肥胖因素对大鼠呼吸机相关性肺损伤的影响

目的评价肥胖因素对大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)的影响。方法清洁级雄性SD大鼠45只,6～8周龄,按照体重分为3组(n=15):正常体重对照组(C组)、正常体重VILI组(CV组)和肥胖VILI组(FV组)。C组和CV组体重为233～267 g,FV组体重为288～332 g。C组潮气量VT 10 ml/kg,CV组和FV组潮气量VT 40 ml/kg,通气频率40次/min,吸呼比1∶ 2,PEEP 0 mmHg,FiO2 21%,机械通气4 h,制备大鼠VILI模型。分别于气管插管前即刻和机械通气4 h时采集动脉血样行血气分析,记录PaO2;剩余血样收集血浆。机械通气4 h时采血后处死大鼠,分离两侧肺组织,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。采用ELISA法检测血浆瘦素浓度、血浆及BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度。测定肺组织湿重/干重(W/D)比值,HE染色后观察肺组织病理结果并进行肺损伤评分,采用Western blot法检测肺组织NF-κB p65表达水平。结果与C组和CV组比较,FV组血浆瘦素浓度升高(P<0.01)。与C组比较,CV组和FV组机械通气...     

雷帕霉素对大鼠呼吸机相关性肺损伤时NLRC4炎症小体活性的影响

目的评价雷帕霉素对大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)时NOD样受体C4(NLRC4)炎症小体活性的影响。方法清洁级健康雄性SD大鼠36只,6～8周龄,体重200～250 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、VILI组和雷帕霉素组(RAPA组)。RAPA组造模前连续3 d腹腔注射雷帕霉素4 mg·kg-1·d-1,C组和VILI组给予等容量生理盐水。VILI组和RAPA组行机械通气4 h,通气参数设置:RR 80次/min,FiO2 21%,PEEP 0 cmH2O,I∶E 1∶1,VT 20 ml/kg。机械通气结束后采集股动脉血样行血气分析,记录PaO2;采用ELISA法检测血清IL-1β和IL-18浓度。收集左肺支气管肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法测定中性粒细胞计数及IL-1β、IL-18浓度。取肺组织,HE染色后光镜下观察病理学结果,并进行肺损伤评分,测定湿重/干重(W/D)比值,采用Western blot法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、NLRC4和caspase-1的表达,采用RT-PCR法检测NLRC4 mRNA表达。结果与C组比较...     

HMGB1在肠缺血再灌注小鼠肺损伤中的作用：与NETs的关系

目的评价高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在肠缺血再灌注小鼠肺损伤中的作用及其与中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的关系。方法 SPF级健康成年雄性C57BL/6小鼠24只,体重20～25 g,采用随机数字表法分为4组(n=6):假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(I/R组)、IgY对照抗体组(IgY组)和Anti-HMGB1中和抗体组(Anti-HMGB1组)。采用夹闭肠系膜上动脉1 h后恢复灌注的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型。Anti-HMGB1组于缺血1 h后肠道血流恢复即刻腹腔注射Anti-HMGB1中和抗体1.0 mg/kg;IgY组于缺血1 h后肠道血流恢复即刻腹腔注射IgY同型对照抗体1.0 mg/kg。于再灌注4 h时处死小鼠,收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),测定总蛋白、游离双链DNA(dsDNA)及HMGB1的浓度;取肺组织HE染色后光镜下观察病理学结果,采用Western blot法测定瓜氨酸化组蛋白H3(Cit-H3)表达。结果与Sham组比较,I/R组和IgY组肺组织病理学损伤评分、BALF总蛋白、HMGB1和dsDNA浓度升高,Cit-H3表达上调(...     

鸢尾素对呼吸机相关性肺损伤大鼠细胞焦亡的影响

目的探讨鸢尾素对呼吸机相关性肺损伤大鼠细胞焦亡的影响。方法健康清洁级雄性SD大鼠36只, 体重200～250 g, 6～8周龄, 采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、呼吸机相关性肺损伤组(V组)和呼吸机相关性肺损伤+鸢尾素组(V+I组)。V+I组机械通气前尾静脉注射鸢尾素1 μg/kg。机械通气(潮气量40 ml/kg, 通气频率60次/min, 吸呼比设为1∶2, PEEP 0, FiO2 21%)4 h后采集股动脉血样, 进行动脉血气分析, 记录PaO2, 计算氧合指数(OI);收集支气管肺泡灌洗液(BALF), 测定总蛋白浓度, 采用ELISA法测定BALF和血清IL-1β、IL-18浓度。取肺组织, HE染色后行肺损伤评分, 测定肺组织湿重/干重(W/D)比值;分别采用Western blot法和RT-PCR法检测焦亡相关蛋白消皮素D-N端(GSDMD-N)、caspase-1及其mRNA的表达水平。结果与C组比较, V组肺损伤评分和W/D比值升高, PaO2和OI降低, BALF总蛋白浓度、BALF和血清IL-1β、IL-18浓度升高, 肺组织caspase...     

GSK484对小鼠呼吸机相关性肺损伤及中性粒细胞胞外诱捕网的影响

目的评价GSK484对小鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)及中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的影响。方法 SPF级健康雄性C57BL/6小鼠48只, 5～6周龄, 体质量15～20 g, 采用随机数字表法将小鼠分为4组(n=12):自主呼吸组(S组)、自主呼吸+GSK484干预组(SG组)、VILI组(V组)、VILI +GSK484干预组(VG组)。S组及SG组气管插管后自主呼吸4 h;V组及VG组机械通气4 h(潮气量30 ml/kg、呼吸频率75次/min、吸呼比1∶2、呼吸末正压0 mmHg、吸入氧气浓度21%)。于VILI建模前3 d, SG组及VG组腹腔注射GSK484 4 mg/kg, 1次/d, S组及V组每天以等容量生理盐水代替。小鼠自主呼吸或机械通气4 h时, 采集腹主动脉血样, 行血气分析, 记录PaO2;随后处死小鼠, 收集支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。确定肺组织湿重/干重比值(W/D);肺组织HE染色后, 光镜下观察病理学结果并行损伤评分;采用ELISA法检测BALF IL-1β、IL-6、TNF-α及髓过氧化物酶(MPO)浓度;采用Western bl...     

高迁移率族蛋白B1在脓毒症中的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种典型的损伤相关分子模式(DAMP)分子, 通过与其相应的受体结合, 参与多种炎症性疾病的多个过程。脓毒症是一种由微生物感染引起的全身性炎症反应综合征, 早期主要表现为多种细菌诱导的复杂性炎症反应, 并伴有促炎介质的释放, 继而发展为免疫性瘫痪, 部分原因是炎症调节失调和相关的免疫抑制。HMGB1在脓毒症免疫紊乱和危及生命的炎症综合征中起着不可或缺的作用。HMGB1还与脓毒症相关的免疫抑制过程有关。进一步了解HMGB1与脓毒症的发病机制有助于开发有效的治疗策略。现就HMGB1与脓毒症的相关作用及调节机制的研究进展作一综述。     

BNIP3L与脓毒症相关性脑病小鼠海马线粒体功能障碍的关系

目的评价BCL2/腺病毒E1B19 kDa蛋白相互作用蛋白3(BNIP3L)与脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马线粒体功能障碍的关系。方法 SPF级C57BL/6雄性小鼠180只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=45):对照组(C组)、假手术组(Sham组)、SAE组和SAE+BNIP3L激动剂卡非佐米组(SC组)。采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症模型。SC组术后2 h腹腔注射卡非佐米2 mg/kg。各组取20只小鼠, 观察7 d生存情况。术后1周时, 取8只生存的小鼠进行水迷宫实验。其余小鼠术后24 h时处死, 取海马组织, 采用免疫荧光法测定海马组织BNIP3L表达, Western blot法测定线粒体BNIP3L表达, 并观察线粒体超微结构。采用荧光素-荧光酶发光法测定线粒体ATP含量, 荧光分光光度法测定线粒体膜电位(MMP)。结果与C组和Sham组比较, SAE组生存率降低, 逃避潜伏期延长, 目标象限停留时间和穿越原平台区域次数减少, 海马线粒体BNIP3L表达下调, MMP和线粒体ATP含量降低(P<0.05), 海马组织BNIP...     

丙泊酚对胃癌细胞凋亡时GRP78-ATF4-CHOP信号通路的影响

目的评价丙泊酚对胃癌细胞凋亡时葡萄糖调节蛋白78(GRP78)-活化转录因子4(ATF4)-C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路的影响。方法传代培养至对数期的MGC-803细胞,采用随机数字表法分为2组(n=15):对照组(C组)和丙泊酚组(P组)。C组细胞在37 ℃、5%CO2条件下正常培养;P组细胞待贴壁生长至70%～90%时,加入丙泊酚,终浓度为5 μg/ml,24 h时采用流式细胞术检测细胞凋亡率,qPCR法检测GRP78、ATF4和CHOP的mRNA表达,Western blot法检测GRP78、ATF4和CHOP的表达。结果与C组比较,P组细胞凋亡率升高,GRP78、ATF4、CHOP及其mRNA表达上调(P<0.05)。结论丙泊酚促进胃癌细胞凋亡的机制与激活GRP78-ATF4-CHOP信号通路有关。     

PIAS调控PPARγ的SUMO化修饰在小鼠内毒素性急性肺损伤内源性保护机制中的作用

目的评价小泛素相关修饰物(SUMO) E3连接酶(PIAS)调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的SUMO化修饰在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)内源性保护机制中的作用。方法实验Ⅰ清洁级野生型雄性C57BL/6小鼠24只, 6～8周龄, 体质量18～22 g, 采用随机数字表法分为4组(n=6):对照组(C组)、ALI组、ALI+ PPARγ诱导剂TZD组(ALI+T组)、ALI+TZD+SUMO化抑制剂漆树酸组(ALI+T+A组)。尾静脉注射LPS 15 mg/kg制备内毒素性ALI模型。ALI+T+A组注射LPS前1 h时腹腔注射漆树酸5 mg/kg;ALI+T组和ALI+T+A组注射LPS前30 min时腹腔注射TZD 50 mg/kg。给予LPS 12 h后处死小鼠取肺组织, 测定湿重/干重(W/D)比值, 光镜下观察病理学结果, 并行肺损伤评分;分别采用Western blot法和PCR法测定PIAS1、PIAS2、PIAS3和PIASy及其mRNA的表达。实验Ⅱ 体外培养的小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)采用随机数字表法分为4组(n=5):对照组(C组)、LPS...     

右美托咪定预处理对脂多糖致大鼠急性肺损伤时高迁移率族蛋白1的影响

目的观察右美托咪定(Dex)预处理对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)时高迁移率族蛋白1(HMGB1)的影响。方法采用尾静脉注射LPS方法制备大鼠ALI模型;将40只健康雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为4组:正常对照组(NR组)、LPS组(尾静脉注射LPS 5 mg/kg)、Dex组(腹腔分别注射右美托咪定25 μg/kg、50 μg/kg后, 尾静脉注射LPS 5 mg/kg)。NR组和LPS组给予等容量生理盐水。大鼠注射LPS 24 h后处死, 取颈动脉血记录动脉血氧分压(PaO2), 观察大鼠一般情况以及肺组织病理变化, 收集支气管肺泡灌洗液(BALF), 测定BALF总蛋白、白细胞介素(IL)-1β及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;取大鼠肺组织称重, 计算肺湿干重比(W/D比);检测肺组织HMGB1、IL-1β和TNF-α的表达。组间比较在符合正态性分布和方差齐性下采用单因素方差分析。结果 LPS组和Dex组大鼠病态表现(呼吸浅快、精神萎靡、口鼻可见血性分泌物)更明显, PaO2[(98±7) mmHg比(66±9)、(79±5)、(83±7) mmHg...     

白藜芦醇通过抑制HMGB1调控卵巢癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨白藜芦醇对卵巢癌细胞凋亡的影响及其分子机制, 为治疗卵巢癌寻找潜在的新靶点。方法将卵巢癌SKOV-3细胞分为对照组和白藜芦醇组。用MTT法检测白藜芦醇处理后卵巢癌SKOV-3细胞的活力。白藜芦醇干预SKOV-3细胞24 h后, Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、HMGB1、TLR4和NF-?B的表达情况。将si-NC、si-HMGB1、Rb1+pcDNA3.1或Rb1+pcDNA3.1-HMGB1转染卵巢癌SKOV-3细胞, MTT法检测细胞对白藜芦醇敏感性的变化。白藜芦醇处理转染细胞, 流式细胞术检测细胞凋亡的变化。结果白藜芦醇能抑制卵巢癌SKOV-3细胞生长, 且白藜芦醇浓度越高抑制效果越显著。对照细胞和实验组细胞HMGB1表达量分别为1.24±0.15和0.86±0.11, 25μM白藜芦醇能抑制HMGB1的蛋白水平;HMGB1下调后对白藜芦醇的敏感性增加, 且促进SKOV-3细胞凋亡;HMGB1过表达后对白藜芦醇的抗性增加, 且抑制SKOV-3细胞凋亡。对照组和白藜芦醇组TLR4表达量分别为0.98±0.12和0.63±0.08, NF...     

HMGB1促进RSV感染的THP-1单核细胞中NLRP3炎症小体的活化

目的探讨高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1, HMGB1)对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)感染的THP-1单核细胞中核苷酸结合域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3)炎症小体活化的影响。方法常规培养THP-1细胞用于RSV病毒的感染实验, 将培养的THP-1单核细胞分为4组:未感染RSV组、RSV感染组、RSV感染+人重组HMGB1(rHMGB1)组、RSV感染+甘草素组, RSV感染6 h后继续培养48 h, 提取4组细胞总蛋白, Western blot法检测4组THP-1单核细胞的NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC)、胱天蛋白酶-1(cysteine aspartate specific protease-1, caspase-1)、IL-1β水平。结果 R...     

机械通气诱发肺纤维化机制的研究进展

机械通气使用不当可引起或加重肺损伤, 称为呼吸机所致肺损伤(ventilator-induced lung injury, VILI), 机械通气导致的肺纤维化则是VILI中非常严重的一种。文章综述机械通气引起肺纤维化的可能机制, 肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞转化为间充质细胞, 巨噬细胞极化及肥大细胞产生胶原、类胰蛋白酶等, 都参与机械通气诱发的肺纤维化;汇总了NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3, NLRP3)炎症小体、透明质酸(hyaluronic acid, HA)、中期因子(midkine, MK)、转化生长因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)等细胞因子及Wnt等信号通路在机械通气肺纤维化中发挥的作用。文章多方面探索机械通气诱发肺纤维化的机制, 为早期诊断及防治提供新思路。     

姜黄素减轻脓毒症小鼠急性肺损伤时SIRT1与铁死亡的关系

目的评价姜黄素减轻脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)时沉默信息调节因子1(SIRT1)与铁死亡的关系。方法 SPF级雄性C57BL/6J小鼠152只, 8周龄, 体质量23～27 g, 采用随机数字表法分为4组(n=38):假手术组(C组)、脓毒症组(S组)、姜黄素组(Cur组)和姜黄素+SIRT1抑制剂EX527组(CE组)。Cur组每日姜黄素200 mg/kg灌胃;CE组每日姜黄素200 mg/kg灌胃, 并腹腔注射EX527 5 mg/kg;C组和S组给予等量溶剂二甲基亚砜。各组连续给药5 d后采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症模型。每组随机取20只小鼠观察造模后7 d生存情况。造模后24 h时, 收集支气管肺泡灌洗液(BALF), 采用ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18浓度;取肺组织, 计算湿重/干重比值(W/D比值), HE染色后行肺损伤评分, 采用比色法检测肺组织还原型谷胱甘肽(GSH)、MDA和铁含量, Western blot法检测肺组织SIRT1、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、酯酰辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)的表达。结果与C组相比, S...     

衰老肾脏时钟基因的表达

目的探索可能影响肾脏衰老的相关基因, 并验证时钟基因Arntl在衰老肾脏中的表达变化。方法通过全转录组测序鉴定C57BL/6雄性24月龄小鼠(衰老组)和3月龄小鼠(年轻组)的差异表达基因, 并通过生物信息学方法分析其所富集的生物学通路及关键蛋白。应用实时荧光定量PCR和Western印迹验证Arntl的mRNA及蛋白表达量。结果 (1)全转录组测序结果显示在C57BL/6衰老组小鼠及年轻组小鼠中共筛选出119个显著差异表达基因。差异表达基因主要富集于节律过程、昼夜节律、基因表达的昼夜调控等生物学过程(均P<0.001)。蛋白质互作网络分析结果显示, Nfil3、Hspa8、Arntl、Hlf、Rorc、Per3、Npas2等是差异表达基因中的关键蛋白。时钟基因Arntl、Nfil3、Npas2、Per3在衰老组及年轻组小鼠之间的mRNA表达差异(均P<0.05)与测序结果一致。(2)相较于C57BL/6年轻组小鼠和SAMR1快速老化小鼠, Arntl蛋白表达量在衰老组小鼠和SAMP8快速老化小鼠肾脏组织中均有下降趋势。结论时钟基因及其参与的昼夜节律生物学通路可能在肾脏衰老过...     

乳脂肪球表皮生长因子Ⅷ介导的胞葬与小鼠脓毒症相关性脑病的关系

目的评价乳脂肪球表皮生长因子Ⅷ(MFG-E8)介导的胞葬与小鼠脓毒症相关性脑病的关系。方法清洁级健康雄性C57BL/6小鼠40只, 2～3月龄, 体重18～22 g, 采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿孔(CLP)组、假手术+PBS组(Sham+PBS组)和CLP+鼠重组MFG-E8组(CLP+rmMFG-E8组)。采用CLP法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。Sham+PBS组、CLP+rmMFG-E8组术后连续5 d于侧脑室分别注射PBS 1 μl、rmMFG-E8 1 μg。术后第6天行新物体识别实验, 第7、8天行条件恐惧实验, 计算小鼠新物体探索时间百分比、辨别指数及条件恐惧僵直反应时间。行为学测试结束后处死小鼠, 提取海马组织, 采用Western blot法检测MFG-E8、Ras相关C3肉毒素底物1的GTP结合蛋白(GTP-Rac1)表达水平, RT-PCR法检测IL-6、TNF-α及IL-1β的mRNA表达水平, TUNEL荧光法确定细胞凋亡率。结果与Sham组比较, CLP组新物体探索时间百分比、辨别指数和僵直反应时间百分比降低, ...     

罗哌卡因对脂多糖诱导的小鼠肺损伤的保护作用及其机制

目的探讨罗哌卡因对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺损伤的保护作用及其机制。方法 30只小鼠按照随机数字表法随机分为对照组、模型组和罗哌卡因组, 每组10只, 模型组和罗哌卡因组大鼠经滴鼻法给予LPS, 制备大鼠急性肺损伤大鼠模型, 建模24 h后, 罗哌卡因组大鼠经灌胃给予2 mg/kg罗哌卡因, 对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。治疗4 d后, 处理大鼠, 分离血清, 固定肺组织。测定肺组织湿重和干重之比;苏木精-伊红(HE)染色分析两组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清组织中白细胞介素(IL)-1β和IL-6的水平;蛋白质印迹法(Western blot)分析大鼠肺组织p65和p50蛋白表达水平。组间比较采用单因素方差分析。结果罗哌卡因组大鼠动脉血PaO2[(72.96±3.52) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)]明显高于模型组大鼠动脉血PaO2[(59.78±5.45) mmHg], 差异有统计学意义(t=6.418, P<0.05)。罗哌卡因组大鼠肺组织湿重/干重比(3.16±0.16)明显低于模型组(4.68±0.38), 差异有统计学意...     

糖尿病与骨关节炎相关性的研究进展

糖尿病和骨关节炎都是常见的慢性疾病并且经常共存, 有学者把这类与糖尿病共存的骨关节炎称作"代谢型骨关节炎"。随着糖尿病与骨关节炎的发病率日益攀升, 近年来对糖尿病合并骨关节炎的流行病学、发病机制及病理进展的研究越来越受到重视。本文探讨了除了体重和年龄以外, 糖尿病是否与骨关节炎相关以及糖尿病是否可能在骨关节炎的病理进程中发挥作用, 以期深入认识糖尿病和骨关节炎的关系, 为探索个性化的骨关节炎治疗方案奠定理论基础。     

DNA甲基化在脓毒症急性肺损伤中的研究进展

DNA甲基化是表观遗传学的修饰方式之一, 在基因表达调控和细胞分化过程中发挥重要作用。肺是脓毒症时最容易受损害的器官, 脓毒症急性肺损伤(acute lung injury, ALI)严重威胁患者生命安全, 其机制尚不完全明确。目前已对DNA甲基化在肺损伤发病过程中的作用进行了大量研究, 文章在简要介绍DNA甲基化原理和脓毒症ALI机制的基础上, 就DNA甲基化与脓毒症ALI时的炎症反应、肺血管屏障破坏、免疫紊乱的关系以及DNA甲基化转移酶抑制剂对脓毒症ALI治疗效果的研究进行综述, 以期对脓毒症ALI的发病机制及防治研究起到一定的启示作用。