kir2.1 mRNA下降分别超过20%和30%(P>0.05);两种钾通道蛋白水平的下降均分别超过10%和60%,且存在明显的剂量依赖性(P<0.05)。同时,双氯芬酸可剂量依赖性减弱巨噬细胞表面的荧光强度,使膜电位分别下降约28%和54%(P<0.05)。巨噬细胞同30 mg/L OxLDL孵育60 h后,细胞体积明显增大,且有许多红色的脂质颗粒沉积于细胞质内,CE/TC的百分比超过50%。1.5和15μmol/L双氯芬酸分别使摄取OxLDL的巨噬细胞内CE的百分比显著减少到(23.624±3.34)%和(13.601±2.916)%,但缺乏明显的量效关系(P>0.05)。结论双氯芬酸显著下调人巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1的表达,降低细胞膜电位,并抑制泡沫细胞形成。     

吉非贝齐对人巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1表达的差别调节作用及其对膜电位的影响

目的:探讨人巨噬细胞发育过程中Kv1.3、Kir2.1通道的表达和吉非贝齐的调节作用,观察其对膜电位的影响,为动脉粥样硬化（AS）相关性疾病治疗提供电生理学依据。方法：健康人外周血单核细胞源性巨噬细胞随机分为对照5 d组（C 5d）、对照7.5 d组（C 7.5d）和吉非贝齐组（G）,吉非贝齐的终浓度为400 μmol•L^-1;采用Real time RT-PCR及Western blotting技术检测Kv1.3和Kir2.1通道的表达,电压敏感染料膜电位标测技术分析膜电位的变化。结果：与C 5d组比较,C 7.5d组Kv1.3 mRNA/蛋白水平从（1.064±0.275）/（0.227±0.018）升高至（3.067±0.824）/（0.409±0.022）（P<0.05）,但Kir2.1 mRNA/蛋白水平却从（1.024±0.166）/（0.204±0.018）降低至（0.399±0.133）/（0.042±0.008）（P<0.05）;与C 7.5d组比较,吉非贝齐组Kv1.3 mRNA/蛋白水平下降至（1.137±0.067）/（0.143±0.023）（P<0.01）,而Kir2.1 mRNA/蛋白水平却升高至（1.35±0.087）/（0.202±0.033）（P<0.01）;吉非贝齐显著消弱C 5d和C 7.5d组巨噬细胞表面的荧光强度,使其膜电位从（1.000±0.026）分别下降至（0.833±0.046）和（0.481±0.053）（P<0.05）。结论：吉非贝齐差别调节人单核细胞源性巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1通道的表达,并降低巨噬细胞膜电位。     

脂联素对巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 通过研究脂联素对细胞内胆固醇的影响,探讨其抗动脉粥样硬化作用的可能机制.方法 以人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1细胞株)来源的泡沫细胞模型为研究对象,用不同浓度的脂联素(1 mg/L,5 mg/L和10 mg/L)进行体外干预.采用油红O观察泡沫细胞形成,用胆固醇氧化酶法检测细胞内胆固醇含量的变化,用荧光显微镜观察巨噬细胞对Dil标记的氧化低密度脂蛋白(Dil-Ox-LDL)的摄取率.结果 脂联素(1 mg/L,5 mg/L和10 mg/L)干预对巨噬细胞内总胆固醇(TC)无显著影响,却能促进胆固醇酯(CE)转化为游离胆固醇(FC),CE/TC比值明显降低(P<0.05);同时观察到脂联素(10 mg/L)干预后可抑制巨噬细胞对Dil-Ox-LDL的摄取.结论 脂联素能减少巨噬细胞对Ox-LDL的摄取和促进巨噬细胞内胆固醇酯的水解,这可能是脂联素抑制胆固醇沉着从而发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一.     

胆固醇流出对氧化性低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡的影响

目的探讨胆固醇流出对氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡的影响。方法采用高效液相分析法检测细胞内胆固醇含量;用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果用ox-LDL处理RAW264.7细胞48h后,细胞内胆固醇明显增加,同时细胞的凋亡率也随之明显增加;而用胆固醇流出刺激物高密度脂蛋白3和β-环糊精处理细胞后,细胞内胆固醇流出显著增加,细胞内总胆固醇明显减少,细胞凋亡率也下降明显。而用胆固醇流出阻断物BFA后,细胞内胆固醇流出明显下降,高密度脂蛋白对细胞的保护作用被明显的削弱。结论促细胞内胆固醇流出能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞的凋亡。     

人胚胎干细胞源性表皮样干细胞分化潜能

【目的】探讨人胚胎干细胞源性表皮样干细胞的分化潜能，为研究其分化的调控机制及寻找新的人皮肤组织工程种子细胞奠定基础。【方法】将人胚胎干细胞与人羊膜共培养4d，定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆，用胰酶消化后移植裸鼠皮下20d、30d及50d。对移植后细胞的分化情况进行了形态学和免疫组织化学观察分析。【结果】人胚胎干细胞源性表皮样干细胞在裸鼠皮下20～30d后，细胞分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状或泡状结构，它们可分别呈CEA和CK18阳性。种植50d后，除上述结构外，可见角化复层扁平上皮、毛囊样、汗腺样及皮脂腺样等结构。【结论】研究结果提示人胚胎干细胞源性表皮样干细胞具有分化为角化复层扁平上皮及毛囊样、汗腺样和皮脂腺样等结构的潜能。     

巨噬细胞源性与肌源性泡沫细胞的不同特性研究

目的：动脉粥样硬化损伤中的泡沫细胞来源于巨噬细胞和平滑肌细胞,本实验在离体细胞培养的基础上探讨了两种来源泡沫细胞的不同特性。方法与结果：选择Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠腹膜巨噬细胞与猪主动脉平滑肌细胞,在氧化低密度脂蛋白（Ｏｘｉｄｉｚｅｄ　ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ,ＯＬＤＬ）环境中孵育一定时间后,可形成特征性的泡沫样细胞。其中,巨噬细胞源性泡沫样细胞的形成环境为 １０ ｍｇ·Ｌ ＯＬＤＬ,作用时间为 ９６ ｈ,细胞内总胆固醇含量为 ７７．６±８．３ｍｇ·ｇ,胆固醇酯在总胆固醇中的构成比为５３.１％ ,胆固醇含量受消斑肽影响不大,第８ｄ开始大量死亡;而肌源性泡沫样细胞则不同,形成环境为 １５ ｍｇ·ＬＯＬＤＬ,作用时间为 ７２ ｈ,总胆固醇含量为 １８７．３±９．２ ｍｇ·ｇ,胆固醇酯构成比为 ６４．１％,胆回醇含量受消斑肽影响较大,第 ６ ｄ开始大量死亡。结论：两种来源的泡沫细胞在产生环境、形成速度、胆固醇含量、生存时间和逆转性等方面可能存在着一定的差异。     

THP1单核细胞分化过程中MMP9表达量的变化

目的研究单核细胞在向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因和蛋白表达的变化。方法体外诱导人单核细胞系(THP-1)细胞株分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应和Western blotting分别检测单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-9基因和蛋白表达的变化。结果THP-1单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-9 mRNA表达量分别增加了2.03倍和3.36倍(P<0.05,P<0.01);蛋白表达分别增加了5.86倍和3.68倍(P<0.01,P<0.05)。巨噬细胞和泡沫细胞中的MMP-9 mRNA水平无明显差异(P>0.05),但泡沫细胞中蛋白表达量较巨噬细胞有显著减少(P<0.05)。结论经体外诱导分化成的巨噬细胞和泡沫细胞中MMP-9 mRNA、蛋白水平与单核细胞比较呈显著增加,但单核细胞分化为泡沫细胞后其蛋白表达量呈显著下降。     

THP1单核细胞分化过程中MMP9表达量的变化

目的 研究单核细胞在向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9(MMP 9)基因和蛋白表达的变化.方法 体外诱导人单核细胞系(THP 1)细胞株分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应和Western blotting分别检测单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP 9基因和蛋白表达的变化.结果 THP 1单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP 9 mRNA表达量分别增加了2.03倍和3.36倍(P<0.05,P<0.01);蛋白表达分别增加了5.86倍和3.68倍(P<0.01,P<0.05).巨噬细胞和泡沫细胞中的MMP 9 mRNA水平无明显差异(P>0.05),但泡沫细胞中蛋白表达量较巨噬细胞有显著减少(P<0.05).结论 经体外诱导分化成的巨噬细胞和泡沫细胞中MMP 9 mRNA、蛋白水平与单核细胞比较呈显著增加,但单核细胞分化为泡沫细胞后其蛋白表达量呈显著下降.     

人骨髓间质干细胞向脂肪细胞诱导分化过程中端粒酶活性的变化

目的观察体外培养人骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成脂分化过程中端粒酶活性的变化规律,并探讨其可能的机制。方法通过贴壁培养法从人骨髓中分离MSCs,利用造血干细胞相关表面抗体对MSCs进行表型鉴定,利用相应诱导分化剂,诱导MSCs向成骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞分化,分析其多向分化潜能。以端粒重复序列扩增法(TRAP)检测MSCs及MSCs诱导成脂分化过程中端粒酶活性;以Western印迹法检测MSCs及MSCs诱导成脂分化过程中端粒酶反转录酶(hTERT)及端粒相关蛋白[端粒重复序列结合因子1(TRF1)、端锚聚合酶1(Tankyrase 1)]的表达水平。结果 TRAP法检测传代培养的MSCs端粒酶呈阴性表达,而MSCs诱导成脂分化过程中,端粒酶活性明显升高,以第7天最高(P<0.05),其后呈下降趋势;Western印迹法检测显示,hTERT在MSCs中有微弱表达,在MSCs诱导成脂分化过程中,hTERT和Tankyrase 1表达水平升高,以第7天最高,此后逐渐下降,而TRF1表达水平保持不变。结论体外培养的MSCs端粒酶呈微弱表达,MSCs在成脂诱导分化过程中,端粒酶活性先升高,其后逐渐下降,而Tankyrase 1可能在其中发挥重要作用。     

诱导人羊膜上皮细胞横向分化为肝细胞样细胞

目的:通过体外诱导分化实验,评价人羊膜上皮细胞(hAECs)向肝细胞样细胞分化的能力.方法:采用地塞米松(Dex),HGF,IGF等细胞因子联合诱导hAECs向肝细胞样细胞分化,诱导周期为2周,诱导过程中采用RT-PCR鉴定albumin(ALB),CYP1A1,CYP1A2,IGFR,c-met等肝细胞相关关键功能基...     

B超引导下胎羊体内人干细胞移植及其向肝脏细胞分化的研究

目的:建立B超引导下胎羊体内人干细胞移植模型,及移植细胞向肝脏细胞体内分化的检测方法.方法:通过B超引导下的穿刺,将(0.5～3)×107 人干细胞移植入发育50～60 d的胎羊体内(n=6);移植后110～120 d取材分析,用人HLA-DR引物PCR检测人源性细胞的嵌合;用人特异性肝细胞、白蛋白、CK18抗体免疫组化染色及Alu探针原位杂交,检测移植细胞向肝脏细胞的分化.结果:在移植的6只胎羊中,5只顺利生产;PCR检测显示5只实验羊肝脏组织中均有人源性细胞的嵌合;免疫组化及Alu探针原位杂交显示人源性细胞分布于门管区周围和肝小叶中,表达白蛋白、CK18等肝细胞分化标志;Alu探针阳性细胞也分布于胆管上皮中.结论:胎羊体内干细胞移植模型及其向肝脏细胞分化的检测,可以有效地显示人干细胞体内向肝脏细胞分化的潜能.