熊胆对HL-60细胞系的分化诱导作用

本文首次报道熊胆对人早幼粒白血病细胞系HL-60的分化诱导作用.HL-60细胞(1.6×10~5/ml)在含有熊胆(400μg/ml)的RPMI 1640培养液中37℃孵育5天左右,80%以上的细胞分化为具有单核-巨噬细胞特征的细胞.细胞增殖明显受到抑制.分化的细胞具有还原硝基蓝四唑和贴壁能力,显示吞噬乳胶颗粒的功能,并基本失去自发形成集落的能力.细胞的α-萘酚醋酸酯酶(α-NAE)和酸性磷酸酶(ACP)活性显著增加.     

猪胆汁酸钠对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制及分化诱导作用

猪胆汁酸钠是人工牛黄的主要成分,临床用于治疗急性胃肠炎、菌痢、百日咳,急性传染性肝炎、慢性气管炎、单纯性消化不良以及预防白喉等.近年已经在实验大鼠证实口服胆酸可以克服摄入维甲酸(retinoic acid,RA)引起的副作用.鉴于RA是髓系白血病细胞分化的生理性诱导剂,临床试用表明口服RA对急性早幼粒细胞白血病有较满意疗效,我们设想胆汁酸与RA联合用药可能对早幼粒白血病的治疗是有意义的.本文报道体外试验结果表明猪胆汁酸钠明显抑制HL-60细胞增殖(IC_(50)400μg/ml),并诱导HL-60细胞向终末方向分化;诱导后的HL-60细胞具有嗜中性粒细胞和单核/巨噬细胞的某些形态、细胞化     

HL—60细胞体外诱导分化过程中全细胞氨基酸含量的分析

本文报道猪胆汁酸钠体外诱导人早幼粒白血病细胞系 HL-60细胞分化过程中全细胞氨基酸含量的变化,并与生理性诱导剂维生素 A 酸体外诱导 HL-60细胞分化过程中全细胞氨基酸水平进行了比较。结果表明,经猪胆汁酸钠体外诱导分化的 HL-60细胞较未分化的 HL-60细胞各种氨基酸水平普遍有不同程度的升高,经维生素 A 酸体外诱导分化的 HL-60细胞则未见这种变化,提示这两种分化诱导剂的生化作用点可能不同。     

维甲酸诱导白血病细胞分化对WT1基因表达的影响

为了解WT1基因的表达与白血病细胞分化的关系以及WT1基因在白血病细胞分化中的作用。本文采用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL-60、K562细胞系分化,然后应用NBT还原试验和RT-PCR方法分别测定细胞分化程度笔WT1基因表达的变化。结果发现,ATRA作用5天后可以诱导HL-60细胞分化,WT1的表达随着HL-60细胞的分化而降低;ATRA对K562细胞无诱导分化作用。其WT1的表达也无显著变化。提示WT1基因的表达与造血细胞分化呈负相关,与白血病细胞的分化有密切联系。     

抑白生血糖浆对HL-60细胞增殖分化的影响

目的 观察抑白升血糖浆（YBSX）含药血清对白血病HL-60细胞增殖分化的影响。方法 正常大鼠ig给予YBSX后取血制备含药血清。体外传代培养HL-60细胞,观察测定细胞生长情况。通过NBT还原试验、酸性磷酸酶（ACP）和非特异性酯酶（α-NAE）活性测定观察细胞分化情况。利用同位素掺人方法检测细胞内DNA和蛋白质合成速率。结果 YBSX含药血清对第一代HL-60细胞增殖影响不明显;对第二代、第三代细胞生长具有明显抑制作用,细胞增殖率呈进行性下降。YBSX含药血清明显升高HL-60细胞NBT还原率和α-NAE阳性细胞数,增强ACP活性（P〈0．01）;降低细胞内^3H-TdR和^3H-Leu掺人量。结论 YBSX可抑制HL-60细胞增殖,诱导其向成熟细胞分化。     

脱氧佛波醇乙酸酯通过激活PKC/ERK通路诱导急性髓系白血病细胞分化

目的研究脱氧佛波醇乙酸酯（12-deoxyphorbol 13-acetate,Prostratin,DPA）对人急性髓系白血病（AML）细胞株HL-60、NB4和U937细胞分化的影响,并证明其通过激活蛋白激酶C/胞外信号调节激酶（PKC/ERK）通路诱导细胞分化。方法 1μmol/L DPA作用HL-60细胞3 d后观察细胞形态的改变;不同剂量的DPA作用HL-60、NB4、U937细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞分化表面标志变化;Western印迹检测ERK蛋白磷酸化的改变;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）抑制剂和PKC抑制剂对细胞分化表面标志的影响;Western印迹检测MEK抑制剂和PKC抑制剂对ERK蛋白磷酸化的影响。结果 DPA可诱导HL-60细胞出现白血病细胞分化的形态。DPA剂量依赖性地诱导AML细胞CD11b表达。DPA在诱导分化剂量范围内可剂量依赖性地引起ERK磷酸化。MEK化学小分子抑制剂U0126可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达;PKC非选择性抑制剂GFX可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达。结论 DPA其通过激活PKC/ERK通路能够明显诱导白血病细胞分化。     

TPA及维生素A酸对人早幼粒白血病细胞系的分化诱导作用

实验观察了HL-60细胞的一些生物学特点及TPA和RA的分化诱导作用。HL-60细胞在液体培养中呈单个细胞悬浮生长,倍增时间25～31h,饱和密度20×10~5/ml左右。HL-60细胞形态类似早幼粒细胞,具有早幼粒细胞的细胞化学特征,NBT还原反应阴性或弱阳性。HL-60细胞在软琼脂培养中能自发形成集落。TPA诱导HL-60分化为巨噬样细胞。TPA与RA的分化诱导作用均与药物浓度有依赖关系,有效浓度分别为0.162～162nM和1～1000nM。TPA与RA诱导HL-60细胞分化的同时,对细胞增殖有抑制作用。     

三氧化二砷对白血病细胞凋亡和分化的双向诱导作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株NB4,HL-60细胞凋亡和分化的双向诱导作用。方法:细胞分化抗原用相应抗体标记,用PI标记DNA,并用流式细胞仪检测。结果:0.6μmol·L-1As2O3作用72h能诱导NB4发生44.9%的凋亡,提高其浓度至8.1μmol·L-1,也能诱导HL-60发生62.3%凋亡,低浓度0.1～0.3μmol·L-1As2O3对NB4、0.1～2.7μmol·L-1As2O3对HL-60细胞无诱导分化作用,对分化抗原表达无影响。只有当浓度增至0.6和8.1μmol·L-1并作用较长时间才能使两种细胞分化抗原表达增加。结论:低浓度As2O3无促分化作用,较高浓度作用较长时间才显示诱导凋亡和一定的促分化作用。     

PHA—LCM净化骨髓混合培养中HL—60细胞的实验研究

植物血凝素刺激的人外周血白细胞条件培养液(PHA-LCM)可以在体外诱导 HL-60细胞分化为单核-巨噬细胞。在混合的人骨髓细胞与 HL-60细胞悬液中加入PHA-LCM,有明显的选择性抑制 HL-60细胞生长的效果,从而,为在自体骨髓移植中体外净化髓系白血病细胞提供了一个实验研究的模型。     

树突状细胞体外产生特异性抗白血病免疫应答的研究

 目的探讨白血病患者外周血树突状细胞(DCs)在体外诱导抗白血病免疫反应.方法用急性早幼粒细胞白血病(M3)细胞株(HL-60)的肿瘤相关抗原(TAA)激活DCs,以粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)联合刺激M3患者外周血DCs,在体外诱导自体混合T淋巴细胞增殖.分化为细胞毒性T细胞(CTL).结果该CL及其上清液对HL-60白血病细胞有高效、特异的杀伤作用,而对慢性粒细胞白血病细胞株(K 562)及肝癌细胞HepG2仅有微弱的杀伤作用.结论DCs能有效提呈肿瘤抗原并诱导出显著的杀伤白血病细胞的免疫反应,可望成为有效的肿瘤特异性免疫治疗新途径.     

TPA 对人早幼粒白血病细胞系 HL-60诱导分化的超微结构研究

对经 TPA 诱导分化的人早幼粒白血病细胞系 HL-60细胞在透射和扫描电镜下进行了观察。TPA 诱导后 HL-60细胞向巨噬样细胞分化,在诱导后1d 大部分细胞已在细胞形状表面构型和突起等方面出现了变化。细胞核、细胞膜及线粒体等细胞器均有改变。TPA 的亲脂性与细胞膜相结合有可能改变细胞受体的构型。推测线粒体等的明显变化将导致细胞的能量代谢、蛋白质合成活动的障碍,而且可能通过抑制肿瘤细胞的能量代谢和蛋白质合成系统促使白血病细胞发生退变和死亡。     

茯苓素对人白血病细胞系HL—60增殖的影响

本文报告了茯苓素对人急性早幼粒白血病细胞系HL-60增殖的抑制作用.经25～100μg/ml茯苓素处理1天,HL-60细胞DNA合成能力明显减弱.药物作用2天后,细胞计数明显少于对照组.这种效应随药物浓度的加大及作用时间的延长而增强.半数抑制浓度为58.4μg/ml.抑制作用为不可逆性.茯苓素处理4天后,HL-60细胞自发形成集落的能力明显减弱.细胞周期分析结果,加药后G_0/G_1期细胞明显增多,S和G_2+M期细胞减少.     

重组腺病毒介导反义c-myc诱导HL-60细胞粒系分化的作用

目的：研究重组反义c-myc腺病毒（Ad-AS-c-myc）诱导人急性早幼粒HL-60细胞系粒系分化及作用分子机制。方法：采用重组腺病毒Lac-Z（Ad-LacZ）及Ad-As-c-myc联合硫酸鱼精蛋白转染HL-60细胞，X-gal染色判断转染效率。采用形态学、RT-PCR、流式细胞仪、四唑氮蓝（NBT）还原试验、非特异酯酶染色等方法进行研究。结果：Ad-AS-c-myc能抑制HL-60细胞C-myc基因在转录水平的表达。被转染HL-60细胞在形态上趋向成熟粒细胞，Ad-AS-c-myc使HL-60细胞周期G0／G1阻滞，过氧化物酶、非特异性酯酶活性增强。结论：Ad-AS-c-myc对HL-60细胞具有诱导粒系分化作用。其生物学作用与HL-60细胞c-myc的表达受抑、HL-60细胞出现一些成熟粒细胞的生理功能有关。     

抑制端粒酶活性对1,25-（OH）2D3诱导肝癌细胞增殖分化的影响

目的：观察抑制端粒酶活性对1,25-（OH）2D3诱导肝癌细胞增殖分化的影响作用。方法：经脂质体介导,将反义端粒酶RNA转染肝癌细胞系SMMC7721细胞。转染细胞扩大培养后,添加1,25-（OH）2D3分别作用于各实验组细胞后,采用MTT法、平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长;光镜和电子显微镜检测细胞分化形态改变。结果：对照组与转染组的吸光度值分别为1.685和0.686,说明转染反义端粒酶RNA可显著抑制肝癌细胞的端粒酶活性;而在抑制肝癌细胞端粒酶活性的基础上,1,25-（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖和诱导细胞分化的作用得以显著的增强。形态学检查也进一步证实存在诱导分化改变。结论：在降低细胞端粒酶活性的基础上,1,25-（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞分化的作用得到增强。     

7-乙酰基-鲁山冬凌草甲素诱导HL-60细胞周期阻滞及其机制研究

目的研究7-乙酰基-鲁山冬凌草甲素（7-acetyl-lushanrubescensin A,ARA）对人急性髓系白血病细胞株HL-60的细胞增殖和细胞周期的影响,并对其作用机制进行探讨。方法MTT法检测ARA对HL-60细胞增殖的影响;在ARA作用HL-60细胞不同时间后,流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测周期相关蛋白Rb、p（phospho）-Rb（ser795）、p-Rb（ser807/811）,细胞周期蛋白（cyclin）D1、cyclin D3、cyclin E2、CDK4及CDK6的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平。结果ARA剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖,48h的IC50为（1.96±0.08）μmol/L。ARA诱导HL-60细胞发生明显的细胞周期G0/G1阻滞,具有时间和浓度依赖性。机制研究显示ARA引起Rb总蛋白出现移行条带,并抑制p-Rb（ser795）位点磷酸化,显著抑制CDK4的蛋白表达,并部分降低cyclin D3和cyclin E2的表达水平,但对cyclin D1和CDK6的作用则不明显。此外,ARA显著增加HL-60细胞内ROS水平,而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）能够阻断ARA诱导的ROS升高及细胞周期阻滞。结论ARA能够明显抑制白血病细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,其机制可能与抑制Rb活化和降低cyclin D3、cyclin E2和CDK4的表达水平相关,并且ROS在ARA介导的生物学效应中可能有重要作用。     

二烯丙基二硫对白血病细胞株增殖的影响

 目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对HL-60白血病细胞株的作用.方法采用MTT法观察DADS对体外培养的HL-60细胞的生长抑制;应用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测药物作用前后白血病HL-60细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量.结果DADS对HL-60细胞具有明显的生长抑制效应,其对HL-60细胞的生长抑制率与药物浓度、时间有明显依赖关系,DADS(作用细胞72 h)浓度从0.625μg/ml增至20.0μg/ml,其对HL-60细胞的生长抑制率由16.7%增至71%,各实验组随时间增加抑制率明显增加(P＜0.01);HL-60细胞中均有VEGF蛋白的分泌,与空白对照组相比DADS 3个浓度组(0.625,1.25,2.5 μg/ml)作用HL-60细胞72 h均能下调VEGF蛋白的分泌(P＜0.01).结论DADS能明显抑制HL-60细胞的增殖;DADS可能通过抑制HL-60细胞VEGF的分泌发挥抗白血病的效应.     

齐墩果酸对hiPSCs衍生心肌细胞成熟的促进作用及机制

目的 探讨齐墩果酸(OA)促进丙酮酸激酶(PK)同工型转换在人诱导多能干细胞(hiPSCs)衍生心肌细胞(hiPSC-CMs)成熟过程中的作用.方法 通过时序性激活和抑制Wnt信号通路,诱导未分化hiPSCs向心肌细胞分化,在诱导第19天将hiPSC-CMs分为空白对照组(添加B27的RPMI 1640培养基)、DMS...     

维生素A酸诱导HL-60细胞时细胞功能的变化及膜表面抗原表达的变化

维生素A酸(RA)能够诱导人的急性早幼粒白血病细胞系HL-60向成熟粒细胞方向分化.临床上RA已作为治疗急性早幼粒白血病及前白血病的药物.分化后,细胞的生长状况、细胞功能及表面抗原的表达均发生变化.我们采用NBT还原反应及吞噬发光实验观察诱导前后细胞功能的变化.并采用间接免疫荧光的方法,使用流式细     

人胚胎低分子肿瘤抑制物的组织分布研究

我们实验室以往的工作表明,在人胎儿肝脏组织中存在着一类抑制人白血病细胞系(HL-60)细胞增殖的低分子量活性成分。这种天然肿瘤抑制物对肿瘤细胞具有一定的选择性抑制作用。在研究人胎肝中低分子肿瘤抑制物的基础上,     

洛伐他汀对HL-60细胞Fas抗原表达的影响

目的：观察洛伐他汀（LOV）对HL-60细胞Fas抗原表达的影响，探讨其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的可能分子机制。方法：采用流式细胞仪检测HL-60细胞的细胞周期相分布，细胞凋亡率，Fas抗原表达水平。结果：4、8、16μmol／L LOV处理HL-60细胞48h后，G0／G1期细胞增多、细胞凋亡百分率增加、增殖指数降低、Fas抗原的平均荧光强度增加，与剂量呈正相关。结论：LOV对HL-60细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用，上调节Fas抗原表达可能是其分子机制之一。