抗-HCV阳性血清HCV RNA检测与基因分型的研究

目的 检测抗-HCV阳件血清巾的HCV RNA并进行HCV基因分型.方法 采用荧光定量PCR法检测85例大连地区抗-HCV阳性患者血清中HCV RNA,应用型特异性引物逆转录套式PCR法对HCV RNA阳性样本进行基因分型.结果 85例的抗-HCV阳性患者中,HCV RNA阳性65例(76.5%),其中基因分型1b型32例(49.2%),2a型29例(44.6%),未分型4例(6.2%).结论 抗-HCV阳性并非HCV直接标志,大连地区HCV基冈1b型和2a型基本相等.     

青岛地区丙型肝炎病毒基因分型

对青岛地区86例抗HCV阳性肝炎患者血清,采用逆转录-套式基因扩增法(RT-PCR)检测HCV·RNA,并用多引物扩增进行基因分型.结果,HCV·RNA阳性50例(58.1%),其中HCVⅡ型45例(90.0%)、Ⅲ型3例、Ⅱ/Ⅲ混合型2例.说明青岛地区HCV基因以Ⅱ型为主,应据此设计预防和治疗措施.     

丙型肝炎病毒逆向点杂交基因分型方法的建立及初步应用

目的 利用逆向点杂交技术建立丙型肝炎病毒(HCV)基因分型新方法。方法在HCV5’端非编码区(5’UTR)设计引物与分型探针，将活性氨基标记的分型探针依次固定在尼龙膜上，制成HCV基因分型逆向点杂交检测膜条。分离纯化血清中的HCV RNA，经逆转录反应和生物素标记引物聚合酶链反应(PCR)巢式扩增后，将扩增产物与检测膜条杂交，过氧化物酶和四甲基联苯胺显色，判断基因分型结果。最后，通过与基因测序结果比较确定新方法的有效性。从佛山地区丙型肝炎患者中随机抽取60份经荧光定量PCR方法对HCV RNA进行过定量分析的血清，用新建方法进行HCV基因分型检测。结果新建HCV逆向点杂交基因分型方法可对所有60份HCV RNA拷贝数在10。～10。／ml之间的抽检血清进行基因分型，发现1b型50例，占83．3％；1a型2例，占3．3％；2a型2例，占3．3％；1a、1b混合型5例，占8．0％；1b、2a混合型1例，占1．7％；未发现2b、3a和3b型。新方法基因分型结果与测序分型结果一致。结论PCR一逆向点杂交技术可以准确有效和简便经济地进行HCV基因分型．适用于临床检测与流行病学研究。在佛山地区人群中感染的HCV以1b型为主。     

肠道病毒VP1基因定型巢式RT-PCR反应体系建立及评价

目的建立一种快速、灵敏、特异的肠道病毒VP1基因分型巢式RT-PCR检测方法。方法根据Gen Bank发表的肠道病毒全基因组序列,收集国内外文献,将文献中用于测序分型的引物进行总结分析,在其VP1区设计并合成巢式RT-PCR引物,优化PCR反应条件,建立检测肠道病毒基因分型的巢式RT-PCR方法。将200株肠道病毒通用阳性,EV71、CA16阴性的临床标本及阴性对照、EB病毒、登革热病毒、流感病毒、腺病毒用该方法进行巢式RT-PCR扩增,随机选择30例PCR产物进行测序,明确本区肠道病毒流行基因型。结果 200份临床病例样本巢式RT-PCR扩增,124例有准确PCR扩增条带,阳性率为62%;阴性对照、EB病毒、登革热病毒、流感病毒、腺病毒均未扩增出条带;23例测序成功,7例比对失败,其中检出16份CA6阳性,阳性率为69.5%,6份CA12阳性,阳性率为26.1%,1份CA10阳性,阳性率为4.3%。结论肠道病毒VP1基因分型巢式RT-PCR检测方法具有良好的灵敏度和特异度;本院就诊患儿肠道病毒基因型主要以CA6和CA12型为主。     

武汉市美沙酮门诊治疗者丙型肝炎病毒基因分型

目的 探讨武汉市美沙酮门诊治疗者丙型肝炎病毒(HCV)及不同基因型感染状况.方法 用酶标记免疫(ELISA)法检测抗-HCV抗体,在86份抗-HCV抗体阳性的血清标本中,分别提取HCV RNA,通过逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)扩增C基因的羧基至E1基因的氨基端长度为474 bp的片段,测定其核苷酸序列,与GenBank中已知的HCV序列进行系谱分析,确定HCV基因型.结果 武汉市美沙酮门诊332名治疗者中抗-HCV IgG阳性率为94.3%;其中86份血清的HCV序列通过系谱显示6a型71例,占82.5%;3b 7例,占8.2%;1a 5例,占5.8%;1b 3例,占3.5%.结论 武汉市美沙酮门诊入组的吸毒者HCV感染以6a型为优势株,其次为3b,吸毒者中HCV感染率较高,且基因亚型呈现多样性.     

丙型肝炎病毒基因分型与肝病程度关系的研究

目的探索丙型肝炎病毒（HCV）基因型在辽宁省大连地区的分布及流行的优势型,并探讨HCV基因型与肝病程度的关系。方法采用型特异性引物逆转录巢式PCR法和限制性片段长度多态性分析（RFLP）法对85例抗-HCV阳性的慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化、丙肝相关肝癌病人进行HCV的基因分型。结果85份抗HCV阳性标本中,HCVRNA检出率为61例,占71．76％（61／85）。在85份抗HCV阳性血清中,仅检出了61例1b和2a型感染者,其中1b型32例,占52％（32／61）;2a型29例,占48％（29／61）。结论大连地区基因型为1b型和2a型两种型,符合中国丙肝病毒基因分型,大连地区1b型和2a型基本相等。未发现1b和2a基因型因肝病严重程度而有所不同。     

浙江口岸出入境人员丙型肝炎病毒基因分型研究

目的 了解浙江口岸出入境人员丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布特征和病毒变异情况,为丙型肝炎的诊断和预防提供有力依据.方法 荧光定量RT-PCR检测120名出入境人员抗-HCV阳性血清标本,并对其中HCV-RNA阳性的81份血清标本应用基因芯片法进行HCV基因分型,对1b型、2a型、3a型、6型各1株的5 '非编码区(5'NCR)PCR产物测序验证.结果 81份HCv-RNA阳性血清,其中lb型62例,2a型5例,3a型3例,3b型3例,1b/3a型的混合感染2例,1b/3b型3例,6型3例,分别占76.54％、6.17％、2.7％、2.700、2.47％、2.7％、2.7％;1b型的序列与GenBank J-4株的同源性为99.2％,2a型与GenBank J-6株的同源性为99.2％,3a型与GenBank k3a/650株的同源性为97.6％,6型与GenBank Th580株的同源性为96.8％.结论 浙江口岸出入境人员中HCV以1b型为主,3型和2a型次之,少量6型,同时存在HCV1b/3混合型.     

蒙古国人丙型肝炎患者HCV RNA检测及基因型的研究

目的通过检测丙型肝炎病毒基因分型,探讨蒙古国抗-HCV阳性患者血清中HCV基因型流行株特征。方法采用基因芯片法对蒙古国183例抗-HCV阳性患者血清标本进行基因型检测,同时检测相关病毒学及肝功能生化指标,分析基因型分布特点和临床意义。结果 183例抗-HCV阳性患者中HCV RNA阳性134例(73.2%),其中基因1b型68例(50.7%),2a型59例(44.0%),并有少量的1a、3a、1b+2a和其它3例混合型。结论抗-HCV阳性并非HCV感染直接标志,蒙古国感染HCV患者的基因型以1b和2a型为主,比例基本相当;基因型在性别上人群分布差异无统计学意义。     

湖北地区丙型肝炎病毒基因型分布及流行病学特征

目的分析湖北地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布及其流行病学特征。方法收集2013年5月至2016年3月在华中科技大学同济医学院附属同济医院接受HCV基因分型检查的丙肝患者血清及相关流行病学资料。采用实时荧光定量PCR对HCV RNA进行测定;采用巢式RT-PCR对HCV RNA阳性样本的核心区(core-e1)进行扩增并测序;对所测序列进行基因分型和进化树分析,并对各基因型相关的危险因素进行综合分析。结果共有HCV RNA阳性310例,测序223例,测序结果显示湖北地区存在5种基因型,1b型178例(79.82%),2a型32例(14.35%),6a型8例(3.59%),3b型4例(1.79%),3a型1例(0.45%)。1b、2a型主要见于1997年以前的有偿供血者和输血者;2a还多见于通过性接触传播的人群;6a、3b和3a型仅见于静脉注射毒品者。结论湖北地区HCV基因型分布呈现多样性且与传播途径密切相关,有关各方应予以关注及干预。     

肠道病毒CODEHOP巢式RT-PCR检测及基因分型方法的建立

目的建立一种可用于肠道病毒的快速检测和基因分型的一致简并引物巢式RT-PCR方法。方法根据genbank发表的不同肠道属病毒多聚蛋白氨基酸序列,用CODEHOP在线软件设计1对肠病毒属简并引物,并在该引物的扩增区域内用Primer 3.0软件设计了EV71、COXA16和COXA10 3个病毒的特异引物,建立了巢式RT-PCR方法,对其检测灵敏度、特异性进行了分析,并对27份手足口病患者粪便样品进行了检测。结果该方法第1轮简并引物扩增的灵敏度是17 ng;第2步分型引物扩增的灵敏度是第1步反应的100倍。27份手足口病患者粪便样品RT-PCR检测结果为阳性,其中15份样品经检测为EV71病毒阳性,10份样品经COXA16病毒阳性,2份样品经检测为COXA10病毒阳性。结论建立的一致简并引物巢式RT-PCR检测方法具有特异强、灵敏高的优势,可用于肠道病毒的检测和基因分型。     

同时检测4种传染病病原体的蛋白质微阵列研究

[目的]建立1种用蛋白质微阵列法可同时检测血清中艾滋病病毒（HIV）抗体、丙型肝炎病毒（HCV）抗体、梅毒螺旋体（TP）抗体和乙型肝炎病毒表面抗原的方法。[方法]将基因工程HIV、HCV、TP重组抗原和乙肝病毒单克隆抗体共价结合于固相载体玻片上，制成蛋白质微阵列。血清样本经稀释、加样、孵育、洗涤后，加上Cy3荧光标记物，用激光芯片扫描系统对蛋白质微阵列进行扫描成像。将获得的图像用Imagene专用分析软件进行分析，所获数据根据cutoff值自动生成判断结果。用此蛋白微阵列系统检测了100份4个项目皆阴性的血清标本，确定了其cutoff值。检测了经酶联免疫吸附试验（EUSA）筛选出4个项目皆阴性的标本40例；艾滋病病毒抗体阳性标本30例；乙肝表面抗原、丙肝抗体、梅毒特异性抗体阳性血清各100份。[结果]蛋白质微阵列法检测艾滋病病毒抗体、丙肝抗体和乙型肝炎表面抗原的阳性和阴性标本的符合率皆为100％，梅毒特异性抗体阳性符合率为97％，阴性符合率为100％。[结论]蛋白质微阵列法检测HIV、HCV、TP和HBsAg与EUSA法检测结果具有高度的符合率。该法具有高通量、快速、特异性强、操作简便等特点，适用于大规模样本的分析，在卫生检疫传染病检测方面具有应用和推广价值。     

出入境人员丙型肝炎传染性及危险因子研究

目的了解出入境人员丙型肝炎(HCV)感染水平,研究HCV感染者的传染性及影响感染的危险因子。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)筛查出入境人员抗-HCV,并对150份抗-HCV阳性血清采用实时荧光定量PCR法测定HCV RNA病毒载量,以性别、年龄、抗-HCV阴性、HCV RNA阴性、1∶4比例为匹配条件,选择600例为阴性对照组。采用单因素和多因素非条件Logistic回归分析。结果23781名出入境人员传染病监测体检中,检出抗-HCV阳性150例,检出率为0.63%。男女间感染HCV的几率均等;抗-HCV阳性率随年龄增长而升高,各年龄组间差异有统计学意义(χ2=86.065,P<0.001);外籍人员抗-HCV阳性率显著低于中国籍,两者差异有统计学意义(χ2=12.376,P<0.005);78.67%抗-HCV阳性者HCV RNA病毒处于复制状态,抗-HCV滴度≥1∶64感染者HCV RNA病毒载量均≥1.02×104copy/ml,各抗体滴度间病毒载量有显著性差异(χ2=136.593,P<0.001);经单因素回归分析发现,年龄、国籍、谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、直接胆红素(DBIL)、尿素(BUN)、总胆固醇(CHOL)、低密度脂蛋白(LDL)等8个因子均有统计学意义,对这8个因子进行多因素Logistic逐步回归分析,年龄、ALT、LDL等3个因子进入模型。结论78.67%出入境人员HCV感染者具有传染性,抗-HCV滴度≥1∶64指标可作为HCV具有传染性的判断指标;影响HCV感染的危险因子有年龄、国籍、ALT、AST、DBIL、BUN、CHOL、LDL等8个。     

降低输血后HCV感染的临床研究

目的：探讨输血后ＨＣＶ感染高发的原因并提出降低发生率的可行措施。方法：对１３８例定期筛检供血及６８例献血前筛检供血的受血者进行了前瞻性调查。用定量ＰＣＲ试剂盒,通过荧光检测仪对１０份供血进行ＨＣＶ ＲＮＡ定量分析;对４１例血清进行ＨＣＶ ＲＮＡ定量、ＡＬＴ用抗－ＨＣＶ检测;用ＲＴ－ＰＣＲ法对３４份抗－ＨＣＶ（－）供血作ＨＣＶ ＲＮＡ定性分析。结果：两种方法筛检供血所致的输血后ＨＣＶ感染率分别为３４     

佛山口岸出入境人员抗-HCV和ALT检测结果分析

目的了解佛山口岸出入境人员丙型肝炎病毒感染情况及丙氨酸转氨酶（ALT）的异常情况,以加强对出入境人员丙型肝炎病毒感染的监测和管理。方法对2006—2007年佛山口岸出入境人员进行抗-HCV和ALT检测,并对检测结果进行统计分析。结果在2919名受检者中检出抗-HCV阳性15例,检出率为5．14‰,入境人员阳性率1．38％,明显高于出境人员阳性率0．15％,两者之间有显著性差异（X^2=15．86,P〈0．05）;其中入境人员中劳务、商务人员分别占总阳性数的66．67％和33．33％。抗-HCV阳性者AIJ异常率为66．67％,抗-HCV、HBsAg阴性者ALT异常率为8．22％,HB—sAg阳性者ALT异常率为23．67％,抗-HCV阳性者ALT异常率与后两者异常率比较分别为（x^2=57．81,P〈0．05）和（x^2=11．81,P〈0．05）,差异有统计学意义。结论抗-HCV阳性者ALT异常情况更明显。应加强管理抗-HCV阳性的出入境人员,做好宣传教育并提供有效的医疗服务,以减少丙型肝炎通过频繁的国际交往而传播的机会,有效保障出入境人员的健康。     

河北省固安县北斜村HCV感染者三年随访研究

笔者对４２例抗０ＨＣＶ阳性者进行了三年随访研究，发现血清ＡＬＴ异常者占１８．１％￣２６．２％，ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为８０％。三年间抗－ＨＣＶ年阴转率仅０．９５％，抗－ＨＣＶ抗体几何平均滴度１６０左右，１９９１年１９９４年检测结果表明抗－ＨＣＶ ＧＭＴ值无明显差异，抗体滴度与血清ＡＴＬ水平以及ＨＣＶ ＲＮＡ无关。     

HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒核心基因启动子突变的研究

目的了解HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒(HBV)核心基因启动子双突变(nt1762 A→T,nt1764 G→A)发生情况及其与基因型、病毒量和HBeAg的关系。方法 HBsAg无症状携带者从隆安研究队列中选择,用套式聚合酶链反应(nested PCR)对研究对象血清HBV核心基因启动子、S基因扩增、序列分析及基因分型,用HBV引物和双标记的TaqMan探针扩增和定量病毒DNA。结果观察开始时核心基因启动子为野毒株的109例观察对象,3年后双突变平均年发生率为2.8%;观察开始时已发生nt1762或nt1764点突变的59例对象,3年后另一个位点也发生突变的平均年发生率为6.8%,两率差异有统计学意义(χ2=5.109 0,P<0.05)。nt1762 A→T突变组HBeAg阳性率(45.5%,10/22)与nt1764 G→A突变组HBeAg阳性率(10.8%,4/37)差异有统计学意义(χ2=9.149,P<0.05)。20例基因型B未发生双突变,重组基因型年双突变率为4.8%(2/14),基因型C年突变率为3.1%(7/75),各基因型间突变率差异无统计学意义(P>0.05)。5例双突变发生后HBeAg仍然阳性者病毒量有下降趋势,而另5例突变发生后HBeAg阴性者其病毒量有升有降。结论 HBV核心基因启动子双突变年发生率较高,这两个位点中的任何一个发生突变是双突变的过渡形式,双突变与基因型无关,nt1764 G→A突变与HBeAg阴性有关。     

A new assay for hepatitis C virus (HCV) core antigen detection: an alternative to nucleic acid technologies in positive or indeterminate anti-HCV subjects?

Markers of viral replication are fundamental tools for understanding the mode of transmission, diagnosis and management of hepatitis C virus (HCV) infection. A new enzyme-linked immunosorbent assay for quantitative detection of free and complexed HCV core antigen (HCV Ag) has been developed. The aim of this study is to evaluate the clinical performance of the new test and compare it with the most widely used commercially available RT-PCR-based assay. To determine the cut-off value we tested 60 samples from anti-HCV negative samples and selected a qualitative cut-off value of 3 pg/ml. To evaluate the usefulness of the new assay in confirming serologically indeterminate results we collected 62 sera. To evaluate the HCV Ag and HCV-RNA relationship we tested 245 samples from patients with different clinical conditions. The results of 61 out of 62 (98.4%) anti-HCV indeterminate samples were found to agree, whereas only one serum was found to be RT-PCR positive and HCV Ag negative. We also found the results to agree in 77.6% (190/245) of the samples from infected patients, while we observed higher agreement in untreated patients, both with and without evidence of liver damage. The correlation coefficient (r) observed between HCV Ag and HCV-RNA was 0.88. The regression line meets the cut-off value at an HCV-RNA concentration of approximately 40,000 IU/ml. In conclusion, we found that the results from the total HCV Ag test agree with the RT-PCR results and therefore we believe that this test could become a useful tool for the diagnosis and management of HCV infection.     

献血员人群HCV感染状况及其输血传播的调查

采用ELISA对1572份献血员血清进行抗HCV检测,阳性率为12.15％。其中女性献血员抗HCV阳性率较男性为高、单采浆献血员者较单纯献血全血者为高,抗HCV检测阳性率随献血员年龄增长而增高。近期ALT升高的单采浆献血者血清抗HCV阳性者显著地高于无近期ALT升高史的同类单采浆献血员。结果证实严格开展献血员HCV感染者筛选将有助于输血相关性的丙肝的预防。     

基因芯片对慢性丙型肝炎患者血清病毒基因分型的应用研究

目的探讨基因芯片对慢性丙型肝炎患者病毒基因分型的应用,分析丙型肝炎病毒（HCV）基因亚型与实验室指标的关系。方法应用基因芯片检测147例HCV-RNA阳性慢性丙型肝炎患者血清病毒基因亚型,并对部分样本进行RT-PCR扩增测序验证;同时检测血清HCV-RNA、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBil）等相关指标并进行分析。结果 147份HCV患者血清样本中1b型120例（81.6%）;2a型13例（8.8%）;3a型1例（0.7%）,6a型4例（2.7%）,未分型9例（6.1%）;基因芯片对基因亚型检出率为93.9%,分型结果与测序符合率100%。1b型患者与非1b型患者比较,HCV-RNA、ALT、AST、TBil等各指标差异均无统计学意义（P均〉0.05）。结论基因芯片技术适合对临床样本丙肝病毒基因亚型的快速检测,本地区慢性丙肝患者病毒基因亚型以1b型为主,其防治工作值得引起相当重视。