乙型肝炎病毒基因分型检测的临床应用

近年开展的乙型肝炎病毒（HBV）基因分型检测对于研究HBV的致病性、临床特征等有重要意义.本文着重从HBV各基因型的地理分布、临床特征、对抗病毒治疗的反应及其与病毒基因变异的关系等方面作一阐述.     

HBV基因变异对荧光定量PCR系统检测HBV-DNA准确性的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型和病毒变异对Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan 48系统和荧光定量PCR系统检测HBV-DNA的影响。方法收集医院肝病中心2014年3月-2015年10月HBV感染患者100例,明确HBV基因型和变异情况,同时采用Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan48系统和荧光定量PCR系统检测HBV-DNA,比较针对不同HBV基因型和病毒变异时两种方法检测结果的差异和相关性。结果两种方法检测B型、C型患者的病毒载量差异均无统计学意义,对未发生病毒变异的患者,两种方法的检测结果差异无统计学意义;对发生病毒变异的患者,两种方法的检测结果差异有统计学意义(t=2.29,P=0.028);两种方法检测B、C型HBV-DNA时的相关系数r分别为0.82、0.86,差异无统计学意义;两种方法检测未发生病毒变异患者HBV-DNA的相关系数r为0.91,显著高于发生病毒变异时的相关系数(r=0.70)(Z=3.13,P<0.01)。结论对于不同的HBV基因型,Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan系统和国产荧光定量PCR系统在检测HBV-DNA方面有较好的相关性,但HBV基因变异可能会影响后者的准确性。     

抗-HCV阳性血清HCV RNA检测与基因分型的研究

目的 检测抗-HCV阳件血清巾的HCV RNA并进行HCV基因分型.方法 采用荧光定量PCR法检测85例大连地区抗-HCV阳性患者血清中HCV RNA,应用型特异性引物逆转录套式PCR法对HCV RNA阳性样本进行基因分型.结果 85例的抗-HCV阳性患者中,HCV RNA阳性65例(76.5%),其中基因分型1b型32例(49.2%),2a型29例(44.6%),未分型4例(6.2%).结论 抗-HCV阳性并非HCV直接标志,大连地区HCV基冈1b型和2a型基本相等.     

萍乡地区乙肝病毒基因多态芯片酶联分析基因分型检测报告

目的 了解本地区乙肝基因型分布。方法 用上海瑞芯生物科技有限公司和中科院上海微系统与信息技术研究所提供试剂，对113例血清标本进行基因分型，并检测各型之间与ALT、HBV—DNA含量以及HBeAg表达。结果 113例HBV-DNA阳性患者基因分型分布为：B型77例，C型14例，BC混合型15例，未分型7例。结论 本地区HBV—DNA基因分型以B型为主，基因型B与年轻非肝硬化患者HCC发生有关，基因型C可能与肝炎症状加重有关，如果BC混合感染，两种基因“相互促进作用”可能更加重肝炎症状。     

膜芯片技术诊断乙型和丙型肝炎病毒与基因分型

[目的]利用膜芯片技术建立乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)联合诊断和基因分型新方法。[方法]根据HBV的前C区、X区及HCV的5'端非编码区(5'UTR)基因序列分别设计引物与分型探针。用生物素标记的引物进行HBV-DNA和HCV-cDNA扩增,将活性氨基标记的分型探针依次固定在尼龙膜上,制成HBV和HCV联合诊断和基因分型膜芯片条。扩增产物与膜芯片条杂交后,经过氧化物酶与底物显色,判断有无HBV和HCV感染并同时进行基因分型。通过经荧光定量PCR和基因测序确定的HBV和HCV单项阳性血清各30份以及HBV和HCV混合血清5份验证该方法的有效性。[结果]膜芯片对HBV和HCV单独感染和混合感染的诊断与荧光定量PCR结果相同,基因分型结果与测序分型结果一致。[结论]利用膜芯片技术可实现HBV和HCV联合诊断和基因分型,并具有准确有效和简便经济等特点,适合用于临床诊断和流行病学调查。     

3种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA结果比较

乙型病毒性肝炎(乙肝)是一种严重影响我国人民健康的传染病,检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量是反映HBV复制的程度,考核抗病毒药物治疗效果的重要依据。用PCR检测HBV-DNA是最常用的检测方法,由于该法受一系列的技术以及人为因素影响,易使检测结果产生误差,甚至造成假阴性的结果。为此,我们对48份HBV-DNA检测阴性标本,用多种不同厂家生产的PCR试剂进行同步复核,探讨其假阴性结果的真实性,现报道如下。材料与方法1标本来源宁波市传染病院2005~2005年住院和门诊乙肝患者2333份血清标本,均未经抗病毒药物治疗,其血清病毒学标志检…     

连云港地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型的研究

[目的]了解连云港地区慢性乙型肝炎患者HBV 基因型特点及其临床意义.[方法]用PCR结合微流芯片技术对2003 年7 月至2005 年7 月门诊及病房收治的慢性乙型肝炎患者感染的HBV 进行基因分型,并与其临床生化结果、病毒定量进行相关性分析.[结果]乙肝病毒基因分型为B 型12例(19.05%),C型45 例(71.43%),B C混合型4例(6.35%),未定型2例(3.17%);其中年龄大于35岁的7例B基因型和21例C基因型的谷丙转氨酶(ALT)水平分别为(174.0±124.7)IU/L 和(247.8±212.6)IU/L(P＜0.05);HBV-DNA病毒载量分别为(5.0±2.1)lg.copies/ml和(6.4±2.71) lg.copies/ml,两项指标经t检验差异有统计学意义(P＜0.05);年龄在18～34岁的B型和C型患者ALT水平、HBV-DNA病毒载量和HBeAg阳性率无统计学差异(P＞0.05).[结论]连云港地区慢性乙型肝炎患者基因型有B 型、C型、B C混合型和未定型,但以C 型为主,B型次之.发现在年龄大于35岁的慢性乙型肝炎患者中,感染C基因型的ALT水平、HBV 病毒载量显著高于B基因型患者(P＜0.05),提示C基因型HBV感染致肝脏损害较重.     

丙型肝炎病毒逆向点杂交基因分型方法的建立及初步应用

目的 利用逆向点杂交技术建立丙型肝炎病毒(HCV)基因分型新方法。方法在HCV5’端非编码区(5’UTR)设计引物与分型探针，将活性氨基标记的分型探针依次固定在尼龙膜上，制成HCV基因分型逆向点杂交检测膜条。分离纯化血清中的HCV RNA，经逆转录反应和生物素标记引物聚合酶链反应(PCR)巢式扩增后，将扩增产物与检测膜条杂交，过氧化物酶和四甲基联苯胺显色，判断基因分型结果。最后，通过与基因测序结果比较确定新方法的有效性。从佛山地区丙型肝炎患者中随机抽取60份经荧光定量PCR方法对HCV RNA进行过定量分析的血清，用新建方法进行HCV基因分型检测。结果新建HCV逆向点杂交基因分型方法可对所有60份HCV RNA拷贝数在10。～10。／ml之间的抽检血清进行基因分型，发现1b型50例，占83．3％；1a型2例，占3．3％；2a型2例，占3．3％；1a、1b混合型5例，占8．0％；1b、2a混合型1例，占1．7％；未发现2b、3a和3b型。新方法基因分型结果与测序分型结果一致。结论PCR一逆向点杂交技术可以准确有效和简便经济地进行HCV基因分型．适用于临床检测与流行病学研究。在佛山地区人群中感染的HCV以1b型为主。     

蛋白质芯片定量检测乙肝表面抗原系统的建立

目的：建立以蛋白质芯片检测乙肝表面抗原的方法,以期对乙肝患者血清中HBsAg进行定量检测,帮助动态分析病情和评估疗效。方法：用点样仪将一种抗-HBsAg单抗点到硝酸纤维素膜（NC膜）上制成芯片,HRP标记另一种抗-HBsAg单抗,以双抗夹心法捕获血清中HBsAg,建立HBsAg浓度与检测点灰度间关系的标准曲线并通过芯片阅读仪进行定量分析。结果：建立的蛋白质芯片检测系统能快速准确地对血清中HBsAg进行定性和定量检测,系统的定量检测范围是1-10000 ng/ml。结论：蛋白质芯片检测系统具有微型化和自动化的优点,与PCR HBV-DNA相比其操作更简便,所需时间更短,可以代替传统的ELISA方法,是更为科学的疗效评估方法。     

太原市食品及公共场所从业人员乙型肝炎病毒(HBV)血清学检测分析

目的：为了掌握我市食品及公共场所从业人员HBV的感染状况。方法：用ELISA法检测HBsAg及乙肝五项。结果：2006年检测35179名我市食品及公共场所从业人员，查出HBsAg阳性者305人，HBsAg阳性率为0．87％，对其中285例HBsAg阳性者定期复检并进一步检测HBV的其他血清标志物，结果有32例HBsAg转阴，其中22例仍检出抗-HBc、HBeAg、抗-HBe等HBV血清标志物，10例产生保护性中和抗体抗-HBs，检出14种感染摸式。结论：对HBsAg及HBeAg阳性者及时调岗，防止乙型肝炎进一步传播。     

DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因型

目的 制备检测HBV基因型的DNA芯片并进行杂交验证.方法 设计多条HBV分型寡核苷酸探针,固定于醛基基片的特定位置,制备成芯片,采用酶呈色技术(BCIP/NBT显色)检测杂交信号,进行杂交验证分析.结果 106例临床样本均测出基因型,其中B型37例,C型69例;对所有样本进行测序分析,结果与芯片杂交一致,杂交的灵敏度和重复性等指标均佳.结论 DNA芯片检测HBV基因型,操作简便易行,技术要求不高,适于临床推广应用.     

乙型肝炎病毒基因型检测及其临床意义

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基因型与抗病毒治疗前后患者HBV DNA载量、肝功能和HBeAg的相关性及其临床意义。方法采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法对87例慢性乙型肝炎患者HBV进行基因分型,分别用连续监测法、荧光定量PCR法和ELISA法检测患者治疗前、治疗6、12个月后的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBV DNA载量和乙型肝炎两对半。结果 87例慢性乙型肝炎患者感染的HBV中B型58例,占66.7%,C型24例,占27.6%,B、C混合型3例,占3.4%,未分型2例,占2.3%;抗病毒治疗前,B基因型患者的ALT[(151.3±5.6)U/L]低于C基因型患者的ALT[(232.5±7.3)U/L],差异有统计学意义(P<0.05);B、C基因型患者HBV DNA载量分别为7.3±1.0和7.6±1.1,差异无统计学意义;抗病毒治疗后,B、C基因型患者ALT和HBV DNA载量均比治疗前降低,且B基因型患者HBV DNA载量显著低于C基因型患者,P<0.05;B基因型的HBeAg阴转率(62.1%)和HBV DNA阴转率(44.8%)显著高于C基因型,分别为29.2%和20.8%,P<0.05。结论广州地区HBV基因型以B型占显著优势,其次是C型,B基因型的临床表现轻于C基因型,对抗病毒治疗的应答反应更好,且较C基因型有更高的HBeAg阴转率。     

宁波地区丙型肝炎病毒基因分型检测

目的:通过检测丙型肝炎病毒基因分型,探讨宁波地区HCV感染基因型流行株特征。方法:本文共收集231例HCV感染者的血清,采用基因芯片技术进行HCV基因分型。结果:231例丙型肝炎病毒基因分型1b型162例,占70.12%;2a型25例,占10.82%;1b+2a混合型15例,占6.49%;并有少数的3b3、a6、型和其它混合型,均占<5%。结论:宁波地区HCV感染基因型以lb型为主、其次为2a型。基因芯片法检测丙型肝炎病毒基因分型,具有微量、多位点、准确性好、灵敏度高、特异性强等特点。     

Genotyping and molecular characterization of hepatitis B virus in liver disease patients in Kenya

Hepatitis B virus (HBV) genotypes are important in both the clinical manifestation of disease and treatment response. Although Kenya belongs to the African Region (AFR-E) characterized by high mortality and hyperendemicity of HBV, there is a paucity of HBV genotyping data. The aim of this study was to molecularly characterize the basic core promoter/precore (BCP/PC) and complete surface (S) regions of HBV isolated from 61 HBsAg-positive liver disease patients attending Kenyatta National Hospital in Nairobi. HBsAg, HBeAg and viral loads were determined. HBV DNA was amplified and sequenced from 58/61 patients. In addition to the complete genome of two isolates, the BCP/PC and the complete S regions of 43 and 38 isolates, respectively were sequenced. Following phylogenetic analysis of the S region, 38 isolates clustered with subgenotype A1, whereas two isolates clustered with genotype D, one with subgenotype D1 and another as an outlier of the clade containing subgenotype D6 and the D/E recombinant. When the complete genome of the latter isolate was sequenced it clustered with D6. The majority of isolates belonged to serological subtype adw2 and only four to ayw2. Three distinct groups of subgenotype A1, distinguished by different amino acid motifs, circulate in Kenya: two in the African cluster and a monophyletic clade in the “Asian” cluster. HBeAg-negativity was a result of G1896A in genotype D isolates, whereas in subgenotype A1, the HBeAg-negativity was a result of mutations in the Kozak region (1809–1812) or precore start codon (1814–1816). Mutations at positions 1762 and 1764 occurred more frequently in HCC patients (p < 0.05). In conclusion, subgenotypes A1, D1 and D6 circulate in liver disease patients in Kenya, with A1 predominating.     

Acute infection by hepatitis B virus

The clinical spectrum of acute hepatitis B virus infection is very broad, with clinical manifestations that range from anicteric and sub-clinical hepatitis to severe acute icteric hepatitis and even, in some cases, to fulminant hepatitis. Diagnosis depends to a large extent on the degree of clinical suspicion of hepatitis, establishing the aetiological origin of the B virus through the study of serological markers and/or DNA in the blood. Although in the majority of cases there is a favourable evolution of acute hepatitis B virus infection, with spontaneous resolution of the clinical manifestations in 4-8 weeks, progression to chronic hepatitis is not unusual in certain cases, above all in infancy. No specific treatment exists for acute hepatitis B virus infection that would reduce its severity or prevent its evolution into chronic hepatitis. However, relative rest and the administration of an hypercaloric diet are recommended. In cases of severe acute hepatitis hospital admission should be recommended; in cases of fulminant hepatitis, admission to the intensive care unit for intensive monitoring and evaluation of a liver transplantation is recommended if spontaneous improvement does not occur. This paper reviews briefly the clinical manifestations, diagnosis, prognosis and treatment of acute hepatitis B virus infection.     

PCR-反向点杂交检测武汉地区丙型肝炎病毒的基因分型

目的了解武汉地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因分型,为合理选择治疗方案及疗效预测提供理论依据。方法用PCR-反向点杂交技术对82份HCV-RNA阳性的血清进行基因分型,并对PCR产物测序验证,同时分析患者的性别、丙型肝炎临床类型与基因型分布相关性。结果 82份HCV感染样本共检出4种基因型,分别为lb、2a、3b和6a型,其中1b占73.1%,2a占14.6%,3b占7.3%,6a型占5.0%,各型测序结果与GenBank相应序列一致,1b型患者中重度型丙型肝炎发病率显著高于其他各型(P<0.05),基因型分布差异与性别无关。结论武汉地区HCV基因型主要为1b型,其次为2a型,与中国其他地区HCV基因型分布相一致,1b型患者临床症状较其他类型重,输血是丙型肝炎传播的主要途径,PCR-反向点杂交技术检测丙型肝炎病毒基因分型结果准确可靠、操作简便,具有临床推广和应用价值。     

内蒙古科右中旗地区蒙古、汉族人群HBV基因分型

目的了解乙型肝炎病毒（HBV）基因型在内蒙古兴安盟科右中旗地区蒙古族及汉族人群之间的分布情况。方法采用S基因区的序列分析法和系统发生树分析法确定HBV基因型,HBV血清标志物检测采用ELISA法检测。结果105例蒙古族样本中93例测序成功,其中B型26例（27.96%）均为B2亚型,C型47例（50.53%）均为C2亚型,D型20例（21.51%）均为D1亚型;60例汉族样本中51例测序成功,其中B型10例（19.61%）均为B2亚型,C型32例（62.74%）全部为C2亚型,D型9例（17.65%）均为D1亚型;从NCBI中BLAST的分型结果与S基因系统发生树的分型结果完全相同。结论内蒙古兴安盟科右中旗地区蒙古族及汉族HBV基因型均为B、C、D型,B、D基因型以蒙古族为主,C基因型以汉族为主。     

被动免疫阻断乙型肝炎宫内感染与胎盘感染

目的 探讨乙型肝炎(简称乙肝)孕妇经被动免疫阻断乙肝病毒(HBV)宫内感染的疗效及胎盘感染与新生儿感染的关系. 方法 100例乙肝表面抗原(HBsAg)阳性的孕妇于妊娠28、32、36周各注射乙肝免疫球蛋白200 IU者,为免疫组,42例HBsAg阳性的孕妇因各种原因妊娠期未注射乙肝免疫球蛋白者,为非免疫组.对所有分娩的新生儿用荧光定量(PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血中HBV-DNA含量及乙肝两对半HBsAg、乙肝病毒表面抗体(HBsAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAs)、-乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒核心抗体(HBcAb),同时对胎盘采用免疫组化法测定乙肝感染标志物HBsAg和HBcAg. 结果 免疫组新生儿HBV的感染率为5.0%(5/100),非免疫组的感染率为16.7%(7/42),2组比较,差异有统计学意义(P<0.05);被动免疫组胎盘HBV感染率为35.0%(35/100),非免疫组为59.5%(25/42),2组比较,差异有统计学意义(X2=7.29,P<0.01)结论 被动免疫可以降低HBV官内感染的发生率,HBV官内感染与胎盘感染相关.