EBV相关胃癌组织中ras基因突变的检测

目的 探讨EBV感染、ras基因突变在EBV相关胃癌(EBVaGC)发生发展中的作用.方法 应用PCR-RFLP技术,分别检测13例EBVaGCs、45例与之匹配的EBV阴性胃癌(EBVnGC)以及58例相应癌旁组织中H-ras 12位点,K-ras 12、13位点突变情况.结果 检测到2例H-ras 12位点突变,突变率为4.44%(2/58),均发生在EBVnGC组织.结论 胃癌组织 ras 基因突变率较低,ras基因突变与EBVaGC的发生无明显相关性.     

胃癌和相应癌旁组织中细胞凋亡与bcl-2的表达

①目的　探讨细胞凋亡和bcl 2蛋白表达在胃癌发生发展中的作用。②方法　选取 5 8例胃癌和相应癌旁组织作为研究对象 ,采用脱氧核苷酸移换酶 (TdT)介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)及免疫组化技术检测其细胞凋亡指数 (AI)和bcl 2蛋白的表达。③结果　胃癌和相应癌旁组织中AI及bcl 2蛋白表达差异有显著性 (t=13.4 0 0 ,P <0 .0 1;χ2 =4 .32 1,P <0 .0 5 )。bcl 2表达阳性组AI明显低于bcl 2表达阴性组 ,差异有显著性 (t=2 .381,P <0 .0 5 )。④结论　bcl 2蛋白异常表达可抑制细胞凋亡 ,与胃癌的发生有明显相关性     

EBV相关胃癌组织中ras基因突变的检测

目的探讨EBV感染、ras基因突变在EBV相关胃癌（EBVaGC）发生发展中的作用。方法应用PCR-RFLP技术,分别检测13例EBVaGCs、45例与之匹配的EBV阴性胃癌（EBVnGC）以及58例相应癌旁组织中H-ras 12位点,K-ras 12、13位点突变情况。结果检测到2例H-ras 12位点突变,突变率为4.44%（2/58）,均发生在EBVnGC组织。结论胃癌组织ras基因突变率较低,ras基因突变与EBVaGC的发生无明显相关性。     

EBV相关胃癌组织CTHRC1基因启动子区甲基化研究

目的分析比较EB病毒(EBV)相关胃癌(EBVaGC)与EBV阴性胃癌(EBVnGC)组织中胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)基因的甲基化状态,探讨EBV感染对CTHRC1基因甲基化的影响。方法采用甲基化特异性PCR检测49例EBVaGC和50例EBVnGC组织中CTHRC1基因启动子区域CpG岛甲基化状态,分析两种胃癌组织中CTHRC1基因甲基化状态及与临床病理特征的关系。结果 EBVaGC组织CTHRC1基因的甲基化状态明显高于EBVnG组织(χ2=14.278,P<0.01)。胃癌组织CTHRC1基因甲基化率与病人性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤浸润程度、肿瘤组织分化程度以及有无淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论 EBV感染可使EBVaGC组织中CTHRC1基因甲基化率明显升高。     

胃癌组织中P16和Rb蛋白的表达

目的 :探讨P1 6和Rb蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法 :采用免疫组化方法检测 4 0例胃癌标本和1 8例癌旁正常胃黏膜中的P1 6和Rb蛋白的表达。结果 :P1 6和Rb蛋白在胃癌组织中的表达阳性率 (35 .5 % ,4 0 % )明显低于癌旁正常胃黏膜组织 (88.6 % ,85 .7% ) (P <0 .0 5 ) ;P1 6和Rb蛋白在胃癌中的表达阳性率呈明显负相关(P <0 .0 5 ,rs=- 0 .5 1 2 ) ;P1 6表达与胃癌的淋巴结转移 ,浸润深度 ,TNM分期有关 (P <0 .0 5 ) ;Rb表达与胃癌的淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,与浸润深度 ,TNM分期无关 (P >0 .0 5 )。结论 :P1 6和Rb蛋白在胃癌中相互抑制表达 ,在胃癌发生发展过程中起一定的作用 ,对胃癌的预后判断有一定的帮助     

基质金属蛋白酶组织抑制物-1 mRNA在胃癌组织中的表达

①目的　检测基质金属蛋白酶组织抑制物 1(TIMP 1)基因在胃癌及其癌旁组织中的表达 ,以探讨TIMP 1在胃癌发生发展中的作用。②方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测胃癌及相应癌旁组织中TIMP 1基因的表达。③结果　 30例胃癌组织中有 16例表达TIMP 1基因 ,阳性率为 5 3.3% ,30例癌旁组织中有14例表达TIMP 1基因 ,阳性率为 4 6 .7% ,TIMP 1基因在胃癌和癌旁组织中的表达无显著性差异 (χ2 =0 .2 6 7,P >0 .0 5 )。④结论　TIMP 1是一种肿瘤生长、侵袭、转移双向调节因子。     

Rb蛋白在胃癌及癌旁组织中表达的意义

目的　检测Rb蛋白在胃癌组织、癌旁组织中的表达及其分布特点。方法　采用S -P免疫组织化学法对 88例胃癌组织、5 2例癌旁组织进行Rb蛋白的定位观察。结果　各病理类型胃癌组织、癌旁组织均有Rb蛋白表达 ,阳性率分别为 6 1.36 %(5 4/ 88)和 84.6 1%(4 4/ 5 2 ) ,阳性细胞的棕黄色颗粒位于细胞核和细胞浆。胃癌Rb蛋白表达与性别、年龄、肿瘤部位在统计学上无差异 (P >0 .0 5 ) ;而与组织学类型、病理分级、淋巴结转移、临床病理分期在统计学上有差异 (P <0 .0 5 )。结论　Rb基因缺失和表达水平的改变与胃癌发生、发展密切相关 ,Rb蛋白表达的检测可作为胃癌预后判断的独立指标。     

bcl-2和 bax 蛋白在肝癌组织的表达与细胞凋亡指数的关系

目的 :研究bcl 2及相关蛋白bax在肝癌组织中的表达与细胞凋亡指数之间的关系。方法 :对2 9例人肝细胞癌及癌旁组织分别进行bcl 2、bax的免疫组织化学研究 ,原位细胞凋亡检测采用TUNEL方法 ,计数阳性细胞数。结果 :bax在肝癌细胞中呈低表达 ,阳性率为 2 0 .7% ,与在癌旁组织中的表达 (65 .1 % )相比存在统计学差异 (P <0 .0 1 )。Bcl 2在肝细胞癌与癌旁组织中均呈低表达 ,表达率分别为 1 7.2 %和2 4.1 % ,二者间不存在统计学差异。Bcl 2和bax的阳性表达率与肝癌组织学分级无明显相关性。细胞凋亡指数在肝癌细胞中的表达率 (1 0 .3 2 %± 4.87% )低于在癌旁组织中的表达 (1 6.1 4%± 4.92 % ) (P <0 .0 1 )。在肝细胞癌和癌旁组织中 ,bax阳性组与阴性组细胞凋亡指数间有统计学差异 (P <0 .0 1 ) ,bcl 2阳性组与阴性组细胞凋亡指数无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :bcl 2和bax的变化影响肝细胞的凋亡状态 ,bax起到更关键的作用。凋亡指数有可能成为判定肝细胞癌变的指标 ,且与组织学分级有关     

单中心大样本Epstein-Barr病毒相关性胃癌亚型的临床病理及分子特征分析

目的 Epstein-Barr病毒相关性胃癌(Epstein-Barr virus associated gastric cancer, EBVaGC)与常见胃癌(非Epstein-Barr病毒相关性胃癌,Epstein-Barr virus non-associated gastric cancer, EBVnGC)不同,具有独特的临床病理特征,本研究采用单中心大样本探讨中国EBVaGC的临床病理及分子特征。方法 回顾分析2003—2018年北京大学肿瘤医院EBVaGC与EBVnGC两组患者的临床病理特征和预后。分析公共数据库胃癌数据集,筛选显著差异表达基因,并在本组病例中验证重要基因的表达及其与预后的相关性。结果 3 241例胃癌患者纳入研究,EBVaGC为163例,占总数的5.0%。与EBVnGC相比,EBVaGC男性常见,平均年龄低,多见于残胃癌,常为低分化腺癌、Lauren混合型,较少出现淋巴结转移,EBVaGC患者的5年生存率为63.2%,优于EBVnGC的59.6%(P<0.05)。为挖掘EBVaGC的分子特征,对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)胃癌数据集(n=240)进行分析,筛选到7 404个显著差异表达基因,涉及细胞增殖、凋亡、侵袭转移等功能,其中侵袭转移相关基因SALL4下调、免疫检查点相关基因PD-L1上调是EBVaGC重要的分子特征。大样本验证显示,SALL4在EBVaGC中多为阴性(1/92,1.1%,低于EBVnGC的303/1 727,17.5%),PD-L1在EBVaGC中多为阳性(81/110,73.6%,高于EBVnGC的649/2 350,27.6%),SALL4阴性和PD-L1阳性患者的预后较好。结论 EBVaGC作为独特的胃癌亚型,较少出现转移且预后良好,该亚型具有特征性分子背景,其中侵袭转移相关基因SALL4的下调以及免疫检查点相关基因PD-L1的上调是重要的分子特征。     

增殖细胞核抗原、Ki67在人喉癌发生中的作用

目的 :检测喉不同病变组织中核增殖抗原 (PCNA)Ki6 7表达情况 ,探讨Ki6 7、PCNA联合表达在人喉癌发生中的作用 .方法 :采用免疫组织化学EnVision法对 196例喉不同病变组织标本 (喉癌 12 1例 ,喉癌前病变 2 3例 ,声带息肉 37例和癌周正常喉组织 15例 )进行Ki6 7、PCNA蛋白联合表达情况检测 .结果 :Ki6 7、PCNA在人喉癌组织中表达阳性率分别为 75 .2 % (91/ 12 1)和 80 .2 % (97/ 12 1) ,喉癌前病变组织中为 4 7.8% (11/ 2 3)和 6 0 .9% (14 / 2 3) ,声带息肉中为 2 4 .3%(9/ 37)和 2 7.0 % (10 / 37) ,癌周正常喉组织中为 13.3% (2 /15 )和 6 .7% (1/ 15 ) .喉癌临床不同分期之间、组织病理学分级之间以及有无颈淋巴结转移之间Ki6 7、PCNA表达阳性率均有显著差异 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,喉癌不同肿瘤部位之间Ki6 7、PCNA表达阳性率无显著差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :Ki6 7、PCNA联合表达与人喉癌的发生、发展及预后有一定的相关性     

大鼠脑损伤时神经细胞c-fos 、c-jun和c-myc基因表达变化

目的观察大鼠脑损伤后不同时间皮质神经细胞早期快反应基因c-fos 、c-jun和c-myc表达变化.方法应用Northern杂交、原位杂交和免疫组织化学方法检测皮质神经细胞中c-fos、c-jun和c-myc的表达.结果脑损伤后15 min,伤侧皮质神经细胞出现上述3种基因mRNA的表达,随时间的延长,表达逐渐增加,于伤后3 h达高峰并持续至伤后24 h,伤后72 h恢复至对照水平.c-fos和c-jun蛋白表达亦于伤后15 min出现,c-myc蛋白表达于伤后30 min出现,并均于伤后3 h达高峰,持续至伤后6 h,伤后24 h表达消失.结论脑损伤后上述3种基因表达特点与其它脑损害不同,可能与损伤机制和继发性神经细胞损害有关.     

德宏州不同民族人群地中海贫血基因调查及分析

目的了解德宏州傣族、景颇族、阿昌族、德昂族、傈僳族、汉族人群携带地中海贫血基因现状,为防治提供科学依据。方法采用PCR和反向点杂交技术鉴定β-地贫基因;以跨跃断裂点PCR(GAP-PCR)技术和凝胶电泳鉴定α-地贫基因,并进行统计分析。结果检测血样本3 018份,检出地中海贫血基因939份,阳性率31.11%,其中α地中海贫血基因阳性率18.36%,β地中海贫血基因阳性率12.76%。不同民族的阳性率比较差异均有统计学意义。结论德宏州属地中海贫血高发区,临床工作中要做好鉴别诊断和治疗。     

C-erbB-2、Nm23和MDR1基因在原发性乳腺癌中的表达及与转移和预后的相关性

目的：探讨C-erbB-2、Nm23和MDR1在原发性乳腺癌中的表达及其与转移和预后的关系。方法：采用免疫组化法（S-P法）检测49例乳腺癌患者手术切除组织中C-erbB-2、Nm23和MDR1的表达,并分析3种基因之间的相关性及其与转移的关系。结果：49例乳腺癌患者中C-erbB-2、MDR1高表达和Nm23低表达的患者转移发生率高（P<0.05）。MDR1的表达与C-erbB-2的表达有相关性（r_s＝1.00,P<0.05）,Nm23与C-erbB-2的表达无相关性(r_s＝0.80,P>0.05),MDR1的表达与Nm23的表达无相关性_s＝0.80,P＞0.05）。C-erbB-2、MDR1同时阳性的患者及C-erbB-2阳性、Nm23阴性的患者转移发生的几率较高,预后较差。结论：C-erbB-2、Nm23和MDR1与乳腺癌转移有关,多个指标联合检测用来估计患者预后指导意义更佳。     

Expression of c-fos and c-jun proteins in the marginal division of the rat striatum during learning and memory training

Background A new brain region, the marginal division (MrD) , was discovered at the caudal margin of the neostriatum. The MrD was shown to be involved in learning and memory in the rat. The aim of this study was to investigate the expression of the immediate-early genes c-fos and c-jun in the MrD of the striatum during learning and memory processes in the rat, immunocytochemical and Western blot methods were used to examine Y-maze trained rats.Methods The rats were divided into three groups, namely the training, pseudotraining, and control groups. After Y-maze training, the expression of the immediate-early genes c-fos and c-jun in the MrD of the rats was investigated using immunocytochemical and Western blot methods.Results After one hour of Y-maze training, the expression of c-jun and c-fos proteins was significantly enhanced in the MrD; the c-jun protein, in particular, was more intensely expressed in this region than in other parts of the striatum. The expression of these two proteins in the training group was significantly higher than in the pseudotraining and control groups. In addition, positive expression was also found in the hippocampus,cingulum cortex, thalamus, and in other areas. Western blot disclosed two immunoreactive bands for the anti-c-fos antibody (47kD and 54kD) and two immunoreactive bands for the anti-c-jun antibody (39kD and 54kD). Conclusions These results indicate that the immediate-early genes c-fos and c-jun participate in signal transduction during the learning and memory processes associated with Y-maze training in rats.     

改进的PCR模板制备及DNA回收方法

直接用煮沸的细菌裂解液中的ＤＮＡ作ＰＣＲ模板，扩增效果与用酚／氯仿抽提纯化的质粒ＤＮＡ作模板的结果一致，缩短了实验时间。利用简单材料回收酶切片段，省去了有机溶剂反复抽提和沉淀的步骤，回收率达到９０％，效果很好。     

结肠癌脾虚证p53, Bcl-2和Bax的表达

目的: 探讨结肠癌脾虚证与p53, Bcl-2, Bax蛋白表达的相关性,揭示病与证之间的内在联系及证的物质基础.方法: 选择进展期低分化结肠腺癌61例,辨证分为脾虚组与非脾虚组,对其主要症状进行半定量积分,并设正常对照组20例.采用免疫组化S-P法检测病理组织中p53, Bcl-2, Bax蛋的表达.结果: 脾虚组患者p53, Bcl-2蛋白的阳性表达率及表达水平显著高于非脾虚组(P<0.05),Bax蛋白阳性表达脾虚组低于非脾虚组,但组间比较差异无显著性(P>0.05),脾虚患者症状积分与p53, Bcl-2蛋白表达水平呈正相关(P<0.01),与Bax蛋白表达水平无相关性(P>0.05);非脾虚患者症状积分与p53, Bcl-2, Bax蛋白表达水平均无显著相关性(P>0.05).结论: 结肠癌中医证型与p53, Bcl-2蛋白的差异表达有关,p53, Bcl-2蛋白是结肠癌脾虚证的相关基因.     

p53和C-Ha-ras基因在胃癌发生中的作用

目的　探讨 p5 3和C Ha ras基因突变在胃癌发生中的作用。 方法　用PCR SSCP和直接测序检测胃癌组织中C Ha ras(12、13密码子 )和 p5 3(外显子 7)基因的突变。 结果　胃癌组织中C Ha ras和 p5 3基因突变发生率显著高于浅表性胃炎和正常胃黏膜组织 ,基因的联合突变在部分胃癌组织中表达。结论　基因联合突变可能是胃癌发生的机制之一。     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG－44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响，阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法PTEN基因体外转染SHG－44细胞，筛选阳性细胞克隆，以原位杂、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况；采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况；以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG－44细胞有PTEN蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核破裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现；流式细胞仪显示细胞周期从G1期到S期发生抑制，并且在G1期峰前出现一明显的凋亡峰（15．9％）；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带；bcl-2的表达也显著下调。结论 PTEN基因可诱导SHG－44细胞凋亡，并下调bcl-2蛋白的表达，这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。     

星形细胞瘤PTEN、p27的表达及相关性研究

目的检测PTEN和p27在星形细胞瘤中的表达,探讨二者表达的意义。方法采用免疫组化S-P法检测星形细胞瘤PTEN和p27的表达,应用SPSS10.0统计软件进行数据处理。结果PTEN、p27在星形细胞瘤表达阳性率均随病理分级升高而降低(P<0.05);PTEN表达水平与p27表达水平正相关(P<0.05)。结论PTEN及p27表达下调与星形细胞瘤的发生发展有关。PTEN可能通过正调节p27的表达发挥其抑癌作用。     

胃癌组织ras和P53基因突变的检测

（１）目的 研究胃癌组织中Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变情况,（２）方法 采用ＰＣＲ ＲＦＬＰ技术,分析４１例胃癌标本中Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变。（３）结果 本组４１例中,１２例（２９．３％）发生Ｐ５３基因突变,１６例（３９．１％）发生ｒａｓ基因突变,１全负时发生Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变。（４）结论 Ｐ５３和ｒａｓ基因突变与胃癌的发生密切相关,在胃癌的发生中可能起重要作用。