生存素修饰的骨髓间充质干细胞抑制小鼠肺纤维化

目的 研究经尾静脉移植携带生存素(survivin)基因的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)对小鼠肺纤维化的影响.方法体 外构建培养经慢病毒转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)及生存素基因的C57BL/6小鼠BMSC-survivin以及经慢病毒转染GFP的C57BL/6小鼠BMSC,并应用流式细胞术比较2种细胞的体外凋亡率.6～8周龄C57BL/6小鼠48只,博莱霉素5 mg/kg气管内灌注制备小鼠肺纤维化模型.随机分为3组:BMSC-survivin组、BMSC组、模型组;造模24 h后,3组分别经尾静脉注射BMSC-survivin、BMSC和生理盐水.每组于第7、28天各处死8只小鼠.肺组织作病理学检查,免疫组织化学法检测肺表面蛋白A的表达;ELISA法测定血清中羟脯氨酸(Hyp)的含量;PCR法检测TGF-31和MMP-9 mRNA表达情况.结果 BMSC及BMSC-survivin细胞凋亡率分别为(14.466±1.953)％和(7.718±0.493)％,给予BMSC干预的小鼠肺病理改变较对照组轻,BMSC-survivin组、BMSC组、模型组肺组织羟脯氨酸含量第7天分别为(0.106 ±0.012)、(0.245±0.009) μg/mL和(0.324 ±0.002) μg/mL,第28天分别为(0.457 ±0.006) 、(0.752 ±0.012) μg/mL和(1.372±0.035) μg/mL;BMSC-survivin组、BMSC组、模型组肺组织SP-A含量第7天分别为(0.718 ±0.018)、(0.669 ±0.013)和(0.581±0.027),第28天分别为(0.433±0.012)、(0.372±0.039)和(0.277±0.013);各时间点,BMSC-survivin组TGF-β1 mRNA、MMP-9 mRNA含量较BMSC组和模型组低,BMSC组较模型组低(P＜0.05).结论 外源性的BMSC可以减轻肺纤维化,生存素基因能够抑制BMSC的凋亡,延长BMSC减轻肺纤维化的作用.     

C型钠尿肽对博莱霉素介导的小鼠肺纤维化的保护作用

目的 观察C型钠尿肽对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的抑制作用.方法 经气管注射博莱霉素制作肺纤维化小鼠模型,将实验动物分为三组,包括空白对照组、博莱霉素处理组(BLM组)和C型钠尿肽干预组(CNP组),于第1、3、7、14天进行肺泡灌洗,回收各组肺泡灌洗液并检测炎性细胞和IL-1β量;记录药物处理后小鼠死亡率;第14天处死小鼠,取肺组织制备病理切片后评价各组模型肺组织形态学变化,测定肺组织匀浆中羟脯氨酸含量.结果 BLM组的肺纤维化和炎症反应较明显,死亡率高;CNP组与BLM组相比,肺纤维化程度减轻,炎性细胞较少,组织羟脯氨酸含量减低,死亡率下降.结论 C型钠尿肽能减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,与干预炎症因子的产生及纤维化过程有关.     

特发性肺纤维化小鼠肺内IL-11及其受体表达

目的：观察肺纤维化小鼠肺组织白细胞介素-11(interleukin-11,IL-11)及其受体的表达。方法：以C57BL/6 小鼠为研究对象,随机分为对照组和博莱霉素(bleomycin,BLM)组(每组6只),BLM组采用一次性气管注射BLM复制 特发性肺纤维化小鼠模型,对照组注射50 μL PBS。21 d后取小鼠肺组织。采用HE染色观察小鼠肺组织形态改变,real- time PCR法检测小鼠肺组织IL-11及其受体的基因表达,Western印迹法和免疫组织化学染色检测小鼠肺组织IL-11受体 表达,ELISA法检测小鼠血清IL-11的含量。在细胞实验中,分别采用real-time PCR和Western印迹法检测转化生长因子 β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理后小鼠成纤维细胞中IL-11受体的基因和蛋白表达。结果：HE染色结果显 示BLM注射21 d后小鼠肺组织纤维化改变明显,肺组织IL-11 mRNA表达和血清IL-11含量上调(P<0.05);肺纤维化小鼠 肺内IL-11受体的基因和蛋白表达均明显上调(P<0.05)。细胞实验结果表明TGF-β1可明显升高小鼠成纤维细胞IL-11受 体的基因和蛋白表达(P<0.05)。结论：肺纤维化小鼠肺内IL-11及其受体表达上调,可能是肺纤维化发生发展的重要机 制之一。     

TGF-β1/Smad3在博来霉素肺纤维化大鼠中的作用

目的 通过Smad3特异性抑制剂(specific inhibitor of Smad3,SIS3)干预博来霉素肺纤维化大鼠,观察转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3蛋白表达情况,探讨TGF-β1/Smad3信号通路在肺纤维化中的作用.方法 选取健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为4组:生理盐水对照组(NS组),博来霉素组(BLM组),SIS3干预组(SIS3组),二甲基亚砜溶媒组(DMSO组),每组15只.BLM组、SIS3组和DMSO组气管内注射博来霉素溶液(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型;NS组以同样方法注入等量生理盐水;SIS3组大鼠腹腔内注射SIS3(2.5 μg/g)干预处理,BLM组注射等量生理盐水,DMSO组注射等量DMSO.各组于造模后第7、14、28天分别处死5只大鼠,行Masson染色观察各组肺组织胶原纤维差异.免疫组化检测各组TGF-β1、Smad3表达情况.结果 与NS组比较,BLM组、DMSO组大鼠肺组织出现明显纤维化,TGF-β1、Smad3表达明显增高;与BLM组、DMSO组相比,SIS3组大鼠肺纤维化程度减轻,TGF-β1、Smad3表达减少.结论 SIS3干预肺纤维化大鼠,能够减轻大鼠肺泡炎,降低肺纤维化程度;TGF-β1/Smad3信号通路在肺纤维化中可能起到重要作用.     

抗Ⅳ型胶原酶单链抗体scFv(3G11)联合顺铂的抗肿瘤活性

目的 研究抗Ⅳ胶原酶基因工程单链抗体scFv(3G11)联合顺铂的抗肿瘤效果.方法 明胶酶谱法、Western-blot法研究顺铂对肿瘤细胞分泌Ⅳ胶原酶蛋白的影响,MTT法、实验动物肿瘤模型研究scFv(3G11)与顺铂联合在体外和体内试验中的抗肿瘤效果.结果 顺铂可抑制肿瘤细胞分泌的Ⅳ胶原酶活性,scFv(3G11)与顺铂联合在体外试验中可抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,体内试验中对小鼠移植性肝癌H22有显著的抑制作用,药物相互作用指数(CDI值)＜1.结论 scFv(3G11)和顺铂联合应用对肝癌的治疗有协同作用.     

维生素D3对博来霉素诱发小鼠肺纤维化的影响

目的 探讨维生素D3( VitD3)对博来霉素( BLM)诱发小鼠肺纤维化的保护作用及其机制.方法 96 只成年C57BL/6J雄性小鼠(8周,24～26 g)随机分为如下8组:生理盐水对照组(对照组),单纯维生素D3组(VitD3组),博来霉素组(BLM 1 d、7 d和21 d组),维生素D3+博来霉素组(VitD3+ BLM 1 d、7 d和21 d组). BLM组经气管单次给予BLM,剂量为3 mg/kg,VitD3+BLM组:在BLM(3 mg/kg)处理前 30 min 及处理后每 24 h 经腹腔给予一次 1, 25 (OH)2D3,剂量为1 μg/kg,对照组和VitD3组给予等量的生理盐水或1,25(OH)2D3,小鼠分别于BLM或生理盐水处理后1 d、7 d和21 d剖杀并取肺组织.用HE染色法检测肺病理改变,用免疫组化检测肺3-硝基酪氨酸水平,RT-PCR检测肺氧化及抗氧化酶 mRNA 水平.结果 HE 染色提示BLM处理引起肺组织破坏及间质纤维化,1,25(OH)2D3显著减轻BLM诱导的肺组织破坏及间质纤维化. RT-PCR提示BLM引起肺组织氧化酶基因表达上调( P＜0.05),抗氧化酶基因表达下调(P＜0.05). 1,25(OH)2D3处理显著抑制BLM引起的肺脏氧化酶基因表达上调及抗氧化酶基因下调(P＜0.05).免疫组化结果提示,1,25(OH)2D3明显减少BLM所致肺3-硝基酪氨酸残留.结论 维生素D3 可能通过抗肺氧化应激作用减轻BLM诱发的肺组织破坏及间质纤维化.     

姜酮在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的保护作用及机制研究

目的 观察并探究姜酮(zingerone, ZO)在博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化中的疗效及潜在分子机制。方法 将40只雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为4组,依次为:对照组、模型组、低剂量ZO治疗组和高剂量ZO治疗组。给予小鼠单次气管内注射BLM (5mg/kg)建立肺纤维化模型。低剂量ZO治疗组和高剂量ZO治疗组小鼠给予不同浓度ZO灌胃处理。HE染色及Masson染色观察肺病理损伤及纤维化状况;试剂盒检测肺组织氧化应激水平;碱水裂解法检测肺组织羟脯氨酸的含量;Western blot法检测肺组织中collagen Ⅰ、α-SMA及NRF2的蛋白表达状况。结果 与对照组比较,模型组小鼠出现了明显的肺病理损伤及纤维化,同时氧化应激明显升高而NRF2蛋白表达明显降低;ZO预处理可明显减轻BLM所致的小鼠肺纤维化和氧化应激,同时上调NRF2蛋白表达。结论 姜酮具有减轻博来霉素小鼠肺纤维化的潜力,其机制与NRF2的激活有关。     

胚胎干细胞治疗博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的研究

 目的 研究静脉注射胚胎干细胞（ESC）对肺纤维化小鼠的治疗作用。方法 气管内滴注博来霉素8.5mg/kg制作C57/BL6雌性小鼠的肺纤维化模型。治疗组(n=20)静脉注射S8小鼠ESC，对照组(n=10)注射生理盐水。治疗组又分为单次治疗(n=10)和重复治疗(n=10)，两者均在造模后1h静脉注射ESC，重复治疗组在造模后3d再次静脉注射ESC。记录小鼠的生存时间，测定小鼠肺组织的羟脯氨酸含量，肺脏病理学观察炎症状态。利用秩和检验统计3组小鼠生存时间，方差分析3组小鼠肺羟脯氨酸含量的差异。结果 接受干细胞治疗后，肺纤维化模型小鼠的生存时间(d)延长，重复治疗组更加明显（对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为7.8±2.8、8.4±3.8、13.5±5.6，P<0.01）；肺羟脯氨酸含量(μg/mL)降低 [对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为（8.59±1.14）、（8.23±1.09）、（5.51±0.39），P<0.01）]；肺脏病理检查显示肺组织炎症程度降低，结构破坏减轻。结论 静脉注射胚胎干细胞可以减轻博来霉素诱导的小鼠肺部炎症和肺纤维化，延长肺纤维化小鼠的生存时间。     

抗Ⅳ型胶原酶单链抗体scFv(3G11)在大肠杆菌的表达及其抗肿瘤活性

目的制备抗IV型胶原酶单链抗体(scFv),用于构建小型化抗肿瘤抗体靶向药物。方法构建重组表达质粒pET-scFv,并在大肠杆菌进行诱导表达。SDS-PAGE和Western-blot法对表达蛋白进行鉴定,分步透析复性。ELISA法、免疫细胞化学染色法检测scFv对靶抗原和肿瘤细胞的结合活性,明胶酶谱法检测对IV型胶原酶活性的抑制作用。Boyden Chamber法测定对肿瘤细胞侵袭的影响。动物试验肿瘤模型检测在小鼠体内的抗肿瘤活性。结果表达的单链抗体scFv(3G11)以包涵体的形式存在,经变性和复性后,对抗原IV型胶原酶和肿瘤细胞的免疫反应呈阳性,抗体亲和常数为6×107/mol/L。不仅可以抑制HT-29细胞和HT-1080细胞分泌的Ⅳ型胶原酶活性,还可以体外抑制肿瘤细胞的侵袭,抑制程度与浓度呈剂量依赖关系。scFv(3G11)4mg/kg对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤率为49.4%(P<0.01)。结论scFv(3G11)保留了完整抗体的抗原结合和抑制活性,能够与肿瘤细胞特异性结合,并在小鼠体内有中度抑瘤效果。scFv(3G11)的相对分子质量远小于完整抗体,可作为肿瘤靶向药物的理想载体。     

丙酸氟替卡松吸入对肺纤维化大鼠MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的 探讨吸入丙酸氟替卡松对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)表达的影响.方法 Wistar 大鼠45 只,随机分成博莱霉素模型组(BLM组)、生理盐水空白对照组(NS 组)和丙酸氟替卡松干预组(FP 组),各15 只.BLM组和FP组气管内灌注BLM诱导肺纤维化,NS 组在相同条件下灌注生理盐水,气管内灌注BLM后,第0～6 天FP组给予丙酸氟替卡松雾化吸入,其余组在相同条件下给予生理盐水雾化吸入.各组分别于第7、14、28 天随机处死5只大鼠,收集肺组织作切片,行苏木精-伊红及Masson 染色,判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度;行RT-PCR检测肺组织中MMP-2 mRNA及TIMP-1 mRNA的表达;行免疫组化染色,测MMP-2和TIMP-1在肺组织的表达水平;用比色法分别检测各组羟脯氨酸(HYP)含量.结果 与NS 组相比,BLM 组第7、14、28 天肺组织的肺泡炎和肺纤维化程度明显加重,HYP含量明显升高(P＜0.05);与BLM组相比,FP组第7、14 天肺组织的肺泡炎程度明显减轻(均P＜0.05),第28 天肺纤维化程度明显减轻(P＜0.05);FP组各时间点HYP含量均较BLM组明显降低(均P＜0.05);MMP-2 mRNA及TIMP-1 mRNA、MMP-2及TIMP-1在NS组肺脏中有微弱表达,灌注BLM后它们的表达均增强,FP 组第7、14、28 天MMP-2 mRNA、TIMP-1 mRNA、MMP-2及TIMP-1的表达均较BLM组降低(均P＜0.05);BLM组MMP-2 mRNA/TIMP-1 mRNA及MMP-2/TIMP-1均较NS组减低,而第28天FP组中MMP-2 mRNA/TIMP-1mRNA及MMP-2/TIMP-1均较BLM组升高.结论 丙酸氟替卡松雾化吸入可减轻BLM致肺纤维化大鼠的肺泡炎和肺纤维化程度,其干预机制可能为降低肺组织内MMP-2及TIMP-1的表达,并在一定程度上调整MMP-2/TIMP-1的比值.     

罗格列酮对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的影响

目的 采用博莱霉素(BLM)腹腔注射诱导大鼠肺纤维化的模型,探讨过氧化物体增殖活化受体γ激动剂(PPAR-γ)--罗格列酮对肺纤维化的治疗作用.方法 经腹腔给予BLM致大鼠肺纤维化模型,将实验大鼠随机分为3组,即对照组、模型组(BLM组)、干预组(罗格列酮组).于造模完成后第21天处死大鼠,取肺组织制备病理切片,行HE,Masson染色后评价各组模型肺组织形态学变化,测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)含量.结果 BLM组的肺组织炎症反应较明显;罗格列酮组与BLM组相比,肺组织HYP下降,肺纤维化程度减轻.结论 罗格列酮能通过活化PPAR-γ信号通路减轻大鼠肺纤维化,机制与干预炎症因子产生及纤维化过程有关.     

柴胡皂甙d对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的治疗作用及机制研究

目的 探讨柴胡皂甙d(SSd)抗小鼠肺纤维化的作用及其机制.方法 180只小鼠按随机数字表法分5组.其中4组为博来霉素(BLM)诱导肺纤维化模型组(气管内注射BLM 5 mg/kg),分为单纯造模组(BLM组)、地塞米松(DXM)干预组(DXM组)、SSd干预组(SSd组)和SSd+DXM联合干预组(SSd+DXM组),每组40只;造模后1 h,后3组小鼠分别腹腔注射DXM 5 mg/kg(0.1 ml)、SSd 1.8 mg/kg(0.18 ml)、SSd+DXM(0.1ml+0.18ml),BLM组腹腔注射0.28 ml生理盐水,每天1次,连续28 d.另1组为正常对照组(NC组,20只),同时间按同样方法注入0.28 ml生理盐水.给药第3、7、14、28天每组各处死5只小鼠,取肺组织行常规组织病理学检查,检测肺组织中羟基脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;取外周血检测SOD和MDA含量.造模的4组每组各20只小鼠用于观察自然生存状况.结果 SSd可明显提高肺纤维化小鼠存活率(SSd组和SSd+DXM组存活率均为80.0%,BLM组为50.0%,P<0.05),并显著减轻小鼠肺泡炎和肺纤维化程度.DXM组、SSd组和DXM+SSd组肺组织HYP含量给药第14、28天明显低于BLM组(P<0.05),血清及肺组织MDA含量给药第3、7、14天明显低于BLM组(P<0.05,P<0.01),血清SOD含量给药第3、7、14天、肺组织SOD含量给药第3、7天明显高于BLM组(P<0.05,P<0.01).结论 SSd有很明显的抗肺纤维化作用,其作用机制可能与抗脂质过氧化作用有关.     

喜炎平注射液对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的作用及机制研究

目的 观察喜炎平注射液对博莱霉素(bleomycin,BLM)所致小鼠肺纤维化的作用并探讨可能的机制.方法 将昆明小鼠随机分为对照组、喜炎平(XYP)组、博来霉素(BLM)模型组、BLM+XYP组.经气管内1次性灌注BLM复制肺纤维化动物模型,治疗组造模后同时予尾静脉注射喜炎平直至第28天实验结束,药物干预后第7天、28天分别处死动物,第7天测定肺湿干重比(W/D),髓过氧化物酶(MPO)活性,苏木精-伊红(HE)染色观察肺泡炎症,第28天测定羟脯氨酸(HYP)含量及前Ⅰ型胶原蛋白mRNA(procollagenl mRNA)表达水平,Masson染色观察肺纤维化程度.结果 第7天,BLM+ XYP组小鼠较BLM组的肺泡炎程度明显减轻,肺W/D及MPO活性降低(P＜0.05),第28天,BLM+ XYP组小鼠肺组织HPY含量、procollagen I mRNA表达水平较BLM组明显降低(P＜0.05),Massor染色显示胶原沉积减少,肺纤维化程度减轻.结论 喜炎平对博莱霉素所致小鼠肺纤维化具有一定的干预作用,其机制可能与其抗炎作用有关.     

阻断白介素-17对博来霉素诱导小鼠肺纤维化及肺组织Fas/FasL表达的影响

目的：探讨阻断白介素-17(interleukin-17,IL-17)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导小鼠肺纤维化、细胞凋亡和肺组织Fas/FasL表达的影响。方法：80只C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为假手术组(SG)、BLM组(BG)、中和抗体组(NG)和抗体对照组(IG),经小鼠气管内一次性注入BLM诱导肺纤维化的形成,假手术组则给予等量生理盐水。NG和IG小鼠分别从造模前1天每隔3 d通过尾静脉给予抗鼠IL-17单克隆中和抗体或同型对照抗体,SG和BG则给予等量PBS。于造模后28 d,处死各组小鼠,取肺组织,通过Masson染色及羟脯氨酸含量测定评价各组小鼠肺纤维化程度,用流式细胞仪和免疫组织化学法分别检测肺组织细胞凋亡和Fas/FasL的表达情况。结果：与BG和IG相比,NG小鼠肺纤维化程度明显减弱(P＜0.01),羟脯氨酸含量显著下降(P＜0.01),细胞凋亡率和Fas/FasL表达亦显著降低(P＜0.01)。结论：内源性IL-17被阻断后,能显著改善BLM诱导的肺纤维化,降低细胞凋亡率和Fas/FasL表达,表明阻断IL-17对BLM诱导的小鼠纤维化改善与Fas/FasL凋亡通路有关。     

高迁移率族蛋白B1和α平滑肌肌动蛋白在博莱霉素诱导肺纤维化中的表达

目的 检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在博莱霉素(BLM)致小鼠肺纤维化模型肺内的表达水平,探讨HMGB1在肺纤维化发病机制中的作用.方法 取20只4～6周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为BLM组和生理盐水(NS)对照组,每组10只.分别向气管内灌注BLM(3 mg/kg)和NS,10 d后处死小鼠.应用RT-PCR法检测两组肺组织HMGB1和α-SMA的mRNA表达水平,应用免疫组织化学检测两组肺组织中HMGB1和α-SMA的蛋白表达水平.结果 RT-PCR半定量和免疫组织化学半定量分析结果显示,BLM组HMGB1的mRNA和蛋白表达均较NS对照组显著增加(0.61±0.08比0.15±0.02,13.12±1.33比7.92±1.10,P均<0.01);BLM组α-SMA的mRNA和蛋白表达均较NS对照组显著增加(0.89±0.12比0.60±0.07,13.66±1.01比8.18±1.33,P均<0.01).结论 在BLM诱导的肺纤维化中肺组织的HMGB1和α-SMA表达增加.肺纤维化病理过程可能与HMGB1表达增加并活化α-SMA的表达有关.     

PEPT2 mRNA在博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织表达研究(摘要)

目的:研究PEPT2(peptide transporter 2)mRNA在肺纤维化大鼠肺组织的表达.方法:(1)实验动物与分组:健康SD大鼠56只(200±20g),雌雄各半,随机分为3组:①正常对照组(n=10),不作任何处理;②生理盐水组(n=10),气管内一次性滴入0.2 mL生理盐水,14 d后放血处死,检测羟脯氨酸含量;③博莱霉素(BLM)组(n=36),将BLM(日本化药株式会社)按5mg/kg溶于生理盐水中配成浓度为0.5%的BLM溶液,气管内一次性滴入0.2 mL复制肺纤维化模型,分别于给药后7 d、14 d和28d检测羟脯氨酸含量.     

博莱霉素静脉注射制备小鼠肺间质纤维化模型

目的经尾静脉一次性注射博莱霉素(BLM)复制小鼠肺间质纤维化动物模型,并观察模型的肺组织病理学变化。方法8周龄雌性C57BL/6小鼠66只,随机分为BLM80组18只、BLM150组19只、BLM300组19只和对照组10只,分别经尾静脉一次性注射BLM80、150、300 mg/kg和生理盐水。结果①BLM80组和BLM150组小鼠最低体重分别为BLM注射前的84%和65%。②BLM80组、BLM150组、BLM300组和对照组小鼠的生存率分别为:100%、43%、0和100%。③BLM150组BLM注射后14 d、28 d,右肺羟脯氨酸含量分别为738±46 nmol、886±83 nmol,与对照组(360±75 nmol)比较差异均有显著性意义(P<0.01)。④BLM150组小鼠BLM注射28 d,在胸膜下及血管周围形成广泛、稳定、明显的纤维化改变。BLM150组与BLM80和对照组比较,肺纤维化病理评分分别呈明显增高(P值均小于0.001)。结论C57BL/6小鼠经尾静脉一次性注射BLM150mg/kg可以制备肺间质纤维化动物模型。     

虾青素通过TGF-β1介导的Smads/ERK通路抑制肺纤维化

目的 研究虾青素(astaxanthin,AX)对博莱霉素(bleomycin,BLM)所致SD大鼠肺纤维化的干预作用及机制.方法 SD雄性大鼠32只,体质量(200±20)g,采用随机数字表法分为Sham组(假手术组)、AX组、BLM组和AX+ BLM组.经气道注入5 mg/kg的BLM(BLM组和AX+ BLM组)或生理盐水(Sham组)后,每天灌服虾青素(2 mg/kg)油溶液(AX组和AX+ BLM组)或植物油(BLM组)连续14 d,最后一次给药24 h后取材.检测肺系数,肺组织进行HE染色及Masson染色,显微镜下观察大鼠肺部炎症及纤维化程度;碱水解法检测羟脯氨酸含量;免疫组化法观察肺组织α-SMA蛋白表达情况;酶联免疫夹心法(ELISA)检测血清中TGF-β1水平;Western blot法检测Smad2/3及ERK1/2蛋白.结果 与Sham组及AX组相比,BLM组肺损伤严重,有明显的肺纤维化病灶形成;与BLM组比较,AX+BLM组肺炎症程度及纤维化程度明显减轻(P＜0.01),肺组织胶原蛋白沉积减少,羟脯氨酸含量明显降低(P＜0.01),α-SMA蛋白表达减少,TGF-β1水平也明显降低(P＜0.05),同时Smad2/3蛋白及ERK1/2蛋白磷酸化水平明显下降.结论 虾青素能明显抑制BLM诱导的肺纤维化,其作用机制可能与降低TGF-β1水平,从而下调Smads/ERK通路有关.     

重组腺病毒Ad-HGF抑制博来霉素致大鼠肺纤维化的作用

目的:观察携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒(Ad-HGF)对博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化的抑制作用,为基因防治肺纤维化探索有效途径. 方法: BLM气管内滴注0.5 mL(2 mg)制作大鼠肺损伤模型60只,分为Ad-HGF治疗组(A组)、Ad-GFP治疗组(B组)和模型对照组(C组),各20只. 造模次日A组给予1×109 pfu Ad-HGF,B组给予1×109 pfu Ad-GFP,C组给予0.5 mL生理盐水灌注治疗;于14 d处死动物,检测肺组织匀浆中羟脯氨酸含量;做石蜡切片,用1 g/L苦味酸天狼猩红染色,偏振光显微镜观察胶原及其类型,并对切片中I型胶原进行半定量评估. 结果: Ad-HGF组羟脯氨酸含量(1.91±0.16) mg/g较Ad-GFP组(3.27±0.43) mg/g和模型对照组(3.04±0.26) mg/g低(P<0. 05);肺组织切片中的I型胶原Ad-HGF组(2.12±0.61)明显较Ad-GFP组(3.17±0.56)和模型对照组(3.38±0.66)稀少(P<0.05). 结论: 重组腺病毒Ad-HGF对肺损伤后纤维化有抑制作用.     

人参茎叶总皂苷对肺纤维化小鼠肺组织中MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用

目的:观察人参茎叶总皂苷对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的肺纤维化小鼠肺组织中MMP-2、MMP-9蛋白质表达的影响。方法:将60只BALB/c小鼠随机分为假手术组、模型组、人参茎叶总皂苷(TG-40,80,160 mg·kg~(-1))组及醋酸泼尼松(prednisone 5 mg·kg~(-1))组,每组10只,采用气管内注入博来霉素的方法建立肺纤维化模型,制模次日开始连续灌胃给药28天。计算小鼠肺系数,右肺下叶进行HE及Masson染色,观察小鼠肺组织病理形态变化及胶原沉积情况,采用Western Blot检测肺组织MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果:与假手术组相比,模型组小鼠的肺系数明显升高,病理形态呈现明显的肺泡炎及肺纤维化,存在大量的胶原沉积,MMP-2、MMP-9蛋白质表达显著上调。给予人参茎叶总皂苷及醋酸泼尼松治疗可降低肺纤维化模型小鼠的肺系数,不同程度改善小鼠肺泡炎及肺纤维化的程度,并能够下调MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平。结论:人参茎叶总皂苷可能通过抑制MMPs中MMP-2及MMP-9蛋白质的表达而改善BLM诱导的小鼠实验性肺纤维化。