Survivin表达抑制影响鼻咽癌细胞的增殖与凋亡

目的研究Survivin表达抑制对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨Survivin在鼻咽癌中的生物学功能。方法采用脂质体将Survivin特异性SiRNA(small interfering RNA)转入鼻咽癌细胞株5-8F,培养48h后,收集细胞。逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分别检测Survivin mRNA和蛋白在细胞中表达。流式细胞仪检测细胞凋亡与周期,显微镜下计数检测细胞增殖抑制。结果SiRNA抑制5-8F细胞Survivin表达后,细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.01);S/G1比值显著高于对照组(P<0.01);细胞增殖抑制率也显著高于对照组(P<0.01);脂质体对照组与阴性SiRNA对照组比较,细胞凋亡、周期和增殖差异无显著性(P>0.05)。结论Survivin表达抑制,诱导鼻咽癌细胞凋亡并抑制其增殖。     

Bcl-2shRNA稳定转染联合γ射线对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响

目的 观察Bcl-2shRNA稳定转染联合γ线照射对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.方法 构建针对Bcl-2基因的干扰质粒pGPH1/GFP/Neo,经脂质体介导转染SGC-7901细胞,G418筛选稳定表达的细胞株,γ线照射后形成4组细胞,分别命名为SGC-7901(A组)、照射/SGC-7901(B组)、Bcl...     

ABT-737对人急性髓细胞白血病细胞U937诱导凋亡作用及机制

目的探讨Bcl-2小分子抑制剂ABT-737对人急性髓细胞白血病细胞U937诱导凋亡作用及机制。方法以人急性髓细胞白血病细胞U937为研究对象,观察不同浓度梯度(0、0.625、1.25、2.5、5.0、10μmol/L)ABT-737对U937细胞增殖抑制及诱导凋亡作用,并检测ABT-737作用前后Bcl-2 mRNA水平和蛋白表达水平改变。CCK-8检测细胞生长抑制率,Annexiin-V/PI双染检测细胞凋亡率,RT-PCR方法检测Bcl-2 mRNA水平,Western blot检测Bcl-2蛋白表达。结果 ABT-737可显著抑制U937细胞生长,随着ABT-737浓度(0、0.625、1.25、2.5、5.0、10μmol/L)的增加,U937细胞数量逐渐减少。其中2.5μmol/L ABT-737即可使U937细胞出现明显增殖抑制,作用24 h后其存活率与对照组(0μmol/L)比较差异有统计学意义(P<0.05)。ABT-737可显著诱导U937细胞凋亡,随着ABT-737浓度(0、0.625、1.25、2.5、5.0、10μmol/L)的增加,凋亡率逐渐增加。其...     

凋亡相关基因Bcl-2和细胞因子bFGF在豚鼠透镜诱导近视眼中的研究

目的：探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（B-cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2）和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）在透镜诱导豚鼠近视眼后极部巩膜细胞中的表达,以及二者对巩膜细胞凋亡的影响。方法：选健康4周龄豚鼠45只,随机分成3组,Ⅰ组（右眼配戴-20D）、Ⅱ组（右眼配戴-10D） Ⅲ组（不作任何干预）。实验前后用睫状肌麻痹下验光、A超动态观察豚鼠眼屈光度和眼轴长度,并取后极部巩膜组织,用电镜、终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导原位缺口末端标记法（TUNEL）和流式细胞术检测巩膜的凋亡细胞, 应用免疫组织化学染色和蛋白印迹（Western-blot）法检测bFGF和bcl-2蛋白。结果:实验后诱导眼形成近视,且伴有眼轴延长。并在诱导眼巩膜细胞中检测到凋亡细胞,凋亡率高于对照组（P＜0.05),透镜诱导的豚鼠近视眼后极部巩膜组织中bFGF和bcl-2的含量降低（P＜0.05)。结论: bFGF与bcl-2在透镜诱导豚鼠近视眼后极部巩膜细胞中表达阳性,并可通过抑制细胞凋亡参与透镜诱导豚鼠近视的形成。     

Bcl-2 loop domain在Bcl-2蛋白结构中的作用初探

目的探讨B细胞淋巴瘤／白血病基因2（Bcl-2） Loop domain结构域在Bcl-2蛋白结构中的作用。方法应用PCR及Western blot方法检测Bcl-2 Loop domain结构域突变前后Bcl-2蛋白的表达情况。结果Bcl-2 Loop domain结构域突变后Bcl-2蛋白只在沉淀中检测到,在上清中未检测到。结论Bcl-2 Loop domain结构域被突变后,Bcl-2蛋白空间结构发生改变,推测Bcl-2 Loop domain结构域在Bcl-2蛋白结构中起到重要作用。     

肝细胞生长因子体外对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对肝癌细胞 HepG2 增殖和凋亡的影响. 方法: 人肝癌细胞株 HepG2加入不同浓度HGF(0, 1, 10, 50 μg/L) 培养2, 4, 6 d,应用MTT 法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡百分率的变化,免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达. 结果: HGF 抑制 HepG2 细胞增殖呈剂量及时间依赖性,并诱导其凋亡[50 μg/L HGF,培养时间为4, 6 d,其抑制率: (30.7±10.2)%, (49.8±11.1)% vs 1 μg/L HGF: (10.7±11.2)%, (4.2±9.4)%; P《0.05, P《0.01]. 随着HGF浓度增大S期细胞明显减少[试验组10, 50 μg/L HGF: (7.5±4.4)%, (7.8±1.6)% vs对照组0 μg/L HGF: (16.6±2.8)%; P《0.05, P《0.01],同时可见G0/G1 期细胞累积现象[试验组10, 50 μg/L HGF: (80.5±3.2)%, (73.1±3.9)% vs对照组0 μg/L HGF:(59.6±6.2)%; P《0.05, P《0.01]. 试验组 G1 峰前出现明显的凋亡峰,凋亡率亦较对照组显著增加(P《0.05). 且试验组细胞 PCNA 表达明显高于对照组. 结论: HGF 对肝癌细胞 HepG2 有抑制增殖和诱导其凋亡的作用,诱导细胞 G0/G1 期阻滞为可能机制之一.     

过表达Bcl-2肾小管上皮细胞株的建立及Bcl-2逆转录病毒对抗肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的 建立稳定过表达Bcl-2蛋白的肾小管上皮细胞,探讨Bcl-2过表达对抗大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用.方法 Bcl-2逆转录病毒感染培养肾小管上皮细胞株HK-2,经G418抗性筛选,PCR鉴定并命名为HK-2Bcl-2;原位杂交检测细胞Bcl-2 mRNA表达水平;甘油诱导大鼠急性肾功能衰竭模型,采用含重组Bcl-2浓缩逆转录病毒液,感染大鼠肾小管上皮细胞,采用免疫组织化学法检测Bcl-2蛋白表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡变化.结果 PCR和原位杂交显示G418抗性细胞克隆过表达Bcl-2;甘油注射后大鼠出现急性肾功能衰竭,Bcl-2逆转录病毒感染肾小管上皮细胞后,Bcl-2蛋白表达上调,并能显著对抗肾小管上皮细胞凋亡.结论 成功建立过表达Bcl-2蛋白的肾小管上皮细胞株HK-2Bcl-2;Bcl-2逆转录病毒显著抑制大鼠肾小管上皮细胞凋亡.     

MicroRNA-25表达下调对神经胶质瘤U87细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨microRNA-25（miR-25）表达下调对神经胶质瘤U87 细胞增殖与凋亡的影响,以及miR-25 与B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2 基因（Bcl-2）在胶质瘤细胞增殖与凋亡过程中的调节作用。方法通过慢病毒介导反义miR-25 寡聚核苷酸转染U87 细胞;分为3 组,实验组（转染anti-miR-25）、对照组（转染negative control）和空白组（空白PBS）;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-25 和Bcl-2 的mRNA 表达水平;CCK-8 法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果实验组miR-25 和Bcl-2 的mRNA 表达量与空白组和对照组比较,差异具有统计学意义（P <0.05）,实验组降低;实验组相对于空白组和对照组,细胞增殖活性降低,细胞周期延缓,细胞凋亡率升高。结论在胶质瘤U87 细胞,miR-25 表达下调通过作用于Bcl-2 靶基因,延缓细胞周期,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

2-甲氧基雌二醇对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)对体外培养的SGC-7901胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将不同浓度的2-ME不同时间作用于SGC-7901,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测2-ME对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;电镜观察细胞超微结构变化.结果 2-ME对SGC-7901细胞有很强的抗增殖的作用,引起大量细胞凋亡,且在一定范围内呈剂量和时间依赖性,作用组与对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.05).细胞周期检测发现作用组大量细胞阻滞于G2/m期G0/G1及S期细胞减少,与对照组存在显著差异(P<0.05).结论 2-ME可抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖并诱导其凋亡.     

瑞舒伐他汀对高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉Bcl-2与Bax表达的影响

目的：观察瑞舒伐他汀对高同型半胱氨酸血症（hyperhomocysteinemia,Hhcy）Wistar大鼠主动脉组织B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2）和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关蛋白X（Bcl-2-associated X protein,Bax）表达的影响。方法：应用ADVIA2400全自动生化仪检测正常对照组,Hhcy组和瑞舒伐他汀组大鼠的血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇和血浆同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）浓度;HE染色观察主动脉病理变化;应用免疫组化和实时荧光定量PCR检测主动脉组织Bcl-2、Bax表达。结果：瑞舒伐他汀组大鼠血浆Hcy浓度（10.47±0.07） μmol/L低于Hhcy组（85.38±0.2） μmol/L,差异具有统计学意义（P<0.05）;瑞舒伐他汀组大鼠主动脉损伤较Hhcy组减轻;免疫组化显示瑞舒伐他汀组大鼠主动脉Bcl-2蛋白表达比Hhcy组降低,Bax蛋白表达比Hhcy组升高,差异均具有统计学意义（P<0.05）;实时荧光定量PCR法显示瑞舒伐他汀组大鼠主动脉Bcl-2 mRNA表达较Hhcy组明显降低,而Bax mRNA表达却升高（P<0.05）。结论：瑞舒伐他汀可能通过降低血浆Hcy浓度及影响主动脉组织Bcl-2、Bax基因表达,从而延缓和改善Hhcy大鼠主动脉粥样硬化的进程及程度。     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的分析5-杂氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-2dC）对鼻咽癌细胞株CNEl、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响。方法用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞，MTT实验观察细胞生长曲线，用流式细胞仪检测细胞周期分布情况和凋亡细胞比例。结果5-aza-2dC对4株细胞的增殖均具有抑制作用，CNEl和6-10B细胞的半数抑制剂量低于CNE2和5-8F。药物处理使4株细胞凋亡率呈剂量依赖性增加，CNEl和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。经5-aza-2dC处理后，CNEl、CNE2、6-10B细胞出现不同程度G0／G1期阻滞，而5-8F表现为G0／G1期和G2／M期双期阻滞．CNEl和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。结论5-aza-2dC对CNEl、CNE2、5-8F和6-10B细胞具有抑制增殖、促进凋亡和细胞周期阻滞作用，CNEl和6-10B对药物敏感性高于CNE2和5-8F。     

AKT抑制剂对鼻咽癌细胞株CNE1的放疗增敏作用

【目的】 探讨Akt抑制剂124005对人鼻咽癌细胞CNE1放射增敏效应及其潜在机制。【方法】 CCK8法检测不同浓度124005对人鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,计算IC50值,选择低于IC50的药物浓度作为增敏浓度,集落形成实验检测放射线加或不加124005以及124005+放射线组联合或不联合自噬抑制剂3-MA对CNE1细胞生存曲线的影响,间接免疫荧光法检测γ-H2AX观察DNA损伤修复和GFP-LC3转染CNE1中自噬标志物LC3的聚集,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡、免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3、PARP、Beclin 1和LC3-Ⅱ的表达,并检测AKT及下游信号通路的表达,探索Akt抑制剂124005放射增敏效应及其潜在机制。【结果】 124005对CNE1 IC50值为30.5 μmol/L。集落形成实验显示,DEF值放疗+8 μmol/L 124005持续用药组为1.92,放疗+12.5 μmol/L 124005用药72 h组为1.12,共聚焦显微镜观察显示124005联合放疗显著增加了CNE1细胞照射后细胞核内γ-H2AX焦点的聚集和转染GFP-LC3质粒的CNE1细胞内LC3的点状聚集、流式检测124005可以明显提高放射线诱导的CNE1细胞凋亡,凋亡率最高达52.9%。Western blot显示124005可以显著抑制放射后p-AKT及下游p-GSK-3?茁和p-PRAS40的表达,增加放射引起的cleaved caspase-3和cleaved PARP以及Beclin 1和LC3-Ⅱ的表达,应用3-MA可降低124005处理后LC3-Ⅱ的表达水平?放射+124005再联用3 mmol/L 3-MA组的DEF值为1.69,明显低于单纯放射+124005组(DEF=1.97)。 【结论】 124005通过对AKT以及下游通路的抑制,抑制DNA损伤修复,同时增加凋亡和自噬来起到对CNE1细胞株放射增敏的效应。     

吲哚-3-原醇对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

【目的】探讨吲哚-3-原醇(indol-3-carbinol,I3C)对人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2的作用及其机制。【方法】将对数生长期的CNE-2细胞分成空白对照组和I3C组。空白对照组细胞常规培养,I3C组细胞培养体系中加入I3C(50μmol/L)。各组细胞培养48 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;Annexin V-碘化丙啶/异硫氰酸荧光素(PI/FITC)检测细胞凋亡,Real-time PCR检测细胞中胞外信号调节激酶(ERK)和Bax、Bcl-2基因表达;Western blot法检测细胞中ERK、p-ERK、Bax、Bcl-2蛋白表达,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。【结果】I3C组与空白对照组比较,CNE-2细胞增殖率显著下降(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),Real-time PCR检测显示I3C组与空白对照组比较,ERK m RNA表达无显著性差异,但Bax m RNA表达水平显著增高(P<0.001),Bcl-2 m RNA表达水平显著下降(P<0.05)。Western blot法检测显示,I3C组与空白对照组比较,ERK总蛋白无明显变化(P>0.05),但p-ERK和Bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.05),Bax蛋白表达和Caspase3活性显著增加(P<0.05)。【结论】吲哚-3-原醇能通过抑制ERK信号传导通路激活而抑制CNE-2细胞增值和促进CNE-2细胞凋亡。     

Bc1-2与胃癌细胞凋亡的关系

目的　探讨癌基因Bc1- 2与胃癌细胞凋亡的关系 ,进一步研究胃癌发生的分子机制。方法　用免疫组化法检测 30例胃癌患者的癌组织中Bc1- 2的表达 ,并在光镜下对受检组织HE染色切片进行凋亡细胞计数。结果　Bc1- 2阳性胃癌的细胞凋亡指数明显低于Bc1- 2阴性胃癌。结论　Bc1- 2有抑制胃癌细胞凋亡的作用     

姜黄素对鼻咽癌细胞株CNE-2Z-H5增殖的影响

目的:研究姜黄素对人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5生长、增殖的作用。方法:应用姜黄素体外干预培养人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5,以绘制生长曲线、MTT及平板克隆形成实验观察姜黄素对CNE-2Z-H5细胞生长、增殖的作用。结果:细胞生长曲线、MTT及平板克隆形成实验均表明姜黄素对CNE-2Z-H5细胞生长、增殖具有抑制作用,并呈剂量效应关系。同时,超过一定浓度的姜黄素对CNE-2Z-H5细胞还具有细胞毒作用,可以体外杀伤CNE-2Z-H5细胞。结论:姜黄素可以有效抑制CNE-2Z-H5细胞的生长和增殖,具有明显的量效关系,可能对鼻咽癌的治疗具有一定价值。     

膀胱癌中p53突变及Bcl-2、PCNA表达与细胞的增殖和凋亡

目的　探讨膀胱癌中p5 3突变和Bcl 2、增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与细胞增殖、凋亡和临床病理学参数之间的关系。方法　SABC免疫组化检测 6 2例膀胱癌标本Bcl 2、p5 3和PCNA的表达。计算肿瘤细胞中PCNA阳性细胞百分比即增殖指数 (PI)。TUNEL法检测细胞凋亡 ,计算肿瘤细胞中凋亡细胞的百分比即凋亡指数 (AI)。结果　 6 2例膀胱癌中 ,5 0例 (80 6 % )发生 p5 3突变 ,其中G3 级的突变率为 91 3% ,较G1级 (72 7% )和G2 级(78 5 % )更多见 ,但差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;T2 期 p5 3突变率 (95 7% )较Ta 1期 (71 8% )高 (P <0 0 1)。14例 (2 2 5 % )发现有Bcl 2表达 ,Bcl 2表达阳性率在G3 级中明显高于G1和G2 级 (P <0 0 5 ) ,但与分期无相关性(P >0 0 5 )。Bcl 2表达与p5 3突变无关。PI为 17 3%～ 4 1 8% (平均为 2 2 4 % ) ,AI为 1 9%～ 3 5 % (平均为2 9% ) ,PI与肿瘤分级、分期相关 ,AI与肿瘤的分级明显相关。结论　p5 3突变与浸润性行为呈正相关。在膀胱癌中 p5 3和PCNA过表达可提示预后。随着肿瘤的进展 ,肿瘤细胞过度增殖可能伴有频繁的凋亡 ,但增殖指数的增加明显强于凋亡指数的增加。     

Bmi-1基因RNA干扰对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的构建针对Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响。方法利用慢病毒表达体系pHelperl．0／pHelper2．0／pGCL—GFP,成功构建针对Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA—Bmi-1,适时定量PCR（real—timePCR）检测稳定转染后胃癌细胞SGC-7901中Bmi-1mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTr法检测其增殖能力。结果稳定转染vshRNA—Bmi-1后SGC-7901细胞Bmi-1mRNA表达明显下降,总抑制效率达85％;癌细胞增殖减慢,凋亡率明显增加。结论构建针对Bmi-1基因的RNAi表达载体,成功转染胃癌细胞SGC-7901,可促进癌细胞凋亡,抑制其增殖能力。     

川芎嗪对人肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 分析不同浓度川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肾癌细胞系（786-O）增殖及凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法 体外培养786-O细胞,与不同浓度川芎嗪溶液（0.5mmol/L、5mmol/L）及溶剂组（DMSO组）作用24、48和72h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖率;细胞计数法检测药物作用48h后的细胞数量变化;DAPI染色观察药物作用48h后细胞核形态;半定量RT-PCR技术和Western blot法检测药物作用48h后凋亡相关基因在转录和翻译水平的改变。结果 随着川芎嗪药物浓度的增加,786-O细胞增殖率显著降低,凋亡率增加,细胞数量也显著减少,且胞核出现皱缩或肿胀,核裂增多;凋亡相关基因AIF、caspase-3在转录及翻译水平上均显著增强,无论与空白对照组还是溶剂对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 本研究证实TMP可以显著抑制人肾癌细胞系786-O细胞的增殖,促进其凋亡,为中药抗癌方面的研究提供实验室证据。     

古抑菌素A对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨去乙酰化转移酶抑制剂古抑菌素A(TSA)对人肝癌细胞株HepG2增殖及凋亡的影响.方法 体外培养人肝癌细胞株HepG2,以不同浓度的TSA(5、50、250、500、1 000、2 000 nmol/L)处理24 h后在倒置显微镜和透射电镜下观察HepG2形态的变化,用CCK-8法检测细胞增殖活性.用TUNEL法检测对照组(加等量DMSO)和500 nmol/L TSA组的细胞凋亡率,用免疫细胞化学法检测两组增殖凋亡调控相关基因caspase-3、bax和bcl-2的蛋白表达.结果 倒置显微镜下,经TSA处理的细胞增殖速度显著减慢;透射电镜下,HepG2出现凋亡早期改变.CCK-8法测定结果显示,对照组和不同浓度TSA(5、50、250、500、1 000、2 000 nmol/L)组HepG2的增殖活性分别为(0.637±0.032)、(0.552±0.016)、(0.499±0.031)、(0.393±0.007)、(0.321±0.026)、(0.277±0.010)和(0.275±0.015),组间比较差异有统计学意义(P＜0.01);且不同浓度的TSA对HepG2的增殖抑制作用有明显的剂量依赖关系.500 nmol/L TSA组细胞凋亡率显著高于对照组,且其凋亡相关蛋白caspase-3和bax的表达较对照组显著增强,差异有统计学意义(P＜0.05);而两组bcl-2的蛋白表达间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TSA可通过增加caspase-3、bax的蛋白表达,诱导细胞凋亡而对人肝癌细胞株HepG2具有增殖抑制作用.     

5-脂氧合酶与细胞增殖及凋亡

5-脂氧合酶是5-脂氧合酶代谢通路中催化花生四烯酸转化为白三烯和氢氧化物的关键酶,在恶性肿瘤和多种病变细胞中高表达。它可以通过分裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶以及磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B等信号转导途径促进肿瘤细胞增殖,抑制肿瘤细胞凋亡。除此之外,5-脂氧合酶还可通过多种方式调控呼吸系统、消化系统以及循环系统等病变细胞的增殖与凋亡。