高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中阿托伐他汀的浓度

目的:建立一种快速、准确、灵敏度高、专属性强的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中阿托伐他汀的浓度。方法:以氟伐他汀为内标,血浆样本经乙腈(含0.05%甲酸)沉淀蛋白后进行LC-MS/MS分析测定。色谱条件：采用MSCB-2C (3.0 mm×50 mm, 3.3μm) C₁₈为色谱柱,以0.05%甲酸-10%甲醇-水为流动相A,0.05%甲酸-40%甲醇-60%乙腈为流动相B,等度洗脱(流动相A∶B=36∶64,V/V),流速为0.5 mL·min^-1,柱温为45℃,进样量为5μL;质谱条件：采用电喷雾(ESI)正离子模式,多反应监测(MRM)方式进行检测,阿托伐他汀及氟伐他汀(内标)的离子对分别为559.45→250.20,412.25→224.15。结果:阿托伐他汀在1.0～100 ng·mL^-1范围内线性关系良好(R²≥0.999 5),定量下限为1.0 ng·mL^-1;低、中、高3水平血浆质控浓度批间及批内精密度在±10%以内,准确度在92.9%～...     

HPLC法测定艾司奥美拉唑钠中3个潜在基因毒性杂质的研究及控制

目的:建立HPLC法测定艾司奥美拉唑钠中潜在基因毒性杂质E、杂质I、2-氯甲基-3,5二甲基-4-甲氧基吡啶。方法:杂质E色谱条件：YMC-Triart C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾缓冲液,流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为302 nm,柱温为30℃;杂质I色谱条件：Agilent Microspher C₁₈色谱柱(100 mm×4.6 mm, 3μm),流动相A为水-磷酸盐缓冲液(pH 7.6)-乙腈(80∶10∶10),流动相B为乙腈-磷酸盐缓冲液(pH 7.6)-水(80∶1∶19),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为302 nm,柱温为30℃;2-氯甲基-3,5二甲基-4-甲氧基吡啶色谱条件：GL Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为0.01 mol·L^-1磷酸氢二钠溶液(pH...     

太白茶HPLC指纹图谱的建立及UHPLC-QExactive Focus MS/MS联用分析

目的:建立太白茶药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析方法,并运用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)法对太白茶中的特征峰进行定性分析。方法:采用Agilent TC-C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长254 nm,进样量10μL。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012年版”,建立指纹图谱并进行相似度评价。化学成分分析选用UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术,采用Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(50 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃;质谱条件为电喷雾离子源(ESI),负离子模式扫描,扫描范围m/z 80～1 200。结果:建立的太白茶特征指纹图谱中...     

基于液质联用技术的溶菌酶一级结构分析研究

目的:使用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UPLC-Q TOF MS法)对国内外3家企业溶菌酶的一级结构进行分析研究。方法:采用BEH300 C₄(50 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱和BEH300 C₁₈(150 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱，以0.1%甲酸/水溶液为流动相A,0.1%甲酸/乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱，流速0.2 mL·min^-1;采用Q TOF MS的电喷雾正离子模式，相对分子质量测定时采用MS模式进行扫描，氨基酸序列和二硫键连接方式测定时采用MS^E模式进行扫描。结果:3种来源溶菌酶相对分子质量与理论值一致；肽图结果显示各样品的氨基酸序列均与理论一致；二硫键连接方式均为Cys6-Cys127、Cys30-Cys115、Cys64-Cys80、Cys76-Cys94。结论:UPLC-Q TOF MS法可用于溶菌酶一级结构的分析。     

HPLC法结合LC-MS法测定硫酸鱼精蛋白含量及肽段鉴定

目的:建立了一种同时测定硫酸鱼精蛋白中主成分纯度和含量的HPLC方法，并采用LC-MS法对肽段氨基酸序列进行鉴定。方法:HPLC方法采用的色谱柱为ThermoHypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8),流动相B为乙腈-0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8)(6.5∶93.5),梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1,柱温55℃,紫外检测波长为214 nm,进样量100μL。LC-MS法先采用馏分收集方式对各肽段进行提取富集，然后液质联用采用Waters ACQUITY UPLC Peptide BEH C₁₈色谱柱(15 cm×0.21 cm, 1.7μm),流速为0.2 mL·min^-1,流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为5%乙腈-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱；Thermo Q-Exactive Plus, ESI离子源，阳离子检测模式，雾化电压为...     

HPLC法测定阿莫西林钠克拉维酸钾中的22个杂质

目的 建立HPLC法同时测定阿莫西林钠克拉维酸钾原料中22个已知杂质含量的方法。方法 采用YMC Triart C₁₈色谱柱(4.6×250 mm, 3μm);流动相A为0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(pH=5.9)-乙腈(99∶1),流动相B为0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(pH=5.9)-乙腈(80∶20),梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为215 nm,柱温为25℃。结果 该方法下主峰与各杂质间分离良好,各成分在各自线性范围内与峰面积线性关系良好(r>0.999);对各杂质的校正因子进行了计算,定量限、检出限及回收率等均符合规定。结论 该法专属性强、灵敏度高、准确度和重复性好,可用于检测阿莫西林钠克拉维酸钾的有关物质。     

马来酸噻吗洛尔中有关物质的识别和测定

目的:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱(UPLC-Q/Orbitrap HRMS)鉴定马来酸噻吗洛尔中的有关物质。方法:采用ACE Excel3 C₁₈-AR(150 mm×4.6 mm, 3μm)色谱柱,以含0.01 mol·L^-1乙酸铵的0.2%甲酸水-甲醇为流动相梯度洗脱,流速0.6 mL·min^-1,紫外检测器检测波长295 nm,质谱检测器采用HESI离子源,正负离子检测模式,碎片和裂解分析借助Mass Frontier 8.0和Compound Discover 3.3软件,通过对主成分进行破坏可以获得系统适用性溶液对样品中的杂质采用UPLC-Q/Orbitrap进行鉴定和分析。结果:主成分在特定条件下可产生出噻吗洛尔杂质B{(±)-1-(叔丁氨基)-2-[(4-吗啉基-1,2,5-噻二唑-3-基)氧]-1-丙醇}、噻吗洛尔杂质D(4-吗啉基-1,2,5-噻二唑)、噻吗洛尔杂质E((S,Z)-4{(-)-1-(叔丁氨基)-2[(4-吗啉基-1,2,5-噻二唑-3-基)氧]-4-氧代丁烯二酸})和噻...     

UHPLC-MS/MS法测定盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔

目的 建立盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法。方法 Waters ACQUITY UPLC CSH^TM C₁₈色谱柱(3.0 mm×150 mm, 1.7μm),10 mmol·L^-1甲酸铵的水溶液(含0.1%甲酸)作为流动相A,乙腈溶液(含0.1%甲酸)作为流动相B,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1,柱温为50℃,进样器温度为5℃,进样体积为10μL,采用多反应监测(MRM)模式,对盐酸普萘洛尔缓释片中的N-亚硝基普萘洛尔进行定量检测。结果 N-亚硝基普萘洛尔在1～20 ng·mL^-1范围内具有良好的线性关系。低、中、高3个浓度的加样回收率(n=3)在98.4%～103.2%之间,RSD≤2.7%。检测限和定量限分别为0.09 ng·mL^-1和0.3 ng·mL^-1。检出盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔含量为1.8μg·g^...     

小儿风叶咳喘平合剂3个成分在大鼠体内的药代动力学研究

目的:对小儿风叶咳喘平合剂中3个主要药效成分在大鼠体内的代谢产物以及药代动力学进行研究。方法:基于超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(UHPLC-ESI TOF MS)方法，采用ACQUITY UPLC?HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm),以0.1%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为0.3 mL·min^-1,质谱采用电喷雾离子源(ESI),以正负离子模式采集多级质谱碎片信息，对大鼠灌胃小儿风叶咳喘平合剂后的血清、胆汁、尿液和粪便进行分析，结合离子碎片进行代谢产物鉴定分析；同时采用超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)的技术进行药代动力学研究。以格列齐特为内标物，采用ACQUITY UPLC?BEH C₁₈色谱柱(50 mm×2.1 mm, 1.7μm),以0.1%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱。血浆样品采用甲醇沉淀蛋白，采用ESI及多反应监测(MRM),选择监测离子(麻黄碱m/z 166.2→148.1、甘草次酸m/z 471.2→453.2、对香豆酸m/z 162.9→119.1、内标m/z 3...     

HPLC-MS/MS法同时测定吲哚布芬中4个基因毒性杂质

目的:建立HPLC-MS/MS法测定吲哚布芬中的4个基因毒性杂质：2-(4-硝基苯基)丁酸、2-(4-氨基苯基)丁酸、2-(3-氨基苯基)丁酸、2-(2-氨基苯基)丁酸。方法:采用Agilent Eclipse Plus C₁₈(4.6 mm×100 mm, 3.5μm)色谱柱,0.1%甲酸-5 mmol·L^-1甲酸铵为流动相A,0.1%甲酸-甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速为0.55 mL·min^-1,进样体积为10.0μL,柱温35℃;采用电子喷雾源ESI,负离子模式采集分析,多反应监测(MRM),离子源温度为550℃。结果:4个基因毒性杂质的质量浓度在31.8～211.7、30.6～204.0、30.0～199.8、29.9～199.2 ng·mL^-1范围内,r均大于0.990 0,峰面积与浓度线性关系良好;检测下限和定量下限的范围分别为1.06～10.2 ng·mL^-1和12～20.4 ng·mL^-1;平均加样回收率为94.2%～108.4%、94....     

不同成熟度川佛手化学成分及含量比较分析

目的：采用超高液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术及高效液相色谱(HPLC)法,对不同成熟度的川佛手化学成分进行比较分析。方法：UPLC-Q-Orbitrap HRMS法采用Thermo Scientific AccucoreTM C18柱(100 mm×3 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水和0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.3m L·min^-1,柱温30℃,进样量3μL,质谱采用电喷雾ESI电离源,正离子模式下扫描采集数据;HPLC采用Thermo Hypersil GOLD C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.05%磷酸水和乙腈进行梯度洗脱,检测波长254 nm。结果：不同成熟度川佛手液质联用测定结果经PCA分析较为分散,无聚集趋势,显示各组之间化学成分总体无明显差异;香叶木苷、橙皮苷、5,7-二甲氧基香豆素、氧化前胡素4种化学成分总含量在青果、青黄果及黄果中范围分别为1.9813～4.8521 mg·g^-1、1.9106～3.8384 mg·...     

高效液相色谱-电喷雾检测器测定熊去氧胆酸的有关物质

目的:建立高效液相色谱-电喷雾检测器法测定熊去氧胆酸中的10个有关物质。方法:采用SHISEIDO Capcell PAK C₁₈ MGII(150 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以0.1%甲酸-甲醇-乙腈(30∶45∶25)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温40℃,检测器温度35℃,采集频率5 Hz,过滤常数3.6 s。采用主成分自身对照法计算已知杂质和其它杂质的含量,并对建立的方法进行方法学验证。结果:熊去氧胆酸与各杂质分离度良好;熊去氧胆酸、杂质A、杂质B、杂质C、杂质E的质量浓度均在1.0～100.0μg·mL^-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,定量限均为1.0μg·mL^-1,检测限均为0.5μg·mL^-1,杂质的平均回收率在99.3%～100.1%,RSD(n=9)不高于2.0%;供试品溶液在10℃条件下放置24 h内稳定;微调液相色谱参数后,对有关物质的检测结果无影响。3批样品有关物质结果显示,杂质A的含量均小于1.0%...     

UPLC-MS/MS测定硫酸庆大霉素原料及滴眼液中的7种基因毒性杂质

目的 采用UPLC-MS/MS快速测定庆大霉素原料及滴眼液中7种基因毒性杂质的含量。方法 采用ODS-3色谱柱(100 mm×3.0 mm, 5μm),流动相A为含0.1%甲酸的甲醇溶液，流动相B为含0.1%甲酸的水溶液，梯度洗脱，流速0.3 mL·min^-1,柱温35℃,正离子(ESI+)模式下单离子检测扫描模式检测。结果 7种基因毒性杂质在实验浓度范围内线性关系良好，回收率结果准确可靠，27批样品中均未检出7种基因毒性杂质。结论 所用方法简便快捷，准确可靠，适合快速检测基因毒性杂质。     

枸橼酸莫沙必利片杂质研究

目的 建立测定枸橼酸莫沙必利片有关物质检测条件下特定杂质莫沙必利柠檬酰胺2个色谱峰的超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法。方法 HPLC条件，色谱柱为Agilent C₁₈柱(150 mm×4.6 mm,5μm)，流动相为枸橼酸盐溶液-乙腈(梯度洗脱)，流速为1.0 mL/min，检测波长为274 nm，柱温为30℃，进样量为10μL;UPLC-Q-TOF-MS条件，色谱柱为YMC-Triant C₁₈柱(150 mm×2.1 mm,1.9μm)，检测器为DAD检测器，流动相为含0.1%甲酸的10 mmol/L乙酸铵(A)-乙腈(B)、梯度洗脱，流速为0.5 mL/min，检测波长为274 nm，柱温为40℃，进样量为0.5μL。电喷雾离子源正离子扫描模式(ESI⁺)，二级质谱碰撞能量30 e V，毛细管电压4 k V，锥孔电压45 V，碎裂电压60 V，干燥气流速8 mL/min，干燥气温度300℃，雾化气压力35 psi，扫描模式MS/MS；扫描范围m/z 50～700；按不加校正因子的...     

UPLC-MS/MS法与ELISA法测定胖大海中黄曲霉毒素的比较研究

目的 采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)对胖大海中的黄曲霉毒素进行检测，比较 两种方法的检测结果以及方法学差异性。方法UPLC-MS/MS法测定：样品采用70%甲醇提取经过免疫亲和柱净化，色谱柱为C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7μm)，柱温为40℃，流动相为水含0.1%甲酸(A)-甲醇含0.1%甲酸(B)，梯度洗脱，流速为0.3 m L·min^-1，多反应检测扫描采集模式，正负离子同时扫描进行数据采集。同时采用ELISA法测定，样品采用甲醇提取，酶联免疫试剂盒反应。结果 UPLC-MS/MS法测定：黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂线性关系良好，检测限分别为0.013 5,0.002 9,0.008 6,0.003 6μg·kg^-1，定量限分别为0.045 0,0.009 8,0.028 6,0.011 9μg·kg^-1，平均回收率分别为98.98%,10...     

复方克霉唑乳膏中抑菌剂降解问题的发现与解析

目的:研究复方克霉唑乳膏中抑菌剂降解产物的分子结构和产生路径，为药品处方改进提供依据。方法:针对复方克霉唑乳膏中的抑菌剂及其降解产物、以及尼泊金类抑菌剂与辅料氢氧化钾的相容性，采用HPLC和UPLC-HRMS方法进行分析研究。HPLC采用Phenomenex Prodigy ODS3 C₁₈色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5μm),以0.02 mol·L^-1醋酸铵溶液(A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱，检测波长为257 nm,柱温为35℃;UPLC-HRMS采用Q-Orbitrap质谱，YMC C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)为流动相梯度洗脱，HESI负离子化检测。结果:通过乳膏相容性试验和质谱分析，阐明了辅料氢氧化钾促进了尼泊金类抑菌剂较为严重的降解，二者的不相容是造成多批次抑菌剂不符合规定(<处方量的80%)的根本原因。结论:个别生产企业复方克霉唑乳膏处方中选择氢氧化钾作辅料存在抑菌剂含量不合格的风险，建议企业优化制剂处方，降低因辅料-辅...     

甘精胰岛素注射液有关物质分析方法研究

目的:优化甘精胰岛素注射液有关物质分析方法,论证现行标准规定限度科学性,并对主要有关物质进行鉴别。方法:采用Thermo scientific Bio-Basic-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以氯化钠-磷酸盐缓冲液-乙腈(18.4 g∶250 mL∶250 mL,加水至1 000 mL)为流动相A,氯化钠-磷酸盐缓冲液-乙腈(3.2 g∶250 mL∶650 mL,加水至1 000 mL)为流动相B,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长214 nm,柱温35℃。利用该方法收集含量最大有关物质组分并利用LC-MS方法进行鉴别。分析色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C₁₈ Column(100 mm×2.1 mm, 1.7μm, 300?),以0.1%甲酸水溶液为流动相A,0.1%甲酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱,柱温为50℃。质谱数据采集条件为MS~E模式,一级质谱能量40 V。结果:该RP-HPLC有关物质分析方法,方法学验证结果良好,能够有效分离并准确测定样品中的有关物...     

黄藤素中3个降解杂质的色谱-质谱结构鉴定

目的:以超高效液相色谱-四极杆-高分辨轨道阱液质联用技术为主要手段,结构定性黄藤素中的3个降解杂质。方法:采用Thermo Gold C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.9μm),以水-乙腈-甲酸(82∶18∶0.1)为流动相,流速为0.3 mL·min^-1,柱温为30℃;离子源为HESI离子源,扫描模式为正离子扫描,碎片分析借助MsFrontier 7.0软件。结果:通过HPLC-DAD、UPLC-HRMS等手段,结合有机反应理论鉴定黄藤素杂质谱中的3个降解杂质,分别为5-羟基黄藤素(杂质2)、10-羟基黄藤素(杂质4)和2-羟基黄藤素(杂质5)。结论:该研究为黄藤素的质量控制和安全性评价奠定基础。     

UPLC-MS-MS法测定怀山药中去甲乌药碱的含量

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS-MS)法测定怀山药中去甲乌药碱含量的测定方法。方法:样品用0.1%高氯酸溶液提取、MCX固相萃取柱净化,5%氨水甲醇溶液洗脱,洗脱液水浴上氮吹干后用50%甲醇水溶液(含0.1%甲液)复溶。采用Waters BEH C₁₈超高效液相色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%的甲酸水溶液进行梯度洗脱分离,柱温30℃,流速为0.3 m L·min^-1,以非诺特罗作为内标进行定量。结果:去甲乌药碱的线性范围为1～100 ng·m L^-1(r=0.999 3),检出限为0.3μg·kg^-1,定量限为1μg·kg^-1;样品加标回收率为86.8%～91.8%,相对标准偏差为2.1%。结论:本方法净化效果好,灵敏度高,线性范围广,重复性好,能够满足怀山药中去甲乌药碱含量测定要求。     

小儿咽扁颗粒中掺伪山银花检验方法研究

目的：建立小儿咽扁颗粒中山银花的高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)检查方法,打击中药制剂中金银花的掺假行为。方法：采用薄层色谱(TLC)法,以灰毡毛忍冬皂苷乙为指标成分,以三氯甲烷-甲醇-水(6∶4∶1)为展开剂,快速筛查小儿咽扁颗粒中掺伪的山银花;采用HPLC-ELSD法鉴别小儿咽扁颗粒中掺伪的山银花,选择Sun Fire^?C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,柱温30℃,进样量10μL;采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)法进行确证,选择Thermo Hypersil GOLD aQ C₁₈(150 mm×2.1 mm,3μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,质谱使用电喷雾离子源,负离子模式下检测。结果：TLC法检测结果显示,34批样品中共有8家企业生产的16批次样品疑似检出灰毡毛忍冬皂苷乙;HPLC-ELSD法的验证结果...