不同方法制备金银花水提液对大鼠免疫功能影响的研究

目的探讨不同方法制备的金银花水提液对大鼠免疫功能的影响,为金银花的临床应用提供理论依据。方法分别采用水煎法和浸泡法制备金银花水提液,大鼠灌胃2周后,分别检测其巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化能力及TH1细胞分泌的IL-2、TNF-α、IFN-γ的mRNA表达情况。结果两种方法制备的金银花水提液均能改善机体的非特异性免疫功能,但只有水煎法制备的提取液能改善机体的细胞免疫功能。结论用水煎法制备金银花提取液改善机体免疫功能的功效优于浸泡法。     

鲍鱼内脏蛋白多糖体内对H_(22)肝癌的抑制作用

目的从鲍鱼内脏中提取活性鲍鱼内脏蛋白多糖(AVPF-I),检测AVPF-I的抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法采用H22移植瘤模型,设生理盐水空白对照、环磷酰胺阳性对照和AVPF-I组,测定各组小鼠瘤重、脾脏指数,MTT法测定淋巴细胞增殖及NK细胞杀伤活性,中性红吞噬法测定腹腔巨噬细胞吞噬活性,ELISA试剂盒检测TNF-α,IL-1和IFN-γ含量。结果AVPF-I能够显著抑制肿瘤生长(P<0.01),抑瘤率达62.37%;与阴性对照组比较,实验组荷瘤小鼠的脾脏指数显著提高(P<0.01),T淋巴细胞增殖作用、NK细胞的活性、巨噬细胞的吞噬功能及血清TNF-α,IL-1和IFN-γ含量均显著提高(P<0.01),并呈一定量效关系。结论AVPF-I能抑制H22肝癌生长,其抑瘤作用很可能是通过对荷瘤小鼠免疫功能的增强实现的。     

宫颈癌术后感染患者T淋巴细胞免疫功能变化及其临床意义

目的探讨宫颈癌患者手术前后及术后发生感染时T淋巴细胞免疫功能的变化,以指导术后临床药物的使用。方法选择2012年10月-2013年9月在妇科宫颈癌ⅠA~ⅡA期行广泛子宫切除+盆腔淋巴结清扫术患者50例,其中33例术后无感染患者为手术Ⅰ组,17例合并术后感染患者为手术Ⅱ组;另选取20名健康女性为对照Ⅰ组及20例子宫肌瘤行全子宫切除术患者为对照Ⅱ组,采用ELISA法检测各组血清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α);采用流式细胞术检测外周血中IFN-γ+CD4+、IL-2+CD4+和TNF-α+CD4+等T淋巴细胞亚群。结果手术Ⅰ、Ⅱ组的宫颈癌患者IFN-γ+CD4+、IL-2+CD4+和TNF-α+CD4+T淋巴细胞及其分泌的IFN-γ、IL-2和TNF-α水平在术前显著低于对照Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05);手术Ⅰ、Ⅱ组的以上各项免疫指标在术后显著升高(P<0.05),且术后合并感染的手术Ⅱ组明显高于未合并感染的手术Ⅰ组(P<0.05)。结论宫颈癌患者体内T淋巴细胞分泌细胞因子功能受抑制;术后T淋巴细胞免疫功能有恢复趋势,而感染进一步增强免疫反应。     

IFN-γ诱导THP-1源巨噬细胞活化的条件优化

目的摸索利用IFN-γ诱导THP-1源巨噬细胞活化的方法,筛选用于检测巨噬细胞活化状态的最佳细胞因子和最佳检测时间。方法 PMA(佛波酯)诱导THP-1分化成为巨噬细胞,两次加入IFN-γ诱导巨噬细胞活化(两步法),ELISA法检测不同浓度和不同刺激时间培养上清中细胞因子TNF-α、IL-10、IL-12、IL-23的水平。结果 IFN-γ诱导的巨噬细胞可大量分泌TNF-α,分泌量大于1 000 ng/mL,而IL-10、IL-12、IL-23分泌量少或未见明显分泌;两次IFN-γ诱导巨噬细胞活化的最低浓度均为2.5 ng/mL,初次最佳刺激时间为8¹6 h,再次最佳刺激616 h,再次最佳刺激6¹8 h。结论 IFN-γ可诱导巨噬细胞活化,两次IFN-γ刺激的效果比单次刺激效果好,TNF-α可作为巨噬细胞活化的理想检测指标。     

长叶胡颓子对荷瘤鼠细胞免疫功能影响

目的观察长叶胡颓子叶对荷瘤鼠细胞因子调节作用。方法50只小鼠随机分为5组,正常对照组、模型组、胡颓子组(水煎液灌胃0.4 mL/只)、环磷酰胺组和胡颓子+环磷酰胺组。采用ELISA法测定白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)水平,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果胡颓子组IFN-γ、IL-2、TNF-α的表达分别为(46.41±5.82),(113.41±9.26)和(0.884±0.096),明显高于模型组、环磷酰胺组(P0.01);长叶胡颓子能纠正荷瘤机体的Th1/Th2漂移现象,维持TH1的优势状态,具有免疫增强作用。结论长叶胡颓子能提高IL-2、IFN-γ、TNF-α的分泌,能够增强荷瘤鼠细胞免疫功能。     

活动性结核患者结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征

目的探讨活动性结核病患者外周血结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征。方法选取2015年11月-2017年3月医院收治的活动性结核病患者、肺部感染/肿瘤患者及同期来健康体检的正常人50例作为对照组。采用γ干扰素释放试验(IGRAS)和流式细胞技术检测CD4+辅助性T细胞1(Th1细胞)和CD8+细胞毒性T细胞(CTL)分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)的分泌情况和分布特征。结果 ESAT-6刺激单个核细胞后,每106个细胞的SFU为84.4±18.1;而CFP-10刺激为54.2±10.8。50例活动性结核病样本中,36例(72.0%)对ESAT-6和CFP-10有反应,14例(28.0%)仅对1种肽有反应。CD4+Th1细胞和CD8+CTL分泌的TNF-α、IFN-γ和IL-2三种细胞因子特征类似。活动性结核病组CD4+Th1细胞分泌TNF-α低于肺部感染/肿瘤组和健康对照组(P<0.05),而IFN-γ、TNF-α+IL-2、TNF-α+IFN-γ+IL-2均高于肺部感染/肿瘤组和健康对照组(P<0.05)。活动性结核病组CD8+CTL分泌的TNF-α低于肺部感染/肿瘤组和健康对照组(P<0.05)。IFN-γ、IL-2、TNF-α+IL-2、TNF-α+IFN-γ+IL-2均高于肺部感染/肿瘤组和健康对照组(P<0.05)。结论活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞(CD4+Th1和CD8+CTL)分泌的IFN-γ+TNF-α+IL-2对于鉴别活动性结核病、肺部感染/肿瘤有一定价值。     

毛细支气管肺炎患儿治疗前后血清IL-4、TNF-α及IFN-γ检测的临床价值

[目的]探讨毛细支气管肺炎患儿治疗前后血清IL-4、TNF-α和IFN-γ的动态变化及临床价值.[方法]采用ELISA双抗体夹心法检测31例毛细支气管肺炎患儿治疗前后血清IL-4、TNF-α及IFN-γ含量,并与对照组结果比较.[结果]毛细支气管肺炎患儿血清IL-4和TNF-α显著高于对照组(P<0.01),而IFN-γ显著低于对照组(P<0.01);治疗7 d后患儿血清IL-4和TNF-α明显下降(P<0.01),而IFN-γ明显升高(P<0.01),与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).[结论]毛细支气管肺炎患儿存在免疫功能紊乱,IL-4、TNF-α及IFN-γ参与患儿免疫功能 改变,在免疫病理机制中起重要作用.     

苜草素对巨噬细胞吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α分泌的影响

目的研究苜草素对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α的影响,探讨苜草素对巨噬细胞免疫功能的影响机制。方法以不同浓度的苜草素和10 g/ml的脂多糖(LPS)分别处理巨噬细胞RAW264.7,采用中性红法测定巨噬细胞的吞噬活性,ELISA检测TNF-α分泌量。以不同浓度的苜草素处理LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7,采用Griess分析法测定NO含量,ELISA检测IL-6分泌量,半定量RT-PCR方法测定巨噬细胞中iNOS、IL-6、TNF-αmRNA水平。结果苜草素在0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时能显著提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性(P<0.05);在0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著增加TNF-α的分泌量(P<0.01),显著降低LPS诱导的巨噬细胞NO产生量(P<0.05);在0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著降低LPS诱导的巨噬细胞IL-6的产生量(P<0.01)。苜草素可抑制LPS诱导的iNOS mRNA和IL-6 mRNA的表达,增加TNF-αmRNA的表达。结论苜草素可以提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,在转录水平上影响小鼠巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α的基因表达,对巨噬细胞免疫功能起调节作用。     

红栓菌粗多糖抗肿瘤及对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究

目的研究红栓菌粗多糖的抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法体外培养S180肉瘤细胞,接种健康小鼠,建立荷瘤小鼠模型。将小鼠随机分组:①蒸馏水组;②红栓菌粗多糖高、中、低剂量组。观察计算抑瘤率、腹腔巨噬细胞吞噬指数及吞噬率、外周血淋巴细胞转化率、血清溶血素水平、以及血清中细胞因子TNF-α、IL-4含量。结果红栓菌粗多糖高、中、低剂量组对小鼠S180肉瘤均有抑制作用,能明显提高荷瘤小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬指数与吞噬率、外周血淋巴细胞转化率及血清溶血素水平,并能提高血清中细胞因子TNF-α含量,对血清中细胞因子IL-4含量的影响作用不显著。结论红栓菌粗多糖具有抗肿瘤以及增强荷瘤小鼠免疫功能的作用。     

豚鼠感染1型嗜肺军团菌后免疫功能指标表达的动态观察

目的 观察豚鼠感染1型嗜肺军团菌（IP1）后外周血γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）、仅肿瘤坏死因子（TNF-α）、CD4^＋和CD8^＋水平的改变。方法 检测正常豚鼠外周血上述细胞因子和T细胞亚群的水平作为对照组，观察豚鼠感染IP1后24、72和120h外周血上述细胞因子和T细胞亚群的水平，并与对照组加以比较。结果 豚鼠感染IP1后各时间段外周血细胞因子和T淋巴细胞亚群水平均出现了一定程度的升高，其中IFN-γ,IL-6和CD8^＋升高更为显著。结论 豚鼠感染LP1后免疫功能表达出现了不同程度的增强。     

病毒性心肌炎患儿外周血中TNF-α、TGF-β1和IFN-γ细胞因子水平分析

目的:探讨病毒性心肌炎患儿外周血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)与疾病的关系。方法:以临床确诊的28例病毒性心肌炎患儿为研究对象,与20例正常健康儿童进行比较,采用Elisa方法检测血清中TNF-α、TGF-β1和IFN-γ蛋白含量;采用实时荧光定量PCR法检测TNF-α、TGF-β1和IFN-γmRNA水平。结果:与健康儿童相比较,病毒性心肌炎患儿外周血IFN-γ的蛋白含量及IFN-γmRNA表达水平明显降低(P<0.01);TNF-α、TGF-β1的蛋白含量及TNF-α、TGF-β1的mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。结论:TNF-α、TGF-β1和IFN-γ参与病毒性心肌炎的发病过程。     

前列腺素E_1对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的:探讨前列腺素E1(Prostaglandin E1,PGE1)对高氧诱发新生大鼠肺损伤的影响。方法:选用新生Wistar乳鼠90只,随机均分为3组(空气对照组,高氧模型组和PGE1治疗组)。每组大鼠于第3、7及14天分别处死各10只,采用硫代巴比妥酸法及考马斯亮蓝方法检测丙二醛(MDA)及总蛋白(TP)水平;光镜下观察肺组织的病理变化,采用免疫组化染色观察肺组织中结缔组织生长因子(CTGF)、γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:高氧模型组BALF中MDA水平、TP水平、肺组织中CTGF、IFN-γ及TNF-α的表达强度明显高于空气对照组,PGE1治疗组BALF中MDA水平、TP水平、肺组织中CTGF、IFN-γ及TNF-α的表达强度明显低于高氧模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:前列腺素E1对新生Wistar乳鼠高氧肺损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制氧自由基和细胞因子的释放有关。     

30例女性SLE患者淋巴细胞培养上清液中IL-2、TNF-α、IFN-γ、IL-4水平测定

目的:通过测定系统性红斑狼疮(SLE)外周血淋巴细胞上清液(PBLS)中细胞因子(IL-2、TNF-a、IFN-g、IL-4)水平,探讨系统性红斑狼疮的发病机制,机体内免疫系统失衡的机理,及上述几种细胞因子对SLE的诊断价值。方法:酶联免疫吸附法(ELISA)法检测淋巴细胞培养上清液(PHA刺激前后)中IL-2、TNF-α、IFN-γ及IL-4水平。结果:SLE患者淋巴细胞培养上清液中IL-2水平与正常对照组比较明显降低;TNF-α水平与正常对照组比较略有降低;IFN-γ水平与正常对照组比较明显降低;IL-4水平与正常对照组比较轻度升高。结论:SLE患者体内存在Th1/Th2细胞因子的比例失衡,即产生Th1型细胞因子减低,产生Th2型细胞因子的细胞增加,Th1/Th2比例向Th2极性偏移。     

Musca domestica pupae lectin improves the immunomodulatory activity of macrophages by activating nuclear factor-κB

In this study, Musca domestica pupae lectin (MPL) was screened for its immunomodulatory effect on macrophages. The phagocytosis of macrophages was improved significantly when they were treated with MPL: remarkable changes were observed in the morphology of the cells, the metabolic abilities of DNA and RNA were enhanced, and the production of hepatin was increased. Meanwhile, compared with the control group, not only the mRNA expressions of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), and interferon-γ (IFN-γ) in macrophages, but also the productions of proteins, were strongly induced by MPL; these effects were inhibited by pyrrolidine dithiocarbamate. Further study suggested that MPL could increase the nuclear factor-κB (NF-κB) p65 level in the nucleus. Overall, these results indicate that the improving immunomodulatory activity induced by MPL is mainly due to the increasing productions of TNF-α, IL-6, and IFN-γ and that the activation of macrophage by MPL is partly mediated via the NF-κB pathway.     

中链甘油三酯饮食增加过氧化物酶增殖体激活受体γ和脂联素的表达

目的探讨含中链甘油三酯(medium chain triglycerides,MCT)的高脂饮食对血清和脂肪组织中脂联素、过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)水平的影响。方法雄性Wistar大鼠,分别饲喂含MCT和长链甘油三酯(LCT)的高脂饲料,8w后病理检测右侧肾周脂肪细胞的大小。ELISA法检测血清中脂联素、TNF-α、胰岛素的水平。逆转录PCR测定脂肪组织中脂联素、PPARγ mRNA表达水平。结果MCT组大鼠体脂(BFA)、外周脂肪组织的细胞直径小于LCT组。MCT组的血清脂联素含量高于LCT组,两组间血清TNF-α无显著差异。MCT组外周脂肪组织中脂联素、PPARγ mRNA表达水平显著高于LCT组。结论MCT饮食可通过促进PPARγ表达,上调脂联素基因的表达,改善大鼠胰岛素抵抗。     

芩百清肺浓缩丸治疗肺炎支原体感染大鼠模型细胞因子表达水平变化

目的分析芩百清肺浓缩丸治疗肺炎支原体(MP)感染大鼠细胞因子表达水平变化,进一步探究芩百清肺浓缩丸对其免疫机制及炎症反应的调控。方法 SPF级成年雄性Wistar大鼠(90~110 g)60只随机分为4组:正常对照组、肺炎支原体肺炎模型(MP组)、芩百清肺浓缩丸组及阿奇霉素组。通过经鼻反复感染MP构建感染模型,对照组鼻内滴入等体积支原体改良培养基。芩百清肺浓缩丸组及阿奇霉素组从MP感染日起连续4天分别给与芩百清肺浓缩丸3.2 g/kg及阿奇霉素25 mg/kg,每日1次,模型组给予等量生理盐水灌胃。给药后第5天抽取血样、分离血清检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及γ干扰素(IFN-γ)水平,留取大鼠肺组织检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果与对照组比较,MP组、芩百清肺浓缩丸组及阿奇霉素组大鼠血清中TNF-α含量显著升高(均P<0.05),与MP组比较,芩百清肺浓缩丸组及阿奇霉素组TNF-α水平显著降低(均P<0.05),但芩百清肺浓缩丸组与阿奇霉素组TNF-α水平无显著性差异;与对照组比较,MP组、芩百清肺浓缩丸组及阿奇霉素组IFN-γ含量均呈不同程度的降低(均P<0.05),与MP组比较,芩百清肺浓缩丸组及阿奇霉素组的IFN-γ水平均升高(均P<0.05),但芩百清肺浓缩丸组与阿奇霉素组IFN-γ水平无显著性差异;肺组织实时荧光PCR(qPCR)结果显示,与对照组比较,MP组、芩百清肺浓缩丸组及阿奇霉素组的TLR4、MyD88、 NF-κB mRNA表达水平均呈不同程度的升高(均P<0.05),与MP组比较,芩百清肺浓缩丸组和阿奇霉素组上述指标水平显著降低(均P<0.05),但芩百清肺浓缩丸组和阿奇霉素组上述指标水平无显著性差异。免疫印迹(WB)结果示TLR4、MyD88、 NF-κB的蛋白表达变化趋势与mRNA一致。结论芩百清肺浓缩丸可降低MP感染大鼠TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α的表达水平,增加IFN-γ的水平,从而减轻MP肺炎的炎症反应。     

Acute ethanol administration inhibits Toll-like receptor 4 signaling pathway in rat intestinal epithelia

Excess alcohol intake, as in binge drinking, increases susceptibility to microbial pathogens. Alcohol impairs macrophage function by suppression of the Toll-like receptor 4 (TLR4) pathway. This study investigated the effects of acute ethanol intake on the TLR4 pathway in rat intestinal epithelia, which usually encounters luminal antigens at first and participates in the development of intestinal immunity. Twenty Wistar rats were randomly assigned to an ethanol group given ethanol as a 25% (v/v) solution in water at 7.5 g/kg, or a control group given saline, by oral gavage daily for 3 days. The epithelial histology and ultrastructure, the intestinal microflora, peripheral and portal venous plasma lipopolysaccharide (LPS) levels, and somatostatin (SST) levels in the peripheral plasma and small intestine were evaluated. Somatostatin receptor 2 (SSTR2), TLR4, TANK binding kinase-1 (TBK1), activated nuclear factor-κB (NF-κB), interferon-γ (IFN-γ) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) in the intestinal mucosa were assayed. LPS responsiveness with or without SST pretreatment was assayed in vitro by quantification of TLR4, TBK1, activated NF-κB, IFN-γ and TNF-α in isolated intestinal epithelia. Mucosal damage was observed in the ethanol group by light and electron microscopy. Escherichia coli cultures were unchanged in rat intestine of the ethanol group compared with controls, but lactobacilli cultures were reduced (p < 0.05). LPS levels increased in peripheral and portal venous plasma (p < 0.05), but mucosal TLR4, TBK1, nuclear NF-κB, IFN-γ and TNF-α were unchanged in the ethanol group. LPS treatment in vitro up-regulated the level of TLR4, TBK1 and nuclear NF-κB as well as the production of IFN-γ and TNF-α in isolated intestinal epithelia in the control (p < 0.05), but not the ethanol group. The stimulatory effects of LPS on intestinal epithelia isolated from the control group were significantly inhibited by SST pretreatment (p < 0.05). The peripheral plasma and intestinal levels of SST and the mucosal expression of SSTR2 in the ethanol group were significantly higher than in the control group (p < 0.05). These findings suggest the hyposensitivity of intestinal epithelial TLR4 to LPS induced by acute alcohol abuse probably through ethanol per se and ethanol-enhanced intestinal mucosal SST pathway may be a novel mechanism for increased susceptibility to intestinal pathogens.