肉毒毒素A的检测方法

本文主要介绍了肉毒毒素A的传统检测方法和当前一些检测方法的原理和优、缺点。这些方法主要包括：鼠的生物学鉴定；被动血凝反应测定、放射性免疫测定、凝胶扩散测定、酶联免疫测定、肽链内切酶酶联免疫测定；聚合酶链式反应核酸探针检测毒素的基因方法以及荧光检测法。‘     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与中和效应

用提取的Ａ型产气荚膜梭菌α毒素包涵体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合和克隆化，经ＥＬＩＳＡ筛选，共获得７株稳定分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，分别命名为１Ａ８、１Ｃ３、１Ｄ５、１Ｄ８、１Ｆ１、１Ｈ１和２Ｅ３。经鉴定，７株ＭｃＡｂ的Ｉｇ亚类有ＩｇＧ１（１Ｄ８）、ＩｇＧ３（１Ａ８、１Ｃ３和２Ｅ３）和ＩｇＭ（１Ｄ５、１Ｆ１和１Ｈ１）。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为：１∶５１２～１∶１０２４和１∶１０６～１∶１０８。尤为重要的是，２Ｅ３杂交瘤细胞株分泌的ＭｃＡｂ不仅能够中和α毒素的磷脂酶Ｃ活性和溶血活性，而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用     

生物恐怖相关肉毒毒素的特征与防治

生物恐怖是指使用致病性微生物或毒素等作为恐怖袭击的武器,经过一定的途径散布致病性细菌或病毒,造成烈性传染病的爆发流行,导致人群失能和死亡,引发社会动荡。     

不同来源产气荚膜梭菌β2毒素编码基因的PCR检测方法建立及遗传多态性分析

目的建立并优化产气荚膜梭菌β2毒素编码基因(cpb2)和非典型cpb2(aty-cpb2)的PCR检测方法, 分析2016-2021年中国9个地区cpb2流行特征和遗传多态性。方法使用PCR方法对188株产气荚膜梭菌菌株的cpb2进行检测, 通过全基因组测序获取cpb2序列以分析其遗传多态性, 使用Mega 11、Makeblastdb软件对110株产气荚膜梭菌所携带的cpb2构建系统发育树并建库, 通过Blastn算法比对后得出cpb2两种不同基因型, 即共有cpb2(con-cpb2)和aty-cpb2之间的序列相似性。结果针对产气荚膜梭菌cpb2和aty-cpb2建立及改进的PCR检测方法的特异性好。cpb2的PCR检测结果与全基因组测序结果高度一致(Kappa=0.946, P<0.001)。来自中国9个地区的菌株中共有107株菌携带cpb2, 94株A型菌株携带aty-cpb2, 6株A型菌株携带con-cpb2, 7株F型菌株携带aty-cpb2。两种不同基因型的cpb2核苷酸序列相似性为68.97%～70.97%, 相同基因型的cpb2核苷酸序列相似性为98.00%...     

葡萄球菌肠毒素A、B检测的免疫芯片技术研究

目的:建立用于葡萄球菌肠毒素A、B检测的免疫芯片技术方法。方法:采用双抗体夹心法原理进行免疫芯片的技术研究,对影响免疫芯片检测结果的实验条件进行了优化。结果:实现了在同一张芯片上同时检测葡萄球菌肠毒素A、B,按优化后的条件检测SEA、SEB,最低检测限均为1 ng/m l。结论:对葡萄球菌肠毒素A、B进行了免疫芯片的制作,可以实现待测物的测定。     

新型液相芯片复合检测5种鼠传病原体方法的建立

目的建立一种能同时检测5种鼠传病原体:流行性出血热病毒(Epidemic hemorrhagic fever,EHF)、斑疹伤寒立克次体(Rickettsia typhi,TY1)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,YP)、恙虫病立克次体(Rickettsia tsutsugamushi,RST)、钩端螺旋体(Leptospira,Lep)的液相芯片多重检测方法;方法针对5种病原的全基因组序列,分别设计特异性引物,并将上游引物5’端分别偶联一些特定的核酸片段作为标签(TAG),下游引物5’端标记生物素,PCR扩增后产物与微球进行杂交,最后利用液相芯片检测系统分析结果。结果建立的方法能同时完成对5种病原体Bio-plex100病原体及其中任何1种的检测,特异性好,灵敏度最低可达3 fg/test。结论通过利用偶联有TAG及生物素的引物对,成功建立了可同时检测5种鼠传病原的液相芯片检测方法,具有较高的灵敏度和特异性。该方法对于鼠传病原体的检测具有较好的应用前景。     

通用型基因悬浮芯片检测生物恐怖细菌的方法研究

目的 建立快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法,用于生物恐怖病原体的快速筛检.方法 选择保守的细菌16 S rDNA序列,并针对炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis,B.a)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,Y.p)、布鲁菌属(Brucella spp.,Bru)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,F.t)和类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.p)等5种生物恐怖细菌设计种(属)特异性探针,经16 S rDNA通用引物341A、519B扩增基因组DNA,用基因悬浮芯片方法进行检测,并对方法的灵敏度、特异度、重复性、检测能力进行验证.结果 经16 S rDNA通用引物扩增,特异性探针杂交检测,能将样本细菌鉴定到属水平,同属菌出现交叉反应;检出限分别为类鼻疽伯克霍尔德菌1.5 pg/μl,布鲁菌属20 ps/μl,炭疽芽孢杆菌7 pg/μl,土拉弗朗西斯菌0.1 pg/μl,鼠疫耶尔森菌1.1 pg/μl;15次重复检测各探针变异系数(CV)为5.18%～17.88%,具有较好的重复性;方法可正确检出模拟白色粉末样本中炭疽芽孢杆菌和鼠疫耶尔森菌.结论 建立了通用型基因悬浮芯片检测体系快速高通量筛查生物恐怖细菌的方法.     

通用型基因悬浮芯片检测生物恐怖细菌的方法研究

Objective To develop a fast, high-throughput screening method with suspension array technique for simultaneous detection of biothreat bacteria. Methods 16 S rDNA universal primers for Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Brucella spp. and Burkholderia pseudomallei were selected to amplify corresponding regions and the genus-specific or species-specific probes were designed. After amplification of chromosomal DNA by 16 S rDNA primers 341A and 519B,the PCR products were detected by suspension array technique. The sensitivity, specificity, reproducibility and detection power were also analyzed. Results After PCR amplification by 16 S rDNA primers and specific probe hybridization,the target microorganisms could be identified at genus level, cross reaction was recognized in the same genus. The detection sensitivity of the assay was 1.5 pg/μl (Burkholderia pseudomallei),20 pg/μl (Brucella spp.), 7 pg/μl (Bacillus anthracis), 0.1 pg/μ1 (Francisella tularensis), and 1.1 pg/μl (Yersinia pestis),respectively. The coefficient of variation for 15 test of different probes was ranged from 5.18% to 17.88%,it showed good reproducibility. The assay could correctly identify Bacillus anthracis and Yersinia pestis strains in simulated white powder samples. Conclusion The suspension array technique could be served as an opening screening method for biothreat bacteria rapid detection.     

手足口病病原液相芯片检测方法的建立

目的：建立检测手足口病病原的液相芯片方法。方法：设计、合成并修饰基因特异性引物和寡核苷酸探针,将寡核苷酸探针和荧光编码微球进行偶联,制备液相芯片;将样本核酸多重PCR扩增产物与液相芯片进行杂交,并通过液相芯片检测仪读取检测结果。结果：同时检测多种肠道病毒（EV）,肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CAV16）的病毒核酸最低检出量均为1pg,检测特异性高。与参照方法相比,EV、EV71、CAV16的检测灵敏度分别为：91．4％、92．9％、100．O％,检测特异度分别为100．0％、97．1％、98．2％,检测准确度分别为：100．0％、96．3％、87．5％。结论：构建的检测手足口病病原的液相芯片方法,具有高通量、灵敏度高、特异性强和检测时间短等优点,为手足口病的快速诊断奠定了基础。     

四种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立

目的建立一种多重PCR检测方法同时检测食品中沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌。方法参考沙门菌侵袭蛋白A(invA)基因序列,志贺菌侵袭性质粒抗原(ipaH)基因序列,金黄色葡萄球菌引物设计参考耐热核酸酶(nuc)基因序列,单增李斯特菌引物设计参考溶血素蛋白(hly)基因序列设计引物,通过多重PCR对4种食源性致病菌的目的基因进行扩增,并对反应体系进行优化。结果对15株目标菌和17株非目标菌的检测未出现假阳性和假阴性结果,产物分子量与预期一致;4种菌的检测灵敏度分别至少达到10pg/μl;对产物的测序分析表明所得序列与目的基因序列吻合;对319份样品的检测结果显示,其中4份生鲜乳中检出金黄色葡萄球菌,1份生猪肉中检出沙门菌。结论该方法具有良好的检测特异性,可供食源性致病菌的快速检测。     

血液透析护理人员血液暴露实时检测方法的建立与临床应用

目的建立一种血液透析护理人员在患者血路操作过程中血液暴露的实时检测方法,为提高护理人员手卫生和手套更换的依从性提供科学依据。方法改良粪便隐血检测方法的步骤,其检测血液的原理为匹拉米洞半定量检测法。采用匿名制随机抽样检测方法,使待检人员(刚完成患者血路操作未脱卸手套)五指并拢,在对应的检测框内(已滴加显色剂)用力按压数秒钟,并在规定时间内观察按压处的变色结果。同时观察碘伏、乙醇、免洗手消毒凝胶对该检测结果的干扰作用。结果 2019年9-11月间,对刚完成患者血路操作的护理人员进行186人次检测,109人次(含双、单手)手指处血液检测结果阳性,阳性率为58.60%(109/186)。109人次的阳性人员以单手的半定量结果分类显示,1+阳性率占19.35%,所占比例最大,4+阳性率占5.38%,比例最小;2+和3+阳性率分别为10.48%、10.22%。消毒剂对本检测方法无干扰作用。结论本研究提供血液透析护理人员在患者血路操作中,手部血液暴露的证据及血液暴露的概率,本研究证据支持血液透析护理人员在医疗活动操作中,应严格实施手卫生、及时更换手套这一基础性的感染控制措施。     

Establishment of a novel safety assessment method for vaccine adjuvant development

Vaccines effectively prevent infectious diseases. Many types of vaccines against various pathogens that threaten humans are currently in widespread use. Recently, adjuvant adaptation has been attempted to activate innate immunity to enhance the effectiveness of vaccines. The effectiveness of adjuvants for vaccinations has been demonstrated in many animal models and clinical trials. Although a highly potent adjuvant tends to have high effectiveness, it also has the potential to increase the risk of side effects such as pain, edema, and fever. Indeed, highly effective adjuvants, such as poly(I:C), have not been clinically applied due to their high risks of toxicity in humans. Therefore, the task in the field of adjuvant development is to clinically apply highly effective and non- or low-toxic adjuvant-containing vaccines. To resolve this issue, it is essential to ensure a low risk of side effects and the high efficacy of an adjuvant in the early developmental phases. This review summarizes the theory and history of the current safety assessment methods for adjuvants, using the inactivated influenza vaccine as a model. Our novel method was developed as a system to judge the safety of a candidate compound using biomarkers identified by genomic technology and statistical tools. A systematic safety assessment tool for adjuvants would be of great use for predicting toxicity during novel adjuvant development, screening, and quality control.