多药耐药(MDR1)基因治疗对中晚期肝癌小鼠生存率的影响

目的 :探讨恶性肿瘤MDRl基因治疗以保护骨髓造血细胞 ,从而加大化疗剂量 ,提高中晚期肝癌小鼠生存率。方法 :用培养的H2 2腹水型肝癌细胞注入Balb/c小鼠制成肿瘤模型 ,同种骨髓造血细胞经浓缩病毒上清法转染MDRl基因后 ,移植入预先照射亚致死剂量60 Co -γ射线的荷瘤小鼠 ,再经大剂量化疗 ,实验分为对照组及阿霉素 5mg/kg(最大剂量 )组、10mg/kg(2×最大剂量 )组、2 0mg/kg(4×最大剂量 )组 3个剂量组 ,分别在化疗 3天后观察小鼠白细胞的变化情况 ,取骨髓造血细胞做P -糖蛋白免疫组化以观察MDRl基因的表达情况 ;测定小鼠死亡率。结果 :化疗第 1、2周实验组白细胞明显高于对照组(P <0 .0 1) ,第 1周各剂量组之间无明显差别 (P >0 .0 5 ) ,第 2周 2 0mg/kg(4×最大剂量 )组比其它两组白细胞数偏低 (P <0 .0 5 )。 10mg/kg和 2 0mg/kg组死亡率明显低于对照组 (P <0 .0 1)。实验组免疫组化阳性率为 8.6 3%± 0 .36 % ,而对照组为零。结论 :MDR1基因转染骨髓造血干细胞后 ,使其对阿霉素的耐受性增加。     

甲状腺癌多药耐药基因MRP、P-gp的表达及临床意义

目的　探讨多药耐药相关蛋白 (MRP)和P 糖蛋白 (P gp)在甲状腺癌中的表达及临床意义。方法　采用免疫组化SP法回顾性检测分析 80例甲状腺癌组织MRP和P gp表达状况。结果　MRP和P gp表达阳性率分别为 86 .3%、76 .3% ,二者有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,两者在甲状腺癌各类型中表达较一致 ,乳头状癌和髓样癌表达阳性率无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,滤泡癌中表达阳率明显低于乳头状癌和髓样癌 (P <0 .0 5 )。MRP与P gp共表达率为 76 .3% (6 1/ 80 ) ,具有相关性(P <0 .0 1)。结论　MRP和P gp在甲状腺癌中阳性率较高 ,提示甲状腺癌对化疗有一定多药耐药性。     

TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药基因MDR1及其编码P-gp蛋白表达的影响,探讨以TRAIL为靶点逆转胃癌多药耐药的机制。方法 SGC-7901/VCR细胞株经不同浓度的TRAIL处理48 h后,RT-PCR检测各组胃癌细胞株中多药耐药MDR1 mRNA的表达情况,同时用ELISA法检测各组胃癌细胞株中P-gp表达的含量。结果不同浓度TRAIL(50、100、200、400μg/L)作用于细胞后,胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。400μg/L与200μg/L组相比其MDR1/P-gp抑制程度并不明显,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAIL可抑制SGC-7901/VCR MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。TRAIL可能通过降低耐药基因MDR1的表达逆转胃癌的多药耐药。     

肿瘤多药耐药治疗策略：P-gp抑制剂研究进展

肿瘤的多药耐药是导致化疗失败的主要原因,因此多药耐药的逆转一直是肿瘤研究领域的研究热点。P-糖蛋白是引起多药耐药性产生的重要因素之一,也是目前肿瘤多药耐药逆转剂最重要的药物靶点。本文对以P-糖蛋白为靶点的肿瘤多药耐药逆转剂的研究进展予以综述。     

多药耐药基因(MDR1)转染小鼠骨髓造血细胞表达及功能研究

目的：探索含人多药耐药基因（ＭＤＲ１）全长ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体转染小鼠骨髓造血细胞转染时间及转染效率的关系。方法：采用逆转录病毒上清法转染小鼠骨髓造血细胞，依据转染时间不同分为２日组及４日组，分别行ＰＣＲ法检测外源ＭＤＲ１基因；免疫组化法检测ＭＤＲ１基因表达，柔红霉素排出试验检测表达外源基因的功能。结果：ＰＣＲ方法证实转入的外源ＭＤＲ１基因可整合入小鼠骨髓造血细胞基因组中；免疫组化法检测转染率最高达３３％，转染４日组转染率大于转染２日组转染率（Ｐ＜０．０５）；柔红霉素排出试验证实转入外源基因表达产物可行使正常功能。结论：逆转录病毒上清法可有效转染外源ＭＤＲ１基因入骨髓造血细胞中；表达产物可行使正常生理功能；在转染４天时间内，转染率随转染时间延长而增高。     

多药耐药基因MDR1的转移与表达研究

为建立逆转录病毒介导的多药耐药基因ＭＤＲ１转移体系,用脂质体转染法将复制缺陷 病毒载体ＨａｍＤＲ导入鼠源单向型包装细胞ＧＰ＋Ｅ８６;收集单向型逆病毒上清并重复转导双嗜型包装细胞,获得高滴度病毒生产细胞ＰＡ３１７／ＨａＭＤＲ。     

结直肠癌中microRNA-451部分逆转MDR1/P-gp途径介导的多药耐药

目的 研究microRNA-451在结直肠癌组织与细胞中的表达及其在MDR1/P-gp途径介导的多药耐药中的作用.方法 收集68例新鲜结直肠癌及癌旁组织,RT-qPCR检测其miR-451表达情况,Western blot检测P-gp蛋白是否表达,并分析其关系;RT-qPCR检测结直肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L、耐阿霉素细胞LoVo/adr及对应亲本细胞中miR-451的表达;利用脂质体将miR-451 mimics(模拟物)、NC RNAs转染2组耐药细胞,RT-qPCR和Western blot分别检测转染后其MDR1 mRNA和P-gp的表达;MTT检测转染细胞在不同浓度奥沙利铂、阿霉素下的增殖并计算其半数抑制浓度(IC50);流式细胞术进一步比较NC转染组和mimics转染组耐药细胞在同一浓度奥沙利铂、阿霉素下凋亡率.结果 相对于癌旁组织,miR-451在结直肠癌组织中低表达,其表达下调与P-gp阳性表达存在相关性(r=-0.404,P=0.002);与亲本细胞相比,miR-451在2组耐药细胞中表达明显降低(P＜0.01);mimics转染组细胞MDR1 mRNA、P-gp相对表达量明显下降,IC50及凋亡率与NC组均有显著差异(P＜0.05).结论 miR-451在结直肠癌中通过MDR1/P-gp途径参与多药耐药,耐药细胞转染miR-451mimics后,可部分逆转耐药.     

多药耐药的研究进展

目的：探讨肿瘤多药耐药的研究新进展。方法：阅读国内外有关文献并进行综述。结果与结论：恶性肿瘤的综合治疗中化学疗法是重要手段之一,然而肿瘤的原发或继发对化疗药物的多药耐药(MDR)是目前肿瘤病人化疗失败的主要原因。     

多药耐药基因MDR1C3435T多态性与口服环孢素A清除率的关系

目的探讨多药耐药基因(MDR1)26外显子C3435T多态性与环孢素A(CsA)药动学特性间的关系.方法 HPLC法测定20名健康男性单次口服CsA 500 mg后24 h中不同时间点的药物浓度.C3435T的多态性测定采用DNA限制性片段长度多态性法,并用基因测序法验证.结果 20名健康男性志愿者中,5例为CC型,11例为CT型,4例为TT型.CC型、CT型和TT型的cmax分别为(2 124.4±179.4)ng/mL、(1 934.3±372.8) ng/mL和(1 765.3±416.0)ng/mL;AUC0-inf分别为(13 922.2±2 881.9) ng·h/mL、(11 511.8±2 192.1) ng·h/mL和(8 515.3±1 062.3) ng·h/mL;CL/F分别为(37.0±6.5) L/h、(45.0±9.0) L/h和(59.5±8.1) L/h;至少含有一个C等位基因的基因型(CC和CT型)与TT型相比,cmax和AUC0-inf分别高了15%和49%,CL/F低了31%.C3435T的基因多态性与cmax无相关性(P>0.05),而与CL/F和AUC0-inf有关(P=0.013).结论 MDR1 C3435T的多态性是口服CsA生物利用度变异大的影响因素.     

多药耐药基因转染对荷瘤小鼠骨髓造血细胞的保护作用

目的探讨MDR1基因转染荷瘤小鼠骨髓单个核细胞（BM-MNCs）后在体内的分布和对骨髓造血细胞的作用。方法将32只H22肝癌荷瘤BALB/c小鼠随机分为4组：正常对照组（不照射不回输）、空白对照组（照射并回输生理盐水）、阴性对照组（照射并回输未转染的BM-MNCs）、转染实验组（照射并回输已转染的BM-MNCs）,每组8只。阿霉素超剂量化疗,监测化疗过程中各组外周血细胞和肿瘤体积的变化,用RT-PCR法和免疫组化法检测外源性人MDR1基因和P-gp在荷瘤小鼠体内的表达和分布。结果化疗后各组红细胞和血小板均无明显变化,差异无统计学意义（P〉0.05）;转染实验组白细胞数于化疗后第4周降至（3.32&#177;0.26）,与化疗前（6.64&#177;0.39）相比减少有统计学意义（P〈0.05）,化疗后第3周起转染实验组白细胞数高于阴性对照组,增高有统计学意义（P〈0.05）;化疗3周后与3个对照组相比转染实验组肿瘤体积较小,减小有统计学意义（P〈0.05）;外源性人MDR1基因和P-gp在骨髓和外周血单个核细胞有表达和分布,在心、肝、肺、脾和肾等组织中无表达和分布;肿瘤组织中无外源性人MDR1基因分布,有P-gp表达。结论MDR1基因转染荷瘤小鼠BM-MNCs后在超剂量化疗中对骨髓造血功能有保护作用,外源性MDR1基因在心、肝、肺、脾和肾等组织中无表达。     

多药耐药mdr-1基因体外转染兔骨髓造血细胞及其表达与功能的研究

目的：探讨浓缩病毒上清转染法在体外将多药耐药mdr—1基因转入兔骨髓造血细胞的条件及检测转染后mdr—1基因在兔骨髓造血细胞中的表达及功能。方法：用秋水仙碱(90ng／ml)筛选含人类全长mdr—1cDNA的产病毒包装细胞PA317—HaMDR1／A1后进行细胞培养并制备浓缩病毒上清。采集新西兰大白兔骨髓并分离富含造血细胞的单个核细胞。骨髓造血细胞与浓缩病毒上清及细胞因子组合共培养。采用免疫组织化学法检测转染率，PCR法检测外源性mdr—1基因的整合，柔红霉素(daunorubicin DNR)泵出试验检测导入的mdr—1基因的功能。结果：秋水仙碱筛选后，产病毒包装细胞P糖蛋白(P-g;ucp[rpteom P-gp)表达增强：外源性mdr—1基因能成功的导入兔骨髓造血细胞，转染2日、4日、6日的转染率分别为22％、37％、39％，但转染4日组细胞生长状态最好；转入的mdr—1基因能发挥药物外排泵的功能。结论：采用浓缩病毒上清转染法能成功的将外源性mdr—1基因导人兔骨髓造血细胞中并获得稳定的功能性表达，为进一步研究mdr—1基因转染骨髓造血细胞后自体回输在大剂量化疗中对骨髓保护作用的研究提供了依据。     

阳离子脂质体介导提高反义寡聚脱氧核苷酸转染卵巢癌细胞株SKOV3/mdr1的效率

多药耐药基因(MDR1)编码的P-糖蛋白(Pgp,P-170)是导致卵巢癌化疗失败的重要原因之一.本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3/mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响.反义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-AS)通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3/mdr1细胞,将正义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-S)同样导入细胞为对照.经以脂质体介导的1.6μmol/LMDR1-AS转染后,PgP阳性的细胞百分数从100%降至48.7%,经过16μmol/L和10μmol/L两个浓度的单纯MDR1-AS转染后,Pgp阳性细胞的百分数也从100%分别降至52.6%和86.7%.因此,通过阳离子脂质体介导可大大提高反义寡核苷酸转染的效率.     

骨肉瘤组织中HER2、P-糖蛋白的表达与预后的关系

大多数骨肉瘤均有HER2及P-糖蛋白(P—gp)的表达。P—gp介导的多药耐药性(MDR)是骨肉瘤化疗不敏感的重要原因，也是影响预后的重要因素，而致癌基因HER2的表达与否则提示肿瘤恶性程度高低及转移能力的强弱。作者拟对HER2及P-gp的表达及其与骨肉瘤预后的关系作一综述。     

MDR1启动子调控的双自杀基因靶向杀伤耐药胶质瘤细胞的研究

目的探讨多药耐药基因（MDR1）启动子调控的CD、TK双自杀基因系统并加前体药物丙氧鸟苷及5 氟胞嘧啶（pcDNA3.MDR1P.CDTK/GCV+5-FC）对耐药胶质瘤细胞（C6/ADR细胞）的靶向杀伤作用。方法利用脂质体介导法将含有MDR1启动子调控的CD、TK双自杀基因的真核表达载体PcDNA3.MDR1P.CD.TK转染入C6/ADR细胞（C6/ADR/CDTK），利用PCR鉴定CD、TK基因的整合，利用RT-PCR鉴定CD、TK基因的表达；然后以转染了质粒pcDNA3.MDR1P.CDTK的C6细胞（C6/CDTK）和正常C6/ADR细胞作为对照，分别加前体药物，利用生长曲线、流式细胞仪、平板克隆形成等方法研究双自杀基因对耐药胶质瘤细胞生长、细胞周期及增殖的影响。结果PCR结果显示，CD、TK基因均整合入C6和C6/ADR细胞中；RT-PCR结果显示，C6/ADR/CDTK细胞中CD、TK基因有特异性表达，而C6/CDTK细胞无特异性表达。应用前体药物后，C6/ADR/CDTK细胞增殖明显受抑；C6/ADR、C6/CDTK、C6/ADR/CDTK细胞经流式细胞仪检测G1期的细胞比例分别为32.68%、47.57%、99.93%（P＜0.05，其平板克隆形成率分别为(96.7±2.1)%、(86.7±1.9)%、(16.7±0.9)%（P＜0.05）。结论pcDNA3.MDR1P.CDTK/GCV+5-FC系统对C6/ADR具有较强的靶向杀伤作用。     

RNA干扰技术沉默MDR1基因逆转大肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu的耐药性

目的  探讨多药耐药（MDR1）基因沉默对大肠癌耐药细胞系LoVo/5-Fu耐药性的逆转作用。方法  构建靶向MDR1的短发夹RNA(EASY-shRNA-MDR1)干扰质粒转染LoVo/5 Fu,实时荧光定量PCR（Realtime-PCR）在mRNA水平检测抑制效果,噻唑蓝（MTT）法检测细胞对5-Fu的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果  与未转染组相比,EASY-shRNA-MDR1组细胞MDR1mRNA表达明显下调（P<0.05）;细胞对5-Fu的IC50及RI显著降低（P<0.05）,敏感性的相对逆转率为74.7%;凋亡率明显升高(P<0.05)。结论  EASY-shRNA-MDR1可有效抑制大肠癌耐药细胞中MDR1的表达,进而降低了大肠癌耐药株对5-Fu的耐药性。