玉米中黄曲霉毒素B1等3种真菌毒素的高效液相色谱测定法

目的建立玉米中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的高效液相色谱测定法。方法玉米样品经甲醇水溶液(V/V=80∶20)提取后,以提取液为分散剂,三氯甲烷为萃取剂,黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素经液液分散式微萃取富集净化,以C18色谱柱为分离柱,以乙腈和1%乙酸水溶液为流动相梯度洗脱分离后,采用变波长的方法对三种毒素进行检测。结果黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的线性范围分别为:1.00~100 ng/ml(r=0.998 5)、5.00~1 000 ng/ml(r=0.999 6)和1.00~100 ng/ml(r=0.999 3),检出限分别为:0.1、1.0和0.3μg/kg,平均加标回收率范围:82.5%~99.3%,RSD10%(n=6)。结论该方法快速、灵敏、准确可靠,适用于玉米样品中黄曲霉毒素B1,玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的同时检测。     

茶叶中黄曲霉毒素的高效液相色谱串联质谱法

目的建立茶叶中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法。方法样品经70%甲醇超声提取15 min,免疫亲和柱净化后,用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)进行分离,流动相为甲醇-0.1%甲酸水(体积比为45∶55),采用多反应监测(MRM)正离子模式进行检测。结果在0.5~50.0 ng/ml的线性范围内,所得4种黄曲霉毒素的回归方程均具有良好的线性关系(r≥0.999 5)。该方法检出限为0.02~0.04μg/kg,定量下限为0.07~0.13μg/kg;平均回收率为75.6%~98.5%,RSD为3.9%~7.1%。结论该方法简单、准确、灵敏度高,适用于茶叶中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的批量检测。     

小微粒色谱柱-高效液相色谱紫外检测器法测定花生中黄曲霉毒素

目的:建立用小微粒色谱柱-高效液相色谱法来测定花生中黄曲霉毒素的方法。方法:样品打碎均匀后,用Bond Elut PH柱萃取,以V水∶V甲醇∶V乙腈=50∶40∶10为流动相,经小微粒色谱柱分离,紫外检测器检测。结果:四种黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1得到很好的分离.检测限分别为:0.5μg/kg0、.8μg/kg、0.2μg/kg、0.4μg/kg。花生样品中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1在添加浓度为0.3μg/kg～3μg/kg的范围内,平均回收率在:82%～96%。相对标准偏差在1.2%～3.3%。结论:该法能在短时间内使花生中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1得到很好的分离,准确,比国标法快捷,值得推广。     

高效液相柱后衍生法测定食品中的黄曲霉毒素B1

目的：研究用高效液相色谱及柱后衍生法测定黄曲霉毒素B1。方法：样品经甲醇＋水（55＋45）提取，提取液经过滤、浓缩后，用高效液相色谱及柱后衍生法测定黄曲霉毒素B1。结果：黄曲霉毒素B1的最低检出量0．01ng，检出限0.12μg／kg，加标回收率在80．8％-97．1％，RSD在2．86％-4．89％之间。结论：方法简单、快速、准确，检出限低，回收率高。     

UPLC同时测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2

目的:建立免疫亲和柱超高效液相色谱法测定食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1和G2含量的方法。方法:试样经过甲醇-水提取、稀释后经过免疫亲和柱层析净化,应用超高液相色谱法检测。结果:试验结果表明:空白样品分别按照0.2μg/kg、0.8μg/kg、2.0μg/kg添加黄曲霉毒素混合标准,回收率为75.0%～90.4%,精密度<5%,黄曲霉毒素B1,B2,G1和G2的检测灵敏度分别为0.2μg/kg,0.2μg/kg,0.4μg/kg,0.2μg/kg。结论:免疫亲和柱净化超高效液相色谱法测定食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2含量,是一种简单、快速和准确的方法。     

花生中黄曲霉毒素检测方法的研究

目的:通过采用免疫亲和柱-高效液相色谱法来测定花生中的黄曲霉毒素。方法:样品用甲醇+水(70∶30)提取液提取后过滤,滤液经黄曲霉毒素免疫亲和柱净化,洗脱液经N2吹干后,加三氟乙酸和正己烷衍生后,用带有荧光检测器的超高效液相色谱仪测定。结果:四种黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1得到很好的分离。检测限分别为:0.2μg/kg、0.4μg/kg、0.2μg/kg、0.4μg/kg。平均回收率在:81.5%～106.2%,相对标准偏差在1.1%～3.5%。结论:该法能使花生中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1得到很好的分离,结果准确。     

伏马菌素B1检测的免疫芯片技术研究

目的：建立用于伏马毒素B1检测的免疫芯片技术方法。方法：伏马菌素B1（FB1）是一种小分子半抗原，可与牛血清白蛋白（BSA）免疫原载体蛋白偶联为FB1-BSA，成为抗原。在醛基化玻璃片表面固定抗FB1抗体，将待测物FB1与一定量的CY3标记的FB1-BSA同时加到芯片上，采用竞争法实验原理进行免疫芯片的技术研究。结果：伏马毒素B1的最低检测限为1μg／ml。结论：对伏马毒素B1进行了免疫芯片的制作，可以实现待测物的测定。     

HPLC同时测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2

目的：分析常见种类食物中黄曲霉毒素的含量，为建立食品中黄曲霉毒素的限量指标提供数据，并为大众的健康饮食提供参考。方法：以黄曲霉毒素B1的平均含量为参考选择黄曲霉毒素含量较多的常见食物种类，使用高效液相色谱仪及荧光检测器分析食物中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。结果：花生酱中含有的黄曲霉毒素最多，平均为2．41μg／kg；大米中黄曲霉毒素的含量次之，平均为0．15μg／kg；花生中黄曲霉毒素的平均含量为0．04μg／kg。结论：高效液相色谱法测定食物中黄曲霉毒素其重现性较好，而且可以一次分别测定出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，从结果看来尽管多数食品中均含有黄曲霉毒素，但是其含量均没有超过国家限量标准，其中花生酱中的黄曲霉毒素含量较高。这些数据均可以为大众的健康饮食提供参考。     

闽北地产红茶叶中黄曲霉毒素B_1污染水平研究

目的了解闽北地产红茶中黄曲霉毒素B_1污染水平。方法从南平各地随机抽取97份红茶样本,经粉碎、浸提、离心后,按GB/T 18979-2003食品中黄曲霉毒素测定,据所使用的免疫亲和柱对样品处理进行优化,用免疫亲和层析净化-高效液相色谱法检测黄曲霉毒素B_1。结果该法黄曲霉毒素B_1在0.5~20ng/mL范围内线性关系良好,相关系数≥0.9995,检出限为0.13μg/kg。红茶样本黄曲霉毒素B1检出率7.2%(7/97),含量3.2~10.6μg/kg,均值7.4μg/kg。结论闽北地产红茶黄曲霉毒素B_1污染水平较低,污染来源可能是茶树鲜叶有霉菌寄生和储存不当。本研究填补了闽北地区红茶黄曲霉毒素B_1污染的空白,可为茶叶中黄曲霉毒素B_1限量标准的制定提供基础数据。     

免疫亲和柱净化、高效液相色谱法结合荧光检测器检测进出口芝麻中的黄曲霉毒素B1

采用免疫亲和柱净化、高效液相色谱法结合荧光检测器检测进出口芝麻中的黄曲霉毒素B1。方法的检测限为0．1μg／kg,相对标准偏差低于9％,回收率85％-90％,方法简便快速、灵敏准确,满足进出口芝麻黄曲霉B1的检测要求。     

T-2毒素对原代培养的小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的 探讨T-2毒素对原代培养的小鼠睾丸间质细胞(Leydig cells)睾酮合成的影响.方法 建立健康清洁级成年雄性昆明小鼠睾丸间质细胞原代培养模型,使细胞悬液密度为5×10~3个/ml,采用改进3β-羟基类固醇脱氢酶(HSD)染色法进行纯度鉴定.将其分为空白对照[0 ng/ml人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)+0 mol/L T-2毒素]组、诱导对照(10 ng/ml hCG+0 mol/L T-2毒素)组、10 ng/ml hCG+10~(-9)mol/L T-2毒素组、10 ng/ml hCG+10~(-8)mol/T~(-2)毒素组、10 ng/ml hCG+10~(-7) mol/L T-2毒素组,培养24 h后检测睾酮含量.结果 新鲜分离的小鼠睾丸间质细胞在有血清培养液中培养24h后,细胞贴壁良好,其纯度在90%以上.在10ng/ml hCG诱导下,原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞培养液中睾酮合成量明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与诱导对照组相比,10 ng/ml hCG+10~(-7)、10~(-8)、10~(-9)mol/的T-2毒素染毒组培养液中睾酮合成量均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);且睾酮合成量随着T-2毒素染毒浓度的升高而降低.结论 T-2毒素可以直接降低原代培养的小鼠Leydig细胞睾酮合成功能.

Abstract：

Objective To investigate the effects of T-2 toxin on testosterone biosynthesis in primary cultured Leydig cell derived from the mouse testis.Methods Leydig cells isolated from Kunming male mice were adjusted to 5×10~5/ml and the purity was identified by the modified 3β-hydroxysteroid dehydrogenase(HSD) staining method.Blank control group(treated with 0 n/ml hCG and 0 mol/L T-2 toxin),inductive control group(treated with 10 ng/ml hCG and 0 mol/L T-2 toxin),low dose T-2 toxin exposure group(treated with 10 ng/ml hCG and 10~(-9) mol/L T-2 toxin),middle dose T-2 toxin exposure group(treated with 10 ng/ml hCG and 10~(-8) mol/L T-2 toxin) and high dose T-2 toxin exposure group(treated with 10 ng/ml hCG and 10~(-7) mol/L T-2 toxin)were designed,respectively.The testosterone level was measured after 24 h of incubation.Results After 24 hours culture in liquid medium contained serum,the fresh isolated Leydig cells grew well and the purity exceeded 90%.Through 10 ng/ml hCG induce,the testosterone level of Legdig cells increased significantly and the difference compared to blank control was of statistical sense (P<0.05).Compared to inductive control group,the testosterone level in Legdig cells decreased significantly in all T-2 toxin exposure groups with a dose dependant manner (P<0.05 or P<0.01).Conclusion T-2 toxin can directly decrease the testosterone biosynthesis of the primary Leydig cells derived from the mouse testis.     

葡萄球菌肠毒素A、B检测的免疫芯片技术研究

目的:建立用于葡萄球菌肠毒素A、B检测的免疫芯片技术方法。方法:采用双抗体夹心法原理进行免疫芯片的技术研究,对影响免疫芯片检测结果的实验条件进行了优化。结果:实现了在同一张芯片上同时检测葡萄球菌肠毒素A、B,按优化后的条件检测SEA、SEB,最低检测限均为1 ng/m l。结论:对葡萄球菌肠毒素A、B进行了免疫芯片的制作,可以实现待测物的测定。     

8种重大烈性传染病病毒液相芯片检测方法的建立

目的建立基于多重PCR技术结合液相芯片技术同时检测汉坦病毒（HTV）、裂谷热病毒（RVFV）、黄热病毒（YFV）、西尼罗病毒（WNV）、克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）、拉沙热[下同]病毒（LFV）、埃博拉病毒（EBV）和马尔堡病毒（MBV）的方法。方法建立8种病毒同时扩增的多重PCR反应体系,分别用各种病毒特异的核酸探针偶联不同编码的微球,将获得的PCR产物与偶联核酸探针的微球混合物进行杂交,建立液相芯片检测方法,并对建立的液相芯片检测方法进行灵敏度及特异性检测评价。结果建立的8种重大烈性传染病病毒的液相芯片筛查方法具有较高的特异性和敏感性,能对8种病毒进行特异的检测。灵敏性实验结果表明,RVFV为10 ng/PCR、WNV为1 ng/PCR、EBV为10 ng/PCR、CCHFV为10 pg/PCR、MBV为1 ng/PCR、HTV为100 pg/PCR、LFV为1 ng/PCR、YFV为10 pg/PCR。结论本研究建立的病毒液相芯片筛查方法能快速、敏感、特异地同时检测8种重大烈性传染病病毒,对口岸入境人员是否携带重大烈性传染病病毒的快速筛查具有广阔的应用前景。     

Protective immunity to ricin toxin conferred by antibodies against the toxin's binding subunit (RTB)

The B subunit (RTB) of ricin toxin is a galactose-/N-acetyl galactosamine-specific lectin that promotes attachment and entry of ricin into host cells. RTB is also the archetype of the so-called R-type lectin family, whose members include haemagglutinins of botulinum neurotoxin (BoNT) progenitor toxins, as well as the binding subunits of cytolethal distending toxins. Although RTB is an appealing subunit vaccine candidate, as well as a potential target for immunotherapeutics, the degree to which RTB immunization elicits protective antibodies against ricin toxin remains unresolved. To address this issue, groups of mice were immunized with RTB and then challenged with 5×LD₅₀s of ricin administered intraperitoneally. Despite high RTB-specific serum antibody titers, groups of RTB immunized mice were only partially immune to ricin challenge. Analysis of a collection of RTB-specific B cell hybridomas suggested that only a small fraction of antibodies against RTB have demonstrable neutralizing activity. Two RTB-specific neutralizing monoclonal IgG₁ antibodies, 24B11 and SylH3, when passively administered to mice, were sufficient to protect the animals against a 5×LD₅₀ dose of ricin. Both 24B11 and SylH3 blocked ricin attachment to terminal galactose residues and prevented toxin binding to the surfaces of bone marrow-derived macrophages (BMM), suggesting that they function by steric hindrance and recognize epitopes located on RTB's carbohydrate recognition sub-domains (1α or 2γ). These data raise the possibility of using specific RTB sub-domains, rather than RTB itself, as antigens to more efficiently elicit neutralizing antibodies and protective immunity against ricin.     

蓖麻毒素B链蛋白多克隆抗体的制备及胶体金免疫层析快速检测法的建立

目的:结合蓖麻毒素(RT)的多克隆抗体和单克隆抗体,建立检测RT的胶体金免疫层析快速检测方法。方法:将纯化得到的重组蓖麻毒素B链蛋白(rRTB)免疫兔,获得抗血清经正辛酸-硫酸铵分步沉淀法纯化,利用间接ELISA方法鉴定抗体效价和特异性。结合抗重组蓖麻毒素A链蛋白(RTA)单克隆抗体,采用双抗体夹心法,建立检测天然RT的胶体金免疫层析技术,并对该方法进行特异性、敏感性、稳定性等评价;在奶粉、血清、土壤等材料中进行模拟添加RT检测。结果:间接ELISA法测定抗体效价为1:105,并可特异性与rRTB结合;胶体金法能在5~10 min内完成检测,多种不同的蛋白及近缘毒素检测评价显示该法特异性良好,检测灵敏性为50 ng/ml,环境样品的检测敏感性也相同。结论:利用兔抗RTB多抗和抗RTA单抗,建立了适用于现场的快速、特异检测天然蓖麻毒素的胶体金免疫层析方法。     

高效液相色谱法测定人血清中5-FU含量的研究

目的建立人体血清中5-FU含量的测定方法。方法高效液相色谱法测定人血清中5-FU的血药浓度,色谱条件：C18（250mm×4．6mm,5μm）,流动相：甲醇：水（15：85）,检测波长：265nm,流速：0．8ml/min,进样量：20μl。结果5-氟尿嘧啶在1-20μg/ml的线性关系良好（r=0．9993）,在1、5、20μg／ml的日内精密度分别为RSD=5．63％、RSD=2．14％、RSD=2．32％。在1、5、20μg/ml的回收率分别为76．76％、107．87％、98．96％。结论该方法适合应用于人血清中5-FU血药浓度测定。     

缬沙坦质量分析

目的：建立高效液相色谱法测定缬沙坦原料的含量及有关物质测定方法。方法：以乙腈-水-冰醋酸（500：500：1）为流动相;检测波长为225nm,流速为1．0ml／rain。结果：在线性范围5．0～75．0ug／ml,r=0．9999,平均回收率100．9％（RSD％=0．49％,n=9）结论：该方法专属性好,准确,灵敏,用于缬沙坦含量的测定结果可靠。     

电压敏感荧光染料在鱼贝类毒素检测中的应用初探

目的建立快速、简便、能反映样品整体毒性的鱼贝类毒素筛查方法。方法以神经母细胞瘤细胞为实验材料,采用电压敏感荧光染料bis-oxonol,根据膝沟藻毒素2,3(GTX2,3)、短裸甲藻毒素(BTX)和河豚鱼毒(TTX)的毒理特点,观察不同浓度毒素作用下细胞荧光的变化。结果 GTX2,3的浓度在2～200ng/ml范围内,TTX的浓度在20～600ng/ml范围内,BTX的浓度在15～400ng/ml范围内,培养体系荧光强度与毒素的浓度之间存在很好的线性关系。结论利用电压敏感荧光染料法可实现对GTX2,3、TTX和BTX的快速检测。     

抗伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及试剂盒的研制

目的为了能够快速检测粮谷类食品中伏马菌素B_1的污染水平,研制具有我国自主知识产权的针对伏马菌素B_1快速检测试剂盒。方法制备了能分泌抗伏马菌素B_1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了敏感、特异、快速的酶联免疫吸附试验检测方法,最终形成具有中国自主知识产权的伏马菌素B_1快速检测试剂盒。结果该试剂盒所用单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,亲和常数为8·3×10-8mol/L。该抗体与其他结构类似物无明显交叉反应,具有较高的特异性。试剂盒对伏马菌素B_1最低检出限5ng/ml,标准曲线的线性范围(50~500ng/ml),回归方程^Y=-0·582X+1·793(r=0·99,P<0·05);对玉米作50ng/ml,200ng/ml和500ng/ml3个加标浓度的回收率在71·89%~112·95%之间;试剂盒在常温状态下有效期至少10个月;实验室内的变异系数和实验室间的变异系数均小于20%。