胃癌Smad4、CyclinD1和p21^waf1表达意义及其与生存的关系

目的研究Smad4、CyclinD1及p21^waf1在胃癌组织中的表达状况,分析其与l临床病理特征及生存之间的关系。方法应用免疫组化S-P法,采用组织芯片技术,分析200例胃癌、56例癌旁组织中Smad4、CyclinD1和p21^waf1蛋白的表达。结果胃癌中Smad4、CyclinD1和p21^waf1蛋白的阳性表达率分别为67．0％、56．5％和59．5％。Smad4蛋白阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌降低（P〈0．01）;CyclinD1的表达水平在有淋巴结转移、低分化程度及弥漫型胃癌中高于无淋巴结转移、高分化及肠型胃癌者（P〈0．05）;p21^waf1n蛋白的阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌者下降（P〈O．05）。胃癌中Smad4与p21^waf1蛋白表达之间呈正相关性（r=0．179,P〈0．05）。用Kaplan—Meier生存曲线经Log-rank检验发现,Smad4阳性表达者预后优于阴性表达者。结论胃癌中存在TGF—Smad4信号通路的异常,Smad4蛋白的异常表达可能导致p21^waf1蛋白的低表达,进而使p21wan对细胞G1／S期的负性调控作用减弱,最终导致肿瘤的发生发展。Smad4蛋白高表达对胃癌患者是一个有利的预后因素,但尚不能作为一个独立的预后指标。     

Smad4及Smad7在胃癌组织中的表达研究

目的:研究Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达及作用.方法:病理学证实的胃癌根治术切除的胃癌组织标本78例,胃癌旁组织78例,采用SP免疫组织化学染色技术,检测Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达.结果:qDSmad4蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为69.23%,在胃癌组织中的阳性表达率为44.87%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率降低;有淋巴结转移者阳性表达率为23.25%,无淋巴结转移者的阳性表达率为71.43%,差别亦有统计学意义(P<0.01).②Smad7蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为17.95%,在胃癌组织中的阳性表达率为89.74%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率升高;有淋巴结转移者阳性表达率为97.67%,无淋巴结转移者的阳性表达率为80.00%,有淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者(p<0.05 .结论:①smad4蛋白在胃癌组织中低表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.②Smed7蛋白在胃癌组织中高表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P〈0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.     

胃癌组织中TGF-β1、Smad2与CyclinD1的表达及其相关性的研究

目的：探讨胃癌组织中转化生长因子β1（TGF‐β1）、Smad2与细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达及三者之间的相关性。方法选择2007年1月至2012年1月腔镜活检正常胃黏膜20份（正常胃组织）作为对照组,手术切除胃癌标本60份（高‐中分化、低分化）作为胃癌组,用免疫组化法检测TGF‐β1、Smad2、CyclinD1正常胃组织及胃癌组织中的表达。结果TGF‐β1及CyclinD1在胃癌组织中的表达高于对照组,Smad2在胃癌组中的表达低于对照组;TGF‐β1及CyclinD1在低分化胃癌组中的表达高于高‐中分化胃癌组;TGF‐β1及CyclinD1在无淋巴结转移的胃癌组中的表达低于有淋巴结转移的胃癌组;TGF‐β1、CyclinD1在胃癌组中的表达随着TNM分期的提高而升高,高‐中分化胃癌组Smad2较低分化胃癌组表达升高,Smad2的表达在无淋巴结转移的胃癌组中的表达高于有淋巴结转移的胃癌组;Smad2在胃癌中的表达随TNM分期的提高而降低,TGF‐β1、Smad2及Cy‐clinD1的表达与患病年龄、性别无关;TGF‐β1与Smad2呈负相关,TGF‐β1与CyclinD1呈正相关,CyclinD1与Smad2呈负相关。结论TGF‐β1、Smad2与CyclinD1的表达与胃癌的发病有关。     

Smad4在胃癌组织中表达的研究

目的检测Smad4在胃癌组织及其相应正常胃粘膜组织中的表达分布,并分析其与胃癌患者临床病理学特征之间的关系。方法选取39例经外科手术切除及组织病理学证实的胃癌患者癌组织标本及相应正常胃粘膜组织,应用冰冻切片免疫组化染色方法,在蛋白水平进行检测。结果正常胃粘膜细胞浆中都有Smad4阳性表达,39例胃癌患者癌组织中22例有Smad4阳性表达(56.4%),两者之间差异有显著性(P<0.05)。Smad4蛋白的表达与癌细胞的分化程度及浸润程度相关,分化程度越低、浸润程度越重,其阳性表达率越低(P<0.05);而Smad4蛋白的表达与年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移、远处转移无相关性。结论Smad4的表达下降与胃癌的发生有关,而且与癌细胞的分化程度及浸润程度密切相关,Smad4可能作为胃癌诊断和预后的分子标志。     

宫颈癌中p21WAF1和CyclinD1的表达与预后

目的 探讨p21WAF1和CyclinD1在宫颈癌发生、发展、预后中的意义。方法 采用免疫组化SP法检测41例宫颈癌,17例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和10例正常宫颈组织中p21WAF1和CyclinD1的表达,及它们与病理组织分级、临床分期、转移和生存时间的相关性。结果 宫颈癌组织中CyclinD1的阳性表达率明显高于CIN组和正常对照组(均为P<0.05),但与肿瘤分级、临床分期、转移无显著相关性(均为P>0.05),CyclineD1阳性表达的宫颈癌患者的中位生存期明显小于阴性表达者(均为,P<0.05)。宫颈癌组织p21WAF1阳性表达率则明显低于CIN组和正常对照组(P<0.05),p21WAF1与肿瘤分级有明显相关性(P<0.05)。结论 CyclinD1高表达,p21WAF1低表达与宫颈癌的发生、发展密切相关。CyclinD1表达可作为判断宫颈癌患者预后的指标。     

XB130在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨XB130在胃癌组织中的表达及其与胃癌分化程度、淋巴结转移及患者生存期的关系。方法收集2011年6月至2012年6月河南省人民医院保存的胃癌组织标本及相应的癌旁组织标本各72例,采用免疫组织化学法检测胃癌及癌旁组织中XB130蛋白表达,采用实时定量荧光聚合酶链反应检测胃癌及癌旁组织中XB130mRNA表达,并分析XB130表达与胃癌临床病理特征的关系。结果 72例胃癌组织标本中,XB130蛋白阳性表达26例,阴性表达46例,阳性表达率36.1%(26/72);72例癌旁组织标本中,XB130蛋白阳性表达52例,阴性表达20例,阳性表达率72.2%(52/72);胃癌组织中XB130蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织(χ~2=16.200,P<0.05)。低、中分化胃癌组织中XB130蛋白阳性表达率显著低于高分化胃癌组织(χ~2=5.786,P<0.05),有淋巴结转移者胃癌组织中XB130蛋白阳性表达率显著低于无淋巴结转移者(χ~2=4.281,P<0.05)。胃癌组织和癌旁组织中XB130 mRNA相对表达量分别为1.52±0.46、3.28±0.51,胃癌组织中XB130 mRNA表达显著低于癌旁组织(t=-21.744,P<0.05)。高分化胃癌组织中XB130 mRNA表达显著高于低、中分化胃癌组织(t=-13.982,P<0.05),有淋巴结转移者胃癌组织中XB130 mRNA表达显著低于无淋巴结转移者(t=-19.906,P<0.05)。XB130 mRNA高表达与低表达患者的平均生存期分别为(37.040±14.826)、(21.529±11.789)个月,XB130 mRNA高表达胃癌患者的生存期显著长于XB130低表达患者(t=9.121,P<0.05)。结论 XB130可能参与了胃癌的发生和发展,且与胃癌分化程度、淋巴结转移及患者生存期有关。     

肺活检材料p21waf1、CyclinE的表达与肺癌预后关系的研究

目的探讨p21waf1,CyclinE在纤支镜肺鳞癌活检组织中表达及与临床病理学特征、患者预后之间关系.方法采用免疫组化ABC方法.结果在肺鳞癌组织中p21waf1呈低水平表达,其阳性表达率(11/54)仅为20.4%.在肺鳞癌组织中CyclinE阳性表达率(17/54)为31.5%.低分化及有淋巴结转移的病例,其CyclinE表达量明显高于高中分化及无淋巴结转移的病例.结论p21waf1在肺鳞癌组织中呈低表达,CyclinE表达可作为判断肺鳞癌恶性程度的一个指标.     

CyclinD1、p27在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理特征、术后复发的关系

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p27蛋白的表达,探讨其与临床病理特征、术后复发的关系。方法回顾性分析125例NSCLC患者的临床资料。125例患者均手术切除,术后以免疫组织化学SP法检测癌组织与癌旁组织CyclinD1、p27蛋白的表达;比较不同临床病理特征患者癌组织CyclinD1、p27蛋白的阳性表达率;随访并统计复发率,对比复发者和未复发者癌组织CyclinD1、p27蛋白表达;采用Cox逐步回归分析探讨癌组织CyclinD1、p27蛋白表达与术后复发的关系。结果癌组织CyclinD1蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),p27蛋白阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);Ⅲa期、低分化患者癌组织CyclinD1蛋白阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ期,中高分化患者,p27蛋白阳性表达率低于Ⅰ、Ⅱ期、中高分化患者(P<0.05);术后复发率为63.20%,复发患者癌组织CyclinD1蛋白阳性表达率高于未复发患者(P<0.05),p27蛋白阳性表达率低于未复发患者(P<0.05);复发NSCLC患者临床Ⅲa期...     

胃癌组织中幽门螺旋杆菌感染与SOX2、CyclinD1蛋白表达的相关性研究

目的探讨胃癌组织中幽门螺旋杆菌(HP)感染与SOX2、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达的相关性。方法收集2014年1月—2015年1月河北北方学院附属第一医院经胃镜和病理检查明确诊断的胃癌标本50例,根据是否感染HP分为HP阳性组(36例),HP阴性组(14例)。采用~(13)C呼气试验和吉姆萨染色(Giemsa)法检测幽门螺旋杆菌感染,采用免疫组织化学法标记SOX2、CyclinD1,检测其在胃黏膜组织中的蛋白表达情况。比较胃癌组织SOX2、CyclinD1蛋白表达与胃癌临床病理特征之间的关系及与HP感染的相关性。结果 SOX2蛋白的表达水平与胃癌患者的性别、年龄和肿瘤大小无关(P>0.05),与临床分期、浸润深度和分化程度有关(P<0.05);CyclinD1蛋白的表达水平与胃癌患者的性别、年龄和肿瘤大小无关(P>0.05),与临床分期、浸润深度和分化程度有关(P<0.05)。SOX2阳性颗粒定位于细胞核,呈棕黄色颗粒。SOX2蛋白在HP阳性组胃癌组织中阳性表达率为5.6%,在HP阴性组阳性表达率为35.7%,2组比较差异有统计学意义(x~2=5.316,P<0.01)。CyclinD1主要定位于胃癌细胞的细胞核,呈棕黄色颗粒。HP阳性组胃癌组织中CyclinDl蛋白阳性表达率为66.7%,HP阴性组表达率为28.5%,2组比较差异具有统计学意义(X~2=2.119,P<0.05)。胃癌组织中HP感染与SOX2蛋白表达呈负相关(r=-0.81l,P<0.01),与CyclinD1蛋白表达呈正相关(r=0.274,P<0.05)。结论 HP感染可能诱发胃癌,SOX2、CyclinD1蛋白可能参与胃癌的发生、发展过程。     

p16蛋白、RUNX3蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 观察p16蛋白、RUNX3蛋白在胃癌组织中的表达及其与胃癌病理特征、预后的关系.方法 应用免疫组织化学链霉菌素- 生物素法(SP法),对52例胃癌组织行p16蛋白、RUNX3 蛋白检测,并与胃黏膜正常的16例检测结果对照.结果 p16蛋白、RUNX3蛋白在胃癌组织中的阳性表达率明显低于其在正常胃黏膜组织中的表达;在低分化、未分化胃癌组织中的阳性表达率明显低于高、中分化胃癌组织,在有淋巴结转移的胃癌中,p16蛋白、RUNX3蛋白阳性表达率显著低于无淋巴结转移组阳性表达率(P<0.05,P<0.01).结论 p16蛋白、RUNX3蛋白表达缺失与胃癌的发生、分化程度及淋巴结转移有密切关系.     

p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响

目的 探讨外源性 p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义.方法 应用脂质体介导法分别将构建的plRES-p27~(waf1)、p27~(kip1)、pIRES-p21~(waf1)-p27~(kip1)真核表达载体,转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,未转染组、转染空质粒组细胞做对照,Western免疫印迹法验证转染前后p21~(waf1)、p27~(kip1)基因蛋白表达情况;噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化;免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况.结果 Western免疫印迹法证实p27~(waf1)、p27~(kip1)、p27~(waf1)基因转染24 h后,其蛋白表达量明显增多(P<0.01),与对照组比较,各转染实验组细胞生长明显受抑制(P<0.01),细胞周期大部分停滞于G1期,各实验组G.期和S期细胞比例依次为:(69.52±3.21)%、(18.38±2.51)%,(60.83±3.02)%、(24.52±1.89)%,(78.37±2.83)%、(15.27±1.74)%,对照组则为(47.28±2.25)%、(33.52±1.97)%,中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前(13.47±0.33)%明显减少:(5.07±0.38)%,(6.28±0.35)%,(3.47±23)%,两两比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 外源性p21~(waf1)和p27~(kip1)基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制,二者联合转染时效果显著.提示,乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程,p21~(waf1)和p27~(kip1)在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用,对于p21~(waf1)、p27~(kip1)基因失活、低表达或不表达的乳腺癌,联合转染外源性p21~(waf1)、p27~(kip1)基因不失为一种有效的治疗手段.     

p21waf1基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

目的:构建人p21^waf1基因的原核表达载体并在大肠杆菌JM109中高效表达。方法:从人肝细胞中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到p21^waf1全基因。用原核细胞表达载体构建了pBV220/p21^waf1重组质粒,经DNA测序确认后,将其转化到大肠杆菌JM109进行表达、初步纯化。 结果:SDS-PAGE凝胶电泳分离显示在分子量21 000处有一诱导蛋白带,薄层扫描显示表达产物在诱导5 h时可达细菌总蛋白的38%,Western blotting证明表达产物与抗人P21^waf1单克隆抗体有特异性免疫反应。 结论:成功构建出p21^waf1表达载体,诱导产生蛋白经检测证实为P21^waf1蛋白。     

胃癌FHIT基因表达与肿瘤细胞增殖关系的研究

目的探讨人胃癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的表达及与肿瘤细胞增殖的关系.方法采用免疫组化法检测60例胃癌组织及其癌旁正常组织中FHIT基因、Ki-67蛋白、p21wafl蛋白的表达.结果(1)胃癌组织中FHIT基因表达水平显著低于癌旁正常组织(P＜0.01).(2)胃癌组织中FHIT基因表达水平与胃癌细胞增殖活性呈显著负相关(P＜0.01).(3)胃癌组织中FHIT基因表达水平降低与p21wafl蛋白的丢失存在显著正相关(P＜0.01).结论FHIT基因作为一种抑癌基因,其表达在胃癌组织中明显下降,与肿瘤细胞增殖过度有关.FHIT基因可能通过p21wafl蛋白参与了对肿瘤细胞周期的调控.     

Smad4及TβRⅡ和P21waf1在食管鳞癌的表达及意义

目的 :探讨食管鳞癌中Smad4、TβRⅡ及P2 1waf1的表达特点及其意义。方法 :80例食管鳞癌样本常规石蜡切片行Smad4、TβRⅡ、P2 1waf1免疫组织化学染色。结果 :Smad4、TβRⅡ、P2 1waf1的表达在食管癌组织学分级Ⅰ级、癌细胞未浸至深肌层和淋巴结无转移的组织样本中阳性率明显高于组织学分级Ⅲ级、癌细胞浸至深肌层或浆膜层和淋巴结有转移的组织样本 ,差异均有显著或极显著意义 (P <0 .0 5 )。结论 :Smad4、TβRⅡ、P2 1waf1与食管鳞癌的发生发展及生物学行为有关 ,随病理分期、细胞分级增高阳性表达率降低。     

Effect of Exogenous bFGF on the Proliferation of Human Adenoid Cystic Carcinoma ACC-2 Cells

To observe the effects of basic fibroblast growth factor （bFGF） on human adenoid cystic carcinoma ACC-2 cell line proliferation and ERK, cyclin D1/p21^waf/cip1 signaling pathways, human adenoid cystic carcinoma cells （ACC-2） were cultured and the influence of bFGF of different concentrations on cell proliferation was determined by MTT. Protein was detected by immuno-precipitation and ERK activity by using ERK agent kit. p-ERK1/2 and down-stream cyclin D1, p21^waf/cip1 expression were detected by Western blotting and the interfering role of mitogen protein-activated kinase （MEK） suppressor U0126 in the afore-mentioned indicators was examined. MTT demonstrated ACC-2 cell proliferation was substantially enhanced by bFGF, immuo-precipitation displayed ERK activity was up-regulated by bFGF, and immuno-imprinting also showed p-ERK1/2, cyclin D1 expression was greatly enhanced and p21^waf/cip1 expression was inhibited by bFGE U0126 suppressed the effect of bFGF. It is concluded that bFGF can promote the proliferation of human adenoid cystic carcinoma ACC-2 cells, and its pathways are associated with the up-regulated activity and expression of p-ERK1/2, inhibited p21waf/cip1 expression and enhanced cyclin D1 expression.     

地塞米松抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖的分子机制:RhoB信号通路的作用

目的 观察地塞米松（Dex）对人卵巢癌细胞HO-8910增殖的影响,探讨小G蛋白RhoB信号通路在其中的作用.方法四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）和软琼脂实验检测细胞的增殖;RT-PCR法检测RhoB mRNA的表达;Western印迹检测RhoB及其上下游信号分子磷酸化Akt（p-Akt）、p21^cip1/waf1和p27蛋白质的表达;报告基因技术检测p21^cip1/waf1基因的转录.结果Dex可以明显抑制HO-8910细胞锚依赖性和非依赖性方式的增殖,100 nM Dex处理细胞6 d,抑制率为31%.100nM Dex处理细胞可以明显上调RhoB mRNA和蛋白质的表达（为对照的2.5倍）;同时伴有p-Akt蛋白质表达的降低（24 h时约为对照的50%）、p27蛋白质表达的增加（36 h时比对照增加了3.3倍）以及p21^cip1/waf1转录和蛋白质表达增多（24h时约为对照的1.7倍）.RhoB过表达可以降低细胞的生长速度,并能增强Dex的增殖抑制作用（100 nM Dex处理6 d,抑制率为44%）;而RhoB表达阻断后可逆转Dex的这一效应（抑制率约为13%）.结论Dex抑制HO-8910细胞增殖的机制可能与抑制PI3K/p-Akt信号,从而上调RhoB蛋白质,使RhoB下游信号分子p21^cip1/waf1和p27蛋白质表达增加有关.     

丁酸钠对小鼠大肠组织抑癌基因表达的影响

目的：观察大肠癌变过程中不同类型腺体组织抑癌基因p21waf1、bax、gadd45的表达及丁酸钠对其表达的影响。方法：利用二甲基肼（DMH）制作昆明小鼠大肠癌模型,通过免疫组化和RT-PCR分别检测大肠癌变过程中,小鼠大肠粘膜不同病理状态下3种抑癌基因的表达与变化。结果：在正常粘膜发展至腺瘤的过程3种基因的表达水平逐渐升高,而癌组织中3种抑癌基因的表达不同程度的降低。丁酸钠灌肠组各基因表达明显高于对照组和DMH组,其中以p21waf1的升幅最大。结论：大肠粘膜癌变与抑癌基因p21waf1、bax、gadd45的表达有关,丁酸钠可以通过调控3种抑癌基因的表达发挥抗肿瘤作用。     

胃癌细胞 p27kip1 、cyclinE 的表达及与幽门螺杆菌感染关系

[目的]观察胃癌细胞p27^kjp1、cyclinE的表达情况，并分析幽门螺杆菌（Heticobacter pylori，Hp）感染对二者表达的影响，以探讨Hp可能的致癌机制。[方法]用免疫组织化学SP法检测59例胃癌p27^kip1、cyclinE表达情况，采用改良Giemsa快速尿素酶检验法检测HD感染。[结果]p27hp。阳性率在正常胃黏膜为84．22％，显著高于胃癌的47．46％（P〈0．05），胃癌中高中分化腺癌组为68．42％，显著高于低分化腺癌的37．5％和与胃黏液癌的31．25％（P〈0．05），但后两者间无显著性差异（P〉0．05）。cyclinE阳性率在正常胃粘膜为11．1l％，显著低于胃癌的55．93％（P〈0．05），胃癌中高中分化腺癌组为31．58％显著低于低分化腺癌的66．67％和胃黏液癌的68．75％（P〈0．05），后两者间无显著性差异（P〉0．05）。p27kjP0及cyclinE的阳性率在HD阳性和HD阴性胃癌组间无显著差异性（P〉0．05）。[结论]胃癌组织p27kipl表达下调、cyclinE表达上调，提示二者的表达失衡可能会促进胃癌的发生。但二者表达与HD感染无明显相关关系。