地塞米松诱导小鼠骨髓基质细胞成骨的分子机制

目的 研究骨髓间充质细胞成骨分化的分子机制，为将其作为基因治疗的载体细胞奠定理论基础。方法 取成年小鼠股骨骨髓，贴壁培养，分别用矿化诱导培养基（10^-7 M地塞米松、10mM β-甘油磷酸钠和50mg／ml抗坏血酸）与骨形成蛋白2诱导，用RT-PCR检测Runx2，Osx和骨钙蛋白基因表达，茜素红染色鉴定钙节结。结果 RT-PCR显示，矿化培养基诱导组仅有Osx和OCN表达，BMP2诱导组Runx2，Osx和OCN全部表达，而两组茜素红染色均呈阳性钙结节。结论 地塞米松诱导的成骨作用中可能通过不同于BMP2的信号通路起作用。     

慢病毒载体介导的bFGF基因转染兔BMSCs的实验研究

摘要： 目的 观察在体外培养条件下, 慢病毒载体介导的碱性成纤维细胞生长因子 （bFGF） 基因转染对兔骨髓基质干细胞 （BMSCs） 生物学特性的影响。方法 采用密度梯度离心法及贴壁筛选法获取 BMSCs; 利用慢病毒载体将 bFGF 基因转染到 BMSCs 中, 根据转染条件分为 bFGF 转染组、 空病毒组、 未转染组, 转染后分别对 3 组细胞的形态 bFGF mRNA 及蛋白表达、 细胞增殖情况、 细胞周期及碱性磷酸酶 （ALP） 活性进行观察。结果 采用密度梯度离心法和贴壁筛选法, 成功获得高纯度的 BMSCs。载有 bFGF 基因的慢病毒转染 BMSCs 后, 细胞形态无明显变化, 而 bFGF mRNA 与蛋白表达均明显增强、 细胞增殖曲线上移、 增殖期细胞比例增大、 ALP 活性明显增高, 与空病毒组及未转染组比较, 差异均有统计学意义 （P＜0.05)。结论 利用慢病毒载体将兔 bFGF 基因导入体外培养的 BMSCs, 目的基因获得稳定表达, 并且自身过表达的bFGF 可以促进BMSCs 的增殖与成骨分化。     

LncRNA XIST调节miR-545-3p/SMAD5轴对人成骨细胞增殖、迁移及成骨分化的影响

目的 探讨长链非编码RNA X染色体失活特异转录本(lncRNA XIST)调控miR-545-3p/SMAD5轴对人成骨细胞(hOB)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法 将hOB细胞分为ctrl组、pcDNA组、pcDNA-XIST组、pcDNA-XIST+miR-NC组、pcDNA-XIST+miR-545-3p mimic组；qRT-PCR检测细胞中XIST、miR-545-3p表达；CCK-8法检测细胞增殖；划痕实验检测细胞迁移；Western blot检测细胞中SMAD5、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)蛋白及细胞核中p-SMAD5蛋白表达；茜素红S染色检测矿化结节形成；双荧光素酶报告基因实验分别验证XIST和miR-545-3p、miR-545-3p和SMAD5的关系。结果 与ctrl组、pcDNA组比较，pcDNA-XIST组hOB细胞中XIST表达、OD₄₅₀值(48、72 h)、划痕愈合率、SMAD5、ALP、Runx2、OCN蛋白及核p-SMAD5蛋白表达升高，miR-545-3p表达降低，矿化结节形成...     

巴戟天多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和骨向分化的影响

目的通过观察巴戟天多糖对骨髓间充质干细胞骨髓间质干细胞(BMSCs)增殖和骨向分化的影响。方法利用髓贴壁法分离培养BMSCs,并通过形态学、流式细胞仪检测细胞表面标志物以鉴定所取得的细胞;采用细胞计数(CCK-8)法检测不同浓度巴戟天多糖对BMSCs增殖情况的影响;对硝基苯磷酸盐法(p NPP)检测不同浓度巴戟天多糖对BMSCs碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,以确定其最佳促分化的剂量。后续实验分空白组、巴戟天多糖组、成骨诱导组,在培养第7,14,21天分别收集各组细胞上清液,检测其ALP活性;培养第21天采用茜素红染色法检测各组BMSCs矿化情况。结果随着培养时间的延长,巴戟天多糖高、中浓度组可显著提高BMSCs的增殖(P0.05),其中高浓度组效果最佳。与空白组相比,巴戟天多糖组可提高BMSCs上清液中ALP活性(P0.05),增加其矿化结节数(P0.05)。结论巴戟天多糖能促进BMSCs的增殖及向成骨细胞分化的能力。     

唑来膦酸盐通过p38 MAPK信号通路调控高糖微环境下成骨细胞分化

目的 探讨唑来膦酸盐（ZOL）对高糖微环境下小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）通路的调节作用。方法 体外培养MC3T3-E1细胞并分为低糖（LG）组、LG+ZOL组、高糖（HG）组、HG+ZOL组。ZOL为0.1μmol/L,LG、HG的葡萄糖浓度分别为5.5 mmol/L和16.5 mmol/L。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖水平;鬼笔环肽染色观察细胞骨架;试剂盒检测细胞碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;免疫荧光法检测Wnt5a、p38 MAPK的荧光表达强度。另设HG+ZOL+p38 MAPK通路抑制剂（SB203580）组,SB203580为10μmol/L。Western blot检测5组细胞中Wnt5a、p38 MAPK、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、骨形态发生蛋白2(BMP2)和Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）的表达水平。结果 4组细胞增殖水平差异无统计学意义（P>0.05）。与LG组比较,LG+ZOL组细胞骨架清晰程度,ALP活性,茜素红矿化结节生成,W...     

BMP-2 通过BMP/Smad/ID3 通路调控非小细胞肺癌 A549细胞的凋亡

目的探讨BMP-2通过BMP通路调控非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法通过双酶切/连接克隆的方法,构建BMP-2 siRNA慢病毒载体及BMP-2慢病毒载体并进行包装;转染慢病毒后,采用荧光显微镜对转染效率进行定性分析,流式细胞术对转染率进行定量分析,RT-qPCR和Western blotting检测BMP-2基因的表达,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡蛋白的表达水平以及A549细胞中Smad1/5/8、磷酸化Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)和ID3蛋白的表达水平。结果转染后第3、4 d,BMP-2 siRNA可显著抑制A549细胞的增殖(P<0.05);转染后24 h,BMP-2 siRNA可显著诱导A549细胞的凋亡(P<0.05),且活化的凋亡蛋白Caspase-9和Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),而过表达ID3可抑制BMP-2 siRNA对细胞凋亡的诱导作用。与未处理组和阴性对照组相比,BMP-2过表达组细胞中p-Smad1/5/8表达水平显著上调(P<0.05),而Smad1/5/8总蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),ID3蛋白的表达显著上调(P<0.05)。结论BMP-2可通过BMP/Smad/ID3通路参与调控A549细胞的增殖和凋亡。     

Smad6信号干扰对MSCs骨向分化的影响

目的研究Smad6信号干扰对骨形态发生蛋白2（BMP-2）诱导的骨髓间充质干细胞（MSCs）骨向分化的促进效应。方法培养小鼠MSCs,用BMP-2诱导骨向分化。细胞分为3组：A组细胞用携带绿色荧光蛋白（GFP）的Smad6重组RNA干扰载体转染;B组细胞用空白载体转染;C组细胞作为对照。结果病毒转染后GFP在MSCs中有效表达,病毒转染效率达98．5％。与B组比较,Smad6RNA干扰显著提高了A组细胞AIP活性和骨钙素水平（P〈0．01）,而C组ALP活性和骨钙素水平均显著低于其他2组（P〈0．01）。茜素红染色显示,A组矿化结节数目显著多于B组（P〈0．05）,而c组无矿化结节形成。结论Smad6RNA干扰可有效促进BMP-2诱导的MSCs骨向分化,该研究为骨组织工程中骨缺损修复提供了一个极具价值的手段。     

胰高血糖素样肽-1及其类似物EX-4促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化

目的:观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其受体激动剂exendin-4(EX-4)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法:取大鼠股骨和胫骨全骨髓,采用贴壁法分离BMSCs并传代至第三代,培养2d后分成4组:BMSC组、诱导成骨组(osteoblast induced medium,OIM组)和诱导加药组,诱导加药组细分为GLP-1(10-9~10-7 mol/L)或EX-4(10-9~10-7 mol/L)的不同浓度组,MTT法检测细胞增殖能力;测定碱性磷酸酶(ALP)活性;通过ALP染色及茜素红染色观察药物诱导BMSCs向成骨细胞分化、矿化的效果;采用RT-PCR方法检测ALP和Runx2成骨相关基因的表达情况。结果:与诱导对照组相比,GLP-1及EX-4各浓度处理组呈剂量依赖性显著促进细胞增殖(P<0.05);ALP染色与茜素红染色结果显示,对照组无显色或显色不明显,而GLP-1及EX-4组均有阳性显色。GLP-1及EX-4可以显著提高ALP活性,并提高Runx2、ALP的表达水平。结论:GLP-1及EX-4不仅能够直接促进BMSCs增殖,并促进其向成骨细胞分化,GLP-1及EX-4可能在骨重建中发挥重要的作用。     

竹叶总黄酮通过抑制Nox4减轻H_2O_2诱导的成骨细胞氧化损伤

目的探究抑制烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox4)表达后竹叶总黄酮对H2O2诱导的成骨细胞氧化损伤的减轻作用。方法 M3T3-E1成骨细胞培养后分为5组,正常组、损伤组、药物处理组、空白转染组、Nox4转染组。收集细胞上清液,采用酶联免疫法测定超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量,DCFH-DA荧光探针法检测活性氧(ROS)含量。钙结节染色、碱性磷酸酶(ALP)染色观察细胞成骨能力;MTT法检测M3T3-E1细胞活力;流式细胞仪检测M3T3-E1细胞凋亡情况;Western blot检测Nox4蛋白的表达。结果与正常组、药物处理组、NOX4转染组比较,损伤组、空白转染组SOD含量降低,MDA、LDH、ROS含量升高。ALP染色显示,损伤组成骨细胞大量损伤,数量明显减少,药物处理组、NOX4转染组细胞损伤程度明显降低,数量有所增加。茜红素染色显示,损伤组细胞钙结节数量减少,药物处理组、NOX4转染组细胞钙结节数量增多。与损伤组、空白转染组比较,药物组、NOX4转染组ALP活性升高。MTT显示,损伤组细胞活力明显降低,药物处理组、NOX4转染组细胞活力升高。流式细胞仪结果显示,损伤组、空白转染组细胞出现大量凋亡,药物处理组、NOX4转染组凋亡程度较轻。Western blot显示,药物处理组、Nox4转染组M3T3-E1细胞Nox4蛋白相对表达量明显降低。结论竹叶总黄酮对H_2O_2诱导的成骨细胞氧化损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制Nox4蛋白表达有关。     

TIMP-1-shRNA基因体外转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的 探讨联合应用RNA干扰与干细胞移植技术在肝纤维化治疗中的应用.方法 采用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并进行流式细胞学鉴定.按使用慢病毒包装系统建立沉默基质金属蛋白酶抑制剂-1 (TIMP-1)基因不同位点分为三组:BMSCs株SH1组(LV-3-TIMP-1-rat-246),SH2组(LV-3-TIMP-1-rat-142),SH3组(LV-3-TIMP-1-rat-373).同时设立转染空载体组(LV-3-shNC,D组).观察各组细胞转染前后形态和荧光的表达;抽提蛋白,应用Western blot技术检测TIMP-1蛋白的表达.结果 原代培养大鼠BMSCs呈梭形,传代后漩涡状生长.慢病毒转染BMSCs 7 d后,各组均可检测到荧光出现,转染前后细胞形态无改变.在3个实验组中,SH3组TIMP-1蛋白表达最低(P＜0.05).结论 应用慢病毒包装系统可以建立沉默TIMP-1基因的BMSCs株,为BMSCs联合RNA干扰技术治疗肝纤维化提供了实验基础.     

ZHX3 基因沉默对BMSCs 中成骨相关因子表达的影响

目的探讨锌指蛋白和同源框3（ZHX3）基因沉默对骨髓间充质干细胞（BMSCs）中smad3、smad4、RUNX2 表达的影响。方法构建ZHX3 低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs（ZHX3 沉默组）,同时设空载病毒转染BMSCs （载体对照组）及不做任何处理的BMSCs（空白对照组）。荧光显微镜下测定细胞转染率并采用免疫印迹技术鉴定转染是否成功;采用免疫荧光化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3 沉默时smad3、smad4、RUNX2 表达情况。结果（1）复苏培养的细胞具有BMSCs 表型。（2）转染后,ZHX3 沉默组和载体对照组均表达绿色荧光,空白对照组不表达荧光,且沉默组ZHX3 基因表达显著低于载体对照组。（3）免疫荧光结果显示,smad3、smad4 的阳性表达位于细胞核和细胞质,RUNX2 的阳性表达主要定位于细胞核。3 组细胞均可见阳性表达细胞,且空白对照组与载体对照组之间荧光强度未见显著差异,但ZHX3 基因沉默组的荧光强度显著低于2 个对照组。（4）免疫印迹检测smad3、 smad4、RUNX2 的条带于空白对照组和载体对照组中无显著差异,但均显著高于ZHX3 沉默组（P＜0.05）。结论 ZHX3 基因沉默后BMSCs 体外成骨能力延迟,可能通过下调smad3、smad4、RUNX2 来发挥作用。     

Beagle犬牙周韧带成纤维细胞和骨髓基质细胞体外成骨再生潜能的比较

目的 比较Beagle犬牙周韧带成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts cells, PDLFs)和骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)体外成骨潜能，为筛选合适的种子细胞促进牙周组织再生提供实验依据。方法 体外通过茜素红染色、Realtime-PCR比较两种细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)及骨保护素(osteoprotegerin, OPG)的表达。结果 茜素红染色显示PDLFs成骨能力高于BMSCs; Realtime-PCR显示，PDLFs的OPG表达量高于BMSCs,差别有统计学意义(P<0.05);PDLFs的ALP表达量虽低于BMSCs,但两者之间差别无统计学意义(P>0.05)。结论 PDLFs体外成骨潜能不低于BMSCs。     

骨碎补含药血清经wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的研究骨碎补含药血清经wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用,探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度含药血清干预BMSCs,CCK-8法分别检测血清干预BMSCs 3、5、7、9 d BMSCs的增殖能力,连续诱导7、10、14 d并进行ALP活性检测,诱导21 d后茜素红染色评价BMSCs的矿化能力,RT-PCR法检测β-catenin、LRP5、GSK-3β、RUNX-2及Osteriex mRNA表达;ELISA法检测细胞内β-catenin、LRP5蛋白表达量。结果骨碎补含药血清具有明显的促进BMSCs增殖的作用,在一定的时间段提高了ALP活性,促进钙化结节形成;上调wnt/β-catenin信号通路β-catenin、LRP5、RUNX-2及Osteriex mRNA表达;下调GSK-3βmRNA表达,上调β-catenin、LRP5蛋白表达。结论骨碎补含药血清可以促进BMSCs的增殖及成骨分化,其机制与激活wnt/β-catenin信号通路,上调β-catenin、LRP5、RUNX-2及Osteriex mRNA表达,下调GSK-3βmRNA表达及上调β-catenin、LRP5蛋白表达密切相关。     

Neuritin基因高表达系统构建及转染大鼠雪旺细胞的鉴定

目的构建neuritin基因的高表达系统,观察其转染雪旺细胞后neuritin的表达。方法根据大鼠neuritin mRNA序列体外合成编码序列(CDS区),构建到pGH载体,与酶切后的GV208-绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体片段进行连接、转化、酶切及测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆,转染入293T细胞,包装成慢病毒,以此感染大鼠雪旺细胞。将雪旺细胞分为三组:空白对照组(A组)、无意义干扰组(B组)、高表达组(C组)。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测细胞neuritin的表达。结果大鼠neuritin正确插入慢病毒载体,C组neuritin mRNA水平显著高于A组、B组(P<0.01)。检测到neuritin蛋白与GFP的融合蛋白。结论成功构建neuritin慢病毒高表达系统;其转染的雪旺细胞neuritin表达升高。     

胞外pH值通过BMP-2信号通路影响高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化

目的 探讨骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP-2）信号通路在不同pH值环境影响高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）钙化中的作用。方法 选取5～8周龄健康雄性SD大鼠,体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs用随机抽样法分为正常对照组(pH7.4)、pH7.4+高磷组、pH7.1+高磷组及pH7.7+高磷组。采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测BMP-2、Smad1及 Runt 相关转录因子2（Runx2） mRNA的表达。结果 与正常对照组相比,pH7.4+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加（P<0.05）、茜素红染色钙化结节增多,Runx2 mRNA表达及ALP活性均增高（P<0.05）;与pH7.4+高磷组相比,pH7.1+高磷组大鼠VSMCs的钙含量减低（P<0.05）、茜素红染色钙化结节减少,Runx2 mRNA表达及ALP活性均降低（P<0.05）,BMP-2、Smad1mRNA表达均降低（P<0.05）,pH7.7+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加（P<0.05）、茜素红染色钙化结节增多,Runx2 mRNA表达及ALP活性均增高（P<0.05）,BMP-2、Smad1mRNA表达均增高（P<0.05）。结论 胞外酸性环境（pH7.1）抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,胞外碱性环境（pH7.7）促进高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其机制可能是通过BMP-2信号通路介导了VSMCs的表型转化。     

骨形态蛋白9诱导干细胞骨向分化与环氧酶-2及PI3K/Akt的关系研究

目的研究骨形态蛋白9(BMP9)诱导干细胞成骨分化过程中对PI3K/Akt信号的激活与环氧酶-2(COX-2)的关系。方法利用组织化学染色法、化学发光法或定量PCR检测碱性磷酸酶(ALP)的水平,Western blot检测骨桥素(OPN)、骨钙素(OCN)、COX-2、Akt1/2和磷酸化Akt1/2(pAkt1/2)水平,RT-PCR检测COX-2的表达,用免疫组化或免疫荧光分别检测COX-2的表达水平以及Akt1/2的磷酸化水平,用茜素红染色检测钙盐沉积。结果 BMP9在C2C12细胞中明显增加ALP活性,促进OPN和OCN表达以及钙盐沉积;BMP9对Akt1/2总蛋白无明显影响,能明显增加Akt1/2磷酸化水平,PI3K抑制剂呈浓度依赖性减弱BMP9诱导ALP活性增加。BMP9在C2C12细胞中促进COX-2表达,抑制COX-2明显减弱BMP9在C2C12细胞中诱导ALP活性增加和钙盐沉积的作用。外源性过表达COX-2促进BMP9诱导p-Akt1/2水平增加,而抑制COX-2则明显减弱BMP9诱导Akt1/2磷酸化水平增加。结论 BMP9在诱导干细胞成骨化过程中对PI3K/Akt信号的激活可能与其促进COX-2表达有关。     

RNA干扰沉默DDX1基因的胶质瘤细胞系的建立

目的以短发夹核糖核酸(RNA)慢病毒载体建立DEAD-box解旋酶1(DDX1)基因稳定沉默的胶质母细胞瘤细胞株。方法针对DDX1基因设计2组短发夹RNA序列,退火形成的双链DNA与线性p LKO. 1-puro-e GFP质粒载体连接,构建慢病毒质粒载体,测序正确后进行慢病毒包装;将获得的重组慢病毒转染人胶质瘤U251细胞,转染细胞分为对照组和干扰组,对照组转染对照慢病毒(sh NC);干扰组转染慢病毒载体p LKO. 1-puro-e GFP-shRNA-DDX1(sh DDX1-1,sh DDX1-2)。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,进行嘌呤霉素抗性筛选;用实时定量聚合酶链式反应(PCR)、蛋白免疫印迹法检测转染后U251细胞中DDX1 mRNA及蛋白表达。结果测序证实成功构建对照组和靶向DDX1基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,病毒悬液滴度均> 3×10~8TU·m L^-1。荧光显微镜下观察显示,对照组和干扰组转染效率高于85%;嘌呤霉素筛选后,干扰组sh DDX1-1、sh DDX1-2中DDX1 mRNA的抑制率分别为85. 44%和71. 66%,DDX1蛋白表达水平分别下降了99. 1%和96. 7%,均较对照组(100%)显著降低(均P <0. 01)。结论成功构建沉默DDX 1基因的胶质瘤细胞系,为研究DDX1对胶质瘤生物学行为的影响提供细胞模型。     

lncRNA IGF2-AS调控IGF2对骨髓间充质干细胞 心肌样分化的影响

目的 探讨长链非编码RNA胰岛素样生长因子2反义转录物（lncRNA IGF2-AS）调控胰岛素样生长因子2 （IGF2）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）心肌样分化的影响。方法 分离培养SD大鼠的BMSCs,倒置显微镜观察原代 细胞、第3代细胞的形态;流式细胞仪检测BMSCs表面抗原CD29、CD90、CD45的表达。将第3代生长良好的BMSCs 分为对照组、空载体组（转染pLVX-IRES-Zs Green1载体）、lncRNA IGF2-AS组（转染pLVX-IRES-Zs Green1-IGF2- AS）、5-氮杂胞嘧啶（5-AZA）组（8 μmol/L 5-AZA 处理）、si-NC 组、si-IGF2-AS 组、si-IGF2 组、lncRNA IGF2-AS+siNC 组及 lncRNA IGF2-AS+si-IGF2 组。实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测 IGF2-AS 表达;MTT 法检测细胞活力; Western blot检测IGF2、间隙连接蛋白43（Cx43）、心肌肌钙蛋白T（cTnT）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）蛋白表达;RNA下拉 和RNA免疫沉淀（RIP）检测IGF2-AS与IGF2蛋白结合情况。结果 原代细胞在培养初期呈悬浮状态,大多数呈圆 形,培养48 h后开始贴壁生长;第3代细胞呈长梭形,排列不整齐,相邻细胞间紧密连接,呈成纤维细胞样。第3代 BMSCs 高表达 CD29（98.21%）、CD90（92.54%）,低表达 CD45（3.67%）。过表达 IGF2-AS 或 5-AZA 处理均可促进 BMSCs 中 Cx43、cTnT、cTnI 蛋白表达,并降低细胞活力,且 5-AZA 组相应指标明显低于 lncRNA IGF2-AS 组（P＜ 0.05）。沉默IGF2-AS或抑制IGF2表达均可降低BMSCs中Cx43、cTnT、cTnI蛋白表达,并降低细胞活力（P＜0.05）; lncRNA IGF2-AS可靶向上调IGF2蛋白的表达（P＜0.05）;沉默IGF2逆转了过表达IGF2-AS对BMSCs心肌样分化的 促进作用。结论 过表达IGF2-AS通过上调IGF2促进BMSCs心肌样分化。     

多聚嘧啶区结合蛋白1通过上皮间质转化途径促进结直肠癌的转移与侵袭

目的 分析多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)在结直肠癌中的表达水平，并探讨其对结直肠癌细胞侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 (1)下载TCGA数据库中结直肠癌转录组数据集，用Limma包分析结直肠癌组织(n=479)和正常组织(n=42)中PTBP1的表达及其与患者临床预后的相关性。(2)第1转染组和第2转染组为SW480细胞中分别转染对照慢病毒(ShCtrl)5μL和PTBP1敲低慢病毒(ShPTBP1组)5μL;第3转染组和第4转染组为LoVo细胞中分别转染ShCtrl和ShPTBP1各5μL;第5转染组和第6转染组为HCT116细胞中分别转染对照质粒(Vector)5μg和PTBP1过表达质粒(plasmid+PTBP1组)5μg;第7转染组和8转染组为HT29细胞中分别转染Vector和plasmid+PTBP1各5μg。以Transwell小室检测上述不同转染组细胞的侵袭能力，用蛋白质印迹法检测各组细胞中的PTBP1、E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达水平。结果 (1)PTBP1在结直肠癌组织和正常组织中的表达量分别为62.05±30.21和...     

G蛋白偶联受体相关分选蛋白1在非小细胞肺癌中表达的临床意义及其与顺铂化疗抵抗的关系

目的 探究G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GPRASP1)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性的关系。方法 收集癌旁组织、原发NSCLC组织及复发NSCLC组织，用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GPRASP1和腺苷三磷酸结合盒式亚家族A成员5(ABCA5)mRNA的表达情况。空白组和过表达组分别用慢病毒转染空白载体和GPRASP1过表达载体于A549细胞中；对照组和抵抗组分别用慢病毒转染对照小干扰RNA(si-control)于A549细胞及DDP耐药细胞中；干扰组用慢病毒转染GPRASP1小干扰RNA(si-GPRASP1)于DDP耐药细胞中。用CCK-8实验法检测细胞对DDP的半抑制浓度(IC₅₀),用RT-PCR法检测各组细胞中GPRASP1与ABCA5的表达情况。结果 癌旁组织、NSCLC组织与复发NSCLC组织中GPRASP1 mRNA表达量分别为(1.27±0.16)×10^-2、(2.68±0.30)×10^-2和(3.89±0.72)×10^-2,ABCA...