液质联用技术用于醋酸阿托西班注射液中杂质结构鉴定

目的:采用高效液相色谱(HPLC)、超高效液相色谱-四极杆串联静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q Orbitrap MS)技术对醋酸阿托西班注射液中杂质结构进行鉴定。方法:HPLC法采用Inertsil ODS-2 C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为乙腈-甲醇-三氟乙酸溶液(pH 3.2)(15∶10∶75),流动相B为乙腈-甲醇(60∶40),梯度洗脱，流速1.2 mL·min^-1,检测波长220 nm。UPLC-Q Orbitrap MS法采用BEH300 C₁₈色谱柱(150 mm×2.1 mm, 1.7μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脱，流速0.2 mL·min^-1;采用电喷雾离子源，选择正离子模式进行Full MS/dd-MS²扫描。结果:对5家企业各1批醋酸阿托西班注射液进行了有关物质测定，以面积归一化计算，含量>0.1%的杂质峰个数分别为9、10、13、9和6,总杂含量分别为0.35...     

太白茶HPLC指纹图谱的建立及UHPLC-QExactive Focus MS/MS联用分析

目的:建立太白茶药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析方法,并运用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)法对太白茶中的特征峰进行定性分析。方法:采用Agilent TC-C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长254 nm,进样量10μL。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012年版”,建立指纹图谱并进行相似度评价。化学成分分析选用UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术,采用Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(50 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃;质谱条件为电喷雾离子源(ESI),负离子模式扫描,扫描范围m/z 80～1 200。结果:建立的太白茶特征指纹图谱中...     

基于液质联用技术分析康艾注射液中人参皂苷类化学成分

目的：采用液质联用技术对康艾注射液中人参皂苷类化学成分进行快速鉴定。方法：化学成分定性分析采用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS技术，色谱柱为ACQUITY UHPLC Column（2.1 mm×100 mm，1.7 μm，BEH C₁₈），以0.1%甲酸水和乙腈梯度洗脱，进样量2 μL，流速为0.2 mL·min^-1。质谱采用电喷雾离子源（ESI），负离子模式下检测。结果：从康艾注射液中共鉴别出40个化学成分。结论：UHPLC-LTQ-Orbitrap MS能快速鉴定康艾注射液中人参皂苷类化学成分，为康艾注射液的药效物质研究奠定基础。     

小儿风叶咳喘平合剂3个成分在大鼠体内的药代动力学研究

目的:对小儿风叶咳喘平合剂中3个主要药效成分在大鼠体内的代谢产物以及药代动力学进行研究。方法:基于超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(UHPLC-ESI TOF MS)方法，采用ACQUITY UPLC?HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm),以0.1%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为0.3 mL·min^-1,质谱采用电喷雾离子源(ESI),以正负离子模式采集多级质谱碎片信息，对大鼠灌胃小儿风叶咳喘平合剂后的血清、胆汁、尿液和粪便进行分析，结合离子碎片进行代谢产物鉴定分析；同时采用超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)的技术进行药代动力学研究。以格列齐特为内标物，采用ACQUITY UPLC?BEH C₁₈色谱柱(50 mm×2.1 mm, 1.7μm),以0.1%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱。血浆样品采用甲醇沉淀蛋白，采用ESI及多反应监测(MRM),选择监测离子(麻黄碱m/z 166.2→148.1、甘草次酸m/z 471.2→453.2、对香豆酸m/z 162.9→119.1、内标m/z 3...     

利用LC-MS/MS法解析化学修饰型胰岛素类似物的氨基酸序列

目的:德谷胰岛素和地特胰岛素是以长链脂肪酸化学修饰为代表的第3代胰岛素类似物,有必要建立专属性强、灵敏度高的LC-MS/MS法测定化学修饰型胰岛素类似物的氨基酸序列。方法:氨基酸序列测定方法的色谱参数为ACQUITY UPLC peptide BEH C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.7μm, 300?),流动相A为0.1%甲酸/水溶液,流动相B为0.1%甲酸/乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1;质谱参数为MS^E采集模式,碰撞能量为30～40 eV。结果:德谷胰岛素和地特胰岛素序列覆盖率良好,化学修饰位点的碎片离子y1&可检出,中高强度离子的离子强度RSD在15%之内,可有效区分与其他未修饰胰岛素的序列。结论:建立了重复性好、专属性强和耐用性好的脂肪侧链修饰型胰岛素类似物氨基酸序列LC-MS/MS方法,为该类产品序列结构的研究方法提供了借鉴意义。     

UPLC-MS/MS法与ELISA法测定胖大海中黄曲霉毒素的比较研究

目的 采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)对胖大海中的黄曲霉毒素进行检测，比较 两种方法的检测结果以及方法学差异性。方法UPLC-MS/MS法测定：样品采用70%甲醇提取经过免疫亲和柱净化，色谱柱为C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7μm)，柱温为40℃，流动相为水含0.1%甲酸(A)-甲醇含0.1%甲酸(B)，梯度洗脱，流速为0.3 m L·min^-1，多反应检测扫描采集模式，正负离子同时扫描进行数据采集。同时采用ELISA法测定，样品采用甲醇提取，酶联免疫试剂盒反应。结果 UPLC-MS/MS法测定：黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂线性关系良好，检测限分别为0.013 5,0.002 9,0.008 6,0.003 6μg·kg^-1，定量限分别为0.045 0,0.009 8,0.028 6,0.011 9μg·kg^-1，平均回收率分别为98.98%,10...     

UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析人血白蛋白及人免疫球蛋白中非目标蛋白成分

目的 采用超高效液相色谱-串联线性离子阱-轨道阱组合高分辨质谱技术对人血白蛋白及人免疫球蛋白中非目标蛋白成分进行定性分析。方法 采用ACQUITY UPLC peptide BEH C₁₈(300Å,1.7 μm,2.1 mm×100 mm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,质谱采用Full MS/dd-MS²(TopN)扫描模式。结果 从人血白蛋白及人免疫球蛋白中共鉴定出非目标蛋白52个,其中人血白蛋白样本中鉴定非目标蛋白25个,人免疫球蛋白样本中鉴定非目标蛋白27个。结论 建立的定性方法可快速、准确、系统地识别出人血白蛋白及人免疫球蛋白中多种蛋白,为该类制剂质量控制及进一步的临床应用提供参考。     

UHPLC-MS/MS测定人血浆中依匹哌唑浓度及其生物等效性研究

目的 建立简便灵敏的超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS)测定人血浆中依匹哌唑浓度,并应用于2种片剂的生物等效性研究。方法 采用Waters Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈-甲醇(50∶50,含0.1%甲酸)(B)梯度洗脱,流速0.4 mL·min^–1,进样量为2μL,柱温40℃,以正离子MRM模式测定依匹哌唑(m/z 434.2→273.2)的浓度,依匹哌唑-d₈(m/z 442.4→281.3)作为内标,离子源为ESI源。血浆样本加入内标,加入甲醇后进行蛋白沉淀,取上清液稀释后进样检测。结果 依匹哌唑在0.2～50 ng·mL^–1呈线性关系,定量下限为0.2 ng·mL^–1,质控样品批内、批间精密度CV≤5.0%,准确度相对偏差在标示值–1.7...     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中他达拉非的浓度

目的 建立一种测定人血浆中他达拉非浓度的液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)法。方法 用蛋白沉淀法对样品进行前处理。色谱柱：Waters ACQUITY UPLC^TM BEH C₁₈(2.1 mm×50.0 mm, 1.7μm),流动相：100%水含2 mmol·L^-1醋酸铵和0.1%甲酸-95%乙腈含2 mmol·L^-1醋酸铵和0.1%甲酸,流速：0.50 mL·min^-1,柱温：40℃,进样量：10μL。用电喷雾离子化源,正离子模式,多反应监测。考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、稀释效应和稳定性。结果 他达拉非在0.80～500.00 ng·mL^-1内,线性关系良好,其标准曲线为y=1.91×10^-2x+1.17×10^-3(r=0.998 8),定量下限为0.80 ng·mL^-1<...     

复杂抗生素多黏菌素E甲磺酸钠的组分与杂质谱研究及在质量控制中的应用

目的:建立二维液质联用方法确定多黏菌素E甲磺酸钠(CMS)杂质的结构及来源,进而用于药物质量控制研究。方法:一维系统：采用Acquity UPLC^?Peptide CSH C₁₈(150 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱,以磷酸盐缓冲液(7.8 g·L^-1磷酸二氢钠,用1 mol·L^-1氢氧化钠溶液调节pH至6.4)-乙腈(19∶1)为流动相A,磷酸盐缓冲液-乙腈(1∶1)为流动相B,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃;二维系统：采用Acquity BEH C₁₈柱(50 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱,以甲酸铵(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1,柱温40℃,检测波长210 nm。质谱检测器采用ESI源,负离子扫描模式。结果:采用2D-LC-Q TOF MS法,推定了CMS中55个杂质的结构,并推测其主要来源为多黏菌素E1-I、多黏菌素E1-7MOA、多黏菌素E3及多黏...     

HPLC法结合LC-MS法测定硫酸鱼精蛋白含量及肽段鉴定

目的:建立了一种同时测定硫酸鱼精蛋白中主成分纯度和含量的HPLC方法，并采用LC-MS法对肽段氨基酸序列进行鉴定。方法:HPLC方法采用的色谱柱为ThermoHypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8),流动相B为乙腈-0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8)(6.5∶93.5),梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1,柱温55℃,紫外检测波长为214 nm,进样量100μL。LC-MS法先采用馏分收集方式对各肽段进行提取富集，然后液质联用采用Waters ACQUITY UPLC Peptide BEH C₁₈色谱柱(15 cm×0.21 cm, 1.7μm),流速为0.2 mL·min^-1,流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为5%乙腈-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱；Thermo Q-Exactive Plus, ESI离子源，阳离子检测模式，雾化电压为...     

基于UPLC-Q/Orbitrap/MS/MS对白虎加人参汤的全成分分析及化学成分鉴定

【摘要】目的 采用超高效液相串联 - 四极杆静电场轨道阱质谱（UPLC-Q/Orbitrap/MS/MS）技术，建立了一种高效的检测方法，对白虎加人参汤的化学成分进行了分析鉴定。方法 采用 Waters UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色谱柱，在 0.1% 甲酸水溶液和 0.1% 甲酸乙腈溶液中以 0.4 mL·min-1 的速度进行梯度洗脱，正负离子模式同时进行检测；根据一级高分辨质谱准确的质荷比数据、二级高分辨质谱碎片离子、色谱保留时间，结合文献报道，对检出的化合物成分进行鉴定。结果 检测到 74 个化合物成分，包含黄酮类、生物碱类、查耳酮类、山酮类、酚类、苯丙素类、萜类、三萜类、环烯醚萜类、氨基酸类、芳香族化合物等。结论 利用 UPLC–Q/Orbitrap/MS/MS 技术对中药复方鉴定，为其物效机制、药理作用及其质量控制的进一步研究提供了初步的理论依据。     

UPLC-MS/MS法鉴定苏格木勒-10中的成分

目的 采用XEVO G2-XS Q-TOF质谱仪快速鉴定苏格木勒-10的化学成分。方法 采用Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.7μm),流速0.3 mL·min^-1,柱温40℃,进样量3μL,流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,质谱扫描范围为m/z150～1500;通过保留时间及质谱数据信息对比,并结合精确相对分子质量、质谱裂解规律对苏格木勒-10的化学成分进行快速鉴定。结果 共鉴定了59个化学成分,并解析了其中4个成分的裂解规律。结论 苏格木勒-10含有丰富的化学成分且来源于多个组方药,可为其质量研究及药物体内代谢分析提供基础。     

黑骨藤主要化学成分在正常和类风湿性关节炎大鼠血浆、尿液、粪便中的代谢产物分析

目的:研究黑骨藤在正常及佐剂性关节炎(AA)大鼠体内的代谢产物,探究类风湿性关节炎(RA)对黑骨藤有效成分在大鼠体内代谢的影响。方法:采用弗氏完全佐剂制备AA大鼠模型;运用UPLC-Q TOF MS^E方法,采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈(100 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱,以0.01%甲酸水-0.01%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.25 mL·min^-1,采用电喷雾离子源,在负离子模式下,对正常和AA模型大鼠灌服黑骨藤提取物后的血浆、尿液和粪便进行分析。结果:在正常大鼠体内和AA模型大鼠体内分别检测到2、3个原型成分,32、35个代谢产物,代谢途径主要包括单咖啡酰基奎宁酸还原、甲基化、开环裂解、葡萄糖醛酸化,二咖啡酰基奎宁酸还原、甲基化、乙酰化、异构化、硫酸酯化、葡萄糖醛酸化等。结论:AA模型大鼠血浆和尿液中的代谢产物比正常大鼠更具多样性,RA疾病状态可能会影响黑骨藤有效成分在体内的代谢途径。     

康艾注射液UPLC/MS指纹图谱研究

目的:建立康艾注射液的UPLC/MS指纹图谱。方法:采用Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈（50mm×2.1mm,1.7μm）进行分离,乙腈-20mmol·L^-1醋酸铵溶液梯度洗脱,流速:0.4ml·min^-1。离子化模式:ESI⁺。结果:对15批康艾注射液样品进行检测,建立了UPLC/MS指纹图谱并标示了8个共有指纹峰。各共有峰相对保留时间变化的RSD均在0.5%之内。结论:该方法准确、重复性好,为进一步质量标准化研究和控制提供依据。     

基于化学分析及药理毒理方法对马钱子炮制前后差异的实验研究

目的:应用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UPLC-Q TOF/MS法)研究马钱子砂烫炮制前后化学差异,并初步评价生品及炮制品的药效及毒性。方法:采用Agilent ZORBAX SB C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm);以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱;流速0.2 mL·min^-1;柱温30℃;质谱采用电喷雾离子源,正/负离子模式,信息关联采集模式扫描;扫描范围m/z 0～1 000。应用PeakView软件的Formula Finder、Mass Calculators等功能,结合SciFinder、Reaxys、ChemSpider等在线数据库进行定性分析和差异性分析;利用SIMCA-P软件构建正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)统计学模型,进行Scatter及S-plot分析;运用MultiQuant软件,采用外标法对马钱子碱、士的宁进行定量分析;最后采用二甲苯耳廓致炎及不同剂量小鼠灌胃实验以对比评价药效毒性。结果:结果显示马钱子的化学成分主要包括生物碱、糖苷、脂肪酸酯和...     

UPLC-MS-MS法测定怀山药中去甲乌药碱的含量

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS-MS)法测定怀山药中去甲乌药碱含量的测定方法。方法:样品用0.1%高氯酸溶液提取、MCX固相萃取柱净化,5%氨水甲醇溶液洗脱,洗脱液水浴上氮吹干后用50%甲醇水溶液(含0.1%甲液)复溶。采用Waters BEH C₁₈超高效液相色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%的甲酸水溶液进行梯度洗脱分离,柱温30℃,流速为0.3 m L·min^-1,以非诺特罗作为内标进行定量。结果:去甲乌药碱的线性范围为1～100 ng·m L^-1(r=0.999 3),检出限为0.3μg·kg^-1,定量限为1μg·kg^-1;样品加标回收率为86.8%～91.8%,相对标准偏差为2.1%。结论:本方法净化效果好,灵敏度高,线性范围广,重复性好,能够满足怀山药中去甲乌药碱含量测定要求。     

十大功劳提取物中三种生物碱在比格犬体内的药动学研究

目的：研究灌胃十大功劳提取物后巴马汀、药根碱、小檗碱在比格犬体内的药动学特征。方法：色谱条件:色谱柱：Acquity UPLC BEH C₁₈ column (2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相流速：0.3 mL·min^-1,流动相：A-0.1%甲酸-水,B-乙腈,柱温：35℃,进样量：10μL,质谱采用电喷雾离子源正离子模式,多反应监测,监测离子对巴马汀、药根碱、小檗碱、延胡索乙素分别为：353.1→337.0、339.1→323.0、336.9→320.9、356.1→192.0。采用Certara Phoenix WinNonlin软件计算相应的药动学参数。结果：比格犬单次口服十大功劳提取物后,巴马汀及药根碱大部分时间点血药浓度均低于最低定量限,巴马汀C_max为2.86±1.31 ng·mL^-1,药根碱C_max均低于1.00 ng·mL^-1,小檗碱药动学行为符合一室模型,其主要药动学参数为：C_max:15.14±7...     

新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素修饰位点研究

目的:建立新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)修饰位点的研究方法,为该类新型修饰技术产物的质量评价提供依据。方法:采用MALDI-TOF质谱分析修饰产物中聚乙二醇(PEG)的修饰个数及修饰肽段的质量数;采用LC-Q-TOF质谱分析修饰位点,分析色谱柱为UPLC色谱柱(Protein ACQUITY BEH C₄ Column, 150 mm×2.1 mm, 1.7μm, 300?),以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相,进行梯度洗脱,柱温为40℃。质谱数据采集条件为MS~E模式,一级质谱能量4 eV,二级碎裂电压30～55 eV。结果:修饰蛋白中PEG的平均相对分子质量为30 000,并且每个PEG-rhGH分子中仅存在1个PEG修饰;原型蛋白重组人生长激素中第134位精氨酸被替换为赖氨酸,且该赖氨酸的ε-氨基与连接子HOOC-O-CH₂-CH₂-N₃中的羧基端共价结合,连接子另一端的叠氮基团与活化后的PEG偶联后生成修饰产物。结论:联合运用多种质谱技术,通过比对...     

HPLC-MS/MS测定化妆品中14种荧光增白剂

目的建立HPLC-MS/MS定量测定化妆品中14种荧光增白剂的分析方法。方法样品经N,N-二甲基甲酰胺超声提取,选用Waters ACQUITY UPLC?BEH C₁₈(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,以甲醇-0.1%氨水水溶液梯度洗脱,流速0.3 mL·min^–1,柱温40℃;质谱法采用三重四级杆质谱,电喷雾离子源,在正/负离子、多反应监测模式下进行扫描。结果14种荧光增白剂在定量范围内线性关系良好,相关系数均>0.99,定量限为0.01～20μg·g^–1,检出限为0.004～8μg·g^–1;在3个添加水平下的平均回收率为85.4%～108.9%,相对标准偏差为0.3%～7.2%。结论该方法灵敏度高,专属性强,操作简单方便,适用于化妆品中14种荧光增白剂的含量测定。