肿瘤坏死因子α对豚鼠耳蜗血管纹微血管内皮细胞通透性的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对豚鼠耳蜗血管纹微血管内皮细胞通透性的影响及可能的分子调控机理.方法 体外分离培养豚鼠耳蜗血管纹微血管内皮细胞并建立内皮细胞通透性体外模型,观察TNF-α、TNF-α连同L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)或L-单甲基精氨酸(NG-monomethyl-L-arginine,L-NMMA)对内皮细胞通透性的影响.按照作用时间和浓度的不同,分别检测内皮细胞对伊文思蓝通透率的变化,并通过免疫荧光激光共聚焦扫描显微镜测定各组标本中的F-肌动蛋白(F-actin)含量的变化.结果 TNF-α能显著增加耳蜗血管纹微血管内皮细胞的通透性,使伊文思蓝的通透率升高(P值均＜0.01),且随TNF-α浓度的提升和作用时间的延长而增加.一氧化氮(nitric oxide,NO)供体L-Arg能增加TNF-α作用下耳蜗血管纹微血管内皮细胞的通透性,使伊文思蓝的通透率升高,差异具有统计学意义(P值均＜0.01),且随着L-Arg浓度的增加内皮细胞对伊文思蓝的通透率也明显增加.一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂L-NMMA可降低TNF-α作用下耳蜗血管纹微血管内皮细胞的通透性,使伊文思蓝的通透率下降,差异具有统计学意义(P值均＜0.01),且随着L-NMMA浓度的增加内皮细胞对伊文思蓝的通透率也明显下降.TNF-α能使内皮细胞中的F-actin含量明显减少(P＜0.01),且TNF-α的浓度越高F-acitn的含量降低越明显;L-Arg能进一步降低F-actin的含量(P＜0.05);而L-NMMA则能抑制这种趋势(P＜0.05).结论 TNF-α能增加耳蜗血管纹微血管内皮细胞的通透性,NO可能是TNF-α调控内皮细胞通透性的重要分子机制之一;耳蜗微血管内皮细胞中F-acfin含量的改变可能与其通透性的调控有关.     

尿素对豚鼠血管纹的作用

将静注尿素的实验组与不用尿素的对照组豚鼠的血管纹取出进行电镜观察,发现实验组血管纹边缘细胞水肿,随之血管纹组织间隙肿胀,但细胞之间的紧密连接无增宽现象;而对照组无此现象发生。提示尿素引起内淋巴脱水,主要通过细胞膜渗透的途径。文中讨论了尿素和甘油对内耳脱水作用的区别以及二者在试验与临床应用中的特点。     

豚鼠血管纹缘细胞的原代培养

目的:建立豚鼠内耳血管纹缘细胞的体外培养系统,为研究缘细胞的功能提供良好的材料。方法:采用移植培养技术,将活体分离的血管纹组织块接种于无菌塑料培养皿中,于5％CO2 37℃恒温箱内培养,每周换液2次,观察细胞生长情况。利用免疫组织化学技术,将抗细胞角蛋白抗体和抗波形蛋白抗体用于检测培养细胞。制作透射电镜标本观察培养细胞的超微结构。结果:培养细胞成功生长4周,具有多角形细胞和梭形细胞两种不同形态,免疫组织化学反应显示角蛋白、波形蛋白染色于多角形细胞胞浆中,梭形细胞仅波形蛋白呈阳性反应。透射电镜示多角形细胞具有紧密接合和桥粒等上皮细胞的特征。结论:采用移植块培养技术,成功建立豚鼠内耳血管纹缘细胞的原代培养方法,为研究缘细胞的功能提供了合适的细胞模型。     

冲击波对豚鼠耳蜗血管纹心钠素的影响

用免疫组织化学（ＡＢＣ）方法结合图象分析和听觉电生理技术研究了冲击波对豚鼠耳蜗血管纹心钠素（ＡＮＰ）的影响及其与听阈阈移的关系。结果表明：冲击波暴露后６、１２、２４、４８小时组，血管纹中ＡＮＰ－ＩＲ产物的光密度值较７２小时组和对照组明显增高（Ｐ＜０．０１），７２小时与对照组的光密度值无显著差异（Ｐ＞０．０５）。自管纹中ＡＮＰ－ＩＲ光密度值的变化与ＡＢＲ阈移呈正相关。提示，血管纹中的ＡＮＰ含量的增高     

内皮舒张因子对豚鼠耳蜗血管纹血管的保护作用

本实验利用活体显微镜摄像技术、透射电镜技术,观察了内皮舒张因子（EDRF）对豚鼠耳蜗微循环的保护作用。结果提示：①速尿组（F）动物,经静脉注射药10min后,耳蜗微动脉缺血,血管内皮细胞损伤;②对速尿／L-精氨酸组（F／L－Arginine）动物,EDRF能使速尿引起的微动脉缺血明显改善,血管纹血管超微结构的损伤程度较单纯F组减轻;③速尿／L-硝基-精氨酸组（F／L－NNA）动物,耳蜗的缺血程度较F组加重。结论提示;EDRF能通过增加局部血流的灌注而改善和保护耳蜗微循环。本研究提供的实验结果,于临床开展微循环致聋疾病的治疗有所启迪。     

豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞钾离子通道特性的研究

目的 研究单个豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞的基本电生理特性。方法 应用耳蜗血管纹组织块培养技术和全细胞膜片钳技术，观察单个培养的豚鼠血管纹边缘细胞在电压钳模式下的电流特性。结果 边缘细胞上记录到钾离子电流，该钾通道有以下特性：①具有电压依赖性；②通道的活动可被4-氨基吡啶（4-aminopyridine，4-AP）和四乙铵（tetraethylammonium，TEA）在相对高浓度下阻滞；③细胞外钙离子浓度的减少可导致该钾通道电流的降低。结论 豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞钾离子通道电流包括钙离子依赖性钾电流、外向延迟整流钾电流和A型钾电流。     

速尿对离体培养豚鼠血管纹毒性作用的观察

目的：观察速尿对离体培养的豚鼠血管纹组织的影响，探讨速尿耳毒性的作用机制。方法：20只花色豚鼠随机分成二组：速尿组（n=16），正常对照组（n=4）。应用组织块培养的方法，将血管纹组织培养24小时，随即对不同的实验组分别应用不同终浓度的的速尿（60、300、600、1250、2500μg/ml），分别继续培养30分钟和90分钟，观察培养的血管纹组织学结构。结果：速尿组在组织学方面均未出现血管纹水肿、缘细胞胞浆肿胀、细胞间隙扩大和中间细胞皱缩等病理改变，与对照组相比较血管纹结构无显著性差异。结论：速尿对体外培养的豚鼠血管纹组织无明显诱导水肿的作用，提示速尿耳毒性的产生，可能是间接的作用机制。     

内皮舒张因子对豚鼠耳蜗血管纹血管的保护作用

本实验利用活体显微镜摄像技术、透射电镜技术,观察了内皮舒张因子（ＥＤＲＦ）对豚鼠耳蜗微循环的保护作用。结果提示：（１）速尿组（Ｆ）动物,经静脉注射药１０ｍｉｎ后,耳蜗微动脉缺血,血管内皮细胞损伤;（２）地速尿／Ｌ－精氨酸组（Ｆ／Ｌ－Ａｒｇｉｎｉｎｅ）动物,ＥＤＲＦ能使速尿引起的微动脉缺血明显改善,血管纹血管超微结构的损伤程度较单纯Ｆ组减轻;（３）速尿／Ｌ－硝基－精且（Ｆ／Ｌ－ＮＮＡ）动物,耳蜗的缺     

iNOS在链霉素耳中毒豚鼠耳蜗血管纹的表达

目的探讨链霉素（streptomycin,SM）耳中毒过程中豚鼠耳蜗诱生型一氧化氮合霉（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的表达.方法 20只豚鼠随机分为正常对照组、SM组,每组10只,SM组每日腹腔注射硫酸链霉素150 mg/kg,正常对照组每日腹腔注射等量生理盐水,用药10天后处死.以听性脑干反应（ABR）为监测指标,结合电镜、免疫组化及图像分析技术,检测链霉素耳中毒过程中耳蜗血管纹iNOS的表达及形态学改变.结果用药10天后,SM组ABR阈值明显高于正常对照组,有统计学差异（P〈0.01）,电镜下可见SM组血管纹损伤严重;免疫组化结果表明,SM组血管纹iNOS的表达明显高于正常对照组.结论 SM耳中毒时ABR阈值升高,血管纹iNOS表达增强.     

庆大霉素对豚鼠血管纹Na，K-ATP酶α亚单位异构体表达的影响

目的 观察正常豚鼠血管纹Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α亚单位异构体的表达及庆大霉素对其表达的影响。方法 用鼠抗大鼠Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α亚单位异构体特异性单克隆抗体,采用免疫组化ＳＰ法观察正常豚鼠血管纹中Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α１异构体的表达及庆大霉素作用后表达的变化。结果 正常豚鼠血管纹Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α１异构体表达呈阳性,而α２和α３异构体表达呈阴性。庆大霉素作用后α１异构体表达显著减弱。结论 庆大霉素显著     

压力波对豚鼠耳蜗血管纹、毛细胞心钠素免疫活性改变的研究

目的为探讨压力波的致聋机理,对豚鼠耳蜗血管纹(SV)、毛细胞(HC)中心钠素免疫活性(ANP-IR)的改变及与听阈阈移的相关性进行研究。方法采用免疫细胞化学(ABC法)法、图像分析听性脑干反应测听技术(ABR)对压力波暴露后不同时间分组的豚鼠耳蜗SV、HC中ANP-IR产物进行检测。结果压力波暴露后6、12、24h和48h组SV组织中ANP-IR光密度值较对照组均有明显的差异(P<0．05),其中24h组最高;冲击波暴露后6、12、24h组内毛细胞(IHC)中ANP-IR阳性产物的光密度值较对照组明显增高(P<0．05),其中以12h组最高。二者的变化均与听阈阈移有明显的正相关性(r1=0．8175,P＞0．05;r2=0．9185,P＞0．05)。而外毛细胞(OHC)中ANP-IR阳性产物变化不明显。结论压力波暴露后,SV组织中ANP的增高可能是内耳的一种代偿机制;IHC和OHC中ANP-IR的变化可能是冲击波对其损伤机制的不同表现。     

一氧化氮合酶在正常豚鼠低位听觉径路及血管纹的分布

采用ＮＯＳ的组织化学技术，研究豚鼠低位史觉径路及血管纹的一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）的分布，结果发现，在耳蜗核有密集的ＮＯＳ阳性胞体，阳性纤维散在，阳性胞体主要集中在耳蜗背侧核，腹侧核内阳性反应较少；螺旋神经节ＮＯＳ阳性细胞呈圆形或椭圆形，有明确的突起；耳蜗各回内外毛细胞均呈ＮＯＳ阳性反应，内毛细胞区较外毛细胞区染色深；血管纹的边缘细胞呈强阳性反应。文章讨论了     

低能量超声照射对豚鼠耳蜗血管纹的影响

目的 探讨低能量超声照射豚鼠耳蜗后血管纹的酶组织化学变化.方法 以A型脉冲超声波诊断仪为超声发射器,分别以2.5 mHz、8.0 mHz超声照射豚鼠耳蜗6.0小时后间隔0.5小时、8.0小时,行豚鼠耳蜗血管纹铺片观察琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)组织化学观察.以Kruskal and Wallis法对血管纹琥珀酸脱氢酶活性(吸光度A值)行统计学处理.结果 2.5 mHz、8.0 mHz超声照射豚鼠耳蜗6.0小时后间隔0.5小时、8.0小时,不同部位耳蜗血管纹SDH酶吸光度A值降低,且照射后8.0小时组较照射后0.5小时组SDH酶吸光度A值有明显升高,这种变化与耳蜗毛细胞SDH酶吸光度A值降低区域大体相对应.结论不同频率低能量超声照射豚鼠耳蜗达一定剂量可引起耳蜗血管纹不同部位SDH酶活性降低,这种变化在一定照射剂量下是可逆或部分可逆的.提示暴露低能量超声达一定剂量可引起耳蜗一定程度的病理改变.     

冲击波对豚鼠耳蜗血管纹碳酸酐酶的影响（摘要）

冲击波对豚鼠耳蜗血管纹碳酸酐酶的影响（摘要）王天友，王锦玲，徐灵，邱建华，刘顺利碳酸酐酶（ｃａｒｂｏｎｉｃａｎｈｙｄｒａｓｅ，ＣＡ）在内耳分布相当广泛，其催化可逆的ＣＯ２水合反应，在许多组织的离子转运、体液形成、去除代谢产生的ＣＯ２和调节酸碱平衡的一...     

庆大霉素对豚鼠血管纹黑色素的影响及其机制

OBJECTIVE: To investigate the effect and its mechanism of gentamicin(GM) on melanin in stria vascularis of guinea pig. METHODS: The differences of auditory thresholds between pigmented and albino guinea pigs, given GM of 150 mg/kg for 7 days, were studied. Moreover, the content of melanosomes, activity of tyrosinase and expression of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) in intermediate cells of stria vascularis in gentamicin-treated pigmented guinea pigs were compared with those in control animals by electron microscope and immunohistochemistry, respectively. RESULTS: After gentamicin exposure, the auditory thresholds of all animals increased significantly (P < 0.001), whereas threshold shifts averaged across all frequencies of pigmented animals were much less than those of the albinos(P < 0.001). The number of melanosomes of each examined area (300 microns 2) in intermediate cells was obviously increased from 19.83 +/- 2.74 to 58.33 +/- 16.22. The ratio of tyrosinase reaction products area to the total measured area was significantly increased from 1.65% +/- 0.40% to 3.45% +/- 0.41% after gentamicin exposure. However, the numbers of positive intermediate cells expressing PCNA were 14.08 +/- 2.76 and 13.58 +/- 2.09 before and after gentamicin treatment, respectively. But there was no statistically significant difference between them (P > 0.05). CONCLUSION: The increase of content of melanin in stria vascularis after GM exposure does not result from the change of proliferating activity of melanocytes, but from the enhanced tyrosinase activity. Melanins in stria vascularis may possess the ability to protect the inner ear from ototoxicity of gentamicin.     

庆大霉素对豚鼠血管纹黑色素的影响及其机制

目的了解庆大霉素(gentamicin,GM)对豚鼠血管纹黑色素的影响及其作用机制.方法豚鼠杂色40只和白色20只每日肌内注射庆大霉素150 mg/kg体重7 d后用脑干诱发电位仪检测两种豚鼠的听阈变化,以透射电镜观察杂色豚鼠用药前后血管纹内黑色素含量及酪氨酸酶活性的变化,并用免疫组化法观察血管纹增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的变化.结果庆大霉素作用后,杂色和白色豚鼠的听阈与用药前比较,差异有非常显著性意义(P<0.001),且两组豚鼠间的阈移差异也有非常显著性意义(P<0.001).杂色豚鼠对照组和实验组(各10只)血管纹中间细胞内平均(±s,以下同)每个观测区域(300 μm2)的黑素体含量分别为(19.83±2.74)个和(58.33±16.22)个,差异有非常显著性意义(P<0.001);酪氨酸酶活性反应产物面积与测定区域面积之比从1.65%±0.40%增加为3.45%±0.41%,差异有非常显著性意义(P<0.001);但对照组与实验组PCNA阳性中间细胞分别为(14.08±2.76)个和(13.58±2.09)个,差异无显著性意义(P>0.05).结论庆大霉素作用后血管纹内黑色素含量的增加,可能是由于药物促进了酪氨酸酶活性的增强,而不是促进黑素细胞的增殖能力增强.黑色素可保护豚鼠内耳免受庆大霉素的耳毒性作用.     

耳蜗血管纹细胞离子转运的研究进展

本文综述了哺乳类动物耳蜗血管纹细胞的离子转运、内淋巴液生成以及耳蜗内淋巴电位产生的主要机制。详细阐述了每一种离子转运蛋白的作用,讨论了耳蜗血管纹中钾离子循环、氯离子循环和盐的平衡,以及这些平衡得以维持的机制。