藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞协同抑制作用的研究

目的 探索藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用及相关调控机制。方法 取对数生长期人宫颈癌HeLa细胞,设置空白对照组（DMSO）、藏红花素组（400 μg·mL^-1）、顺铂组（5 μg·mL^-1）、联合组（藏红花素400 μg·mL^-1+顺铂5 μg·mL^-1）。干预48 h后,CCK-8检测HeLa细胞增殖抑制率,采用CompuSyn软件计算藏红花素与顺铂的联合指数（CI）,Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting检测激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞周期素D1（Cyclin D1）、周期蛋白依赖激酶2（CDK2）的表达。结果 与顺铂组比较,联合组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,CI为0.68,具有中度协同效应;细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,G₀/G₁期细胞比例显著升高（P<0.05）,而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.05）,Cyclin D1、CDK2蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与空白对照组比较,藏红花素组G₀/G₁期细胞比例显著升高而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.01）,Cyclin D1、CDK2表达水平显著降低（P<0.05）。结论 藏红花素联合顺铂可协同抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖和生长,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白的表达从而促进细胞凋亡、阻滞细胞周期进程有关。     

青蒿琥酯对人结肠腺癌细胞的放射增敏作用

目的 研究青蒿琥酯对人结肠腺癌SW480细胞的放射增敏作用。方法 用MTT法测定青蒿琥酯的半数抑制浓度(IC₅₀)。将SW480细胞分为4组：对照组、药物组(给予20% IC₅₀的青蒿琥酯)、照射组(给予6 MV 4 Gy X射线照射)、联合组(经20% IC₅₀浓度的青蒿琥酯培养8 h后,给予6 MV 4 Gy X射线照射)。MTT法测定4组细胞增殖抑制率。再测定细胞集落形成情况,计算细胞集落形成率(PE),细胞存活分数(SF)。根据多靶单击公式,计算平均致死剂量、外推值、2 Gy时的细胞存活分数和放射增敏比。用流式细胞仪测定各组细胞的凋亡率。结果 青蒿琥酯的IC50为20.87 μg·mL^-1。与对照组相比,3个实验组的细胞增殖抑制率和凋亡率有显著差异(P<0.05),而与其他3组相比,联合组的细胞增殖抑制率和凋亡率有显著差异(P<0.05)。放射增敏比为1.38。结论 青蒿琥酯对人结肠癌腺癌SW480细胞有一定的放射增敏作用,机制可能与促进凋亡有关。     

木香内酯对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨木香内酯（micheliolide，MCL）对结肠癌细胞增殖和凋亡的作用及潜在机制。方法 通过腹腔注射致癌剂氧化偶氮甲烷（azoxymethane，AOM）和饮用致炎剂葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate，DSS）构建AOM/DSS小鼠结肠癌模型，分别给予尾静脉注射2.5 mg·kg^-1顺铂、MCL 0，10，20，50 mg·kg^-1，连续30 d记录小鼠存活率。取肿瘤组织，称肿瘤质量。免疫组化检验小鼠肿瘤组织Ki67和胱天蛋白酶3（caspase-3）蛋白表达水平，Western blotting检测小鼠肿瘤组织PTEN蛋白表达量；结肠癌细胞系SW620分别用含10 μmol·L^-1顺铂、MCL 0，2.5，5，10 μmol·L^-1培养基培养，或转染siPTEN后在MCL 0和10 μmol·L^-1培养基培养。BrdU细胞增殖试验检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blotting检测细胞增殖抗原（Ki67、PCNA）、细胞凋亡相关蛋白（cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax）及PTEN蛋白表达量。结果 与模型组相比，MCL增加小鼠生存率，减轻肿瘤质量，增加抑瘤率，上调PTEN蛋白表达，减少Ki67阳性细胞，增加caspase-3阳性细胞（P<0.05或P<0.01）；与对照组相比，MCL降低结肠癌细胞BrdU阳性细胞百分比，下调Ki67和PCNA的表达量，增加细胞凋亡率，下调Bcl-2的表达量，上调Bax、cleaved caspase-3和PTEN的表达（P<0.05或P<0.01）；抑制PTEN表达能逆转MCL对SW620细胞增殖和凋亡的作用（P<0.01）。结论 MCL抑制结直肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡，这与上调PTEN表达有关。     

青蒿琥酯对人源肝星状细胞中Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响研究

摘 要 目的：探讨青蒿琥酯（Art）对Akt/GSK 3β/β catenin信号通路的影响。方法: 不同浓度（0,12.5,25,50 μg·mL^-1）Art作用于人源肝星状细胞（LX 2）,采用CCK 8法检测细胞增殖情况,并确定给药浓度;给予不同浓度Akt抑制药MK 2206 0～8 μmol·L^-1,Western blot法确定其最佳抑制浓度;给予Art、MK 2206、MK 2206+Art,采用Western blot法检测各组Akt、p Akt、GSK 3β、p GSK 3β、β catenin蛋白表达情况。结果: CCK 8法检测细胞存活率,当选用25 μg·mL^-1Art作用于LX 2细胞24h时细胞存活率约80%,Western blot法确定当MK 2206浓度为6 μmol·L^-1时,可有效抑制p Akt的表达;Art组（25 μg·mL^-1）、MK 2206组（6 μmol·L^-1）、MK 2206（6 μmol·L^-1）+Art（25 μg·mL^-1）组与对照组相比,Akt、p Akt、p GSK 3β、β catenin蛋白表达均有显著差异（P<0.05）,MK 2206（6 μmol·L^-1）+Art（25 μg·mL^-1）组分别与Art（25 μg·mL^-1）组、MK 2206（6 μmol·L^-1）组比较,GSK 3β、Akt蛋白表达无显著差异（P>0.05）,p Akt、p GSK 3β、β catenin蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论: Art可通过Akt因子对Wnt/β catenin信号通路中相关因子产生影响,进而抑制细胞增殖,缓解肝纤维发展进程。     

海莲叶提取物抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡★

目的 研究海莲叶提取物对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。方法 将非小细胞肺癌A549细胞分成Control组（0 μg·mL^-1海莲叶提取物处理）、BSLE-L组（10 μg·mL^-1海莲叶提取物处理）、BSLE-M组（20 μg·mL^-1海莲叶提取物处理）、BSLE-H组（30 μg·mL^-1海莲叶提取物处理）、BSLE-M+Jagged1-Fc组（20 μg·mL^-1海莲叶提取物和Notch信号通路激活剂Jagged1-Fc处理）。采用MTT实验检测细胞增殖，平板克隆实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞术检测细胞凋亡变化，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，Western blotting检测细胞中Bax、Bcl-2、vimentin、E-cadherin、MMP-2、Notch-1、NICD-1和Hes-1蛋白表达变化。结果 与Control组比较，BSLE-L、BSLE-M、BSLE-H组细胞存活率和克隆形成数目依次降低，细胞凋亡率依次升高，细胞侵袭数目、迁移数目依次降低，细胞中Bax、E-cadherin蛋白表达水平依次升高，vimentin、MMP-2、Bcl-2、Notch-1、NICD-1和Hes-1蛋白表达水平依次降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。与BSLE-M组比较，BSLE-M+Jagged1-Fc组细胞存活率和克隆形成数目显著升高，细胞凋亡率显著降低，细胞迁移和侵袭数目显著升高，细胞中Bax、E-cadherin蛋白表达水平显著降低，Bcl-2、vimentin、MMP-2、Notch-1、NICD-1和Hes-1蛋白表达水平显著升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 海莲叶提取物可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移、上皮间质转化（EMT），诱导细胞凋亡，其作用机制与降低Notch信号通路激活水平有关。     

HPLC法测定化妆品原料2-羟乙基脲及杂质尿素的含量

目的 建立化妆品原料2-羟乙基脲的高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）含量测定方法,并检测其杂质尿素的含量,以实现对2-羟乙基脲的质量控制。方法采用Capcell PAK ADME C_{18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;以水为流动相;柱温30℃;流速为1.0 mL·min^-1;进样量10 μL;检测波长194 nm。结果 2-羟乙基脲和尿素分别在1.168～116.8 μg·mL^-1（r=0.999 7）和1.032～206.5 μg·mL^-1（r=0.9992）范围内浓度与峰面积有良好的线性关系,平均回收率分别为98.0%和97.1%,检出限分别为0.12 μg·mL^-1和0.21 μg·mL^-1,定量限分别为0.36 μg·mL^-1和0.52 μg·mL^-1。结论 本方法准确度高,重复性好,检测灵敏度符合检测要求,可用于化妆品原料2-羟乙基脲及其杂质尿素的含量测定方法。}     

紫草素抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导人结肠癌SW480细胞凋亡和自噬的作用研究

目的 探讨紫草素对人结肠癌SW480细胞凋亡和自噬的影响及其机制。方法 取对数生长期人结肠癌SW480细胞,设对照组（DMSO）、紫草素（0.3、0.5、0.7 μg/mL）和LY294002（PI3K特异性抑制剂,5 μg/mL）组。药物干预48 h后,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测SW480细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC流式细胞术分析细胞凋亡状况,蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax、LC3蛋白表达并计算Bax/Bcl-2和LC3-II/LC3-I值。结果 与对照组比较,经紫草素0.3、0.5、0.7 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够显著提高人结肠癌SW480细胞增殖抑制率和凋亡率（P<0.01）;经紫草素0.5、0.7 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够显著下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达,并上调Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05、0.01）,提高Bax/Bcl-2和LC3-II/LC3-I值（P<0.01）。与LY294002组比较,经紫草素0.7 μg/mL干预能够显著提高SW480细胞增殖抑制率和凋亡率（P<0.05、0.01）,下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达并上调Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05、0.01）,提高Bax/Bcl-2和LC3-II/LC3-I值（P<0.01）。结论 紫草素能够促进人结肠癌SW480细胞凋亡和自噬,作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化有关。     

HPLC法同时测定复方三维右旋泛酸钙糖浆中4中维生素的含量

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定复方三维右旋泛酸钙糖浆中维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆和烟酰胺的含量。方法 采用外标法进行测定,色谱柱为Thermo Betasil C₁₈ Analytical(4.6 mm×250 mm, 5 μm),流动相为乙腈-5 mmol·L^-1十二烷基硫酸钠（含0.05%甲酸）水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长260 nm,柱温30 ℃。分别测定10批复方三维右旋泛酸钙糖浆。结果 维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆、烟酰胺4种成分的线性范围分别为5.76~115.2 μg·mL^-1(r=0.999 9)、1.16~23.20 μg·mL^-1(r=0.999 9)、1.72~34.4 μg·mL^-1(r=0.999 6)和5.76~115.2 μg·mL^-1(r=0.999 9),平均加样回收率为96.2%~98.4%(RSD为2.14%~3.42%)。不同批次复方三维右旋泛酸钙糖浆中维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆、烟酰胺含量范围分别为0.133 7~0.155 9、0.027 86~0.030 71、0.039 05~0.047 7、0.138 7~0.148 2 mg·g^-1。结论 该方法为完善复方三维右旋泛酸钙糖浆的质量标准和加强质量控制提供了新的方法和依据。     

应用UPLC研究亚胺培南在大鼠体内的药动学

目的 建立灵敏的超高效液相色谱法测定大鼠血浆中亚胺培南的浓度。方法 血浆样品采用乙腈蛋白沉淀方法,色谱柱为Dikma Diamonsil C₁₈;以0.1 mol·L^-1磷酸氢二钠(85%磷酸调pH至7.0)-甲醇(45∶55)为流动相;流速为1.0 mL·minL^-1;柱温为35 ℃;检测波长为295 nm。结果 亚胺培南血药浓度在0.5～100 μg·mL^-1内线性关系良好(r=0.999 7),最低检测限为0.5 μg·mL^-1;日内、日间RSD均≤10％,提取回收率在80.5％~81.2％之间。6只SD大鼠单剂量口服给予亚胺培南后药动学参数分别为：C_max(75.3±6.2)μg·mL^-1;t_1/2(6.72±1.58)h;AUC_0-t(694.1±28.3)h·μg·mLL^-1;AUC_0-∞(746.2±32.9) h·μg·mL^-1。结论 本方法简便、准确、灵敏、专属性强,同样适用于人血浆中亚胺培南浓度的测定及其药动学研究,对于评价亚胺培南疗效和安全性有重要意义。     

水飞蓟宾在大鼠小肠中的吸收特性

目的考察水飞蓟宾在大鼠各肠段的吸收。方法以一定浓度的水飞蓟宾溶液作为灌流液，以0.1 mL·min^-1进行大鼠不同肠段的单向灌流,于不同时间收集肠灌流液并肝门静脉取血，分别用HPLC测定灌流液和血中药物浓度。结果实验结果表明190 μg·mL^-1水飞蓟宾在不同肠段的吸收速率常数(k_a)和有效透过系数(P_eff)是十二指肠>空肠>回肠>结肠。质量浓度为80 μg·mL^-1的水飞蓟宾灌流液在十二指肠的吸收与190和300 μg·mL^-1的吸收情况均有显著性差异(P<0.05)，但质量浓度为190 μg·mL^-1与300 μg·mL^-1的吸收之间无显著性差异(P>0.05)。肝门静脉血中药物分析也显示十二指肠>空肠>回肠>结肠。结论水飞蓟宾在小肠全肠道均有吸收且有高浓度饱和现象。     

Advanced glycation end-products/peptides: a preliminary investigation by LC and LC/MS

An investigation on AGE-peptides, originating by proteolysis of in vitro glycated proteins, was carried out by LC methods with different detection applied to the mixture produced by proteinase K digestion of in vitro glycated human serum albumin (HSA). Classical approaches, like spectroscopic (UV, fluorescence) and mass spectrometric methods (MALDI, LC/ESI/MS), show that the digestion mixture is highly complex. However, there are clearcut differences between the digestion mixtures of glycated and unglycated HSA, in the former case allowing identification of possible glycated peptides belonging to the AGE-peptide class. MS/ MS experiments on selected species seem to be promising as regards structural information.     

老年粘连性肠梗阻诊治分析

目的探讨老年人粘连性肠梗阻的诊治。方法分析223例老年人粘连性肠梗阻患者的诊断和治疗情况。结果腹部X线平片检查后确诊,不完全性肠梗阻98例,完全性肠梗阻125例;手术治疗136例。结论老年人肠梗阻更为复杂,几乎都有腹部手术史,合并症多。往往缺乏典型的临床表现。需腹部X线摄片诊断,治疗方法取决于肠梗阻的性质。难点是发现早期绞窄并及时手术。需进行严密不间断的前后对比观察,一旦肠袢坏死,手术并发症与病死率将明显增高。同时治疗过程中应重视围手术期处理。     

脑囊虫病合并脑积水的影像学诊断与外科手术治疗

目的：探讨脑积水型脑囊虫病的诊断与外科手术治疗效果。方法：对诊断明确的73例脑积水型脑囊虫病患者实施了脑室或脑池囊虫摘除术,术后进行抗脑囊虫病治疗。结果：其中13例脑积水症状改善效果不佳,二次行脑室-腹腔分流术,60例手术均获成功。术后均未出现新的神经损害症状,脑室恢复正常。结论：影像检查是对脑积水型脑囊虫病做出正确诊断的重要依据,积极手术切除脑囊虫,解除梗阻性脑积水术后再进行抗囊虫治疗,必要时再行脑室腹腔分流手术,临床效果明确安全。     

术前放化疗对中晚期直肠癌保肛手术的临床作用价值

目的探讨术前放化疗对中晚期进展期直肠癌保肛手术的临床价值。方法选取郑州人民医院72例直肠癌患者,随机将患者平均分成两组,观察组患者给予术前新辅助放、化疗,对照组患者同期直接手术。随访分析两组患者保肛率及3a生存率。结果近期疗效上,观察组总有效率明显优于对照组（P〈0.05）;远期疗效上,两组3a生存率及术中淋巴结阳性率之间差别均有统计学意义（P〈0.05）;两组保肛率差异也有统计学意义（P〈0.05）。结论术前加用放化疗在提高直肠癌患者保肛率的同时,可以提高患者3a生存率和降低淋巴结转移率,减少手术并发症和局部复发率。但其最终结果和远期疗效有待进一步观察和分析。     

LC/MS/MS与GC/MS法分析鉴定小鼠尿中沙美特罗的代谢产物

目的:鉴定沙美特罗在小鼠尿中的主要代谢产物.方法:ig给药后,收集小鼠尿液,经固相提取,葡萄糖醛酸酶水解,进行LC/MS/MS分析和硅烷化后进行GC/MS分析同时分离鉴定沙美特罗代谢产物.结果和结论:在给药后尿样中发现沙美特罗原型和4种代谢产物M1～M4,其结构推测为19-羟基沙美特罗(M1)、2-羰基沙美特罗(M2)、19-羰基沙美特罗(M3)和19-羟基-8-甲氧基沙美特罗(M4).     

子宫腺肌病与子宫肌瘤的临床对比分析

目的：探讨子宫腺肌病与子宫肌瘤的临床特点及B超、实验室检测的价值,提高对子宫腺肌病术前的诊断率。方法：选择52例子宫腺肌病患者和62例子宫肌瘤患者为研究对象,并对其临床症状、妇科检查、B超结果及血清CA125水平进行比较。结果：两组患者发病年龄和临床症状相近,但子宫腺肌病的痛经症状明显（P〈0.01）;妇科检查子宫腺肌病的子宫常均匀性增大,且一般增大〈12孕周,而宫体压痛明显高于子宫肌瘤（P〈0.01）;两组B超诊断符合率分别为61.5%和93.5%,有统计学差异（P〈0.01）;子宫腺肌病组血清CA125阳性率80.8%,子宫肌瘤组血清CA125阳性率4.8%,有统计学差异（P〈0.01）。结论：综合分析子宫腺肌病与子宫肌瘤的临床表现、妇科检查、B超所见和血清CA125水平有助于提高子宫腺肌病的术前诊断。     

The role of microsphere fabrication methods on the stability and release kinetics of ovalbumin encapsulated in polyanhydride microspheres

The effect of microsphere fabrication methods on the stability and release kinetics of ovalbumin encapsulated in polyanhydride microspheres was investigated. The polyanhydrides used were poly(sebacic anhydride) (poly(SA)) and a 20:80 random copolymer of poly[1,6-bis(p-carboxyphenoxy)hexane] (poly(CPH)) and poly(SA). Microspheres were fabricated using three double emulsion methods (water/oil/water, water/oil/oil and solid/oil/oil) and cryogenic atomization. The encapsulation efficiency was highest for cryogenic atomization and lowest when the w/o/w technique was used. Microspheres fabricated by the s/o/o method had the largest initial burst of released protein. All the methods resulted in zero-order release of the protein after the burst. The release of ovalbumin from poly(SA) and 20:80 (CPH:SA) microspheres lasted ～3 and ～6 weeks, respectively. For all fabrication methods the primary structure of released ovalbumin was conserved as determined by gel electrophoresis. The secondary structure of ovalbumin encapsulated in 20:80 (CPH:SA) w/o/w microspheres was not conserved.     

A Comparison of Abstinence-Oriented and Indefinite Methadone Maintenance Treatment

Advantage was taken of a natural experiment to compare the outcome of abstinence-oriented and indefinite methadone maintenance. Subjects assigned to an abstinence-oriented program were significantly more likely than those assigned to indefinite maintenance to use heroin (OR 1.3) and amphetamines (OR 2.8) during the first 2 years of methadone treatment but less likely to use benzodiazepines (OR 0.7). Subjects discharged from the abstinence-oriented program were significantly more likely to relapse and return to maintenance treatment (RR, first 6 months, 4.2). The abstinence-oriented program was also less able to attract heroin addicts into maintenance treatment.     

Early Versus Late Onset of Alcoholism in the Elderly

The age of onset of alcohol-related problems is a typology that is gaining prominence among clinicians. Findings from epidemiological studies suggest that there are a significant number of older alcoholics who first begin to drink alcohol “abusively” in their later years. While few demographic differences appear between late onset and early onset alcoholics, a number of studies have reported clinical differences be tween these groups that may affect the natural course and treatment outcome of the illness.     

LC/MS/MS法测定辛伐他汀血浆浓度及其在健康人体内的药物动力学研究

目的:建立人体血浆中辛伐他汀的LC/MS/MS测定方法,并研究辛伐他汀片在男性健康志愿者体内的药物动力学行为,评价其生物利用度和生物等效性。方法:采用两制剂双周期自身对照试验设计。18名男性健康志愿者随机交叉服用单剂量辛伐他汀试验片剂和参比片剂20mg,采用液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)分析方法测定血浆辛伐他汀的浓度。采用DAS2.0程序计算药物动力学参数和相对生物利用度,并进行等效性评价。结果:测定单剂量口服20mg辛伐他汀参比片剂和试验片剂的AUC_((0→24))分别为(14.90±5.86)和(14.37±4.94)ng·h·ml~(-1),AUC_((0→∞))分别为(15.62±6.29)和(14.78±5.02 )ng·h·ml~(-1);C_(max)分别为(4.54±2.11)和(4.00±1.34)ng·ml~(-1);T_(max)分别为(1.75±0.79)和(1.39±0.65)h。以AUC_((0→24))与AUC_((0→∞))计算相对生物利用度分别为(108.0±52.7)%和(106.4±52.5)%。结论:该法准确灵敏,测得的数据可靠,统计分析表明两种制剂生物等效。