移植长期培养的骨髓细胞对照射半同种小鼠疗效的初步观察

影响同种骨髓移植成功的主要障碍是发生免疫反应,包括宿主抗移植物反应(HVGR)和移植物抗宿主病(GVHD)。特别是骨髓植入受体后发生的GVHD,可使宿主致死。在半同种骨髓移植时,用亲代骨髓给F_1受体移植,虽然可不发生排斥反应,但仍会发生GVHD。若将骨髓移植物经过处理去除T细胞,则会明显地减轻或避免GVHD发生。例如用抗Thy-1,2抗体处理供体小鼠的骨髓清除T细胞,再移植给致死照射的同种小鼠,可大大提高动物的活存率。小鼠骨髓长期培养可长时间地维持造血干细胞(CFU-S)增殖和分化为粒系祖细胞及     

小鼠移植骨髓后供体细胞的追踪结果及其对临床的意义

LACA系和上海种小鼠于一次全身照射9～10Gy后分别移植正常异性同系、同窝或同种动物骨髓。移植骨髓后一年内不同时间分批活杀动物,借C分带染色识别Y染色体法追踪受体骨髓中供体型细胞所占比例。追踪观察结果表明,决定供体造血干细胞能否在受体造血组织中成活、增殖并长期替代造血功能的因素为照射剂量及供、受体间遗传学关系。本文结合本实验结果,讨论了当前临床上对一些血液病进行骨髓移植时有关照射剂量与方法的问题。     

不同剂量γ射线照射后胎儿骨髓CD34~ 造血干细胞死亡规律

目的　探讨不同剂量γ射线照射后胎儿骨髓CD34 造血干细胞的死亡规律。方法　以流式细胞术PE -CD34 FITC AnnexinV 7AAD三色荧光法 ,多参数分析了受不同剂量γ射线照射后 ,不同时间点的胎儿骨髓CD34 造血干细胞凋亡、坏死和存活的时效和量效变化特点。结果　受大剂量率γ射线 1次 5Gy和 8Gy照射后 ,胎儿骨髓CD34 造血干细胞的死亡是在照射后为期 1周的连续性死亡 ,既有凋亡又有坏死 ,但是以凋亡为主 ;受大剂量率γ射线 1次 10Gy和 12Gy照射后 ,胎儿骨髓CD34 造血干细胞则在受照后当天即大量坏死 ,在持续 1周内全部死亡。结论　受大剂量率γ射线 1次照射后 ,造血干细胞在 1周内发生了增殖期死亡而连续性空出所占据的龛位     

rhG-CSF大剂量单次给药对非清髓骨髓移植小鼠造血功能重建的影响

目的 观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)大剂量单次给药对非清髓骨髓移植小鼠造血恢复的影响,为rhG-CSF的临床应用提供新的实验依据.方法 雄性C57BL/6J小鼠,经60Co γ射线6 Gy全身照射.于受照后0.5h给予rhG-CSF处理,通过检测接受不同骨髓移植时间(未移植组和照后0.5、6、24和48 h移植组)和rhG-CSF不同给药剂量(0、0.25、0.5和l mg/kg组)照射小鼠外周血象变化,摸索最佳接受骨髓移植时间和rhG-CSF最佳给药剂量.建立绿色荧光蛋白(GFP)小鼠非清髓骨髓移植小鼠模型,通过流式细胞仪检测受体小鼠外周血中GFP+白细胞占有核细胞总数的百分数,探究rhG-CSF大剂量单次给药对外源性干祖细胞植入的影响.结果 rhG-CSF大剂量单次给药对照后0.5～48 h内接受非清髓骨髓移植小鼠的造血恢复均有不同程度的促进作用,其中对照后24 h移植组小鼠的白细胞、红细胞和血小板的恢复最佳(F=17.76、14.75、8.66,P ＜0.05);0.25～1.0 mg/kg rhG-CSF单次给药可不同程度地促进非清髓骨髓移植小鼠的多系造血恢复,尤以大剂量rhG-CSF(1.0 mg/kg)给药时效果更为显著(F=5.34、8.92、16.54,P＜0.05);此外,照射小鼠接受GFP小鼠骨髓细胞移植后,在照后9～21 d,rhG-CSF组小鼠外周血白细胞数均明显高于移植对照组(F =35.61,P＜0.05),但GFP+细胞比例在给药组与移植对照组之间差异无统计学意义.结论 rhG-CSF大剂量单次给药可显著促进非清髓骨髓移植小鼠多系造血功能恢复,但对输入的外源造血干细胞植入率没有明显影响.     

“抗微1号”对γ—射线照射小鼠多能造血干细胞的保护作用

本实验采用了集落形成单位测定法观察抗微1号(KW-1)对γ-射线照射小鼠多能造血干细胞的保护作用。在照射前后各给KW-15天,能增加照射小鼠脾脏内源性造血灶的形成,同时,使脾脏重量和骨髓有核细胞数(NNBMC)较照射对照组明显增加,从而改善小鼠的整体造血功能;KW-1可显著加快照射小鼠多能造血干细胞(CFU-S)的增殖,使其恢复加快,4Gy照射后第14天,KW-1组CFU-S已恢复到正常水平的67.8%,而照射给水组则仅恢复到正常水平的40.7%;CFU-S剂量—存活曲线的结果表明,KW-1组与照射给水组之D_o(存活曲线上使存活细胞每减少63%所需要的照射剂量)和n(射线对靶子细胞的击中次数)无显著差异,说明KW-1对小鼠CFU-S的放射敏感性无明显影响。因此,KW-1防止照后效应,促进照射后CFU-S的增殖恢复是其抗辐射作用机制之一。     

不同剂量γ射线照射后胎儿骨髓CD34+造血干细胞死亡规律

目的 探讨不同剂量γ射线照射后胎儿骨髓CD34^ 造血干细胞的死亡规律。方法 以流式细胞术PE－CD34^ ／FITC－AmnexinV/7AAD三色荧光法、多参数分析了受不同剂量γ射线照射后,不同时间点的胎儿骨髓CD34^ 造血干细胞凋亡、坏死和存活的时效和量效变化特点。结果 受大剂量率γ射线1次5Gy和8Gy照射后,和骨髓CD34^ 造血干细胞的死亡是在照射后为期1周的连续性死亡,既有凋亡又有坏死,但是以凋亡为主;受大剂量率γ射线1次10Gy和12Gy照射后,胎儿骨髓CD34^ 造血干细胞则在受照后当天即大量坏死,在持续1周内全部死亡。结论 受大剂量率γ射线1次照射后,造血干细胞在1周内发生了增殖期死亡而连续性空出所占据的龛位。     

造血干细胞(CFU)增生状态的研究

用Till和McCulloch(1961)的方法,能定量地测定小鼠的多能造血干细胞(CFUs)。一种方法是移植少量骨髓或脾细胞进入超致死剂量照射的受体鼠,8～10天以后计数脾脏内的集落数(外源性-CFUs)。另一种方法追查亚致死剂量照射     

大鼠重组干细胞因子对小鼠的辐射防护作用

受致死剂量的小鼠用重组大鼠干细胞因子(rSCF)处理,可刺激受致死性照射小鼠的造血明显恢复。照射前后注射rSCF产生最佳防护效应提示,rSCF不仅保护造血细胞免遭早期辐射损伤,而且也刺激照后造血恢复,说明重组大鼠干细胞因子处理对小鼠具有辐射防护作用。     

TNF-α对放射所致造血损伤的保护效应

研究ＴＮＦ－α对放射所致造血损伤的保护效应及其机理。方法采用骨髓粒－单系祖细胞体外琼脂培养技术，研究ＴＮＦ－α对致死剂量６０Ｃｏγ射线全身照射小鼠的防护效果；对亚致死剂量照射后小鼠造血重建的作用，采用流式细胞技术，分析ＴＮＦ－α对小鼠骨髓细胞周期分布的影响。结果ＴＮＦ－α照射前给药能提高受致死剂量照射小鼠３０天存活率至４６．６７％，照射后１３～１９天外周血白细胞、第３天骨髓有核细胞、造血干细胞以及第３，５天粒－单系祖细胞均显著高于照射对照组（Ｐ＜０．０１），同时发现ＴＮＦ－α能阻止静止期骨髓细胞进入增殖周期。结论肿瘤坏死因子促进照射后小鼠骨髓造血的恢复，可能是ＴＮＦ－α抗放作用的重要机理之一。     

以造血干细胞动力学为基础对辐射诱发粒细胞白血病生成的研究

辐射对造血的远期效应可分为两种:一是随机效应,如白血病生成;二是非随机效应,如造血组织的再生不良。重要的是建立一个适宜的与人员受到照射后进行流行病学研究有关的实验模型。为了与一次大剂量全身照射后白血病生成配对,作者曾用3Gy照射诱发RFM/MsNrs小鼠粒细胞白血病,建立了模型系统。该模型的最大优点是照后18天通过移植测试系统,可阐明来源于造血干细胞的潜在的白血病细胞(PLC)的建立。它比明显的白血病实际发生提前三个月,而且白血病克隆的扩展     

低剂量照射对小鼠骨髓移植造血功能的影响

目的探讨低剂量照射促进小鼠骨髓移植后受体造血功能的重建。方法通过对小鼠体外骨髓细胞进行不同剂量的照射，用^3H-TdR掺入法确定产生最佳刺激增殖效应的照射剂量。在骨髓移植前，对供体小鼠骨髓细胞给予最佳刺激剂量的照射，然后将被照射的骨髓细胞输入受体小鼠内，最后动态监测受体小鼠的外周血细胞和骨髓单个核细胞数量。结果在离体情况下，经6和8cGy低剂量照射的小鼠骨髓细胞增殖能力明显增强。用低剂量照射的骨髓细胞进行骨髓移植后，受体小鼠骨髓单个核细胞数和外周血细胞计数普遍高于相应的对照组。结论低剂量照射可能促进小鼠骨髓移植后受体造血功能的重建。     

葛根黄酮的辐射防护及其机制的研究

目的研究葛根黄酮对受照射小鼠的辐射防护作用及其作用机制。方法采用^60Coγ射线照射小鼠模型，观察8Gy照射小鼠30d存活和死亡动物存活时间。在低剂量照射模型观察用药后外周血指标和脏器系数变化，用原位末端标记法观察受照射小鼠脾细胞凋亡，流式细胞仪检测脾细胞凋亡率，同时检测血清中抗氧化酶和脂质过氧化物水平。结果照前给予葛根黄酮能明显提高受照射小鼠的存活率。葛根黄酮能明显促进受低剂量（5Gy）照射后小鼠的外周血白细胞恢复，提高受照小鼠的胸腺和脾脏指数，抑制受照射小鼠脾细胞凋亡，降低脾细胞内的caspase-3活性，降低脂质过氧化物水平。结论葛根黄酮具有明显的辐射防护作用，效果明显优于愈风宁心片。葛根黄酮抗辐射作用机制可能与抑制辐射敏感细胞的细胞凋亡和抗氧化作用有关。     

小鼠骨髓细胞及骨髓基质细胞混合输注对骨髓移植后造血重建的影响

观察小鼠骨髓细胞及骨髓基质细胞混合输注对骨髓移植后造血重建的影响。给予受致死剂量照射的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠输注同基因骨髓细胞１×１０７ 个及经体外扩增的同基因原代骨髓基质细胞 ２×１０５ 个,与单纯骨髓移植组比较,移植后第１４ 天外周血白细胞、血小板回升较快,第１５ 天、第２０ 天ＢＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｓ明显高于后者,第２０ 天已达正常。　结论：原代骨髓基质细胞不仅是可以移植的,而且能够加快造血重建,提高移植效果。     

胎肝基质细胞强化骨髓移植治疗急性放射病

目的为进一步提高骨髓移植效果。方法以昆明种小鼠急性放射病为模型，进行了胎肝基质细胞强化同种异基因骨髓移植，观察了小鼠造血重建、急性移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）及小鼠存活率。结果胎肝基质细胞移植可强化骨髓移植效果，与单纯骨髓移植组比较，于照射后第１１天小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞计数，ＣＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｆ、ＣＦＵ－Ｓ回升较快，ＣＦＵ－Ｆ已达正常，于照射后第１７天造血得以重建；ＧＶＨＤ较轻，存活率显著提高，达６０％。结论胎肝基质细胞改善了造血微环境，可能既改善了“龛位”，又增加了“龛位”使干细胞更多的植入，促进了造血重建，提高了骨髓移植效果，是一种“种子与土壤”并重的移植新方法。     

河南“4.26”~(60)Co源辐射事故受照人员剂量的

目的　估算河南“4 2 6”6 0 Co源辐射事故中 6名受照人员的物理剂量。方法　确立各受照人员的受照模式 ;模拟测量辐射场的照射量率分布 ;使用组织等效拟人体模 ,对“梅”(女 )、“旺”(8岁男童 )和“天”的主要受照 ,进行剂量模拟测量 ;对“勇”、“民”、“义”的受照和“天”的部分受照 ,采用组织 空气比的方法估算他们的剂量。结果　给出“梅”和“旺”的 19个主要器官和组织剂量 ,“梅”、“旺”和“天”的全身平均剂量分别为 6 1Gy、3 4Gy和 2 4Gy;造血干细胞活存计权等效剂量分别为 5 0Gy、2 6Gy和 2 3Gy。“勇”、“民”和“义”全身平均剂量分别为 1 1Gy、0 9Gy和 0 7Gy ;造血干细胞存活计权等效剂量分别为 1 0Gy、0 9Gy和 0 8Gy。结论　给出的物理剂量估算结果与用生物学方法估算的剂量结果 ,以及受照者的临床检验和辐射损伤症状程度相一致 ,为临床诊治和剂量与效应的研究提供了可靠的剂量学数据资料。     

异基因外周血造血干细胞移植治疗极重度骨髓型和肠型急性放射病的临床报告

目的 探讨异基因外周血造血干细胞移植在肠型和极重度骨髓型放射病救治中的作用和地位.方法 山东"10·21" 60Co 辐射事故中2例病人受到意外照射,病例A受照射剂量20～25Gy,诊断为"肠型放射病",病例B受照射剂量9～15Gy,诊断为"极重度骨髓型放射病".经联合环磷酰胺、抗淋巴细胞球蛋白和氟达拉滨预处理,2例分别行HLA半相合及全相合外周血造血干细胞移植.采用环孢霉素A和骁悉方案(病例A加用CD25单抗和供者间充质干细胞)预防移植物抗宿主病(GVHD).结果 2例均移植成功,供体完全存活,移植后9～11天白细胞开始恢复,2周后白细胞恢复正常、骨髓造血重建成功.2例均未发生移植排斥和GVHD.病例A照射后33天死于败血症和多器官功能衰竭.病例B照射后75天死于心衰为主的多器官功能衰竭.结论 HLA相合及半相合外周血造血干细胞移植救治极重度骨髓型和肠型急性放射病是完全可能和可行的,联合免疫抑制剂预处理对促进供体稳定植入是必要的,环孢霉素A、骁悉和CD25单抗及供者间充质干细胞对预防GVHD有重要作用.     

X射线和γ射线预处理对小鼠异基因骨髓移植后造血免疫重建的影响

目的 研究X射线和γ射线两种预处理方式造成的损伤程度的差别,以及对造血、免疫重建的影响,确定适用于异基因造血干细胞移植的预处理照射方式.方法 对受鼠分别使用直线加速器X射线或60Coγ射线进行致死剂量(总剂量为7.0 Gy)全身照射后,给予相同数量供鼠骨髓细胞移植.观察受鼠移植后的生存时间、重要脏器(肝、小肠和肺)病理...     

全身照射的剂量估算

全身照射在骨髓移植(BMT)或造血干细胞移植(HSCT)预处理方面已成为其重要的组成部分,因此越来越引起人们的关注.全身照射实施前处方剂量可以选用百分深度剂量(PDD)、组织体模比(TPR)RA.射、出射平均剂量等方法来计算,我们尝试采用TPR、PDD等参数估算实际照射剂量及病人各器官的受照剂量.     

全身照射对造血干细胞移植后造血系统重建的临床分析

目的 分析比较全身照射对自体和异体造血干细胞移植后造血重建状况的影响。方法 对70例自体和异体造血干细胞患者移植后造血系统重建状况进行动态观察及分析。结果 两组患者移植后,粒细胞、血小板的下降与回升有一定规律性,自体移植组和异体移植组中性粒细胞恢复时间分别为14和16 d,血小板恢复时间分别为23和27 d,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。但是无论自体或异体移植组中,外周血移植均较骨髓移植的造血系统重建时间短,差异有统计学意义(P<0.05);吸收剂量≥10 Gy者血小板重建时间较<10 Gy者缓慢(P<0.05);中性粒细胞恢复时间与吸收剂量无关。结论 在全身照射剂量条件相同情况下,自体和异体造血干细胞移植后造血系统重建状况差异无统计学意义,但是外周血造血干细胞移植较骨髓移植造血重建迅速,血小板恢复时间与吸收剂量有关。     

骨髓移植后受者骨髓基质细胞起源的研究

骨髓移植的实质是造血干细胞的移植我们新近的研究证实:骨髓移植后,受者骨髓的基质细胞也受到严重的损害,但它们的重建可发生在移植后7周内,先于造血干细胞的重建。然而,重建的骨髓基质细胞属供者还是受者本身起源?仍然是一个争论的问题。为了进一步探讨这一问题,作者研究了骨髓移植后受者骨髓成纤维细胞(CFU—F)长期培养后染色体的分析,现报告如下: