四价流感病毒亚单位疫苗配伍RFH01佐剂在小鼠体内的免疫原性研究

目的评价四价流感病毒亚单位疫苗配伍RFH01佐剂在小鼠模型中的免疫原性。方法按照《中国药典》2020年版(三部)的方法对4种单价流感病毒亚单位疫苗原液进行鉴别试验。在研究配伍RFH01佐剂的四价流感病毒亚单位疫苗小鼠模型中, 采用随机分组法将460只雌性6～8周龄BALB/c小鼠分为实验组、疫苗对照组、阴性对照组和空白组, 共46组, 每组10只。在研究四价流感病毒亚单位疫苗在老年和青年小鼠模型中, 采用随机分组将80只雌性10月龄和80只雌性10周龄BALB/c小鼠同时分为单价流感病毒疫苗、四价流感病毒亚单位疫苗、四价流感病毒亚单位疫苗+RFH01佐剂组、鸡胚四价流感病毒裂解疫苗对照组和PBS组, 共16组, 每组10只。均采用肌内注射免疫, 初次免疫21 d后, 采血分离血清, 并用相同程序和剂量进行加强免疫, 第42天采血分离血清。血凝抑制试验检测小鼠血清抗体水平。结果两次免疫后, 所有配伍RFH01的疫苗组阳转率均达到100%, 且血清抗体效价几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)显著高于不含佐剂的疫苗组。配伍RFH01佐剂的单价流感病毒疫苗和四价流...     

甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗对小鼠的免疫原性观察

目的:观察国产甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗对小鼠的免疫原性.方法:将不同血凝素含量(20、30、40 μg/ml)各3批甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗分别免疫小鼠,腹腔注射0.5 ml/只,每批疫苗又分为1针组、2针组,每组10只,2针间隔1周,同时设对照组.首针免疫后21天,分别采血,分离血清,检测血凝抑制抗体效价和中和抗体效价,观察疫苗的免疫原性.结果:血凝素含量为20 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组、2针组血凝抑制抗体效价均小于1:40,中和抗体效价均小于1∶200;血凝素含量为30、40 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组、2针组的血凝抑制抗体效价均大于1∶40,中和抗体效价均大于1∶200;血凝素含量为30、40 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组和2针组的血凝抑制抗体和中和抗体效价比较,差异均无统计学意义.结论:血凝素含量为30 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗接种1针即可达到理想的免疫效果.     

新型甲型H1N1流感病毒HA基因DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体

目的 探讨新型甲型流感病毒(2009H1N1)血凝素(HA)DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体特性.方法 构建2009H1N1或1918甲型流感病毒(1918H1N1)HA蛋白表达质粒2009HA和1918HA,采用25μg或200μg剂量2009HA质粒免疫小鼠,以2009HA或1918HA蛋白为包被抗原,测定小鼠血清中2009HA抗体总量或交叉反应抗体含量,分别用2009H1N1和1918H1N1两种假病毒(pp)测定抗体中和活性.结果 25 μg或200μg的2009HA质粒加强免疫小鼠后,4～16周内两组小鼠血清中2009HA总抗体水平以及对2009H1N1pp的中和抗体滴度相似(P>0.05),都含有与1918HA蛋白交叉反应抗体,对1918H1N1pp的交叉中和抗体滴度相似(P>0.05).结论 小剂量2009HA质粒DNA疫苗能够诱导小鼠产生持久的高水平中和抗体,对于预防新现流感病毒具有潜在应用价值.     

高致病性人禽流感H5N1疫苗滴鼻免疫应答效果的初步研究

目的 通过高致病性人禽流感H5N1全病毒-MF59佐剂疫苗滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价该疫苗所诱导的系统免疫与黏膜免疫应答效果.方法 以不同剂量抗原按比例与MF59佐剂配伍制成粘膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,二免2周采血检测血清IgG、IgM效价及血清中HAI(HA inhibitor)的中和抗体效价,同时收集鼻、肺灌洗液,检测其lgG和slgA抗体效价.结果 H5NI+MF59组血清抗体效价较H5NI组有显著升高(P＜0.01);在各剂量组中,随着剂量的增加抗体效价呈上升趋势.12μg腭后抗体效价呈下降趋势,以HSNI+MF59(12μg)组效价最高;肺鼻灌洗液中,均可检测到特异性分泌型IrA、IsG,其中特异性分泌型IgA效价略高于IgG;抗体亚型的分布以IgG1、IgG2b为主.结论 灭活高致病性禽流感全病毒H5N1在佐剂MF59作用下可诱导机体产生体液免疫应答,同时还可以在黏膜局部产生特异性分泌型IgA、IsG,为高致病人禽流感病毒I-15N1黏膜疫苗的研制奠定了基础.     

恶性疟疾疫苗M.RCAg-1与候选佐剂纳米乳配伍的免疫原性研究

为了评价纳米乳作为佐剂对恶性疟疾人工重组蛋白疫苗M.RCAg-1免疫原性的影响,将纳米乳佐剂与M.RCAg-1相配伍,于第0、14、28 d肌肉注射免疫小鼠,抗原量为20μg/只。第3次免疫后10 d,眼球取血并取脾细胞。采用ELISA法检测小鼠血清特异性Ig G抗体水平、抗体亚类及其对抗原单表位的识别,用间接免疫荧光反应(IFA)检测抗体对恶性疟原虫天然蛋白的识别,用ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞免疫应答水平。结果显示疫苗佐剂组小鼠血清中抗M.RCAg-1的抗体水平可达1∶108;疫苗佐剂组产生的特异性Ig G抗体以Ig G1为主;疫苗佐剂组抗体对抗原单表位和天然虫体的识别效果显著。各表位和蛋白诱发免疫小鼠分泌IFN-γ的特异性淋巴细胞克隆数高于分泌IL-4的特异性淋巴细胞克隆数。结果提示纳米乳作为恶性疟疾疫苗M.RCAg-1的佐剂,能够显著提高机体的体液免疫和细胞免疫应答水平。     

登革病毒重组亚单位疫苗的构建及免疫原性分析

目的 构建登革病毒1～4型重组亚单位疫苗,分析重组疫苗的免疫原性.方法 利用连接肽将登革病毒1型与2型,3型与4型的外膜蛋白DⅢ基因片段连接在一起,克隆人原核表达载体pET-30a,在大肠埃希菌中表达DEN1/2型、DEN3/4型融合重组蛋白.重组蛋白经高效液相色谱柱分离纯化后,混和免疫小鼠,采用中和实验法测定血清中和抗体效价,同时进行乳鼠体内中和实验,观察中和抗体对乳鼠的免疫保护作用.结果 重组蛋白能诱导小鼠产生针对登革病毒1～4型的中和抗体,平均中和效价分别为1：34.9、1：45.3、1：24.7和1：38.4.中和抗体能保护新生乳鼠免受致死剂量DEN1～4的攻击,保护率分别为100%,100%,83%,83%.结论 构建的重组亚单位疫苗具有良好的免疫原性,能诱导小鼠产生中和抗体,为构建单一四价疫苗提供了实验室依据.     

登革病毒Ⅱ型E基因片段在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析

目的分析登革病毒Ⅱ型（DEN2）重组包膜蛋白的免疫原性，为登革Ⅱ型亚单位疫苗的研制奠定基础。方法扩增DEN2E基因片段（254—395AA），与表达载体pET-30a连接，构建重组表达载体，在大肠杆菌BL21（DE3）中表达重组蛋白。重组蛋白经高效液相色谱（HPLC）柱纯化后，进行阻断DEN2感染C6／36细胞试验，同时用重组蛋白免疫小鼠，采用中和实验法测定血清中和抗体效价。结果该基因片段在大肠杆菌中高效表达重组蛋白，重组蛋白可被抗DEN2多克隆抗体识别，纯化后的重组蛋白能有效地抑制DEN2感染C6／36细胞，经重组蛋白免疫的小鼠可产生中和抗体。结论表达的DEN2重组包膜蛋白具有良好的免疫原性，能诱导中和抗体的产生。     

溶酶体靶向的汉坦病毒包膜糖蛋白DNA 疫苗的体液免疫评价和攻毒保护效果

目的:构建嵌合溶酶体相关膜蛋白(LAMP)的汉坦病毒糖基化蛋白DNA 疫苗并对其免疫进行评价。方法:利用前期实验构建的重组质粒pVAX-Gn、pVAX-Gc、pVAX-LAMP/ Gn 和pVAX-LAMP/ Gc 以及inactivated 疫苗免疫BALB/ c 小鼠,分别通过间接ELISA 和中和试验检测免疫小鼠血清中的特异性抗体和中和抗体;攻毒实验检测小鼠体内的保护效力。结果:间接ELISA 结果显示,pVAX-LAMP/ Gc 组特异性抗体滴度最高,依次为pVAX-Gc、pVAX-LAMP/ Gn、pVAX-Gn 与inactivated疫苗组;中和结果显示,LAMP 组均优于相应传统DNA 疫苗组,且抗体效价均优于Inactived vaccine 组;攻毒实验显示,DNA 疫苗和inactivated 疫苗组小鼠体内无汉坦病毒特异性抗原检出。结论:LAMP 分子的嵌合DNA 疫苗可诱导更高水平的抗体,在小鼠体内有较好的保护效力,这一靶向策略有望成为提高DNA 疫苗效价的有效方式。     

手足口病CA16型VP1亚单位疫苗的构建制备及免疫原性初步分析

目的 制备CA16型VP1蛋白疫苗并进行免疫原性初步分析,为手足口病CA16疫苗的深入研究提供资料.方法 利用RT-PCR技术获得CA16 VP1基因,克隆到载体pFastBac HT A,与Bacmid DNA重组,转染Sf9昆虫细胞,重组CA16 VP1蛋白与Al(OH)_3佐剂混合制备重组CA16 VP1蛋白疫苗,腹腔免疫BALB/c小鼠,2次免疫后进行免疫效果初步评价.结果 用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western blot法,证明重组CA16 VP1蛋白在昆虫细胞Sf9中得到表达,用ELISA和微量中和法检测到免疫小鼠血清有特异IgG和中和抗体产生,最佳免疫抗原剂量为20μg,其特异IgG效价为1:1600,中和抗体效价为1:250;通过淋巴细胞增殖试验和细胞因子测定,证明诱导T细胞应答,诱发Th1/Th2型免疫应答.结论 CA16 VP1基因克隆成功,并在Sf9昆虫细胞中获得表达,构建的蕈组CA16 VP1亚单位疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为今后研制手足口病CA16疫苗奠定了基础.     

重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗构建和免疫保护效果

目的构建和拯救重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株,并通过动物实验评价其免疫原性及免疫保护性。方法利用流感病毒反向遗传学技术,以流感病毒为载体,将RSV保护性抗原G蛋白表位的基因插入到流感病毒非结构蛋白NS1基因,拯救重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G,进而对rFLU/RSV/G的特性进行全面鉴定。rFLU/RSV/G滴鼻免疫Balb/c小鼠,通过检测中和抗体效价、血清抗体(IgG、IgG1、IgG2a)和黏膜抗体sIgA效价以及细胞因子(IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α)的分泌量来评价机体产生的体液、细胞和黏膜免疫反应。攻毒实验评价rFLU/RSV/G的免疫保护性,观测小鼠的体质量变化、病毒载量、存活情况以及肺病理变化。结果成功拯救出重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G。重组病毒rFLU/RSV/G与流感病毒颗粒形态和大小分布相符,并且表达针对RSV的特异性蛋白NS1-G。动物实验表明rFLU/RSV/G诱导小鼠机体产生较高的中和抗体、RSV特异性的Th1型细胞免疫反应以及黏膜免疫反应。攻毒实验显示rFLU/RSV/G对RSV A2株和PR8流感病毒野毒株具有一定免疫保护效果,能够有效降低肺鼻的病毒载量,肺组织病变情况明显减轻,且无小鼠死亡。结论重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G是一个有前景的RSV候选疫苗株,具有较高的免疫原性和免疫保护性,值得在棉鼠和猴子进行进一步研究。     

恶性疟原虫多表位人工随机重组疫苗M.RCAg-1的中试规模制备与鉴定

中试规模高效制备恶性疟原虫多表位人工随机重组疫苗M.RCAg-1,并对其免疫原性进行鉴定。20 L培养基规模发酵培养M.RCAg-1的工程菌,产物经高压匀浆破碎后,通过镍琼脂糖凝胶FF层析和琼葡糖凝胶G200 HP层析两步分离纯化获得中试M.RCAg-1。将15只BALB/c小鼠随机地平均分为3组（弗氏佐剂组、中试M.RCAg-1与弗氏佐剂配伍组和小试M.RCAg-1与弗氏佐剂配伍组）进行皮下免疫,利用间接Elisa和间接免疫荧光（IFA）技术对3次免疫后小鼠血清中的特异性抗体进行分析。IPTG诱导4 h后发酵结束,菌体产量25 g/L,M.RCAg-1约占菌体总蛋白的24%;经两步柱层析分离纯化后,目的蛋白纯度大于95%,回收率高达53.2%;与弗氏佐剂对照组相比,中试M.RCAg-1和小试M.RCAg-1都能在小鼠体内诱生高水平的特异性抗体应答,其抗体滴度均可达到1:1 024 000。与此同时,两实验组鼠血清抗体的对疟原虫天然抗原都有识别,其识别水平并无差异（P>0.05）。本研究成功地高效制备出多表位人工随机重组疫苗M.RCAg-1,并在小鼠体内证实其具有良好的免疫原性,为随后进行的M.RCAg-1的临床前研究奠定基础。     

重组霍乱毒素B亚基与恶性疟原虫多表位融合蛋白的免疫原性研究

目的　评价霍乱毒素B亚基与恶性疟原虫多价抗原的融合蛋白的免疫原性。方法　在大肠杆菌中表达重组霍乱毒素与恶性疟原虫多价抗原的融合蛋白 ,通过免疫小鼠评价融合蛋白的免疫原性。结果　通过亲和层析纯化霍乱毒素B亚基与恶性疟原虫多价抗原的融合蛋白 ,不加任何佐剂 ,以 5 0 μg/只的剂量免疫C5 7BL/ 6J小鼠 ,3次免疫后 ,CTB抗体滴度达 1∶6 40 0 ,抗疟原虫抗体滴度 1∶16 0 0 ,其CTL活性为 2 0 7%。结论　霍乱毒素具有较好的佐剂作用 ,经融合蛋白免疫的小鼠能产生良好的体液和细胞免疫 ,为评价该抗原的免疫保护作用打下了基础     

登革病毒外膜蛋白DⅢ区融合基因真核表达载体的构建及免疫效果研究

目的:构建登革病毒外膜蛋白DⅢ区融合基因真核表达载体并分析其免疫原性.方法:利用连接肽将登革病毒1型与2型、3型与4型的外膜蛋白(E蛋白)DⅢ基因片段连接在一起,克隆人真核表达载体pCDNA3.1(+),构建DEN1/2型、DEN3/4型EDⅢ融合基因的二价真核表达载体,转染哺乳动物细胞BHK-21,用间接免疫荧光法和免疫印迹法鉴定目的蛋白的表达.将两种二价重组质粒混合形成四价DNA疫苗免疫小鼠,观察其免疫原性及诱导产生中和抗体的能力.结果:二价重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的蛋白,四价DNA质粒免疫小鼠,能诱导产生针对登革病毒1~4型的中和抗体,平均中和效价分别为l:24.7、1:26.9、1:13.4、1:16.0.结论:本研究构建的DNA质粒在小鼠模型中具有良好的免疫原性,为登革多价DNA疫苗的研究提供了可行性.     

肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2的免疫原性和保护效果评价及保护机制初步研究

目的采用肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2为抗原制备重组蛋白疫苗, 在小鼠肺炎模型中评价疫苗的免疫原性、保护效果和保护机制。方法利用大肠埃希菌原核表达系统表达肺炎克雷伯菌KPC-2蛋白, 经GST亲和层析对目的蛋白进行纯化;采用KPC-2蛋白制备疫苗, 经皮下注射免疫新西兰兔, 心脏采血分离血清, 用Protein G亲和层析纯化多克隆抗体, 同时运用调理吞噬杀菌试验检测抗体的体外杀菌活性。采用KPC-2疫苗免疫雌性BALB/c小鼠3次, 间接ELISA检测血清中特异性IgG抗体滴度。末次免疫后7 d, 通过气管插管构建小鼠肺炎克雷伯菌肺部感染模型, 感染1 h后尾静脉给予0.1 mg美罗培南治疗, 通过比较免疫组与佐剂组的生存率、细菌定植量和组织病理学差异, 以及给药组与生理盐水组生存率的差异评价疫苗的保护效果。采用KPC-2多克隆抗体被动免疫评价抗体的保护效果。结果 KPC-2免疫组小鼠血清特异性IgG水平显著高于对照组(t=4.325,P<0.05), 免疫组生存率显著高于对照组[70% (7/10)vs 10% (1/10), P<0.05];免疫组小鼠肺组织炎性程度及...     

甲型H1N1流感病毒样颗粒疫苗的初步研究

目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot、血凝、单向免疫扩散,透射电镜等方法鉴定病毒样颗粒;使用A/California/07/2009(H1N1)裂解疫苗作为对照,腹腔注射免疫Balb/c小鼠,并使用A/Beijing/501/2009(H1N1)进行攻毒,评价病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果。结果经鉴定,纯化后的病毒样颗粒血凝滴度为1:512,HA含量为92.9μg/ml,颗粒大小在100 nm左右,二免10 d后IgG抗体效价7.9×103,血凝抑制实验测得血抑(Hemagglutination Inhibition,HI)效价384,对50LD50的A/Beijing/501/2009(H1N1)病毒的保护率达到100%。结论甲型H1N1流感病毒样颗粒的免疫原性显著高于裂解疫苗,为发展不依赖鸡胚生产的流感亚单位疫苗提供了技术保证。     

CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响

目的 研究CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗体液免疫和细胞免疫效果的影响,为今后研制新佐剂流感疫苗和解决流感疫苗产能不足的问题提供依据.方法 以不同剂量的2009 H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,分别以CpG-ODN、氢氧化铝以及CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂为疫苗佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、血凝抑制试验和假病毒中和试验等方法评价体液免疫效果,通过ELISPOT、胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤等方法评价细胞免疫效果.结果 与无佐剂对照组相比,CpG-ODN或氢氧化铝单独使用能够在一定程度上增强体液免疫,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高3～6倍、2～4倍和4～8倍.CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂具有更强的佐剂效应,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高23～ 57倍、9～20倍和16～64倍.根据体液免疫结果,复合佐剂能够使流感病毒裂解疫苗的抗原用量降低至少16倍.此外,复合佐剂能够显著增强流感病毒裂解疫苗的细胞免疫应答,不但能够促进抗原特异性CD4+T细胞的IFN-γ分泌,而且能够促进抗原特异性CD8+T细胞的CTL杀伤活性.结论 CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂能够增强流感病毒裂解疫苗的体液免疫和细胞免疫应答并显著降低抗原用量.     

新型冠状病毒和甲型流感病毒双价DNA疫苗的构建与免疫原性研究

目的构建新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)和甲型流感病毒双价DNA疫苗, 并在小鼠模型中评价其免疫原性。方法将SARS-CoV-2 Beta突变株S1蛋白编码序列和甲型流感病毒Cambodia (H3N2)株HA蛋白编码序列进行密码子优化合成, 采用Over-lapping PCR方法, 将两个编码基因通过自裂解2A肽(self-cleaving 2A peptides)序列连接成S1-2A-HA片段, 构建能同时表达S1蛋白和HA蛋白的双价DNA疫苗, 命名为pVRC-S1-2A-HA, 间接免疫荧光和Western blot验证S1蛋白和HA蛋白的表达。将DNA疫苗以肌肉注射加电转途径(IM+EP)免疫BALB/c小鼠, 间接ELISA、假病毒中和试验和血凝抑制试验检测小鼠体液免疫应答, IFN-γ ELISPOT、胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining, ICS)和CBA法检测小鼠细胞免疫应答。结果双价DNA疫苗pVRC-S1-2A-HA可...     

新型冠状病毒重组RBD重复串联三聚体蛋白疫苗作为加强针可在小鼠中诱导较强的免疫应答和交叉中和反应

目的研究新型冠状病毒重组蛋白疫苗作为加强针的效果。方法选择新型冠状病毒受体结合域(receptor binding domain, RBD)进行3次重复拷贝串联作为免疫原(RBD-sc-trimer), 利用昆虫杆状病毒表达系统表达RBD-sc-trimer重组蛋白, 并用His-标签亲和纯化。纯化产物进行Western blot鉴定并在体外验证其与人血管紧张素转化酶2(human angiotensin converting enzyme 2, hACE2)的结合能力。在BALB/c小鼠模型中进行免疫原性检测(结合抗体及中和抗体), 同时与RBD二聚体(RBD-Fc)、RBD单体(RBD)和刺突蛋白三聚体(S trimer)进行比较。结果 RBD-sc-trimer的免疫原性优于RBD-Fc和RBD, 并能达到S trimer的水平。RBD-sc-trimer能诱导产生较强的Th1偏向型抗体应答, 并能交叉中和新型冠状病毒Beta、Delta和Omicron变异株, 其中相较于原始毒株, 针对Omicron的中和抗体水平仅下降9.1倍, 远低于RBD-Fc(68.4倍)和S trim...     

酵母表达的戊型肝炎病毒结构区ORF2蛋白的免疫原性研究

目的 研究巴氏毕赤酵母表达系统表达的戊型肝炎病毒（Hepatitis Evirus,HEV)结构区ORF2蛋白的免疫原性。方法 将重组蛋白免疫BALB/c小鼠。首先通过亲和捕获反转录PCR鉴定免疫小鼠抗血清是否能结合感染HEV恒河猴粪便及胆汁中的病毒颗粒,其次将重组蛋白分别以不同免疫途径,不同佐剂免疫小鼠,通过检测小鼠血清中抗-HEVORF2抗体阳转率及抗体滴度,观察其免疫原性。结果 亲和捕获反转录PCR阳性,表明免疫鼠抗血清可以捕获感染恒河猴粪便及胆汁样品中的HEV。在小鼠免疫实验中,肌内免疫优于腹腔免疫,抗原联合铝佐剂及CpG佐剂及CpG佐剂优于抗原联合铝佐剂,以抗原联合铝佐剂和CpG佐剂经股四头肌免疫小鼠,4周后加强一次的免疫效果最佳,ED500为0.023μg,实验表明,巴氏毕赤酵母表达的重组HEVORF2蛋白刺激小鼠产生的抗体,不仅可以特异性结合天然HEV,而且该蛋白在小鼠体内可以有效地诱发体液免疫反应。结论 巴氏毕赤酵母表达系统表达的HEVORF2蛋白具有良好的免疫原性,这为新型戊型肝炎疫苗的研制奠定了基础。     

甲型流感病毒血凝素头部蛋白结构域的原核表达及血清学分析

目的在原核系统中表达流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)头部蛋白并进行血清学分析。方法将H1N1和H3N2型流感病毒的HA头部蛋白编码基因克隆到pET-22b(+)原核表达质粒中, 通过IPTG诱导, 在大肠埃希菌BL21中获得含有HA头部与His-Tag的融合蛋白rH1N1-HA和rH3N2-HA。SDS-PAGE分析IPTG诱导前后的融合蛋白, 验证表达的准确性, Western blot验证重组蛋白的表达。纯化重组蛋白, 多剂次免疫家兔, 获得针对H1N1-HA和H3N2-HA头部的多克隆抗体。同时, 重组蛋白免疫BALB/c小鼠, 评价其免疫原性。结果 rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白在小鼠体内诱导了滴度高于40的血凝抑制抗体, 可作为一种保护性抗原。rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白制备的多克隆抗体, 可作为Western blot、ELISA等免疫学应用的重要材料。结论本研究制备的HA头部蛋白可作为一种保护性抗原, 在小鼠体内诱导保护性抗体。HA头部制备的多克隆抗体, 可用于甲型流感病毒的免疫学和血清学研究。