LPS对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的研究细菌脂多糖（LPS）对大鼠肺微血管内皮细胞（rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC）Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C kinase substrate，SSeCKS）表达和细胞内定位的影响，探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法用植块培养法体外培养大鼠肺微血管内皮细胞，用抗大鼠CD31抗体进行细胞鉴定。LPS刺激体外培养的RPMVEC，用定量PCR、免疫印迹方法检测LPS刺激RPMVEC不同时间SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况；用0．05μmol／L蛋白激酶C（PKC）抑制剂（Calphostin C）预处理RPMVEC30min后再用LPS刺激6h，免疫荧光细胞化学法观察Calphostin C对LPS诱导SSeCKS与纤维状肌动蛋白（filamentous—actin，F-actin）细胞内定位和结构改变的影响。结果定量PCR结果显示LPS刺激RPMVEC1h后SSeCKS表达水平达到最高，Westernblot结果与定量PCR结果相一致，同时，LPS以时间依赖的方式诱导SSeCKS磷酸水平增加。免疫荧光结果显示LPS刺激后，F-actin发生重构，细胞内形成应力纤维，SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足末端聚集；Calphostin C部分抑制LPS对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论LPS能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加和细胞内定位改变，PKC参与I娲诱导内皮细胞F-ac，6n的重构和SSeCKS重新分布；提示SSeCKS可能与LPS诱导内皮细胞F-actin的重构有关。     

SSeCKS对牛肺动脉内皮细胞黏附和迁移的影响

目的： 研究SSeCKS在细胞外基质成份诱导内皮细胞黏附和迁移中的作用。方法： 用纤黏连蛋白(FN)诱导内皮细胞，以Western blotting分析SSeCKS表达量的变化；用Ro31-8220、calphostin C（蛋白激酶C抑制剂）预处理内皮细胞，观察对细胞黏附和迁移的影响，以共聚焦显微镜观察其对SSeCKS、F-actin和vinculin在细胞定位的影响。结果： FN能够显著诱导内皮细胞黏附和迁移，SSeCKS的表达量也随之增加，具有时间和剂量依赖性；经Ro31-8220、calphostin C处理细胞后，SSeCKS表达量明显减少，细胞黏附率和迁移细胞数也较处理前显著减少，SSeCKS由细胞质散在分布向核周聚集，且SSeCKS与F-actin、vinculin在细胞边缘共定位比处理前减少。结论： SSeCKS参与细胞外基质诱导内皮细胞黏附和迁移的过程，由其介导的PKC信号转导促进了这一过程，蛋白激酶C抑制剂可有效抑制此过程。     

犀角地黄汤合银翘散通过PKC-SSeCKS通路抑制TNF-α诱导的肺微血管内皮细胞通透性增加

目的:观察犀角地黄汤合银翘散(XDY)对TNF-α诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)通透性的影响及其与PKC-SSeCKS信号通路的关系,以探究该方治疗病毒性肺炎的作用环节和分子机制。方法:原代培养大鼠PMVEC,在Transwell小室上用电导法于不同时点监测TNF-α诱导的PMVEC跨内皮细胞单层电阻(TER)测定其通透性。不同的干预因素作用24 h后,检测PMVEC的TER、PKC活性、SSeCKS mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平,激光共聚焦显微镜观察PMVEC中SSeCKS的定位和F-actin的结构变化。结果:TNF-α作用24 h后PMVEC通透性达高峰;与对照组比较,TNF-α组TER降低,PKC活性增强;与TNF-α组比较,TNF-α加PKC抑制剂组和TNF-α加XDY含药血清组PKC活性降低,而TER升高且与对照组无差别。与对照组比较,TNF-α组SSeCKS的mRNA和蛋白表达升高;与TNF-α组比较,TNF-α加XDY含药血清组SSeCKS的mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平降低。对照组PMVEC中F-actin主要分布在细胞周边和核周,形成致密周围束,SSeCKS均匀散在分布于细胞中;TNF-α组细胞周边的F-actin致密束基本消失,SSeCKS集中分布于核周;TNF-α加含XDY含药血清组F-actin结构及SSeCKS的分布趋于正常。结论:犀角地黄汤合银翘散可以抑制TNF-α诱导的PMVEC PKC信号通路的激活,降低PKC结合底物SSeCKS的表达,最终影响肌动蛋白的变构、阻止内皮细胞变形而降低PMVEC的通透性。     

PKC在TNF-α诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

目的:研究蛋白激酶C(PKC)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-GalT-Ⅰ)表达的调节作用,以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响。方法:分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),再用TNF-α刺激HUVECs,应用RT-PCR、Western blot方法检测β-1,4-GalT-Ⅰ表达变化,应用细胞荧光染色观察β-1,4-GalT-Ⅰ催化的糖链的表达变化及细胞骨架结构的改变,通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变。结果:几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度的抑制TNF-α刺激HU-VECs引起的β-1,4-GalT-Ⅰ表达的上调,PKC激动剂能够使上调的β-1,4-GalT-Ⅰ的表达进一步增加;在HUVECs中β-1,4-GalT-Ⅰ与细胞骨架有共同定位,PKC抑制剂显著抑制TNF-α诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1,4-GalT-Ⅰ细胞内的再分布;PKC抑制剂显著抑制TNF-α诱导的内皮-单核细胞黏附能力的上调。结论:PKC可能参与调节TNF-α诱导的HUVECsβ-1,4-GalT-Ⅰ的表达,并且可能多种类型的PKC参与了这一调节过程;PKC可能通过对β-1,4-GalT-Ⅰ的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力。     

蛋白激酶C在脂多糖诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

目的 研究蛋白激酶c(PKC)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)表达的调节作用,以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响.方法 分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)30 min,LPS刺激HUVECs 4 h后,RT-PCR、Western blot方法 检测β-1,4一GalT-Ⅰ表达变化,细胞荧光染色观察β-1,4-GalT-Ⅰ催化的糖链表达变化及细胞骨架结构的改变,通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变.结果 几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度地抑制LPS刺激HUVECs引起的β-1,4-GalT-Ⅰ表达的上调,PKC激动剂能够使上调的β-1,4-GalT-Ⅰ的表达进一步增加;在HUVECs中β-1,4-GalT-Ⅰ与细胞骨架有共同定位,PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1,4-GalT-Ⅰ细胞内的再分布;PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮-单核细胞黏附能力的上调.结论 PKC可能参与调节LPS诱导的HUVECs β-1,4-GalT-Ⅰ的表达,可能多种类型的PKC参与了这一调节过程;PKC可能通过对β-1,4-GalT-Ⅰ的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力.     

内毒素致伤小鼠肺组织SSeCKS表达变化的研究

目的 观察内毒素，脂多糖（LPS）致伤小鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物（SSeCKS）的表达变化和细胞定位。方法 腹腔注射LPS制备小鼠内毒素肺损伤模型，依据注射时相和剂量不同随机分组。用Real-time PCR法和Western blot法检测各组肺组织SSeCKS的mRNA和蛋白质水平表达情况，间接免疫荧光双标法检测SSeCKS在肺组织中的细胞定位。结果 SSeCKS表达水平与LPS用量呈现剂量和时间依赖关系：1、5、10和15mg/kg组SSeCKS mRNA水平皆显著高于对照组（P〈0．05），且随注射剂量增高SSeCK SmRNA表达量亦逐渐增高；不同时相LPS（5mg/kg）注射后肺组织中SSeCKS mRNA水平表达呈动态变化过程，1h开始增高，3h达到表达高峰，12h降至正常水平；SSeCKS蛋白水平表达变化与mRNA水平变化相一致。SSeCKS在肺组织中定位于肺泡间隔毛细血管内皮细胞。结论 SSeCKS是炎症反应蛋白，其表达量与炎症的严重程度相关。内毒素可诱导肺泡间隔毛细血管内皮细胞SSeCKS表达上调。     

细菌脂多糖对培养星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C底物表达的影响

目的 研究细菌脂多糖(LPS)对培养的大鼠星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)表达的影响.方法 培养的星形胶质细胞随机分为空白对照组、LPS单一刺激组、LPS联合PKC抑制剂(RO-31-8220)刺激组.运用荧光定量PCR(Real time RT-PCR)、免疫印迹和免疫细胞化学法分析SSeCKS的表达变化和亚细胞定位.结果 Real time RT-PCR显示,LPS可以上调SSeCKS mRNA水平,在作用浓度为100 μg/L和1 mg/L时与对照组有显著差异(P＜0.01).Western blotting表明,当LPS作用浓度为100 μg/L时,SSeCKS蛋白表达量明显上调;在此浓度作用下,SSeCKS表达于6 h达高峰并广泛磷酸化,至24 h其蛋白表达仍维持于较高水平.免疫细胞化学分析显示,正常情况下,SSeCKS散在分布于胞质,于胞膜略有浓集.在LPS单一刺激组,SSeCKS富集于核周;当LPS联合RO-31-8220共同作用时,SSeCKS的亚细胞定位与正常组无明显差异.结论 在体外培养的星形胶质细胞中,LPS可诱导SSeCKS表达,上调其磷酸化水平,影响其细胞内定位.这些改变与PKC的功能相关.提示SSeCKS可能参与星形胶质细胞中炎症信号的转导.     

霉酚酸酯对血管内皮细胞与淋巴细胞粘附及其表达CD40L的影响

目的：观察霉酚酸酯（MMF）对细胞因子刺激下人脐静脉内皮细胞（mWEC）CD40L的影响。方法：正常分娩人脐带经胶原酶消化后，分离出内皮细胞，培养至3～5代，用于细胞粘附和CIMOL表达试验。以TNF-α和／或霉酚酸（船A）处理HUVEC 20小时后，用虎红法研究对淋巴细胞与内皮细胞粘附作用。以TNF-α、rIFN-γ、LPS分别和MPA同时作用HUVEC 24小时。加不同浓度的MPA与LPS诱导HUVEC 24小时，用Cell-ELISA检测CIMOL的表达。结果：（1）MMF能抑制静息及TNF-α激活的内皮细胞与淋巴细胞间的粘附作用。（2）三种细胞因子均可明显诱导内皮细胞表达CD40L分子。（3）MMF不能抑制静息状态下内皮细胞CD40L的表达，但抑制TNF-α、rIFN-γ和LPS诱导CIMOL的表达作用，且MMF抑制LPS诱导的内皮细胞CD40L表达呈剂量依赖效应。结论：MMF通过抑制内皮细胞表达CIMOL而影响淋巴细胞与内皮细胞的相互作用，这可能是MMF抗排斥反应机制之一。     

IL-1β影响大鼠星形胶质细胞中SSeCKS表达的研究

目的:研究Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在IL-1β激活的星形胶质细胞中的表达.方法:以炎性因子IL-1β刺激大鼠体外培养的星形胶质细胞,观察细胞中SSeCKS的表达及其细胞内的亚定位的改变.结果:IL-1β可上调大鼠原代培养星形胶质细胞中SSeCKS的表达,诱导其丝氨酸磷酸化.在亚细胞水平,IL-1β还能引起SSeCKS向核周、细胞星状突起聚集,而蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220能抑制IL-1β对细胞中SSeCKS亚细胞定位及磷酸化水平的影响.结论:在IL-1β的影响下,大鼠星形胶质细胞中SSeCKS的表达增加,磷酸化水平增强,细胞内定位发生改变,这种改变与PKC的功能相关,提示SSeCKS可能作为PKC的下游分子参与到炎性因子引起的星形胶质细胞活化的过程中.     

PKC在人肾小球系膜细胞IP3R1表达中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)对人肾小球系膜细胞(HMCs) IP3R1蛋白和mRNA表达的影响及PKC在此信号通路中的作用,以期为肝肾综合征(HRS)肾小球滤过率下降的发生机制提供理论依据.方法 用实时定量PCR和免疫印迹检测IP3R1 mRNA和蛋白表达的情况,并分别用蛋白激酶C(PKC)激动剂PMA、PKCα、PKCδ特异性抑制剂及HA-DN-PKCα质粒转染干预上述诱导实验检测IP3 R1的表达变化.此外,免疫印迹检测TNF-α对p-PKCα蛋白的表达影响.结果 TNF-α明显上调IP3 R1蛋白和mRNA表达.PMA、PKCα抑制剂Safingol和HA-DN-PKCα质粒瞬时转染预处理HMCs后,均能明显阻断TNF-α诱导IP3 R1蛋白的表达,而PKCδ抑制剂Rottlerin预处理后,对IP3 R1蛋白表达无明显影响.此外,TNF-α刺激HMCs,各不同时间组总PKCα蛋白表达无明显差异,而TNF-α刺激8 h p-PKCα蛋白表达明显增加.结论 TNF-α能上调人系膜细胞IP3 R1蛋白及mRNA的表达,TNF-α活化PKCα是TNF-α上调IP3 R1表达的重要上游信号.     

卡巴胆碱抑制肿瘤坏死因子所致微血管内皮细胞通透性增高

目的探讨卡巴胆碱对肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）诱导的增加微血管通透性的作用。方法采用FITC标记白蛋白漏出法、考马斯亮蓝染色法观察卡巴胆碱对TNF-α诱导微血管内皮细胞通透性，细胞形态和细胞骨架变化的影响。结果与对照组比较，TNF-α明显增加微血管内皮细胞通透性（P〈0．05），诱导细胞皱缩，细胞间隙增大和细胞骨架排列紊乱。给予卡巴胆碱可以明显抑制TNF-α诱导微血管内皮细胞通透性增加，并呈剂量依赖性，同时可以使细胞间隙明显减小，细胞骨架排列有序。结论卡巴胆碱可能通过抑制TNF-α对细胞骨架的损伤，进而抑制微血管通透性增加。     

CXC趋化因子受体2(CXCR2)参与脓毒症脑病小鼠脑内皮细胞激活并介导中性粒细胞迁移

目的探讨CXC趋化因子受体2(CXCR2)在脂多糖(LPS)诱导的脓毒症脑病中对脑内皮细胞激活和中性粒细胞迁移入脑的影响。方法设置C57BL/6J小鼠和CXCR2基因敲除小鼠正常对照组、野生型小鼠LPS处理组和CXCR2基因敲除小鼠LPS处理组。腹腔注射LPS建立脓毒症脑病模型,醋酸AS-D萘酚酯酶组织化学染色检测小鼠脑皮质区域内中性粒细胞的浸润情况, ELISA检测小鼠全脑和血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CXC趋化因子配体1(CXCL1)的水平。分离脑皮质部位微血管内皮细胞并进行原代培养,Western blot法检测LPS(1μg/mL)和TNF-α(200 ng/mL)对原代小鼠脑微血管脑内皮细胞CXCR2蛋白表达的影响以及CXCL1对脑内皮细胞骨架蛋白纤维型肌动蛋白(F-actin)及血管细胞黏附分子1(VCAM-1)蛋白表达的影响。结果腹腔注射LPS后,野生型小鼠(C57BL/6J小鼠)脑和血浆中TNF-α水平升高,同时脑中CXCL1水平也显著升高,且小鼠脑皮质内浸润的中性粒细胞数目显著增多;然而CXCR2基因敲除小鼠脑皮质内浸润的中性粒细胞数目较野生型小鼠显著减少。体外使用LPS和TNF-α刺激后,脑内皮细胞CXCR2蛋白水平升高; CXCL1刺激脑内皮细胞后, F-actin和VCAM-1的蛋白水平也明显升高。结论 CXCR2参与脓毒症脑病小鼠脑内皮细胞的激活,进而介导中性粒细胞的迁移。     

TNF-α和LPS诱导系膜细胞白细胞介素-12表达的研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和脂多糖（LPS）对系膜细胞IL-12表达的影响。方法利用细胞培养、酶联免疫吸附（ELISA）等技术，观察TNF-α及不同剂量、不同作用时间的LPS干预等不同条件下，系膜细胞IL-12蛋白表达的变化。结果静息状态的系膜细胞不表达IL-12，LPS（10μg／ml）和TNF-α（20ng／ml）均可诱导系膜细胞显著表达IL-12，且两者具有协同效应。在一定的剂量范围内，LPS呈剂量及时间依赖性诱导系膜细胞表达IL-12，但随着LPS刺激时间及浓度的增加，IL-12的表达减少。结论TNF-α及LPS均可诱导系膜细胞表达IL-12参与机体免疫炎症，但系膜细胞在表达IL-12时对LPS的长期及高浓度刺激产生耐受性。     

ERK在LPS诱导大鼠雪旺氏细胞TNF-α表达中的作用

目的 研究细胞外信号调节激酶（ERK）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠雪旺氏细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的作用。方法 采用Westernblot检测细胞中ERK激酶的活性；用ERK的特异性抑制剂（PD98059）预处理细胞后，ELISA检测细胞中TNF-α水平；RT-PCR检测细胞中TNF-α mRNA的表达；用免疫荧光双标法检测ERK的表达定位。结果 LPS可显著激活雪旺氏细胞中的ERK信号通路，其激活高峰在LPS刺激后30～45min，60min后ERK磷酸化水平开始逐渐下降；用PD98059预处理细胞后，可显著抑制细胞TNF-α以及TNF-α mRNA的产生；LPS刺激细胞后引起ERK磷酸化，PD98059可抑制该过程。结论 ERK信号通路的激活可能是LPS诱导TNF-α表达的前提。通过阻断细胞内信号转导通路来减少TNF-α及其他细胞因子的产生，为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新的思路。     

腺苷抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的 探讨腺苷抑制脂多糖（LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的凋亡。方法 将培养的HUVEC分成6组：对照组,二甲基亚砜（DMSO）组,LPS组,低、中和高剂量腺苷组,用荧光显微镜动态观察细胞形态结构,用ELISA检测上清液中TNF-α表达量,用流式细胞技术检测各组细胞凋亡。结果 LPS组细胞凋亡率显著升高,TNF-α的表达量也显著升高（p＜0.05）;不同剂量腺苷能显著抑制LPS诱导的TNF-α的表达,显著抑制细胞的凋亡率（p＜0.05）。结论 一定浓度的腺苷能抑制LPS 诱导的HUVEC释放炎症介质、抑制细胞发生凋亡。     

脂多糖活化的大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生的新机制

目的：探讨脂多糖（LPS）活化的肺泡巨噬细胞中低氧诱导因子－1α（HIF-1α）的表达及其在肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α（TNF-α）中的作用。 方法： 应用HIF-1α 诱骗法（HIF-1α decoy）抑制其作用，并用Western blotting、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。 结果： HIF-1α蛋白含量在LPS组（1.95±0.57）和HIF-1α decoy组（1.89±0.59）均明显高于对照组（0.41±0.14，P＜0.05）；HIF-1α mRNA的表达在对照组（0.7838±0.3183）、LPS组（0.7622±0.3387）和HIF-1α decoy组（0.8155±0.3594）之间无显著差异（P>0.05）；LPS刺激24 h后，大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生明显高于对照组（61 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），抑制HIF-1α后TNF-α的产生明显低于LPS刺激组（90 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），但 HIF-1α decoy组TNF-α的产生仍然高于对照组（61 ng/L vs 94 ng/L, P<0.05）。 结论： 大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的刺激下HIF-1α蛋白的稳定性增强使其表达明显上调，并且促进TNF-α的产生，提示HIF-1α在肺部慢性炎症性疾病如COPD的发病机制中可能有重要作用。     

MAPK通路在晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞骨架结构改变中的作用

目的：探讨晚期糖基化终产物通过MAPK信号转导通路引起人脐静脉内皮细胞骨架结构改变的作用机制。方法：用胰酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞，以不同浓度的晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白（AGE-HSA）与之作用不同时间，并选用不同的试剂以及主导激活或抑制的腺病毒突变体以阻断或激活MAPK通路，与对照组进行比较，采用免疫荧光染色法显示细胞骨架肌动蛋白F-actin的结构改变。结果：AGE-HSA以剂量和时间依赖的方式引起内皮细胞骨架蛋白F-actin结构的改变，未经修饰的HSA无此作用;p38通路的特异性抑制剂SB203580和ERK通路的特异性抑制剂PD98059均可抑制AGEs对细胞骨架的作用，而JNK通路抑制剂SP600125则无此作用；MKK6b、 MEK1结构活性型突变体的重组腺病毒可明显诱导细胞骨架改变，MKK7活性型则无此作用;且MKK6b、 MEK1无活性型突变体可明显抑制AGEs对细胞骨架的作用；p38α亚型的无活性突变体可阻断MKK6b结构活性型突变体诱导的细胞骨架改变。结论：AGE修饰蛋白通过MAPK家族中的p38和ERK信号转导通路引起内皮细胞骨架肌动蛋白F-actin的重组和再分布。     

LPS对大鼠雪旺氏细胞TNF-α合成和释放的影响

目的：探讨内毒素脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）的诱导作用对大鼠雪旺氏细胞肿瘤坏死因子α（tumor nec-rosis factor-α,TNF-α）的表达。方法：不同浓度,不同时间用LPS刺激雪旺氏细胞,用酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测细胞胞液和上清中分泌的TNF-α的表达量,同时用间接免疫荧光细胞化学染色检测TNF-α的细胞定位。结果：用LPS10μg/ml刺激后2小时能显著促进雪旺氏细胞浆内TNF-α的表达,同时也检测到培养液上清中有TNF-α的释放。结论：细菌的致病因子LPS的诱导确能促进雪旺氏细胞高效表达和分泌TNF-α,从而为雪旺氏细胞作为免疫活性细胞在周围神经系统中发挥免疫调节作用提供初步依据。     

肾上腺素对小鼠巨噬细胞中促炎／抗炎介质比值的影响

目的：研究肾上腺素对脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7中促炎介质［肿瘤坏死因子（TNF-α）、一氧化氮（NO）、环加氧酶-2（COX-2）］和抗炎介质［血红素氧化酶-1（HO-1）、白介素10（IL-10）］表达及NF-κB活化的影响。 方法： 以10 μg/L的LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型，加入不同浓度的肾上腺素（1、5、10、50 μmol/L）孵育24 h后，收集培养上清并提取细胞总蛋白，酶联免疫法测定上清中TNF-α、IL-10浓度，Griess法检测上清NO含量(以NO2-/NO3-表示)，免疫印迹法检测细胞总蛋白中COX-2、HO-1、IκB-α的含量。 结果： 10 μg/L的LPS明显诱导TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2、IL-10及HO-1的产生；LPS+肾上腺素组与LPS单独作用组相比促炎介质TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2的表达量显著下降，而抗炎介质IL-10、HO-1的表达却明显增强；肾上腺素与LPS共同作用组中IκB-α的含量与单独LPS作用组相比无明显差异。 结论： 肾上腺素下调LPS诱导的巨噬细胞中促炎介质的表达同时促进抗炎介质的表达，这种效应并不通过影响NF-κB的活化来实现。     

低氧对肺动脉平滑肌和内皮细胞蛋白激酶C α mRNA表达的影响

目的：探讨低氧对肺动脉平滑肌和内皮细胞蛋白激酶C(PKC)αmRNA表达的影响。方法：应用原位杂交技术了大鼠不同节段肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞PKCαmRNA的分布及低氧对在体和离体肺动脉平滑肌细胞及内皮细胞PKCαmRNA表达的影响。结果：正常大鼠各级肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞均有PKCαmRNA的表达,腺泡内肺动脉平滑肌细胞中的表达明显高于肌型肺动脉（P＜0．01）,低氧14d和28d肌型动脉和腺泡内肺动脉内皮细胞的表达均明显增高（P＜0．01）,腺泡内腺动脉平滑肌细胞的表达较对照组明显升高（P＜0．01）,低氧14d肌型肺动脉平滑肌细胞表达升高不明显,但低氧28d明显升高（P＜01）,正常条件下离体培养猪肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞均有PKCαmRNA的表达,低氧1h对其表达无明显影响,48,72h表达明显升高,以72h升高最显著（P＜0．001）,结论：低氧可促进肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞PKC amRNA 的表达,而以腺泡内肺动脉平滑肌细胞的变化最明显,PCKα在低氧性肺动脉高压的形成中可能起一定作用。